Questo lavoro è supportato da un Hamilton-Fairley NHMRC Fellowship (RH, AL); Operational Support Program Infrastrutture del Governo del Victoria (RH, EW) e la Curie Industria-Academia Partnership Marie e percorsi concedere il patrocinio della Commissione Europea (ME, PD) . Gli autori desiderano ringraziare il Dott. Andre Miyague, dott.ssa Francesca Russo, la signora Rosita Kinnart e il signor Ivan Laermans per la loro competenza tecnica nella produzione di questo video.

Il seguente protocollo sperimentale è stato approvato dal comitato etico degli animali, Katholieke Universiteit Leuven, Leuven, Belgio. Abbiamo seguito descritto precedentemente procedura chirurgica 13 tra cui alcuni cambiamenti metodologici, soprattutto nelle procedure di anestesia. 1. Indurre ritardo di crescita intrauterino (IUGR) <ol><li> Tempo datato coniglie gravide (ibrido Dendermonde e Nuova Zelanda Bianco) sono alloggiati in gabbie individuali su un hr programma 12/12 della luce con accesso ad acqua e standard di coniglio chow ad libitum da età gestazionale (GA) 18 giorni. A GA 25 giorni (termine completo è di 31 giorni circa), i conigli sono trasferiti nella sala operatoria per la creazione chirurgica di IUGR. Prima dell&#39;intervento, in modo casuale assegnare un &quot;caso&quot; (IUGR) e &quot;controllo&quot; corno uterino in utero bicorne coniglio utilizzando il software di randomizzazione (GraphPad Software, USA) 19. Dimensione del campione deve essere determinata con calcoli di potenza per singola researchers per la loro domanda di interesse. </li><li> Procedura di anestesia. Induzione dell&#39;anestesia si ottiene con la somministrazione di ketamina 35 mg / kg (Ceva Sante Animale, Bruxelles, Belgio) e xylazina 5 mg / kg (Ceva Sante Animale, Bruxelles, Belgio) per via intramuscolare nella coscia. L&#39;anestesia viene quindi mantenuta con una miscela inalatoria del 1-4% isoflurano (Isoba Veterinario; Abbott Laboratories Ltd., Queenborough, Kent, Regno Unito) in O 2 a 2 L / min. Posizionare un pulsossimetro (Nellcor N-20, Covidien, Irlanda) il secondo e il terzo dito del piede materno per il monitoraggio continuo della frequenza cardiaca e arteriosa saturazione O 2. </li><li> Procedura chirurgica. <ol><li> Premedicazione. Prima di iniziare l&#39;intervento chirurgico, somministrare la profilassi antibiotica penicillina G, 300.000 UI (Kela Pharma, Hoogstraten, Belgio), uterina tocolitico medrossiprogesterone acetato 0,9 mg / kg (Depo-Provera, Pharmacia Upjohn, Puurs, Belgio) e buprenorfina analgesico 0,03 mg / kg (Temgesic; Schering-Plough) Per via sottocutanea in una singola siringa da 2,5 ml. </li><li> Preparazione Coniglio. Posiziona il coniglio su un rilievo di riscaldamento per tutta la durata della chirurgia. Eliminare i peli dal campo chirurgico addominale e applicare antisettico Povidone-iodio 7,5% (Betadine, Purdue, Connecticut, Stati Uniti d&#39;America). Un protocollo asettico completo viene poi impiegata. </li><li> Laparotomia addominale. Infiltrati il sito di incisione con anestetico locale (2 ml di 1% lidocaina, B Braun Medical, Belgio) per via sottocutanea. Il sito di incisione dovrebbe essere circa 5 cm di lunghezza nella linea mediana, nella inferiore 2/3 della dell&#39;addome. Una volta che la pelle è aperto, utilizzare una miscela di dissezione tagliente e smussato per esporre la guaina del muscolo retto. Bisogna fare attenzione ad evitare le ghiandole mammarie vascolari materne situate ai lati della linea mediana all&#39;entrata (Figura 1A). Afferrare la guaina del muscolo retto e del peritoneo, la tenda per evitare l&#39;inserimento accidentale del contenuto addominale, e inserire con cura utilizzando dissezione tagliente (Figura 1B). </li><li> Esteriorizzazione uterina. Surround campo chirurgico con teli di garza imbevuta di soluzione salina riscaldata. Afferrare delicatamente e esteriorizzare entrambi i lati del utero bicorne. Bisogna fare attenzione a non fare né l&#39;vaginale o fine ovarica di ogni corno uterino in tensione, in quanto ciò potrebbe causare sanguinamento sgradito, il dolore e la contrattilità uterina. L&#39;assistente irriga continuamente l&#39;utero esposta con soluzione salina riscaldata per evitare contrazioni uterine. Palpare e registrare il numero di feti presenti in ogni corno. Per convenzione, il feto al termine ovarico è designato il primo feto. Un corno uterino è il caso corno e l&#39;altra è la squadretta. Identificare il caso corno precedentemente assegnato in modo casuale per induzione IUGR e quindi sostituire il clacson di controllo nuovamente dentro l&#39;addome (feti di controllo interno). </li><li> Indotta chirurgicamente IUGR. Identificare i vasi utero-placentare per ogni sacco gestazionale nel caso corno designato (Figura 1C).Chirurgicamente legare il 40-50% di queste navi che utilizzano un 5-0 poliglattina sutura (Ethicon Vicryl, Johnson &amp; Johnson Medical, USA) (Figure 1D-1E). In pratica, ci sono spesso tre fasci vascolari che riforniscono ogni sacco gestazionale. In questo caso, il più grande fascio vascolare è legatura. Una volta completato, l&#39;utero è ancora irrigato con soluzione salina riscaldata e con premura tornò al ventre. </li><li> Chiusura addominale. Chiudere l&#39;addome in due strati con un funzionamento continuo 2-0 poliglattina sutura (Ethicon Vicryl, Johnson &amp; Johnson Medical, USA). Chiudere la pelle con sottocuticolare 3-0 poliglattina sutura (Ethicon Vicryl, Johnson &amp; Johnson Medical, USA). Aerosol spray alluminio sulla ferita per evitare che il coniglio dal successivo interferire con le suture. </li><li> Recovery. Cease anestesia e osservare attentamente la ripresa della respirazione. Il coniglio viene poi alloggiato come sopra descritto con accesso a cibo e acqua ad libitum e osservati quotidianamente. </li></ol></li></ol> 2. Esecuzione ecocardiografia fetale e Pulsed-Doppler ad ultrasuoni <ol><li> Lo stesso coniglio viene poi trasferito a GA 30 giorni per ecocardiografica e valutazione ecografica. Il coniglio è posto su un rilievo di riscaldamento per la durata dell&#39;esame. </li><li> Procedura di anestesia. <ol><li> Induzione dell&#39;anestesia si ottiene con la somministrazione di ketamina 35 mg / kg (Ceva Sante Animale, Bruxelles, Belgio) e xylazina 5 mg / kg (Ceva Sante Animale, Bruxelles, Belgio) per via intramuscolare. Una volta posato, ottenere l&#39;accesso endovenoso con un calibro cannula 24 (BD Insyte-W, Becton Dickinson Infusion Therapy Systems, Utah, USA) inserito in una vena periferica auricolare. </li><li> Mantenere l&#39;anestesia con un&#39;infusione continua di chetamina e xilazina: 2 ml di ketamina (100 mg / ml) e 1,5 ml xilazina (20 mg / ml) a 46,5 ml di soluzione salina, quindi infuso tramite una pompa a siringa a 40 ml / ora. Fissare un tre vie-tap e allegare una siringa di anestesia salvataggio 5: 2 mlketamina (100 mg / ml) e 1,5 ml xilazina (20 mg / ml). Boli di 0,5 ml anestesia salvataggio sono raramente necessarie. Amministrare buprenorfina analgesico 0,03 mg / kg (Temgesic; Schering-Plough) subcutaneouslyprior alla chirurgia. Ossigeno 2 L / min viene applicata da maschera. Posizionare un pulsossimetro (Nellcor N-20, Covidien, Irlanda) il secondo e il terzo dito del piede materno per il monitoraggio continuo della frequenza cardiaca e arteriosa saturazione O 2. </li></ol></li><li> Laparotomia addominale ed esteriorizzazione dell&#39;utero. Fare riferimento a 1.3.3 e 1.3.4. </li><li> Posizionamento del feto per ecocardiografica e l&#39;esame ecografico. <ol><li> Collocare il coniglio in posizione laterale rivolta verso il ricercatore. Ciò semplifica il recupero di un unico sacco gestazionale per l&#39;esame e impedisce un&#39;eccessiva trazione sui vasi utero-placentare. Per quanto possibile, cercate di esteriorizzare un solo sacco gestazionale alla volta per ridurre al minimo l&#39;esposizione. Assicurarsi che il sacco gestazionale esposto è posto sulla garza irrigata conriscaldato salina. Per garantire risultati standardizzate tra diversi gruppi di studio, in genere solo il feto al ovarico e vaginali estremità di ciascun corno uterino vengono utilizzati per l&#39;esame ecografico. </li><li> Funzione cardiaca fetale è molto sensibile all&#39;effetto di esteriorizzazione uterina, variazione in temperatura e pressione dal trasduttore di ultrasuoni sui vasi placentari. Per ridurre al minimo questi effetti confondenti ambientali e iatrogeni sulla funzione cardiaca, l&#39;esame ecografico deve iniziare immediatamente dopo l&#39;esteriorizzazione del sacco gestazionale e dovrebbe essere sistematico ed efficiente. Nella nostra esperienza, i cambiamenti nella funzione cardiaca fetale raramente si verificano nei primi 5 minuti di esposizione. Se si incontra bradicardia fetale, rimuovere la sonda ad ultrasuoni, riposizionare il feto per evitare attorcigliamenti dei vasi feto-placentare, irrigare con soluzione salina o riscaldato brevemente restituire il sacco gestazionale di nuovo nel ventre materno. Se bradicardia fetale è persistente, l&#39;esame di questo fetus dovrebbe essere abbandonato a favore di esaminare la prossima feto. </li></ol></li><li> L&#39;ecocardiografia fetale. <ol><li> Il Visualsonics VEVO 2100 (Toronto, Canada), piattaforma microultrasound ad alta risoluzione con software di analisi cardiaco e la tensione installati è necessario. Un VisualSonics MS-250 trasduttore (VisualSonics, Toronto, Canada), è utilizzato per l&#39;acquisizione dei dati. Questo ha una frequenza centrale di 21 MHz con una larghezza di banda 13-24 MHz. Il fuoco geometrico è di 15 mm, la larghezza massima dell&#39;immagine è di 23 mm e la profondità massima dell&#39;immagine è di 30 mm. L&#39;ingombro è di 28 x 5,75 millimetri. I dati vengono acquisiti in conformità con la Società Americana di Ecocardiografia linee guida e norme per l&#39;esecuzione del ecocardiogramma fetale. 20 </li><li> Acquisizione dati 1: vista laterale A livello del quattro camere-vista laterale, registrare un B-mode cine ciclo di almeno cinque cicli cardiaci per determinare deformazione, velocità di deformazione, velocità e spostamento.. Questo è analizzato offline utilizzando il VevoStrainAlgoritmo (Visualsonics, Toronto, Canada), come descritto in precedenza nella rivista nel dettaglio. Indici 21 ecocardiografia M-mode può essere ottenuto in questa visualizzazione standard. Offline misure della struttura e funzione cardiaca possono poi essere analizzati: ventricolare interno e diametro del setto in sistole e diastole, i volumi, stroke volume, frazione di accorciamento, frazione di eiezione e della gittata cardiaca 21. </li><li> Acquisizione dati 2:. Vista apicale A livello del apicale quattro camere-view, B-mode cine loop può essere ripetuto per VevoStrain analisi come descritto sopra. Ecocardiografia M-mode è utilizzato per valutare la tricuspide (TAPSE) e mitralica anulare Escursione sistolica del piano (MAPSE) e la deformazione longitudinale e velocità di deformazione. 22,23 Questa visione apicale consente anche la valutazione del flusso valvolare velocità di forme d&#39;onda e l&#39;indice di performance miocardica modificato come precedentemente descritti. 24 </li></ol></li><li> Feto-placentare pulse-Doppler agitò ULTrasound. </li></ol> Velocità del flusso d&#39;onda (FVW) dell&#39;arteria ombelicale si ottengono individuando i vasi ombelicali con color Doppler e poi mettendo la pulsato cancello campione Doppler sopra l&#39;arteria ombelicale su un loop privo di cordone ombelicale. L&#39;25 dell&#39;arteria cerebrale media (MCA) è FVW situato ponendo il campione Doppler pulsato cancello appena oltre l&#39;origine MCA volta circolo di Willis si trova dal color Doppler. 26 Il dotto venoso (DV) FVW è ottenuto ponendo il campione Doppler pulsato cancello nella porzione prossimale del DV visto con color doppler in cui ha origine dalla vena ombelicale intraepatica sia in una vista sagittale o trasversale del feto. 26 L&#39;indice di pulsatilità (PI) è calcolata in linea utilizzando il software di analisi cardiovascolare VisualSonics.

L&#39;autore professor Jan D&#39;hooge ha un accordo di ricerca con VisualSonics. Gli autori restanti non hanno informativa.

Abbiamo utilizzato un approccio precedentemente convalidato di ridurre chirurgicamente il flusso sanguigno utero-placentare in un coniglio per la produzione di IUGR 13-16 e poi esaminando la funzione cardiaca fetale 14 per descrivere la tecnologia microultrasound e l&#39;analisi della funzione cardiaca disponibile sul VisualSonics VEVO 2100. La capacità di riprodurre feto-placentare Doppler variazioni di feti IUGR umani in un piccolo modello animale e poi per consentire l&#39;esame della funzione ...

L&#39;onere delle malattie cardiovascolari che risulta dalla restrizione della crescita intrauterina del feto (IUGR), non può essere sopravvalutata. E &#39;la principale causa di mortalità neonatale dopo anomalie congenite. 1 IUGR si riferisce ad un feto che non riesce a raggiungere il suo potenziale di crescita e di solito è il risultato di insufficienza placentare. 2 In sopravvissuti, cardiovascolare cattiva salute è evidente in tutta la durata di vita con disfunzione miocardica apparente nell&#39;infanzia e nella fanciullezza 3,4 e successiva ipertensione 5, 6 diabete, l&#39;obesità e sviluppare nella vita adulta - tutti i fattori di rischio cardiaci cumulativi, dalla nascita alla morte prematura per cardiopatia ischemica 7. Lo sviluppo di modelli animali per caratterizzare la comunicazione materno-fetale che stabilisce IUGR e la successiva risposta del feto a ridotta disponibilità substrato è necessario se vogliamo comprendere meglio sia la fisiopatologia di auto IUGR correlatainsufficienza cardiaco e per sviluppare strategie cardio-protettivi per migliorare la salute fetale e postnatale. A questo proposito, sono stati descritti molti modelli differenti attraverso specie diverse. 8 IUGR viene indotto da sotto nutrizione materna con una dieta ipoproteica nei roditori, 9 ablazione chirurgica o legatura del flusso ematico uterino nei roditori e cavie 10 o occlusione del dell&#39;arteria ombelicale nella pecora. 11 Tuttavia, è evidente che nessun modello completamente ricapitola la IUGR umana. 12 In questa corrente studio metodologico, abbiamo utilizzato un approccio ben convalidato di interruzione selettivo vascolare utero-placentare in un coniglio 13-16 che non solo produce risposte cardiovascolari fetali osservati con gli ultrasuoni clinicamente 14, ma anche permette di interrogatorio della funzione cardiaca fetale con il romanzo ecocardiografia con tecnologia microultrasound del VisualSonics VEVO 2100. Mentre Doppler di fetoplvasi acental rimane la pietra angolare della corrente sorveglianza prenatale di feti IUGR 17, ecocardiografia funzionale viene sempre più utilizzato per fornire nuove intuizioni in fisiopatologia della malattia e di valutare il benessere fetale. 18 Di conseguenza, qui prendiamo questi progressi della ricerca clinica e descriviamo un modello animale che porti non solo questa sofisticazione di imaging, ma fornisce anche la piattaforma sperimentale per studiare percorsi meccanicistici e nuove terapie.

<table border="1">
	<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketamine</td>
 <td>Ceva Sante Animale</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.ceva.com/en" target="_blank">http://www.ceva.com/en</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Xylazine</td>
 <td>Ceva Sante Animale</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.ceva.com/en" target="_blank">http://www.ceva.com/en</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Depot Provera</td>
 <td>Pharmacia Upjohn</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Penicillin G</td>
 <td>Kela Pharma</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.kela.be" target="_blank">http://www.kela.be</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Lidocaine</td>
 <td>B Braun Medical</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.bbraun.com/" target="_blank">http://www.bbraun.com/</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Temgesic</td>
 <td>Schering-Plough</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.merck-animal-health-usa.com/" target="_blank">http://www.merck-animal-health-usa.com/</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Isolurane</td>
 <td>Isoba Vet; Abbott Laboratories Ltd</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.abbottanimalhealth.com/index.html" target="_blank">http://www.abbottanimalhealth.com/index.html</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethicon</td>
 <td>Johnson and Johnson</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.ethiconproducts.co.uk/products/sutures" target="_blank">http://www.ethiconproducts.co.uk/products/sutures</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethicon</td>
 <td>Johnson and Johnson</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.ethiconproducts.co.uk/products/sutures" target="_blank">http://www.ethiconproducts.co.uk/products/sutures</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethicon</td>
 <td>Johnson and Johnson</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.ethiconproducts.co.uk/products/sutures" target="_blank">http://www.ethiconproducts.co.uk/products/sutures</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>VEVO 2100</td>
 <td>VisualSonics</td>
 <td>SN100-0032</td>
 <td><a href="http://www.visualsonics.com/" target="_blank">http://www.visualsonics.com/</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Aquasonic Gel</td>
 <td>Parker Laboratories</td>
 <td>01 02</td>
 <td><a href="http://www.parkerlabs.com/ultrasound_products.html" target="_blank">http://www.parkerlabs.com/ultrasound_products.html</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Nellcor N-20PA Pulse oximeter</td>
 <td>Covidien</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.nellcor.com/prod/PRODUCT.ASPX?S1=POX&amp;S2=MON&amp;id=282&amp;V" target="_blank">http://www.nellcor.com/prod/PRODUCT.ASPX?S1=POX&amp;S2=MON&amp;id=282&amp;V</a></td>
 </tr>
	 </tbody>
 </table>

fetal echocardiography and pulsed-wave doppler ultrasound in a rabbit model of intrauterine growth restriction

Fetale intrauterina crescita restrizione (IUGR) risultati in funzione cardiaca anomala che è evidente prenatale grazie ai progressi nella feto-placentare Doppler ed ecocardiografia fetale. Sempre più spesso, queste modalità di imaging sono stato impiegato clinicamente per esaminare la funzione cardiaca e valutare il benessere in utero, guidando in tal modo tempi delle decisioni di nascita. Qui, abbiamo utilizzato un modello di coniglio di IUGR che permette l&#39;analisi della funzione cardiaca in modo clinicamente rilevante. Utilizzando isoflurano indotto, IUGR è chirurgicamente creato in gestazionale giorno all&#39;età di 25 anni eseguendo una laparotomia, esponendo l&#39;utero bicorne e poi legando il 40-50% delle navi uteroplacentare riforniscono ogni sacco gestazionale in un unico corno uterino. L&#39;altro corno del utero bicorne coniglio serve da feti di controllo interno. Poi, dopo il recupero in età gestazionale giorno 30 (a termine), lo stesso coniglio sottoposto all&#39;esame della funzione cardiaca fetale. L&#39;anestesia viene indotta con Ketamine e xylazina per via intramuscolare, poi mantenuto da una infusione endovenosa continua di ketamina e xylazina per ridurre al minimo gli effetti iatrogeni sulla funzione cardiaca fetale. Una laparotomia ripetizione viene eseguita per esporre ogni sacco gestazionale e un esame microultrasound (VisualSonics VEVO 2100) della funzione cardiaca fetale viene eseguita. Insufficienza placentare è evidente da un indice di pulsatilità rilievo o una fine del flusso diastolico assente o invertita del Doppler dell&#39;arteria ombelicale forma d&#39;onda. Il dotto venoso e dell&#39;arteria cerebrale media Doppler viene poi esaminato. L&#39;ecocardiografia fetale viene eseguita da modalità B di registrazione, la modalità M e la velocità del flusso d&#39;onda nella vista laterale e apicale. Calcoli Offline determinano variabili standard M-mode cardiaci, tricuspide e mitralica anulare Escursione sistolica del piano, macchiolina di monitoraggio e analisi del ceppo, modificato indice di performance miocardica ed il flusso vascolare velocità di forme d&#39;onda di interesse. Questo piccolo modello animale di IUGR offre pertanto l&#39;esame di in utero la funzione cardiaca, che è coerente con la pratica clinica corrente ed è quindi utile in un ambiente di ricerca traslazionale.

Una crescita asimmetrica limitato feto e la placenta dalla legatura vascolare utero-placentare è paragonato a un normale controllo del feto e la placenta nella Figura 1F. Crescita asimmetrico è confermato dalla riduzione del peso alla nascita neonatale e aumento della circonferenza della testa: il rapporto circonferenza addominale a controlli. Risultati rappresentativi di feto-placentare studi Doppler sono mostrati in Figura 2. Viene mostrato un modello normale a bassa resistenza di f...

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Fetal Echocardiography and Pulsed-wave Doppler Ultrasound in a Rabbit Model of Intrauterine Growth Restriction

Descriviamo l&#39;esame della funzione cardiaca fetale con l&#39;ecocardiografia fetale funzionale, contemporanea e feto-placentare Doppler utilizzando il VisualSonics VEVO 2100 microultrasound in un modello indotta chirurgicamente di restrizione della crescita fetale intrauterina in un coniglio.

L&#39;ecocardiografia fetale e Pulsed-Doppler ad ultrasuoni in un modello di coniglio di ritardo di crescita intrauterino

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ...

fetal-echocardiography-pulsed-wave-doppler-ultrasound-rabbit-model

Research

JoVE Journal

Medicine

28.1K Views.  University Hospitals Leuven. Descriviamo l'esame della funzione cardiaca fetale con l'ecocardiografia fetale funzionale, contemporanea e feto-placentare Doppler utilizzando il VisualSonics VEVO 2100 microultrasound in un modello indotta chirurgicamente di restrizione della crescita fetale intrauterina in un coniglio.