Preparazione del campione per OPTIR-FISH per sondare il metabolismo del glucosio nelle comunità batteriche

Per iniziare, prendi vetrini standardizzati al fluoruro di calcio. Immergili in etanolo al 70% per 15 minuti e sciacquali due volte con acqua deionizzata. Trasferire i vetrini puliti in una soluzione di poli-L lisina allo 0,1% e incubarli per una notte a quattro gradi Celsius.

Quindi sciacquare gli scivoli con acqua deionizzata e lasciarli asciugare. Successivamente, scongelare i campioni di cellule preparati a temperatura ambiente mantenendoli al riparo dalla luce. Per evitare l'eccessiva formazione di cristalli di sale da PBS durante l'essiccazione del campione, lavare le cellule scongelate due volte con acqua deionizzata.

Centrifugare a 14.000 g per 10 minuti e rimuovere il surnatante. Reintrodurre il volume originale di acqua deionizzata nelle cellule e farle vorticare delicatamente. Dopo il lavaggio, centrifugare le cellule a 14.000 G per 10 minuti per concentrare i campioni di cellule batteriche e rimuovere il surnatante.

Agitare delicatamente la soluzione rimanente per circa 30 secondi e applicare uno o due microlitri di questa soluzione sul vetrino di fluoruro di calcio preparato.