Questo protocollo è stato approvato dalla cura degli animali e utilizzo Comitato Istituzionale (IACUC) presso l&#39;Università della Florida ed è conforme con il &quot;Principio di prodotti per animali da laboratorio&quot; (NIH pubblicazione n ° 86-23, riveduta 1985). 1. Materiale <ol><li> Animali: maschio topi C57BL / 6 (Laboratori di Harlan, Indianapolis, IN, USA) pesa 20-26 grammi al momento della chirurgia. </li><li> Anestesia: <ol><li> Anestesia macchina: sistema di inalazione VetEquip anestesia (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA). </li><li> Inalazione anestetico: isoflurano (Farmaceutica Baxter, Deerfield, IL). </li></ol></li><li> Strumenti chirurgici: SuperCut forbici Iris, diritto (Strumenti di precisione del Mondo, Inc., Sarasota, FL, USA); Vännäs micro-forbici, diritto (Strumenti di precisione del Mondo, Inc., Sarasota, FL, USA); Dumont pinze (punta fine, 45 ° punte piegate, strumenti di precisione del Mondo, Inc., Sarasota, FL, USA), unità di coagulazione bipolare (Essiccatore ad alta frequenza 900, Strumenti di precisione del Mondo, Inc., Sarasota, FL, USA), clip nave micro (Strumenti di precisione mondiale, Inc., Sarasota, FL, USA) </li><li> Attrezzature chirurgiche: punte sterili di cotone; Panni, spugne garza; sutura (7-0 sutura Seta, Ethicon, Inc., Somerville, NJ, USA); adesivo tissutale (Vetbond, 3M Company, St. Paul, MN, USA); scrub chirurgico : Bethadine, 70% di etanolo, e sterile, soluzione fisiologica allo 0,9%; unguento oculare (Unguento Vet Puralube, Pharmaderm, Melville, NY, USA). </li><li> Occlusione sutura preparazione MCAO: <ol><li> Filamento per la MCA occlusione: 7-0 chirurgica sutura monofilo di nylon (Ethicon, Inc., Somerville, NJ, USA). </li><li> Fonte di calore per ottundimento punta sutura (Unità Cauterio termica, World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL). </li><li> Gomma siliconica liquida (silicone RTV adesivo, World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA). </li></ol></li><li> Chirurgico / dissezione microscopio (Microscopio stereo Leica MZ6). <ol><li> Illuminatore in fibra ottica (Fiber Optic illuminatore FO1-150, TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA). </li></ol></li><li> Flussimetria laser Doppler (PeriFlux System 5000, Perimed, Stoccolma, Svezia). <ol><li> Flessibile microtip (MT Microtip B500-0 Etero, Perimed, Stoccolma, Svezia) </li></ol></li><li> Temperatura di parametri: <ol><li> Rettale temperature monitor (BAT-12, strumenti di precisione del Mondo, Inc., Sarasota, FL). </li><li> Coperta termica (T / POMPA, TP600, Gaymar, NY, USA). </li></ol></li><li> Colorazione e la misurazione quantitativa di infarto del volume: <ol><li> Soluzione al 2% 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (2% TTC, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). </li><li> I topi cervello matrice affettatrice (Zivic Miller-Lab. Inc., Allison Park, PA, USA). </li><li> Fotocamera digitale (V1253, Kodak Co., Rochester, NY, USA). </li><li> Immagine J software (ImageJ 1.42q software, US National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA). </li></ol></li></ol> 2. Pre-chirurgica passi <ol><li> Prima dell&#39;intervento, i topi sono alloggiati sotto una 12:12 ciclo luce / buio con libero accesso all&#39;acqua e roditori chow. </li><li> Punti di sutura per MCAO sono preparati da ottundimento 1-2mm della punta sutura con il calore e rivestimento 3-4mm dell&#39;albero sutura dalla sua punta in gomma silicone liquido, che permette ad asciugare (7-0, diametro punta, 0,20, 0,25 millimetri, rivestimento lunghezza, 3-4mm, lunghezza sutura 11-13mm). Sterilità devono essere conservati in tutte le fasi di cui sopra. </li><li> Dopo aver soppesato il mouse, l&#39;anestesia viene indotta con il 4% isoflurano in una camera di induzione e mantenuta durante la procedura con 1,5-2% isoflurano nel 30% O 2 e 70% N 2 O miscela di gas tramite una maschera facciale. </li><li> Il mouse è posto in posizione prona su un tampone di garza disteso su una superficie a temperatura controllata operativa (coperta termica), la pelliccia testa rasata. </li><li> Pomata oftalmica lubrificante viene applicato in entrambi gli occhi, e le palpebre sono chiuse per prevenire l&#39;essiccamento occhio durante il processo chirurgico. </li><li> Una linea mediana incisione (1 cm) è effettuata sulla cute sovrastante la calotta cranica dalla linea nucale superiore al nasion e la pelle è tirata lateralmente di apporre un microtip flessibile (MT B500-0 Microtip Etero, diametro 0,5 mm). Il microtip è posto perpendicolarmente alla superficie del cranio parietale destra (1 mm posteriormente e 5 mm lateralmente al bregma) per monitorare il flusso di sangue nel territorio MCA flussimetria laser Doppler. </li><li> Assicurarsi che il microtip flessibile è collegato al cranio saldamente prima che l&#39;animale è rivolto a una posizione supina. Collo dell&#39;animale è posto su un tappetino morbido e il suo naso è tenuto a cono dei sistemi per anestesia. Questo sarà il risultato di avere spazio sufficiente per il microtip flessibile. </li><li> Una sonda di temperatura rettale è inserito per mantenere costante la temperatura interna degli animali di 37 ± 0,5 ° C. </li><li> Entrambe le zampe anteriori e hindpaws sono nastrate per la superficie di piattaforma operativa, e la coda è registrato al tubo rettale. </li> &lt;/ Ol&gt; 3. MCA occlusione chirurgia: <ol><li> Sotto il microscopio operatorio, una incisione del collo linea mediana è fatto con le forbici tra il manubrio e la mascella sollevando delicatamente la pelle flaccida. </li><li> La coppia ghiandole sottomandibolari sono alla base senza mezzi termini divisi, con la ghiandola sinistra lasciato in situ. La ghiandola sottomandibolare destra è ritratto cranialmente e fissato con il muscolo sternocleidomastoideo. </li><li> La divisione esposto del muscolo omo-ioideo che copre la guaina carotidea è accuratamente diviso con pickup. </li><li> Il diritto arteria carotide comune (CCA) è accuratamente separati e isolati dal nervo vago e la sua guaina (situato lateralmente al CCA). </li><li> D&#39;ora in poi, i 2 metodi chirurgici che sono stati utilizzati di frequente per eseguire MCA occlusione divergono: </li></ol> Koizumi 4 Metodo <ol class="lroman" type="i"><li> Tre punti di sutura collare sciolti (7-0 seta) sono disposte intorno alla destra CCA. </li><li> L&#39;arteria carotide esterna (ECA) è identificato, isolato e cauterizzato (2-3mm distale di biforcazione). Essa può essere successivamente suddiviso con micro-forbici. Per evitare involontari danni periferici nel sito cauterizzazione, la potenza dovrebbe essere impostato a 1 con la manopola di alimentazione. Ciò è coerente per tutti i cauterizzazioni. </li><li> Tensione sufficiente è applicata al collare di sutura più prossimale del CCA per occludere il flusso di sangue (legatura permanente). L&#39;occlusione del flusso sia verificata da un calo ~ 50% dei valori basali perfusione corticale. </li><li> Poi una clip nave si trova appena prima della biforcazione CCA per evitare il flusso retrogrado al momento della arteriotomia. </li><li> Un arteriotomia viene eseguita tra la sutura prossimale legati e la clip sulla nave CCA con micro-forbici (più vicino alla legatura). </li><li> Il calore smussato e siliconato 7-0 sutura in nylon viene introdotto attraverso il arteriotomia e avanzate fino a raggiungere la clip nave. I 2 punti di sutura rimanenti collare sciolti sono delicatamente serrate intorno al CCA tra il arteriotomia e il clip nave per evitare perdite di nuovo il flusso attraverso CCA, con attenzione a non traumatizzare la parete arteriosa, poi la clip nave è ritirata. </li></ol> Longa di 3 Metodo <ol class="lalpha" type="a"><li> L&#39;ECA è identificato, si disgregano per quanto possibile (nei pressi della sua biforcazione nelle arterie linguale e mascellare), cauterizzato (con potenza impostata a 1), e diviso con micro-forbici. </li><li> Due punti di sutura collare sciolti (7-0 seta) sono disposte intorno alla ICA prossimale appena sopra la biforcazione CCA. </li><li> Il CCA è temporaneamente chiuso con una clip nave. L&#39;occlusione del flusso sia verificata da un calo ~ 50% dei valori basali perfusione corticale. </li><li> Poi l&#39;ICA è temporaneamente chiuso con una clip nave al di sopra dei due punti di sutura perdere collare per evitare il flusso retrogrado al momento della arteriotomia. </li><li> Un arteriotomia viene eseguita utilizzando micro-forbici nella vicina Corte dei conti riflette al moncone. </li><li> Il calore smussato e siliconato 7-0 sutura in nylon viene introdotto attraverso il arteriotomia in Corte dei conti e avanzate fino a raggiungere la clip nave applicata in ICA. I 2 punti di sutura collare sciolto in prossimale ICA sono delicatamente serrate intorno al prossimale ICA per evitare il flusso riflusso sanguigno attraverso ICA, con sufficiente attenzione a non traumatizzare la parete arteriosa, poi la clip nave è ritirata. </li></ol> Il resto della procedura è ampiamente convergenti: <ol><li> La sutura occlusione è avanzato lentamente attraverso l&#39;arteria carotide interna (ICA) verso la base cranica fino alla resistenza mite si fa sentire. Una goccia concorrenti in termini di valore del flusso ematico cerebrale in percentuale (= 80%) rispetto al basale è confermato dalla flussimetria laser Doppler. I 2 punti di sutura collare sono stretti attorno al filamento inseriti. </li><li> Per esperimenti di ischemia cerebrale transitoria, la sutura occlusione viene ritirata delicatamente dopo 45 minuti. Questo punto di tempo può essere modificato per vari scopi sperimentali. </li><li> Dopo aver estratto il filo di sutura, il sito arteriotomia è chiuso per evitare di sanguinamento post-operatorio. Nel metodo di Koizumi, si tratta di serraggio in modo sicuro le suture collare intorno al CCA. Nella tecnica Longa, il sito arteriotomia alla base della ECA è cauterizzato, poi i punti di sutura al colletto prossimale ICA sono allentati e rimossi per ripristinare il flusso carotideo. </li><li> Per chiudere l&#39;incisione, la ghiandola sottomandibolare e SCM sono disposti sopra il campo operatorio. I bordi della ferita sono poi approssimato con l&#39;adesivo in tessuto cervicale e nelle aree del cuoio capelluto. In alternativa, una graffetta sutura assorbibile o metallo potrebbe essere usato per chiudere la ferita soprattutto quando sopravvivenza a lungo termine degli animali è destinato. </li><li> Dopo la chiusura incisione, l&#39;animale riceve 1 salina calda ml per via sottocutanea come riempimento del volume. Una dose di analgesici appropriati (cioè Buprenorfina a 0,05-0,1 mg / kg) deve essere utilizzato per minimizzare il dolore dell&#39;animale e il disagio durante il periodo di recupero. L&#39;animal è rimosso dalla sala operatoria e messo in una gabbia di recupero zona calda / per prevenire l&#39;ipotermia, con libero e facile accesso al cibo e di acqua dolce. </li></ol> 4. Post-Op valutazione neurologica Dopo che l&#39;animale riprenda coscienza totale, deficit neurologici possono essere valutati da una scala semplice (scala a cinque punti) come segue 3: <ol start="0"><li> nessun deficit osservabili </li><li> mancata estensione zampa controlaterale (lieve deficit neurologico focale) </li><li> girando in una direzione controlaterale per infarto (moderato deficit neurologici focali) </li><li> cadendo in una direzione controlaterale a infarto (grave deficit neurologici focali) </li><li> depressione del livello di coscienza senza movimento spontaneo </li></ol> 5. Colorazione e la misurazione quantitativa del volume cerebrale infarto <ol><li> Dopo 24 ore di riperfusione MCA, il topo sopravvissuto viene pesato, profondamente anestetizzati con il 4% isoflorane, e sacrificato secondo il protocollo approvato. </li><li> Il cervello è accuratamente rimosso e collocato in una affettatrice cervello di topo matrice, e il cervello intero coronale sezionati a intervalli di 2 mm. </li><li> Le sezioni sono immersi nel 2% TTC in tampone fosfato (PBS) a 37 ° C per 20 minuti. Dopo la colorazione TTC, zona infracted viene mostrato come (non colorate) tessuto bianco adiacente al rosso mattone (vitali) del tessuto (Figura 1). </li><li> Sezioni seriali vengono fotografati con una macchina fotografica digitale e la zona di infarto viene misurata con il programma J immagine. </li><li> L&#39;area di infarto (bianco, senza macchia), la zona dell&#39;emisfero ipsilaterale (bianco e rosso mattone, macchiato), e la zona dell&#39;emisfero controlaterale (rosso mattone, macchiato) sono misurati per ogni sezione. Il volume è calcolato sommando le aree di rappresentanza in tutte le sezioni e moltiplicando per lo spessore della fetta. Dopo aver corretto per l&#39;edema, il volume di infarto è calcolato come segue 9: Volume dell&#39;infarto corretta (CIV),% = [volume nell&#39;emisfero controlaterale - (volume emisfero ipsilaterale - volume dell&#39;infarto)] volume emisfero / controlaterale x 100 </li></ol> 6. Rappresentante Risultati Dopo l&#39;occlusione e riperfusione del MCA tramite sinistra CCA per stabilire transitoria ischemia cerebrale, gli animali sono sacrificati ed i loro cervelli sezionati coronale sono colorati con TTC per valutare il volume di infarto (Figura 1). <img src="files/ftp_upload/2879/2879fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Sezioni di serie TTC-macchiato cervello coronale (2 mm) di topi sottoposti a MCA occlusione.

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+on+stroke+prevention,+diagnosis,+and+therapy.+Report+of+the+WHO+Task+Force+on+Stroke+and+other+Cerebrovascular+Disorders.">Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 1407-1431 (1989).</li><li>Lloyd-Jones, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2009+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.">Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 119, e21-e181 (2009).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 84-91 (1989).</li><li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.+I.+A+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema. I. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monofilament+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse.">Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Neurol Res. 19, 641-648 (1997).</li><li>Fujii, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-related+differences+in+susceptibility+to+transient+forebrain+ischemia+in+SV-129+and+C57black/6+mice.+.">Strain-related differences in susceptibility to transient forebrain ischemia in SV-129 and C57black/6 mice. .</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 28, 1805-1810 (1997).</li><li>Bederson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+2,3,5-triphenyltetrazolium+chloride+as+a+stain+for+detection+and+quantification+of+experimental+cerebral+infarction+in+rats.">Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 17, 1304-1308 (1986).</li><li>Qi, X., Hosoi, T., Okuma, Y., Kaneko, M., Nomura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+4-phenylbutyrate+protects+against+cerebral+ischemic+injury.">Sodium 4-phenylbutyrate protects against cerebral ischemic injury.</a> Mol Pharmacol. 66, 899-908 (2004).</li><li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy.">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 13, 683-692 (1993).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ideal+suture+diameter+is+critical+for+consistent+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Ideal suture diameter is critical for consistent middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Neurosurgery. 56, 196-200 (2005).</li><li>Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-regulated+model+of+focal+ischemia+in+the+mouse:+a+study+with+histopathological+and+behavioral+outcomes.">Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 35, 1720-1725 (2004).</li><li>Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+induced+prolonged+protection+against+cerebral+ischemia+in+mice:+a+redox+sensitive+mechanism?.">Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism?.</a> Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).</li></ol>

Gli autori dichiarano di non avere alcun conflitto di interessi.

Il modello MCAO è un modello stabilito che replica ischemia cerebrale in specie murina. Questo modello è stato utilizzato nel ratto e successivamente adattato alle topi. Evitare craniectomia per eliminare l&#39;influenza di manipolazione chirurgica sulla permeabilità della barriera emato-encefalica e della pressione intracranica è un vantaggio di questa tecnica. Tuttavia, molte variabili, come il ceppo differenze legate al 10, dimensioni della punta di sutura 11, durata dell&#39;occlusione <sup...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome del reagente </th><th> Tipo </th><th> Azienda </th><th> Numero di catalogo </th><th> Commenti (opzionale) </th></tr><tr><td> Maschio C57BL / 6 topi </td><td> Animale </td><td> Laboratori di Harlan, Indianapolis, IN, USA </td><td></td><td> 20-26 gr </td></tr><tr><td> Dissezione microscopio </td><td> Microscopio </td><td> Leica stereo microscopio MZ6 </td><td></td><td> 6.3:1 zoom </td></tr><tr><td> Illuminatore in fibra ottica </td><td> Illuminatore </td><td> TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA </td><td></td><td> FO1-150 </td></tr><tr><td> Isoflurano </td><td> Anestesia </td><td> Farmaceutica Baxter, Deerfield, IL </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> SuperCut Iris forbice, diritto </td><td> Strumento chirurgico </td><td> Mondo Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA </td><td> 14218 </td><td></td></tr><tr><td> Vännäs micro-forbice, diritto </td><td> Strumento chirurgico </td><td> Mondo Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA </td><td> 14003 </td><td></td></tr><tr><td> Pinze punta Dumont multa </td><td> Strumento chirurgico </td><td> Mondo Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA </td><td> 503290 </td><td></td></tr><tr><td> Clip nave </td><td> Strumento chirurgico </td><td> Mondo Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA </td><td> 14120 </td><td></td></tr><tr><td> Essiccatore ad alta frequenza 900 </td><td> Strumento chirurgico </td><td> Mondo Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA </td><td> 500397 </td><td></td></tr><tr><td> 7-0 sutura chirurgica nylon monofilamento </td><td> Sutura </td><td> Ethicon, Inc., Somerville, NJ, USA </td><td> 1647G </td><td> Sutura per l&#39;occlusione </td></tr><tr><td> 7-0 sutura chirurgica della Seta </td><td> Sutura </td><td> Ethicon, Inc., Somerville, NJ, USA </td><td> 7733G </td><td> Sutura di legatura </td></tr><tr><td> Silicone RTV adesivo </td><td> Gomma siliconica </td><td> Mondo Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA </td><td> 1571 </td><td></td></tr><tr><td> Vetbond </td><td> Tessuto adesivo </td><td> 3M Company, St. Paul, MN, USA </td><td> 70200746587 </td><td></td></tr><tr><td> Puralube Vet Unguento </td><td> Occhio unguento </td><td> Pharmaderm, Melville, NY, USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Buprenorfina hydrochlorode </td><td> Analgesici </td><td> Hospira Inc., Lake Forest, Illinois, USA </td><td> NDC 0409-2012-32 </td><td></td></tr><tr><td> Cauterio unità termica </td><td></td><td> Mondo Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA </td><td> 501292 </td><td></td></tr><tr><td> PeriFlux System 5000 </td><td> TCD flussimetria </td><td> Perimed, Stoccolma, Svezia </td><td></td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 </td><td> Termometro rettale </td><td> Mondo Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA </td><td> BAT-12R </td><td></td></tr><tr><td> T / POMPA, TP600 </td><td> Coperta termica </td><td> Gaymar, NY, USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro </td><td> Reagente </td><td> Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA </td><td> T8877 </td><td></td></tr><tr><td> I topi cervello matrice affettatrice </td><td> Cervello affettatrice </td><td> Zivic Miller-Lab. Inc., Allison Park, PA, USA </td><td> BSMAS001-1 </td><td></td></tr></tbody></table>

intraluminal middle cerebral artery occlusion (mcao) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice

L&#39;ictus è la terza causa di morte e la principale causa di disabilità nel mondo, con un costo stimato di quasi 70 miliardi dollari negli Stati Uniti nel 2009 1,2. Il intraluminale occlusione dell&#39;arteria cerebrale media (MCAO) il modello è stato sviluppato da Koizumi 4 nel 1986 per simulare questa patologia di forte impatto umano nel ratto. Una modifica del metodo di MCAO è stato poi presentato dalla Longa 3. Entrambe le tecniche sono stati ampiamente utilizzati per identificare i meccanismi molecolari delle lesioni cerebrali da ictus ischemico e potenziali modalità terapeutiche 5. Questo metodo relativamente non invasivo nei ratti è stata estesa da utilizzare nei topi per sfruttare ceppi transgenici e knockout 6,7. Per modello di ischemia cerebrale focale, una sutura intraluminale è avanzato attraverso l&#39;arteria carotide interna per occludere la base del MCA. Ritraendo la sutura dopo un determinato periodo di tempo imita riperfusione spontanea, ma la sutura può essere mantenuto in permanenza. Questo video sarà dimostrare i due principali approcci per l&#39;esecuzione di intraluminale procedura MCAO nei topi in modo graduale, oltre a fornire spunti per potenziali svantaggi e le insidie. Il tessuto cerebrale ischemico sarà successivamente colorate con 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC) per valutare il grado di infarto cerebrale 8.

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Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Il intraluminale occlusione dell&#39;arteria cerebrale media (MCAO) modello è il modello più frequente tra i modelli sperimentali utilizzati ictus ischemico. Qui dimostrerà tutto il modello in dettaglio con la guida di flussimetria laser Doppler, ed i suoi risultati rappresentativi.

Intraluminali occlusione dell&#39;arteria cerebrale media (MCAO) Modello per l&#39;ictus ischemico con la guida flussimetria laser Doppler in topi

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

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Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

49.8K Views.  University of Florida. Il intraluminale occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) modello è il modello più frequente tra i modelli sperimentali utilizzati ictus ischemico. Qui dimostrerà tutto il modello in dettaglio con la guida di flussimetria laser Doppler, ed i suoi risultati rappresentativi.

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Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Corsa di modellazione in Mouse - Medio occlusione dell&#39;arteria cerebrale con il Modello Filament

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

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Medicina

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Modello murino di Mezzo occlusione dell&#39;arteria cerebrale

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

Bilaterale occlusione comune Arteria carotide come uno stimolo precondizionamento in grado di indurre tolleranza ischemica precoce di focale Ischemia Cerebrale

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

L&#39;endotelina-1 indotta cerebrale media occlusione dell&#39;arteria modello per l&#39;ictus ischemico con guida laser flussimetria Doppler in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

Utilizzando una finestra craniale per visualizzare l&#39;arteria cerebrale media Durante endotelina-1 indotta da occlusione dell&#39;arteria cerebrale media

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Sistema ottimizzato per il monitoraggio perfusione cerebrale nel modello Rat Stroke of intraluminale occlusione dell&#39;arteria cerebrale media

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

Corsa di modellazione in Mouse: Coagulazione permanente dell&#39;arteria cerebrale media distale

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Embolic occlusione dell&#39;arteria cerebrale media (MCAO) per l&#39;ictus ischemico con omologhi coaguli di sangue nei ratti

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.

Approccio chirurgico per occlusione dell&#39;arteria cerebrale media e riperfusione indotta ictus nei topi

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of stroke on tissue injury and to evaluate the effectiveness of therapeutic interventions, several experimental models in a variety of species were developed. They include complete global cerebral ischemia, incomplete global ischemia, focal cerebral ischemia, and multifocal cerebral ischemia. The model described in this protocol is based on the middle cerebral artery occlusion (MCAO) and is related to the focal ischemia category. This technique produces consistent focal ischemia in a strictly defined region of the hemisphere and is less invasive than other methods. The procedure described is performed on mice, given the availability of several genetic variants and the high number of tests standardized for mice to aid in the behavioral and neurodeficit evaluation.

We describe a mouse model of stroke induced by the occlusion of the middle cerebral artery using a silicone coated suture. The protocol can be applied to induce permanent occlusion or a temporary ischemia, followed by reperfusion.

Induzione di ictus ischemico e di ischemia-riperfusione nei topi mediante la tecnica di occlusione dell&#39;arteria Medio e visualizzazione di Infarct Area

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of ...