Este trabalho é apoiado por uma Hamilton-Fairley NHMRC Fellowship (RH, AL), Programa de Apoio à Infra-Estrutura Operacional do Governo de Victoria (RH, EW) ea Curie Indústria-Academia Parceria Marie e Caminhos conceder patrocinado pela Comissão Europeia (ME, PD) . Os autores gostariam de agradecer ao Dr. Andre Miyague, Dr. Francesca Russo, a Sra. Rosita Kinnart eo Sr. Ivan Laermans por seus conhecimentos técnicos na produção deste vídeo.

O seguinte protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê de Ética Animal, Katholieke Universiteit Leuven, Leuven, na Bélgica. Seguimos cirúrgico descrito anteriormente 13 procedimentos, incluindo algumas mudanças metodológicas, especialmente no procedimento de anestesia. 1. Induzindo a restrição de crescimento intra-uterino retardado (CIUR) <ol><li> Tempo datado coelhos grávidas (híbrido Dendermonde e Nova Zelândia Branco) estão alojados em gaiolas individuais em uma hr horário 12/12 luz com acesso a água e padrão de coelho ração ad libitum da idade gestacional (IG) de 18 dias. No GA 25 dias (período completo é de 31 dias, aproximadamente), os coelhos são transferidos para a sala de operações para criação cirúrgica de CIUR. Antes da cirurgia, alocar aleatoriamente um &quot;case&quot; (CIUR) e &quot;controle&quot; corno uterino no útero bicorno coelho usando o software de randomização (GraphPad Software, EUA) 19. O tamanho da amostra deve ser determinado por cálculos de energia por indivíduo researchers para a sua pergunta de interesse. </li><li> Procedimento anestesia. A indução da anestesia é conseguido através da administração de cetamina 35 mg / kg (Ceva Sante Animale, Bruxelas, Bélgica) e xilazina 5 mg / kg (Ceva Sante Animale, Bruxelas, Bélgica) por via intramuscular na pata traseira. A anestesia é mantida, em seguida, com uma mistura de inalação de 1-4% de isoflurano (Isoba Vet; Abbott Laboratories Ltd., Queenborough, Kent, Reino Unido) em O 2 a 2 L / min. Coloque um oxímetro de pulso (Nellcor N-20, Covidien, Irlanda) na segunda e na terceira toe materno para monitorizar continuamente a frequência cardíaca e a saturação de O2 arterial. </li><li> Procedimento cirúrgico. <ol><li> A pré-medicação. Antes de iniciar a cirurgia, profilaxia antibiótica administrar penicilina G, 300.000 UI (Kela Pharma, Hoogstraeten, Bélgica), uterino tocolítico acetato de medroxiprogesterona 0,9 mg / kg (Depo-Provera, Pharmacia Upjohn, Puurs, Bélgica) e analgésica da buprenorfina 0,03 mg / kg (Temgesic; Schering-Plough) Por via subcutânea em 2,5 ml de uma única seringa. </li><li> Preparação do coelho. Coloque o coelho em uma almofada de aquecimento durante todo o período da cirurgia. Remover os pêlos da área cirúrgica abdominal e aplicar anti-séptico Iodopovidona 7,5% (Betadine, Purdue, Connecticut, EUA). Um protocolo asséptica completo é, então, empregue. </li><li> Laparotomia abdominal. Infiltrar no local da incisão, com anestesia local (2 ml de lidocaína a 1%, B Braun Medical, Bélgica) por via subcutânea. O local de incisão deve ser cerca de 5 cm de comprimento, na linha média, no 2/3 inferiores do abdómen. Uma vez que a pele está aberto, utilizar uma mistura de dissecção cortante e romba para expor a bainha do reto. Deve ser tomado cuidado para evitar as glândulas mamárias maternas vasculares situados de cada lado da linha média de entrada (Figura 1A). Segure o músculo reto abdominal e peritônio, tenda para evitar a inclusão involuntária de conteúdo abdominal e insira cuidadosamente o uso de dissecção aguda (Figura 1B). </li><li> Exteriorização uterina. Cerque o campo cirúrgico com cortinas de gaze embebidas em soro fisiológico aquecido. Segure cuidadosamente e exteriorizar ambos os lados do útero bicorno. Cuidados devem ser tomados para não colocar tanto o vaginal ou no final de ovário de cada corno uterino sob tensão, pois isso pode resultar em sangramento indesejável, a dor ea contratilidade uterina. O assistente de irriga o útero exposto continuamente com solução salina aquecida para evitar as contracções uterinas. Palpar e registrar o número de fetos presentes em cada chifre. Por convenção, o feto no final do ovário é designado o primeiro feto. Um corno uterino é o caso do chifre e o outro é o controlo de chifre. Identificar o caso chifre previamente alocados aleatoriamente para indução CIUR e depois substituir o chifre controle de volta para o abdômen (fetos controles internos). </li><li> Cirurgicamente induzida CIUR. Identificar os vasos útero-placentários para cada saco gestacional no caso corno designado (Figura 1C).Cirurgicamente ligadura 40-50% destes navios que utilizam a poliglactina 5-0 sutura (Ethicon Vicryl, Johnson e Johnson Medical, EUA) (Figura 1D-1E). Na prática, muitas vezes há três feixes vasculares fornecendo cada saco gestacional. Neste caso, o maior feixe vascular é ligado. Uma vez completo, o útero é novamente aquecido irrigado com solução salina e cuidadosamente devolvido ao abdómen. </li><li> Fecho abdominal. Feche o abdómen em duas camadas, utilizando uma corrida contínua de sutura 2-0 de poliglactina (Vicryl Ethicon, Johnson &amp; Johnson Medical, EUA). Feche a pele com subcuticular poliglactina 3-0 sutura (Ethicon Vicryl, Johnson e Johnson Medical, EUA). Pulverizador de aerossol de alumínio sobre a ferida, para impedir que o coelho depois de interferir com as suturas. </li><li> Recuperação. Cessar anestesia e observar de perto a recuperação da respiração. O coelho é então alojados tal como descrito acima, com acesso a comida e água ad libitum e observados diariamente. </li></ol></li></ol> 2. Realizar ecocardiografia fetal e ultra-som Doppler pulsátil <ol><li> O mesmo coelho é então transferido para GA 30 dias para ecocardiografia e avaliação ultra-som. O coelho é colocado sobre uma almofada de aquecimento durante todo o período de exame. </li><li> Procedimento anestesia. <ol><li> A indução da anestesia é conseguido através da administração de cetamina 35 mg / kg (Ceva Sante Animale, Bruxelas, Bélgica) e xilazina 5 mg / kg (Ceva Sante Animale, Bruxelas, Bélgica) por via intramuscular. Uma vez calmo, obter acesso intravenoso usando uma cânula de calibre 24 (BD Insyte-W, Becton Dickinson sistemas de terapia de infusão, Utah, EUA), inserido em uma veia periférica auricular. </li><li> Manter a anestesia com uma infusão contínua de cetamina e xilazina: 2 ml de cetamina (100 mg / ml) e 1,5 ml de xilazina (20 mg / ml) a 46,5 ml de solução salina normal, e depois infundido por meio de uma bomba de seringa de 40 ml / h. Garantir um three-way-tap e anexar uma ml seringa de anestesia resgate 5: 2 mlcetamina (100 mg / ml) e 1,5 ml de xilazina (20 mg / ml). Bolus de 0,5 ml anestesia salvamento são raramente necessária. Administrar analgésico buprenorfina 0,03 mg / kg (Temgesic; Schering-Plough) subcutaneouslyprior a cirurgia. Oxigénio 2 L / min, é aplicada por meio de máscara. Coloque um oxímetro de pulso (Nellcor N-20, Covidien, Irlanda) na segunda e na terceira toe materno para monitorizar continuamente a frequência cardíaca e a saturação de O2 arterial. </li></ol></li><li> Laparotomia e exteriorização uterina. Consulte a 1.3.3 e 1.3.4. </li><li> Posicionamento para ecocardiografia fetal e ultra-sonografia. <ol><li> Coloque o coelho numa posição lateral virado para o investigador. Isso facilita a recuperação mais fácil de um único saco gestacional, para exame e impede tração excessiva em vasos útero-placentários. Tanto quanto possível, tentar exteriorizar apenas um saco gestacional de cada vez para minimizar a exposição. Assegurar o saco gestacional exposta é colocada sobre uma gaze irrigado comsalina aquecida. Para garantir resultados normalizados entre os diferentes grupos de estudo, em geral, apenas o feto no ovário e termina vaginais de cada trompa uterina são utilizados no exame de ultra-som. </li><li> A função cardíaca fetal é muito susceptível ao efeito de exteriorização uterina, a mudança na temperatura e de pressão a partir do transdutor de ultra-som ao longo dos vasos placentários. Para minimizar esses efeitos de confusão ambientais e iatrogênica sobre a função cardíaca, o exame de ultra-som deve começar imediatamente após exteriorização do saco gestacional e deve ser sistemática e eficiente. Em nossa experiência, mudanças na função cardíaca fetal raramente ocorrem nos primeiros 5 min de exposição. Se bradicardia fetal é encontrado, remover a sonda de ultra-som, reposicionar o feto para evitar a torção dos vasos feto-placentárias, irrigar com soro fisiológico aquecido ou brevemente devolver o saco gestacional de volta para o abdome materno. Se bradicardia fetal é persistente, o exame para este fetus deve ser abandonada em favor de examinar o próximo feto. </li></ol></li><li> Ecocardiografia fetal. <ol><li> O Visualsonics VEVO 2100 (Toronto, Canadá), plataforma microultrasound de alta resolução com um software de análise cardíaca e tensão instalado é necessária. Um VisualSonics MS-250 transdutor (VisualSonics, Toronto, Canadá) é utilizado para a aquisição de dados. Isto tem uma frequência central de 21 MHz com uma largura de banda de 13-24 MHz. O foco geométrico é de 15 mm, a largura máxima da imagem é de 23 mm e a profundidade máxima da imagem é de 30 mm. A pegada é de 28 x 5,75 mm. Os dados são adquiridos de acordo com a Sociedade Americana de Ecocardiografia e normas para a realização do ecocardiograma fetal. 20 </li><li> Aquisição de dados 1: vista lateral No nível do quatro câmaras visão lateral, gravar um modo-B cine circuito de pelo menos cinco ciclos cardíacos para determinar a tensão, taxa de deformação, velocidade e deslocamento.. Esta é analisada utilizando o desligada VevoStrain(Visualsonics, Toronto, Canadá) algoritmo como anteriormente descrito na revista em detalhe. Índices 21 ecocardiografia modo-M podem ser obtidos neste vista padrão. Medições off-line de estrutura e função cardíaca pode então ser analisada: ventricular interna e diâmetros de septo em sístole e diástole, volumes, volume sistólico, fração de encurtamento, fração de ejeção e débito cardíaco 21. </li><li> A aquisição de dados 2:. Apical Ao nível do apical de quatro câmaras view, modo B cine loop pode ser repetido para VevoStrain análises tal como descrito acima. M-mode ecocardiografia é usada para avaliar tricúspide (TAPSE) e excursão mitral anular avião sistólica (MAPSE) e tensão longitudinal e taxa de deformação. 22,23 Essa visão apical também permite a avaliação de valvular OVF eo índice de performance miocárdica modificado conforme anteriormente descrito 24. </li></ol></li><li> Fetoplacentária pulso acenou Doppler ultrasound. </li></ol> Fluxo de ondas de velocidade (FVW) da artéria umbilical são obtidos por localizar os vasos umbilicais, utilizando Doppler a cores e, em seguida, colocar a amostra portão Doppler pulsado sobre a artéria umbilical num circuito livre de cordão umbilical. 25 A artéria cerebral média (MCA) é FVW localizado colocando o portão amostra Doppler pulsado apenas para além da origem da MCA uma vez que o Círculo de Willis está localizado por Doppler colorido 26. ducto venoso (DV) FVW é obtida colocando o portão amostra Doppler pulsado na porção proximal do DV visto com Doppler colorido onde se origina a partir da veia umbilical intra-hepática ou em uma visão sagital ou transversal do feto. 26 O índice de pulsatilidade (PI) é calculada off-line usando o software de análise cardiovascular VisualSonics.

O autor Professor Jan D&#39;hooge tem um acordo de pesquisa com VisualSonics. Os demais autores não têm divulgações.

Nós usamos uma abordagem previamente validado de reduzir cirurgicamente fluxo sanguíneo útero-placentário em um coelho para produzir CIUR 13-16 e examinar mais tarde a função cardíaca fetal 14 para descrever a tecnologia microultrasound e análise da função cardíaca disponíveis na VEVO VisualSonics 2100. A capacidade de reproduzir feto-placentárias Doppler mudanças de fetos com RCIU humanos em um modelo animal pequeno e, em seguida, permitir o exame da função cardíaca com a ecocardi...

A carga de doença cardiovascular que resulta da restrição do crescimento fetal intra-uterino retardado (CIUR) não pode ser exagerada. É a principal causa de morte fetal após anomalias congénitas. CIUR 1 refere-se a um feto que não consegue atingir o seu potencial de crescimento e é geralmente um resultado de insuficiência placentária. Em dois sobreviventes, a doença cardiovascular é evidente através do tempo de vida com a disfunção do miocárdio resulta na infância 3,4 e hipertensão subseqüente 5, 6 diabetes e obesidade em desenvolvimento na vida adulta - todos fatores de risco cardíaco cumulativos desde o nascimento à morte prematura por doença cardíaca isquêmica 7. Desenvolvimento de modelos animais para caracterizar a comunicação materno-fetal que estabelece CIUR ea resposta fetal após a redução da disponibilidade de substrato é necessário se quisermos tanto melhor compreender a fisiopatologia do carro CIUR relacionadacomprometimento cardíaco e desenvolver estratégias cardio-protetores para melhorar a saúde fetal e pós-natal. A este respeito, muitos modelos diferentes, em diferentes espécies foram descritas. CIUR 8 é induzido por materno sob a nutrição com uma dieta de baixo teor de proteína em roedores, 9 ablação cirúrgica ou ligadura de fluxo sanguíneo uterino em roedores e cobaias 10 ou oclusão do artéria umbilical em ovinos. 11 No entanto, é evidente que nenhum modelo totalmente recapitula o CIUR humano 12. Neste estudo metodológico atual, usamos uma abordagem bem validado de interrupção vascular útero-placentária seletiva em um coelho 13-16 que não só produz respostas cardiovasculares fetais observadas com ultra-som clinicamente 14, mas também permite o interrogatório da função cardíaca fetal com o romance ecocardiografia utilizando a tecnologia microultrasound do VisualSonics VEVO 2100. Apesar de ultra-som Doppler de fetoplvasos acental continua a ser a pedra angular da atual vigilância pré-natal de fetos com RCIU 17, ecocardiografia funcional está sendo cada vez mais utilizado para fornecer novos insights sobre a fisiopatologia da doença e para avaliar o bem-estar fetal. 18 Assim, aqui vamos dar esses avanços da pesquisa clínica e descrever um modelo animal que portos não só esta imagem de sofisticação, mas também fornece a plataforma experimental para investigar os caminhos mecanicistas e terapêuticas.

<table border="1">
	<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketamine</td>
 <td>Ceva Sante Animale</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.ceva.com/en" target="_blank">http://www.ceva.com/en</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Xylazine</td>
 <td>Ceva Sante Animale</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.ceva.com/en" target="_blank">http://www.ceva.com/en</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Depot Provera</td>
 <td>Pharmacia Upjohn</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Penicillin G</td>
 <td>Kela Pharma</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.kela.be" target="_blank">http://www.kela.be</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Lidocaine</td>
 <td>B Braun Medical</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.bbraun.com/" target="_blank">http://www.bbraun.com/</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Temgesic</td>
 <td>Schering-Plough</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.merck-animal-health-usa.com/" target="_blank">http://www.merck-animal-health-usa.com/</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Isolurane</td>
 <td>Isoba Vet; Abbott Laboratories Ltd</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.abbottanimalhealth.com/index.html" target="_blank">http://www.abbottanimalhealth.com/index.html</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethicon</td>
 <td>Johnson and Johnson</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.ethiconproducts.co.uk/products/sutures" target="_blank">http://www.ethiconproducts.co.uk/products/sutures</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethicon</td>
 <td>Johnson and Johnson</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.ethiconproducts.co.uk/products/sutures" target="_blank">http://www.ethiconproducts.co.uk/products/sutures</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethicon</td>
 <td>Johnson and Johnson</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.ethiconproducts.co.uk/products/sutures" target="_blank">http://www.ethiconproducts.co.uk/products/sutures</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>VEVO 2100</td>
 <td>VisualSonics</td>
 <td>SN100-0032</td>
 <td><a href="http://www.visualsonics.com/" target="_blank">http://www.visualsonics.com/</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Aquasonic Gel</td>
 <td>Parker Laboratories</td>
 <td>01 02</td>
 <td><a href="http://www.parkerlabs.com/ultrasound_products.html" target="_blank">http://www.parkerlabs.com/ultrasound_products.html</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Nellcor N-20PA Pulse oximeter</td>
 <td>Covidien</td>
 <td></td>
 <td><a href="http://www.nellcor.com/prod/PRODUCT.ASPX?S1=POX&amp;S2=MON&amp;id=282&amp;V" target="_blank">http://www.nellcor.com/prod/PRODUCT.ASPX?S1=POX&amp;S2=MON&amp;id=282&amp;V</a></td>
 </tr>
	 </tbody>
 </table>

fetal echocardiography and pulsed-wave doppler ultrasound in a rabbit model of intrauterine growth restriction

Fetais crescimento intrauterino restrito (CIUR) resulta na função cardíaca anormal que é aparente pré-natal devido aos avanços na fetoplacentária Doppler e ecocardiograma fetal. Cada vez mais, essas modalidades de imagem estão sendo utilizados clinicamente para examinar a função cardíaca e avaliar o bem-estar no útero, orientando, assim, calendarização das decisões de nascimento. Aqui, usamos um modelo de coelho de CIUR, que permite a análise da função cardíaca de uma forma clinicamente relevante. Usando anestesia induzida isoflurano, CIUR é criado cirurgicamente em idade gestacional dia 25, realizando uma laparotomia, expondo o útero bicorno e ligadura de 40-50% dos vasos útero-placentários fornecendo cada saco gestacional em um único corno uterino. O outro chifre no útero bicorno coelho serve como fetos controles internos. Em seguida, após a recuperação em idade gestacional dia 30 (termo), o mesmo coelho passa por exame da função cardíaca fetal. A anestesia é induzida com Ketamine e xilazina por via intramuscular, em seguida, mantido por uma infusão contínua de cetamina e xilazina para minimizar os efeitos iatrogênicos sobre a função cardíaca fetal. Uma laparotomia repetição é realizada para expor cada saco gestacional e um exame microultrasound (VisualSonics VEVO 2100) da função cardíaca fetal é realizada. Insuficiência placentária é evidente por um elevado índice de pulsatilidade ou um fluxo diastólico final ausente ou reversa da artéria umbilical Doppler onda. O ducto venoso e da artéria cerebral média Doppler é então examinada. Ecocardiografia fetal é realizada pelo modo B gravação, o modo M e OVF em vista lateral e apical. Cálculos off-line determinar variáveis ​​padrão do modo M cardíacos, excursão sistólica avião anular tricúspide e mitral, salpico de monitoramento e análise de tensão, o índice de desempenho miocárdico modificado e vascular OVF de interesse. Assim, este modelo de pequenos animais de CIUR oferece exame em Utero da função cardíaca que é consistente com a prática clínica atual e é, portanto, útil em um ambiente de pesquisa translacional.

Um crescimento assimétrico restrito feto e placenta de ligadura vascular útero-placentária é comparado a um feto controlo normal e placenta na Figura 1F. Crescimento assimétrico é confirmado pelo baixo peso ao nascer neonatal e aumento da circunferência da cabeça: a relação circunferência abdominal com os controles. Os resultados representativos de estudos feto-placentárias Doppler são mostrados na Figura 2. Um padrão de baixa resistência normal do fluxo diastólico final...

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Fetal Echocardiography and Pulsed-wave Doppler Ultrasound in a Rabbit Model of Intrauterine Growth Restriction

Descrevemos exame da função cardíaca fetal com a ecocardiografia fetal funcional contemporânea e fetoplacentária Doppler usando o VisualSonics VEVO 2100 microultrasound em um modelo induzido cirurgicamente de restrição do crescimento fetal intra-uterino em um coelho.

Ecocardiografia fetal e ultra-som Doppler pulsátil em um modelo de coelho de restrição do crescimento intra-uterino

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ...

fetal-echocardiography-pulsed-wave-doppler-ultrasound-rabbit-model

Research

JoVE Journal

Medicine

28.1K visualizações.  University Hospitals Leuven. Descrevemos exame da função cardíaca fetal com a ecocardiografia fetal funcional contemporânea e fetoplacentária Doppler usando o VisualSonics VEVO 2100 microultrasound em um modelo induzido cirurgicamente de restrição do crescimento fetal intra-uterino em um coelho.