EB, KMB, e HX contribuiscono allo stesso modo. Questo studio è stato sostenuto dal SPORE NCI in tumori gastrointestinali P50 CA062924, CA148964 NIH K23, Fondazione Lustgarten, Viragh Foundation, Investigator Award ASCO giovane, NIH CA0090701 5T32-28 Training Grant, Sol Centro pancreatico Goldman Cancer, e della Fondazione Nazionale Pancreas.

B7-H1/PD-L1, un membro della famiglia B7-immune di regolamentazione proteine ​​di superficie cellulare, svolge un ruolo importante nella regolazione negativa di risposte immunitarie mediate da cellule attraverso la sua interazione con il suo recettore, morte programmata-1 (PD -1) 1,2. Sovraespressione di B7-H1 da cellule tumorali è stato osservato in un certo numero di tumori umani, compreso il melanoma, glioblastoma, e carcinomi del polmone, seno, colon, ovaio, e cellule renali, e ha dimostrato di alterare anti-tumorali T- cella immunità 3-8. Recentemente, B7-H1 espressione tessuti adenocarcinoma pancreatico è stato identificato come un potenziale marcatore prognostico 9,10. Inoltre, il blocco di B7-H1 in un modello murino di cancro pancreatico ha dimostrato di produrre una risposta antitumorale 11. Questi dati suggeriscono l&#39;importanza di B7-H1 come un potenziale bersaglio terapeutico. Anti-B7-H1 anticorpi bloccanti sono quindi in fase di sperimentazione in studi clinici per l&#39;uomo piùtumori solidi tra cui il melanoma e tumori del polmone, del colon, rene, stomaco e pancreas 12. Per essere successivamente in grado di identificare i pazienti che beneficeranno B7-H1 di targeting terapie, è fondamentale per indagare la correlazione tra espressione e la localizzazione delle B7-H1 e la risposta del paziente al trattamento con anticorpi B7-H1 blocco. Esaminando l&#39;espressione di B7-H1 in tessuti umani adenocarcinoma pancreatico attraverso immunoistochimica darà una migliore comprensione di come questa co-inibitrice molecola di segnalazione contribuisce alla soppressione dell&#39;immunità antitumorale in microambiente del tumore. L&#39;anticorpo anti-B7-H1 monoclonale (clone 5H1) sviluppato da Chen e colleghi ha dimostrato di produrre risultati affidabili in colorazione criosezioni di più tipi di tessuti neoplastici umani 4,8, ma macchie nei paraffinati diapositive era stata una sfida fino recentemente 13-18. Abbiamo sviluppato la B7-H1 stainiprotocollo ng per le diapositive incluse in paraffina di tessuti adenocarcinoma pancreatico. La B7-H1 protocollo di colorazione qui descritto produce coerente colorazione membranosa e citoplasmatica di B7-H1 con po &#39;di storia. 1. De-parafinization <ol><li> Bake scorre a 55 ° C per 20 min. </li><li> In una cappa chimica, immergere i vetrini in xilolo per 10 min. </li><li> Immergere i vetrini in xilene fresco per 10 minuti. </li><li> Immergere i vetrini in etanolo al 100% per 5 min. </li><li> Immergere i vetrini in etanolo al fresco 100% per 5 min. </li><li> Immergere i vetrini in etanolo al 95% per 5 min. </li><li> Immergere i vetrini in etanolo al 80% per 5 min. </li><li> Immergere i vetrini in acqua deionizzata per 5 min. </li></ol> 2. Antigen Retrieval <ol><li> Immergere i vetrini in tampone Tris-EDTA (pH 9,0) e riscaldare in una pentola a pressione a 125 ° C per 30 sec, quindi 90 ° C per 10 sec. </li><li> Lasciare raffreddare i vetrini per 60 min. </li><li> Immergere i vetrini in TBST per 5 min; rEPEal doppio. </li></ol> 3. Colorazione <ol><li> Pulire soluzioni in tutto il tessuto nelle diapositive. Segnare un cerchio intorno al tessuto con una penna idrofobo. </li><li> Porre i vetrini in una camera umida ed evitare l&#39;essiccamento del tessuto sul vetrino durante tutto il processo di colorazione intero. Porre una goccia (circa 200 pl o più per coprire la zona di tessuto completamente) del blocco perossidasi all&#39;interno del cerchio idrofobico sul vetrino ed incubare i vetrini in blocco perossidasi per 5 min. </li><li> Sciacquare i vetrini con TBST, poi mettere in TBST per 5 min. </li><li> Porre una goccia di BLOCK ACE tampone di bloccaggio su ogni diapositiva e incubare per 15 minuti. </li><li> Sciacquare i vetrini con TBST, poi mettere in TBST per 5 min. </li><li> Mettere una goccia di soluzione di avidina su ogni diapositiva e incubare per 15 minuti. </li><li> Sciacquare i vetrini con TBST, poi mettere in TBST per 5 min. </li><li> Mettere una goccia di soluzione di biotina su ogni diapositiva e incubare per 15 minuti. </li><li> Risciacquare slides con TBST, poi mettere in TBST per 5 min. </li><li> Incubare vetrini con diluizione di 1:1000 topo anti-B7-H1 anticorpo monoclonale (clone 5H1) o un mouse IgG1 κ controllo isotipico in 200 microlitri TBST a 4 ° C per una notte per 22 ore + / - 1 h. La concentrazione finale di anticorpo in TBST è 2,57 mg / ml. </li><li> Sciacquare i vetrini con TBST, poi mettere in TBST per 5 min. Ripetere due volte. </li><li> Incubare vetrini con biotina coniugata ratto anti-topo IgG1 anticorpo secondario ad una concentrazione 1:500 (in 200 ul di soluzione al 2% di siero di capra) per 30 min. </li><li> Sciacquare i vetrini con TBST, poi mettere in TBST per 5 min. Ripetere due volte. </li><li> Una goccia di streptavidina-biotina Complex (deve essere preparata almeno 30 minuti prima dell&#39;uso) su ciascun vetrino e incubare per 15 min. </li><li> Sciacquare i vetrini con TBST, poi mettere in TBST per 5 min. Ripetere due volte. </li><li> Porre una goccia di reagente di amplificazione (diluito 2:1 con TBST) su ogni diapositiva e incubare per 4 min. </li><li> Sciacquare i vetrini con TBST, quindi posto in TBST per 5 min. Ripetere due volte. </li><li> Porre una goccia di streptavidina-HRP in ogni diapositiva e incubare per 15 minuti. </li><li> Sciacquare i vetrini con TBST, poi mettere in TBST per 5 min. Ripetere due volte. </li><li> Una goccia di 3,3-diaminobenzidina (DAB) e substrato cromogeno su ciascun vetrino e sviluppare il colore per 2 min. </li><li> Subito dopo lo sviluppo del colore, lavare i vetrini con DDH 2 O per 1-2 min. </li><li> Incubare vetrini con una goccia di ematossilina per 90 sec. </li><li> Lavare con DDH 2 O per 1-2 min. </li><li> Lavare con acqua corrente e sapone per 1-2 min. </li><li> Lavare con DDH 2 O per 1-2 min. </li></ol> 4. Disidratazione e montaggio <ol><li> Immergere i vetrini in etanolo al 80% per 3 min. </li><li> Immergere i vetrini in etanolo al 95% per 3 min. </li><li> Immergere i vetrini in etanolo al 100% per 5 min. Ripeti. </li><li> Immergere i vetrini in xilene per 5 min. Ripeti. </li><li> Aggiungere una goccia diCytoseal 60 a diapositiva e il luogo del coprioggetto. </li></ol> La Tabella 1 elenca i reagenti utilizzati nelle procedure sopra descritte.

<ol>
	<li>Flies, D. B., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+new+B7s:+playing+a+pivotal+role+in+tumor+immunity.">The new B7s: playing a pivotal role in tumor immunity.</a> J. Immunother. 30, 251-260 (2007).</li><li>Dong, H., Zhu, G., Tamada, K., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B7-H1,+a+third+member+of+the+B7+family,+co-stimulates+T-cell+proliferation+and+interleukin-10+secretion.">B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion.</a> Nat. Med. 5, 1365-1369 (1999).</li><li>Curiel, T. J., Wei, S., Dong, H., Alvarez, X., Cheng, P., Mottram, P., Krzysiek, R., Knutson, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockade+of+B7-H1+improves+myeloid+dendritic+cell-mediated+antitumor+immunity.">Blockade of B7-H1 improves myeloid dendritic cell-mediated antitumor immunity.</a> Nat. Med. 9, 562-567 (2003).</li><li>Dong, H., Strome, S. E., Salomao, D. R., Tamura, H., Hirano, F., Flies, D. B., Roche, P. C., Lu, J., Zhu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-associated+B7-H1+promotes+T-cell+apoptosis:+a+potential+mechanism+of+immune+evasion.">Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion.</a> Nat. Med. 8, 793-800 (2002).</li><li>Dong, H., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B7-H1+pathway+and+its+role+in+the+evasion+of+tumor+immunity.">B7-H1 pathway and its role in the evasion of tumor immunity.</a> J. Mol. Med. (Berl). 81, 281-287 (2003).</li><li>Strome, S. E., Dong, H., Tamura, H., Voss, S. G., Flies, D. B., Tamada, K., Salomao, D., Cheville, J., Hirano, F., Lin, W., Kasperbauer, J. L., Ballman, K. V., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B7-H1+blockade+augments+adoptive+T-cell+immunotherapy+for+squamous+cell+carcinoma.">B7-H1 blockade augments adoptive T-cell immunotherapy for squamous cell carcinoma.</a> Cancer Res. 63, 6501-6505 (2003).</li><li>Hirano, F., Kaneko, K., Tamura, H., Dong, H., Wang, S., Ichikawa, M., Rietz, C., Flies, D. B., Lau, J. S., Zhu, G., Tamada, K., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockade+of+B7-H1+and+PD-1+by+monoclonal+antibodies+potentiates+cancer+therapeutic+immunity.">Blockade of B7-H1 and PD-1 by monoclonal antibodies potentiates cancer therapeutic immunity.</a> Cancer Res. 65, 1089-1096 (2005).</li><li>Thompson, R. H., Gillett, M. D., Cheville, J. C., Lohse, C. M., Dong, H., Webster, W. S., Krejci, K. G., Lobo, J. R., Sengupta, S., Chen, L., Zincke, H., Blute, M. L., Strome, S. E., Leibovich, B. C., Kwon, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Costimulatory+B7-H1+in+renal+cell+carcinoma+patients:+Indicator+of+tumor+aggressiveness+and+potential+therapeutic+target.">Costimulatory B7-H1 in renal cell carcinoma patients: Indicator of tumor aggressiveness and potential therapeutic target.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 17174-17179 (2004).</li><li>Geng, L., Huang, D., Liu, J., Qian, Y., Deng, J., Li, D., Hu, Z., Zhang, J., Jiang, G., Zheng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B7-H1+up-regulated+expression+in+human+pancreatic+carcinoma+tissue+associates+with+tumor+progression.">B7-H1 up-regulated expression in human pancreatic carcinoma tissue associates with tumor progression.</a> J. Cancer Res. Clin. Oncol. 134, 1021-1027 (2008).</li><li>Loos, M., Giese, N. A., Kleeff, J., Giese, T., Gaida, M. M., Bergmann, F., Laschinger, M., WB, M., Friess, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+significance+and+regulation+of+the+costimulatory+molecule+B7-H1+in+pancreatic+cancer.">Clinical significance and regulation of the costimulatory molecule B7-H1 in pancreatic cancer.</a> Cancer Lett. 268, 98-109 (2008).</li><li>Okudaira, K., Hokari, R., Tsuzuki, Y., Okada, Y., Komoto, S., Watanabe, C., Kurihara, C., Kawaguchi, A., Nagao, S., Azuma, M., Yagita, H., Miura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockade+of+B7-H1+or+B7-DC+induces+an+anti-tumor+effect+in+a+mouse+pancreatic+cancer+model.">Blockade of B7-H1 or B7-DC induces an anti-tumor effect in a mouse pancreatic cancer model.</a> Int. J. Oncol. 35, 741-749 (2009).</li><li>Wang, S., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunobiology+of+cancer+therapies+targeting+CD137+and+B7-H1/PD-1+cosignal+pathways.">Immunobiology of cancer therapies targeting CD137 and B7-H1/PD-1 cosignal pathways.</a> Curr. Top Microbiol. Immunol. 344, 245-267 (2011).</li><li>Thompson, R. H., Webster, W. S., Cheville, J. C., Lohse, C. M., Dong, H., Leibovich, B. C., Kuntz, S. M., Sengupta, S., Kwon, E. D., Blute, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B7-H1+glycoprotein+blockade:+a+novel+strategy+to+enhance+immunotherapy+in+patients+with+renal+cell+carcinoma.">B7-H1 glycoprotein blockade: a novel strategy to enhance immunotherapy in patients with renal cell carcinoma.</a> Urology. 66, 10-14 (2005).</li><li>Thompson, R. H., Kuntz, S. M., Leibovich, B. C., Dong, H., Lohse, C. M., Webster, W. S., Sengupta, S., Frank, I., Parker, A. S., Zincke, H., Blute, M. L., Sebo, T. J., Cheville, J. C., Kwon, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+B7-H1+is+associated+with+poor+prognosis+in+renal+cell+carcinoma+patients+with+long-term+follow-up.">Tumor B7-H1 is associated with poor prognosis in renal cell carcinoma patients with long-term follow-up.</a> Cancer Res. 66, 3381-3385 (2006).</li><li>Thompson, R. H., Dong, H., Kwon, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+B7-H1+expression+in+clear+cell+carcinoma+of+the+kidney+for+prognostication+and+therapy.">Implications of B7-H1 expression in clear cell carcinoma of the kidney for prognostication and therapy.</a> Clin. Cancer Res. 13, 709s-715s (2007).</li><li>Karim, R., Jordanova, E. S., Piersma, S. J., Kenter, G. G., Chen, L., Boer, J. M., Melief, C. J., vander Burg, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-expressed+B7-H1+and+B7-DC+in+relation+to+PD-1++T-cell+infiltration+and+survival+of+patients+with+cervical+carcinoma.">Tumor-expressed B7-H1 and B7-DC in relation to PD-1+ T-cell infiltration and survival of patients with cervical carcinoma.</a> Clin. Cancer Res. 15, 6341-6347 (2009).</li><li>Inman, B. A., Sebo, T. J., Frigola, X., Dong, H., Bergstralh, E. J., Frank, I., Fradet, Y., Lacombe, L., Kwon, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-L1+(B7-H1)+expression+by+urothelial+carcinoma+of+the+bladder+and+BCG-induced+granulomata:+associations+with+localized+stage+progression.">PD-L1 (B7-H1) expression by urothelial carcinoma of the bladder and BCG-induced granulomata: associations with localized stage progression.</a> Cancer. 109, 1499-1505 (2007).</li><li>Brahmer, J. R., Drake, C. G., Wollner, I., Powderly, J. D., Picus, J., Sharfman, W. H., Stankevich, E., Pons, A., Salay, T. M., McMiller, T. L., Gilson, M. M., Wang, C., Selby, M., Taube, J. M., Anders, R., Chen, L., Korman, A. J., Pardoll, D. M., Lowy, I., Topalian, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+I+study+of+single-agent+anti-programmed+death-1+(MDX-1106)+in+refractory+solid+tumors:+safety,+clinical+activity,+pharmacodynamics,+and+immunologic+correlates.">Phase I study of single-agent anti-programmed death-1 (MDX-1106) in refractory solid tumors: safety, clinical activity, pharmacodynamics, and immunologic correlates.</a> J. Clin. Oncol. 28, 3167-3175 (2010).</li><li>Wang, L., Ma, Q., Chen, X., Guo, K., Li, J., Zhang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+significance+of+B7-H1+and+B7-1+expressions+in+pancreatic+carcinoma.">Clinical significance of B7-H1 and B7-1 expressions in pancreatic carcinoma.</a> World J. Surg. 34, 1059-1065 (2010).</li><li>Nomi, T., Sho, M., Akahori, T., Hamada, K., Kubo, A., Kanehiro, H., Nakamura, S., Enomoto, K., Yagita, H., Azuma, M., Nakajima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+significance+and+therapeutic+potential+of+the+programmed+death-1+ligand/programmed+death-1+pathway+in+human+pancreatic+cancer.">Clinical significance and therapeutic potential of the programmed death-1 ligand/programmed death-1 pathway in human pancreatic cancer.</a> Clin. Cancer Res. 13, 2151-2157 (2007).</li><li>Taube, J. M., Anders, R. A., Young, G. D., Xu, H., Sharma, R., McMiller, T. L., Chen, S., Klein, A. P., Pardoll, D. M., Topalian, S. L., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colocalization+of+inflammatory+response+with+B7-h1+expression+in+human+melanocytic+lesions+supports+an+adaptive+resistance+mechanism+of+immune+escape.">Colocalization of inflammatory response with B7-h1 expression in human melanocytic lesions supports an adaptive resistance mechanism of immune escape.</a> Sci. Transl. Med. 4, 127ra37 (2012).</li></ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Immunoistochimica del B7-H1 sulla criosezioni è stato riportato in studi precedenti per una varietà di tumori 3,4. Tuttavia, clinici campioni tumorali di solito sono disponibili solo in forma di paraffina-incastonati blocchi. L&#39;anticorpo monoclonale 5H1 è recentemente stato applicato con successo per la colorazione di tessuti inclusi in paraffina tumorali compresi carcinoma renale, carcinoma della cervice, carcinoma della vescica e melanoma 13-18. B7-H1 colorazione su inclusi in paraffina <s...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> CSA Sistema </td><td> Dako </td><td> K1500 </td><td> Comprende i seguenti reagenti di cui al protocollo: blocco perossidasi, streptavidina-biotina complessi, reagenti di amplificazione, streptavidina-HRP, ed il substrato cromogeno DAB e </td></tr><tr><td> Avidina / biotina Blocco Kit </td><td> Vettore </td><td> SP-2001 </td><td></td></tr><tr><td> Blocco ACE </td><td> Serotec </td><td> BUF029 </td><td></td></tr><tr><td> Biotina anti-topo IgG1 </td><td> BD </td><td> 553441 </td><td></td></tr><tr><td> IgG1 di topo K Isotype controllo </td><td> eBioscience </td><td> 14-4714-85 </td><td></td></tr><tr><td> TBS (Tris-salina tamponata), 10X </td><td> Cellgro </td><td> 46-012-CM </td><td> 10xTBS contiene 80 g / L di NaCl e 24,2 g / L Tirs; Diluito a 1X con ddH2O per lavaggi; </td></tr><tr><td> Tween 20 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P1379 </td><td> 1 ml aggiunto a 1 L di 1X TBS per fare TBST </td></tr><tr><td> Target Retrieval, 20x </td><td> Celerus Onda </td><td> 014-3000-000 </td><td> Diluito a 1x con DDH 2 O </td></tr><tr><td> Alcool etilico 190 Proof </td><td> Pharmco-Aaper </td><td> 111000190 </td><td></td></tr><tr><td> Alcool etilico 200 Proof </td><td> PHARMO-Aaper </td><td> 111000200 </td><td></td></tr><tr><td> Xilene </td><td> VWR </td><td> 95057-827 </td><td></td></tr><tr><td> Ematossilina </td><td> Richard-Allan scientifico </td><td> 72804 </td><td></td></tr><tr><td> Cytoseal 60 </td><td> Richard-Allan scientifico </td><td> 8310-4 </td><td></td></tr><tr><td> Coprioggetto </td><td> Corning </td><td> 2940-245 </td><td></td></tr><tr><td> Umidità camera </td><td> Sigma </td><td> H6644 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Tabella 1. Reagenti e apparecchiature. </td></tr></tbody></table>

immunohistochemical staining of b7-h1 (pd-l1) on paraffin-embedded slides of pancreatic adenocarcinoma tissue

B7-H1/PD-L1, un membro della famiglia B7-immune di regolamentazione proteine ​​di superficie cellulare, svolge un ruolo importante nella regolazione negativa di risposte immunitarie mediate da cellule attraverso la sua interazione con il suo recettore, morte programmata-1 (PD -1) 1,2. Sovraespressione di B7-H1 da cellule tumorali è stato osservato in un certo numero di tumori umani, compreso il melanoma, glioblastoma, e carcinomi del polmone, seno, colon, ovaio, e cellule renali, e ha dimostrato di alterare anti-tumorali T- cella immunità 3-8. Recentemente, B7-H1 espressione tessuti adenocarcinoma pancreatico è stato identificato come un potenziale marcatore prognostico 9,10. Inoltre, il blocco di B7-H1 in un modello murino di cancro pancreatico ha dimostrato di produrre una risposta antitumorale 11. Questi dati suggeriscono l&#39;importanza di B7-H1 come un potenziale bersaglio terapeutico. Anti-B7-H1 anticorpi bloccanti sono quindi in fase di sperimentazione in studi clinici per il mulgestire più tumori umani solidi tra cui il melanoma e tumori del polmone, del colon, rene, stomaco e pancreas 12. Per essere successivamente in grado di identificare i pazienti che beneficeranno B7-H1 di targeting terapie, è fondamentale per indagare la correlazione tra espressione e la localizzazione delle B7-H1 e la risposta del paziente al trattamento con anticorpi B7-H1 blocco. Esaminando l&#39;espressione di B7-H1 in tessuti umani adenocarcinoma pancreatico attraverso immunoistochimica darà una migliore comprensione di come questa co-inibitrice molecola di segnalazione contribuisce alla soppressione dell&#39;immunità antitumorale in microambiente del tumore. L&#39;anticorpo anti-B7-H1 monoclonale (clone 5H1) sviluppato da Chen e colleghi ha dimostrato di produrre risultati affidabili in colorazione criosezioni di più tipi di tessuti neoplastici umani 4,8, ma macchie nei paraffinati diapositive era stata una sfida fino recentemente 13-18. Abbiamo devfuggita la B7-H1 protocollo di colorazione per le diapositive incluse in paraffina di tessuti adenocarcinoma pancreatico. La B7-H1 protocollo di colorazione qui descritto produce coerente colorazione membranosa e citoplasmatica di B7-H1 con po &#39;di storia.

Un successo colorazione immunoistochimica di B7-H1 dimostrerà l&#39;espressione eterogenea di B7-H1 (marrone segnali di sviluppo di colore DAB) in adenocarcinoma pancreatico. Alcune cellule pancreatiche adenocarcinoma hanno espressione prevalentemente membranosa B7-H1 (Figura 1A), mentre altri hanno espressione sia prevalentemente citoplasmatica di B7-H1 o espressione poco B7-H1 (figure 2 e 3). Epitelio dotto pancreatico normale esprime poco B7-H1 (Figura 4). Colorazio...

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Immunohistochemical Staining of B7-H1 PD-L1 on Paraffin-embedded Slides of Pancreatic Adenocarcinoma Tissue

B7-H1 (PD-L1) e il suo legame al PD-1 forniscono una maggiore tumore segnale indotto immunosoppressiva nel microambiente del tumore. Una tecnica di colorazione immunoistochimica per caratterizzare l&#39;espressione e la localizzazione di B7-H1 in adenocarcinoma pancreatico è descritto qui.

Colorazione immunoistochimica di B7-H1 (PD-L1) in paraffina incorporate diapositive di tessuto pancreatico Adenocarcinoma

B7-H1/PD-L1, a member  of the B7 family of immune-regulatory cell-surface proteins, plays an important  role in the negative regulation of cell-mediated ...

immunohistochemical-staining-b7-h1-pd-l1-on-paraffin-embedded-slides

Research

JoVE Journal

Medicine

Immunohistochemical Staining of B7-H1 (PD-L1) on Paraffin-embedded Slides of Pancreatic Adenocarcinoma Tissue

23.0K Views.  The Johns Hopkins University School of Medicine. B7-H1 (PD-L1) e il suo legame al PD-1 forniscono una maggiore tumore segnale indotto immunosoppressiva nel microambiente del tumore. Una tecnica di colorazione immunoistochimica per caratterizzare l'espressione e la localizzazione di B7-H1 in adenocarcinoma pancreatico è descritto qui.