Gli autori desiderano ringraziare tutti i membri del laboratorio di Ricke, passati e presenti. Ringraziamo Calvin Patten, Jr., DVM e Brigitte Raabe, DVM, per i commenti utili per quanto riguarda il protocollo. Vorremmo riconoscere il NIDDK, NCI, e NIEHS per il loro sostegno finanziario per questi studi: R01DK093690, R01CA123199, RC2ESO18764. TMN è un tirocinante nel Programma di Formazione Medica Scientist presso l&#39;Università di Rochester finanziato dal NIH T32 GM07356, il NIH sotto Ruth L. Kirschstein Nazionale Research Service Award F30DK093173 supporta anche questo progetto. CDV è supportato da T32CA157322 e ABT è supportato dal T32ES007015 presso l&#39;Università del Wisconsin-Madison. Il contenuto è di esclusiva responsabilità degli autori e non rappresentano necessariamente il punto di vista ufficiali dell&#39;Istituto Nazionale delle Scienze Mediche Generali o NIH.

1. Preparazione di Compressed ormone / Drug Pellet <ol><li> Questa procedura deve essere eseguita in una cappa di sicurezza chimica mentre indossa un camice da laboratorio, guanti, mascherina, occhiali di sicurezza, e il cofano. Per evitare la contaminazione incrociata, è fondamentale che l&#39;apparecchiatura che crea pellet è completamente pulito con etanolo al 70% prima e dopo la fabbricazione di ciascun tipo di pellet. </li><li> Utilizzando una bilancia analitica e pesare la carta, misurare quantità desiderata di polvere di ormone / droga. Circa il 5% di materiale in più si raccomanda di accogliere la perdita durante la pressatura. </li><li> Alcuni ormoni / farmaci richiedono un agente o un riempitivo di legame, che è mescolato prima di pellet fabbricazione. Ad esempio, la produzione di un 2,5 mg pellet di 17β-estradiolo, l&#39;ormone combinare con 22,5 mg di colesterolo, che si traduce in un pellet 25 mg. </li><li> Trasferire attentamente insieme die, posto sotto la pressa e spingere la leva con decisione verso il basso per comprimere i pellet. Utilizzare una pressione costante per mantenere costante la superficie sonoun rapporto volume. </li><li> Successivo inverse portastampi e abbassare la leva per rilasciare il pellet. </li><li> Ispezionare pellet per l&#39;integrità e determinare se la massa finale è nel raggio desiderato. Un intervallo accettabile una differenza ± 5% in massa finale (ad esempio, un intervallo accettabile per un pellet di 25 mg è 23,8-26,3 mg). </li><li> I pellet possono essere fatte prima dell&#39;intervento e conservati (condizioni e la durata dello stoccaggio dipende dalla stabilità del ormonale o farmaco usato nella produzione di pellet). Pellets ormonali possono essere acquistati come alternativa a pellet produzione. L&#39;acquisto pellet evita l&#39;uso di farmaci di qualità non farmaceutici dal momento che verranno formulate e aggravati. </li></ol> 2. Preparazione di cellule ricombinanti Xenotrapianti <ol><li> Harvest e la cultura principale del mouse mesenchima urogenitale (UGM), le cellule stromali per meno di 4 settimane prima di essere raccolti per il conteggio. </li><li> Cultura immortalato prostata linee cellulari epiteliali nel solito fashion e raccogliere per il conteggio. Per questo esempio, preparare cellulari innesti ricombinanti mescolando 100.000 cellule BPH-1 epiteliali per innesto con 250.000 UGM cellule stromali per innesto in sospensione. </li><li> Cellule pellet insieme e risospendere in abbastanza collagene di tipo 1 neutralizzato ratto coda per numero desiderato di innesti, ciascuna in un volume di 25 pl a 50 pl. </li><li> Impostare innesti ricombinanti a 37 ° C per 15 minuti e poi coprire con terreno di coltura per la conservazione a 37 ° C per 48 ore prima di innesto. </li></ol> 3. Preparazione del tessuto Xenotrapianti <ol><li> Mantenere le precauzioni universali per via ematica patogeni durante approvvigionamento dei tessuti e la procedura chirurgica. Dopo l&#39;approvazione comitato di revisione istituzionale e il consenso informato, avere tessuto prostatico fresco di resezione chirurgica. Per gli studi di crescita BPH, tessuti possono essere raccolte da resezione transuretrale della prostata o semplici procedure prostatectomia. Xenotrapianti primarie di PRCA o prost benignatessuto mangiato può essere ottenuto da campioni di prostatectomia radicale. </li><li> Conservare tessuto raccolto in mezzi cellule isotonica tamponata salina normale o su ghiaccio. A seconda delle condizioni dei tessuti e di stoccaggio, i campioni possono essere conservati per un massimo 24 ore prima della preparazione di innesti di tessuto. Pratica comune è di dividere il campione in tre pezzi, con una sezione fissato in formalina ed ordinariamente trattati per istologia, un pezzo scatto congelato per l&#39;analisi molecolare e un pezzo ulteriormente suddivisa in xenotrapianti di tessuto (1-3 mm di dimensioni). </li></ol> 4. Preparazione del fuoco lucido pipetta di vetro <ol><li> Guanti resistenti indossare occhiali protettivi, camice da laboratorio e di calore, posto vetro pipetta Pasteur punta nel becco Bunsen fiamma ad un angolo di circa 60 ° per iniziare. </li><li> Mantenere una costante, lieve movimento alla pipetta in modo da evitare punti caldi. </li><li> Disegna la punta sottile e fuoco lucidare con l&#39;obiettivo di essere un finale leggermente curva con una rotonda, chiuso punta. </li></ol&gt; 5. Preparazione di strumenti chirurgici e Suite <ol><li> Sterilizzare in autoclave tutti gli strumenti. Prima dell&#39;intervento, ispezionare tutti gli strumenti, avendo cura di mantenere il campo sterile. </li><li> Impostare area chirurgica sterile con tamponi assorbenti, portata dissezione, anestesia naso a cono, strumenti chirurgici e la lampada di riscaldamento diretto verso l&#39;area di lavoro. Per sterilizzare gli strumenti tra topi, Preriscaldare tallone sterilizzatore. </li><li> Montare ed apparecchi di anestesia prova; pesare scavenger gas. </li><li> Utilizzando le microonde, pastiglie cera calore per 5 minuti (in incrementi di 1 min, impastare il pad cera per coniugare fuso e unmelted cera) all&#39;accensione 70-80%, fino a quando tutta la cera è uniformemente sciolto. Al tatto, assicura il pad non è troppo caldo e posto sotto la gabbia di recupero roditori vuoto. </li><li> Don dispositivi di protezione individuale per le procedure chirurgiche di roditori, tra cui mascherina chirurgica, cappellino, guanti e camice. </li></ol> 6. Procedura chirurgica: renale Capsule xenotrapianto<ol><li> Tutte le procedure che coinvolgono gli animali di ricerca devono essere eseguite con l&#39;approvazione dei comitati per la cura degli animali istituzionale e di utilizzo. Prima dell&#39;induzione dell&#39;anestesia, osservare il mouse per garantire la salute e il benessere. </li><li> Posizionare il mouse nella camera di induzione di anestesia isoflurano al 3-5%. Quando l&#39;animale ha smesso di muoversi e la frequenza respiratoria è diminuito, trasferimento a cono in posizione prona, e mantenere l&#39;anestesia al 1-3%. </li><li> Se necessario, utilizzare tagliatori di radere la parte posteriore del mouse. Questo non è necessario quando si utilizza atimici nudi (nu / nu) topi. </li><li> Applicare una pressione decisa per la tessitura del piede posteriore esteso per valutare l&#39;adeguatezza dell&#39;anestesia. Se il mouse risponde alla pressione, è necessario più tempo per l&#39;anestesia abbia effetto. Se necessario, regolare il flusso di anestesia leggermente per raggiungere l&#39;anestesia adeguata. </li><li> Quando il mouse viene adeguatamente anestetizzato, disinfettare il sito chirurgico con iodio soluzione chirurgica (Betadine), seguita da70% di alcol. </li><li> Don guanti sterili e camice, applica teleria sterile al sito chirurgico. Sollevare la pelle torna con un paio di pinze dentate, e utilizzando le forbici grossolani fanno un cm dorsale mediana incisione 2-3. </li><li> Utilizzando forbici smussate o una sonda, separare il derma sottostante dalla parete del corpo (su entrambi i lati dell&#39;incisione per l&#39;innesto bilaterale o su un lato per l&#39;innesto unilaterale). </li><li> Riposizionare il mouse in posizione laterale, e identificare la posizione del rene visualizzando il profilo renale attraverso la parete muscolare. Applicare una leggera pressione manuale con il pollice e l&#39;indice sull&#39;addome può aiutare con la visualizzazione organi interni. </li><li> Usando sottili forbici iris, e avendo cura di evitare grandi vasi e nervi spinali, fare un 1 centimetro incisione nella parete del corpo parallelo alla colonna vertebrale. Amplia questa incisione di 1,5-2,0 cm (leggermente più lungo l&#39;asse longitudinale del rene) aprendo delicatamente le forbici ampia dopo inserendoli nella incisione iniziale. </li><li> Esteriorizzare il rene applicando una leggera pressione all&#39;esterno della parete muscolare su entrambi i lati del rene con il dito indice e pollice. Tuck pelle bordi sotto del rene esteriorizzato, che si regga sulla parete del corpo. Mentre il rene è esteriorizzato, mantenere l&#39;idratazione della capsula renale applicando salina sterile. </li><li> Utilizzando belle # 5 pinze sollevare delicatamente la capsula renale dal parenchima del rene e con la multa bisturi, fare una incisione mm 2 -4 nella capsula. La dimensione della incisione è determinata dalle dimensioni della protesi, ma dovrebbe essere minimizzato per mantenere l&#39;integrità della capsula. </li><li> Manipolare una pipetta Pasteur di vetro che è stata disegnata sottile e incendio lucidato con un&#39;estremità chiusa arrotondata sotto la capsula tangente alla superficie del rene. Aprire delicatamente una piccola capsula tasca per gli innesti, con grande attenzione a non danneggiare il parenchima renale. </li><li> Il bordo di taglio della capsula renale viene sollevato con le pinza sottile, e l&#39;i innestos inserita nella tasca sotto la capsula utilizzando il vetro pipetta lucidati a fuoco. Diversi innesti possono essere posizionati sotto la capsula renale e distribuiti uniformemente sulla superficie del rene. </li><li> Se, nel corso di un innesto, la capsula diventa disidratato, dovrebbe essere inumidito applicando salina sterile. </li><li> Quando l&#39;innesto è completa, sollevare delicatamente i lati dell&#39;incisione parete muscolare per sostituire il rene indietro nella cavità del corpo. Si osservi che gli innesti non scivolare fuori da sotto la capsula. </li><li> Chiudere la parete muscolare con una sola sutura (4-0, FS-2 Vicryl sutura). La procedura chirurgica può essere ripetuta sul rene controlaterale riposizionando il mouse. </li><li> Quando l&#39;innesto è completa, il mouse potrebbe subire sottocutanea pellet impianto nel corso della stessa procedura chirurgica (Vedi protocollo punto 7). </li><li> Utilizzando pinze dentate, allineare i bordi incisione della pelle e applicare 2-3 clip ferita chirurgica per chiudere l&#39;incisione. Somministrare analgesia (usiamo 5-10 mg / kg carprofen mediante iniezione sottocutanea) e posizionare il mouse in decubito laterale nella gabbia recupero. Assicurare il mantenimento della temperatura corporea con calore da una lampada o piastra elettrica. Osservare per il pieno recupero del mouse, che dovrebbe avvenire in meno di 15 minuti. </li><li> I topi devono essere osservati per la prossima 24 ore per i segni di dolore post-operatorio, sanguinamento e / o altre complicazioni. Controllare regolarmente incisione chirurgica per segni di infezione. </li><li> Rimuovere clip ferita con dispositivo chirurgico di rimozione della clip ferita 7-14 giorni dopo l&#39;intervento chirurgico. </li></ol> 7. Procedura chirurgica: sottocutaneo Pellet impianto <ol><li> Ripetere i passaggi 6,1-6,5 dalla capsula renale xenotrapianto procedura chirurgica. </li><li> Sollevare la pelle torna con un paio di pinze pelle, e utilizzando le forbici grossolani fanno un cm dorsale mediana incisione 1-2. </li><li> Utilizzando forbici smussate o una sonda, separare il derma sottostante dalla parete del corpo in direzione craniale. </li><li> Utilizzando pinze pelle,sollevare delicatamente l&#39;aspetto craniale dell&#39;incisione cutanea, e tenendo premuto il pellet ormone delicatamente con rette, pinze dentellate, inserire il pellet e rilasciare alla collottola, in tasca si è creato con la sonda smussato. </li><li> Ripetere i passaggi da 6,18-6,20 capsula renale xenotrapianto procedura chirurgica. Se si esegue per via sottocutanea pellet impianto solo, usare 1 clip ferita chirurgica per chiudere l&#39;incisione chirurgica. </li></ol>

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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+hormone+action+in+prostatic+carcinogenesis:+stromal+androgen+receptors+mediate+prostate+cancer+progression,+malignant+transformation+and+metastasis.">Androgen hormone action in prostatic carcinogenesis: stromal androgen receptors mediate prostate cancer progression, malignant transformation and metastasis.</a> Carcinogenesis. 33, 1391-1398 (2012).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+efficient+xenograft+models+for+benign+and+malignant+human+prostate+tissue.">Development and characterization of efficient xenograft models for benign and malignant human prostate tissue.</a> The Prostate. 64, 149-159 (2005).</li><li>Goto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximal+prostatic+stem+cells+are+programmed+to+regenerate+a+proximal-distal+ductal+axis.">Proximal prostatic stem cells are programmed to regenerate a proximal-distal ductal axis.</a> Stem Cells. 24, 1859-1868 (2006).</li><li>Xin, L., Ide, H., Kim, Y., Dubey, P., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+regeneration+of+murine+prostate+from+dissociated+cell+populations+of+postnatal+epithelia+and+urogenital+sinus+mesenchyme.">In vivo regeneration of murine prostate from dissociated cell populations of postnatal epithelia and urogenital sinus mesenchyme.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 11896-11903 (2003).</li><li>Priolo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+genomic+characterization+of+mouse+xenografts+of+human+primary+prostate+tumors.">Establishment and genomic characterization of mouse xenografts of human primary prostate tumors.</a> Am. J. Pathol. 176, 1901-1913 (2010).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Mulder, G. B., Luo, Y., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+Rodent+Surgery+for+the+New+Surgeon.">Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586 (2011).</li></ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.

Questo documento e il protocollo descritto nel presente documento descrivono la produzione di ormone compressa e / o pellets droga, e la procedura chirurgica per l&#39;impianto sottocutaneo pellet di topi. A seconda della domanda di ricerca da affrontare, questa tecnica può essere eseguita singolarmente, o in combinazione con capsula renale xenotrapianto di cellule della prostata innesti ricombinanti o xenotrapianti tessuto della prostata, che sono tecniche ampiamente utilizzate nella ricerca prostata 17-19....

Il cancro della prostata (PRCA) e iperplasia prostatica benigna (BPH) sono significativi oneri sanitari. PRCA è il secondo tumore solido più frequente negli uomini ed una delle principali cause di cancro legate morte 1. BPH è anche molto diffusa tra gli uomini più anziani, e si stima che la manifestazione clinica di BPH, sintomi delle basse vie urinarie (LUTS), interesserà 50-90% degli uomini 2. Mentre androgeni ed estrogeni sono noti per essere importanti in PRCA e BPH, la nostra comprensione dei meccanismi ormonali che sono alla base della carcinogenesi e la crescita rimane incompleto 3,4. Modelli animali semplici e geneticamente trattabili sono alla base degli studi che affronteranno tali priorità nella ricerca della prostata. In ormonali malattie reattive come PRCA e BPH, l&#39;uso del sottocutaneo, pellets ormone di rilascio lento, isolatamente o in combinazione con capsula renale xenotrapianto (il trasferimento di cellule, tessuti o organi da una specie all&#39;altra) nel immunocompospite del mouse romised, fornisce un metodo semplice e riproducibile per lo studio regolazione ormonale della crescita e carcinogenesi. Sottocutanea ormone pellet impianto è una tecnica semplice e riproducibile per studiare regolazione ormonale della carcinogenesi e formazione benigna della prostata 5. Impianto sottocutaneo di topi maschi adulti con 25 mg di testosterone (T) e 2,5 mg di 17β-estradiolo (E2), causa un aumento nel siero E 2 e graduale diminuzione della T, ricreando l&#39;ambiente ormonale dinamico di uomini di invecchiamento 5,6. Inoltre, questo modello riassume molte delle caratteristiche cliniche di BPH-LUTS 5,7. Metodi alternativi di somministrazione di ormoni comprendono la somministrazione orale / sonda gastrica o iniezione intraperitoneale, che causare disagio al roditore, sono meno consistenti nel fornire la stessa quantità di farmaco nel tempo, e sono più di un impianto chirurgico di una volta intensità di lavoro. Altri modi sottocutanei per hOrmone e / o la somministrazione di farmaci includono capsule Silastic 8. Mentre abbiamo anche l&#39;esperienza con l&#39;utilizzo di capsule Silastic, pellets compressi sono favoriti per la loro facilità d&#39;uso e riproducibilità. Inoltre, i tassi di rilascio di pellet ormonali compressi meglio imitano gli ormoni steroidei sessuali rapporti dinamici osservati in uomini di invecchiamento 5,7. Poiché lo sviluppo di topi geneticamente immunocompromessi, numerosi sistemi modello in vivo dotati di tecniche xenotrapianto sono stati sviluppati per lo studio di una ampia varietà di tessuti normali e malati. Ci sono diverse categorie di base di xenotrapianto. Xenotrapianti tessuti costituiti da un piccolo pezzo di tessuto intatto, che può essere una struttura normale, tumore maligno, o formazione benigna. Szot et al. (2007) hanno recentemente illuminato capsula renale xenotrapianto di insule pancreatiche 9. Aamdal et al. (1985) ha descritto capsula renale xenotrapianto di 27 linee cellulari tumorali umane in imMouse munocompromised ospita 10. Innesti possono anche essere costituiti da una singola linea di cellule immortalizzate (cancerose o non-oncogeno), o possono essere costituiti da una linea di cellule immortalizzate combinata con cellule isolate dal mesenchima (cella innesto ricombinante). Siamo favorevoli xenotrapianto di cellule ricombinanti per sondare i rispettivi ruoli di stroma ed epitelio nello sviluppo di PRCA e BPH. Cunha et al. (1980) fu il primo a riferire che quando adulto murino epitelio della vescica è combinato con mesenchima embrionale urogenitale sinusale (UGM) e eterotrapiantate sotto la capsula renale di topi maschi padroni di casa, il tessuto si sviluppa in strutture che assomigliano alla prostata acini 11. Norman et al. (1986) ha mostrato che topo adulto prostatica duttale e UGM, se combinati in ricombinanti tessuti, subiscono la crescita duttale e la ramificazione morfogenesi 12. Hayward et al. (1988) ha mostrato che epitelio prostatico umano risponde induttivo m fetaleesenchyme in modo simile 13. Un modello ormonale della carcinogenesi della prostata, combinando la prostata umana immortalizzate linea cellulare epiteliale BPH-1 con UGM, è stata riportata da Wang et al. 14 (2001) ed è stato ampiamente utilizzato nel nostro laboratorio 15. Questo modello è adatto per comprendere PRCA progressione perché benigna dell&#39;epitelio prostatico si trasforma in malattia metastatica, modellazione avanzata PRCA negli esseri umani 5. Poiché i componenti specifici possono essere geneticamente manipolati, cellule innesto ricombinante è particolarmente utile come approccio per valutare le interazioni stroma-epiteliale. Altri siti idonei per xenotrapianto sono intradermica, sottocutanea e luoghi ortotopici 16. A seconda del processo di tessuto e la malattia di interesse, questi possono essere approcci alternativi adatti. Per lo studio di carcinogenesi della prostata ormonale e regolazione della crescita benigna, scegliamo la capsula renalesito per xenotrapianto grazie alle sue innesto superiori prendere velocità, abbondante afflusso di sangue, e la capacità di impiantare un numero maggiore di xenotrapianti in un sito limitato a 16. Inoltre, la manipolazione ormonale del mouse host che provoca atrofia prostatica limita l&#39;uso della prostata ortotopico innesto 16. Questo protocollo descrive le tecniche di produzione dell&#39;ormone compressa / droga pellet e impianto chirurgico, così come capsula renale xenotrapianto di cellule della prostata e tessuti umani innesti. Insieme, queste tecniche forniscono un saggio sensibile per determinare se un topo geneticamente modificato è più suscettibile di PRCA e / o BPH iniziazione di ceppi di controllo. Xenotrapianto è una tecnica potente per la valutazione in vivo del potenziale delle cellule sperimentali per sviluppare istologiche e molecolari di malignità, nonché un saggio per strategie di trattamento innovativi per una vasta gamma di malattie benigne e maligne.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EQUIPMENT &amp; MATERIALS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pellet press</td>
			<td>PARR Industries </td>
			<td>2815</td>
			<td>3mm Punch &amp; Die set</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Analytical Balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>1918302</td>
			<td>Voyager or other</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Bunsen burner</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-962Q</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>L2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Deltaphase Pad Kit (reheatable wax)</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>39DP</td>
			<td>Alternative to an electric heating pad</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Hot Bead sterilizer</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>18000-45</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Isoflurane Vaporizer</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>VAP3000</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Induction Chamber</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>RES644</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>F/AIR Canister</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>80120</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>4 port Manifold</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>RES536</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Rebreathing Circuits</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>CIR529</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Inlet/Outlet Fittings</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>VAP203/4</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pressure Reg/Gauge</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>OXY508</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Oxygen Flowmeter</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>OXY660</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>21mm Clear Tubing</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>301-150</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Small Mice Nose Cone</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>ACC526</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile surgical gown</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>350.79866.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Surgical mask</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>350.50111.2</td>
			<td>2-ply w/ earloops</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile gauze</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.14100.2</td>
			<td>2 x 2 inches</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile Gloves</td>
			<td>Kimberly Clark</td>
			<td>55092</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Bouffant</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.27100.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.06220.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Surgical Scrub Wash</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>733.80010.3</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile Fields (Fenestrated)</td>
			<td>General Econopak, Inc</td>
			<td>88VCSTF</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>REAGENTS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C-3292</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Testosterone Proprionate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T-1875</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>17&beta;-estradiol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E-2758</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.33161.3</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.70200.3</td>
			<td>Injectable (Rimadyl)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Webster Veterinary</td>
			<td>07-836-3379</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.74504.3</td>
			<td>NaCl 0.9%, Injectable</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>SURGICAL INSTRUMENTS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Straight Sharp/Blunt Scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tools (F.S.T.)</td>
			<td>14054-13</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Toothed, Curved)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11055-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fine Iris scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe Scalpel</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>10071-12</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glass Pasteur pipets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S67050</td>
			<td>5" length</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Curved)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Straight)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11050-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Vicryl Suture</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>295-92100.2</td>
			<td>4-0, FS-2, Absorbable</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Needle Holder w/ scissor action</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12002012</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Wound Clips</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>ACS CS</td>
			<td>May use 7mm or 9mm clips</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Reflex Wound Clipper</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12031-09</td>
			<td>Correspond w/ wound clip size</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Would Clip Remover</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12033-00</td>
			<td>Universal</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterilization Container</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>20810-01</td>
			<td>Any autoclavable container will do</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Syringe w/ needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>148292C</td>
			<td>1cc, 25Gx1</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ear Tag Applicator</td>
			<td>National Band &amp; Tag Co.</td>
			<td>1005s1</td>
			<td>Alternative to ear notching</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Small Animal Ear Tags</td>
			<td>National Band &amp; Tag Co.</td>
			<td>1005-1</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

renal capsule xenografting and subcutaneous pellet implantation for the evaluation of prostate carcinogenesis and benign prostatic hyperplasia

Nuove terapie per due malattie comuni della prostata, il cancro alla prostata (PRCA) e iperplasia prostatica benigna (BPH), dipendono in modo critico sugli esperimenti che valutano la loro regolazione ormonale. Ormoni sessuali steroidei (in particolare androgeni ed estrogeni) sono importanti in PRCA e BPH, si sonda i loro rispettivi ruoli nell&#39;indurre la crescita della prostata e carcinogenesi in topi con esperimenti usando pellet ormonali compressi. Ormonali e / o droga pellet sono facilmente realizzati con una pressa pellet, e chirurgicamente impiantati nel tessuto sottocutaneo dell&#39;host topo maschio. Noi descriviamo anche un protocollo per la valutazione della carcinogenesi ormonale combinando sottocutanea dell&#39;ormone pellet impianto con xenotrapianto di cellule ricombinanti prostata sotto la capsula renale di topi immunocompromessi. Inoltre, l&#39;ormone sottocutanea pellet impianto, in combinazione con la capsula renale xenotrapianto di tessuto di BPH, è utile per capire meglio regolazione ormonale del prost benignamangiato la crescita, e per testare nuove terapie mirate sesso steroidi percorsi ormonali.

<html> A seconda ipotesi da testare, capsula renale xenotrapianto di tessuti o cellule ricombinanti può essere eseguita isolatamente o in combinazione con l&#39;impianto sottocutaneo ormone pellet. Uno schema di un esperimento ipotetica che unisce esperimento capsula xenotrapianto renale con ormone sottocutanea pellet impianto è illustrato in Figura 1. Una varietà di sostanze in polvere e / o cristallini possono essere utilizzati nella fabbricazione di pellet compressi con la stampa pellet. Fi...

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Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

Descriviamo la fabbricazione di pellet ormonali compressi, nonché sottocutanea impianto chirurgico in topi. Questa strategia può essere combinato con la crescita di cellule e tessuti xenotrapianti sotto la capsula renale di topi nudi atimici valutare cancerogenesi ormonale e regolazione della crescita prostatica benigna.

Renale Capsule xenotrapianto e sottocutanea Pellet impianto per la valutazione di carcinogenesi della prostata e dell&#39;iperplasia prostatica benigna

New therapies for two common prostate diseases,  prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend  critically on experiments ...

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JoVE Journal

Medicine

24.9K Views.  University of Wisconsin-Madison.  Descriviamo la fabbricazione di pellet ormonali compressi, nonché sottocutanea impianto chirurgico in topi. Questa strategia può essere combinato con la crescita di cellule e tessuti xenotrapianti sotto la capsula renale di topi nudi atimici valutare cancerogenesi ormonale e regolazione della crescita prostatica benigna. 

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Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

Valutazione della captazione nanoparticelle nei tumori in tempo reale utilizzando intravitale Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

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Cell Population Analyses During Skin Carcinogenesis

Cancer development is a multiple-step process involving many cell types including cancer precursor cells, immune cells, fibroblasts and endothelial cells. Each type of cells undergoes signaling and functional changes during carcinogenesis. The current challenge for many cancer researchers is to dissect these changes in each cell type during the multiple-step process in vivo. In the last few years, the authors have developed a set of procedures to isolate different cell populations during skin cancer development using K14creER/R26-SmoM2YFP mice. The procedure is divided into 6 parts: 1) generating appropriate mice for the study (K14creER+ and R26-SmoM2YFP+ mice in this protocol); 2) inducing SmoM2YFP expression in mouse skin; 3) preparing mouse skin biopsies; 4) isolating epidermis from skin; 5) preparing single cells from epidermis; 6) labeling single cell populations for flow cytometry analysis. Generation of sufficient number of mice with the right genotype is the limiting step in this protocol, which may take up to two months. The rest of steps take a few hours to a few days. Within this protocol, we also include a section for troubleshooting. Although we focus on skin cancer, this protocol may be modified to apply for other animal models of human diseases.

Carcinogenesis is a process involving interactions between cancer cells and the cancer microenvironment. To dissect the molecular events, one needs to isolate different cell populations at different stages during cancer development. Using a mouse model for basal cell carcinoma, we describe a protocol for cell analyses during carcinogenesis.

Analisi popolazione cellulare Durante carcinogenesi della pelle

Cancer development is  a multiple-step process involving many cell types including cancer precursor  cells, immune cells, fibroblasts and endothelial ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions preclinically. However, valid assessment of pathological alterations often requires histological analysis, and when performed ex vivo, necessitates death of the animal. Therefore in conventional experimental settings, intra-individual follow-up examinations are rarely possible. Thus, development of murine endoscopy in live mice enables investigators for the first time to both directly visualize the gastrointestinal mucosa and also repeat the procedure to monitor for alterations. Numerous applications for in vivo murine endoscopy exist, including studying intestinal inflammation or wound healing, obtaining mucosal biopsies repeatedly, and to locally administer diagnostic or therapeutic agents using miniature injection catheters. Most recently, molecular imaging has extended diagnostic imaging modalities allowing specific detection of distinct target molecules using specific photoprobes. In conclusion, murine endoscopy has emerged as a novel cutting-edge technology for diagnostic experimental in vivo imaging and may significantly impact on preclinical research in various fields.

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Small animal imaging techniques allow serial diagnostic examinations and therapeutic interventions in vivo. Recently, the scope of applications has significantly widened and currently includes assessment of colonic tumor development, wound healing and monitoring of inflammation. This protocol illustrates these diverse potential applications of murine endoscopy.

Murino Endoscopia per<em&gt; In Vivo</em&gt; Guarigione Imaging Multimodale di Cancerogenesi e valutazione della ferita intestinale e infiammazione

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or subvert anti-tumor immune responses in order to survive and flourish. Tumors take advantage of a number of different mechanisms of immune &#8220;escape,&#8221; including the recruitment of tolerogenic DC, immunosuppressive regulatory T cells (Tregs), and myeloid-derived suppressor cells (MDSC) that inhibit cytotoxic anti-tumor responses. Conversely, anti-tumor effector immune cells can slow the growth and expansion of malignancies: immunostimulatory dendritic cells, natural killer cells which harbor innate anti-tumor immunity, and cytotoxic T cells all can participate in tumor suppression. The balance between pro- and anti-tumor leukocytes ultimately determines the behavior and fate of transformed cells; a multitude of human clinical studies have borne this out. Thus, detailed analysis of leukocyte subsets within the tumor microenvironment has become increasingly important. Here, we describe a method for analyzing infiltrating leukocyte subsets present in the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Mouse B16 melanoma tumor cells were inoculated subcutaneously in C57BL/6 mice. At a specified time, tumors and surrounding skin were resected en bloc and processed into single cell suspensions, which were then stained for multi-color flow cytometry. Using a variety of leukocyte subset markers, we were able to compare the relative percentages of infiltrating leukocyte subsets between control and chemerin-expressing tumors. Investigators may use such a tool to study the immune presence in the tumor microenvironment and when combined with traditional caliper size measurements of tumor growth, will potentially allow them to elucidate the impact of changes in immune composition on tumor growth. Such a technique can be applied to any tumor model in which the tumor and its microenvironment can be resected and processed.

This protocol describes a method for the detailed evaluation of leukocyte subsets within the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Chemerin-expressing B16 melanoma cells were implanted subcutaneously into syngeneic mice. Cells from the tumor microenvironment were then stained and analyzed by flow cytometry, allowing for detailed leukocyte subset analyses.

Valutazione del tumore infiltrante leucociti sottoinsiemi in un tumore sottocutaneo modello

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine balloon denudation model, which is comparable with established vessel injury models in large animals. The aorta denudation model with balloon catheters mimics the clinical setting and leads to comparable pathobiological and physiological changes. Briefly, after performing a horizontal incision in the aorta abdominalis, a balloon catheter will be inserted into the vessel, inflated, and introduced retrogradely. Inflation of the balloon will lead to intima injury and overdistension of the vessel. After removing the catheter, the aortic incision will be closed with single stiches. The model shown in this article is reproducible, easy to perform, and can be established quickly and reliably. It is especially suitable for evaluating expensive experimental therapeutic agents, which can be applied in an economical fashion. By using different knockout-mouse strains, the impact of different genes on MH development can be assessed.

This article demonstrates a murine model to study the development of myointimal hyperplasia (MH) after aortic balloon injury.

Basato su palloncino ferita per indurre iperplasia Myointimal nell'Aorta addominale di Mouse

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the quality of life. BPH includes 2 major treatments: medication and surgery. Surgical treatment is often the most effective and final intervention. Holmium laser enucleation of the prostate (HoLEP), one of the most efficient surgical procedures for BPH, is conducted transurethrally. During surgery, the most important and most difficult part is to locate the surgical capsule of the prostate, which is consistent to the idea of anatomic surgery. Different skills may be needed in treating different parts of the prostate. HoLEP tends to be efficient and safe with good hemostatic properties, and able to treat bladder calculus, which may be the complications of BPH. The technique is particularly suitable for prostate of varying volumes and sizes. Indeed, HoLEP also presents certain disadvantages, such as a long learning curve and costly equipment. Regardless, this method may be the "new standard" and the excellent method for the surgical treatment of BPH.

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate HoLEP.

Here we present a safe and efficient protocol, holmium laser enucleation of the prostate, to treat benign prostatic hyperplasia.

Trattamento chirurgico per l'iperplasia prostatica benigna: Holmium Laser Enucleation della prostata (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the ...

Enucleation of the Prostate for the Treatment of Benign Prostatic Hyperplasia Using a 980 nm Diode Laser

In the aging male population, the occurrence of lower urinary tract symptoms (LUTS) caused by benign prostatic hyperplasia (BPH) is a common problem. Here, we introduce a new technique called 980 nm diode laser enucleation (DiLEP) to treat BPH1. Diode lasers can absorb both water and hemoglobin at the same time, so they are good for cutting and hemostasis2. The diode laser was approved by the FDA in 2007, and has been used in the treatment of BPH because of its effective cutting and hemostasis effect3. DiLEP presents several advantages over other techniques, such as TURP, HoLEP, and PVP. During the procedure, we define the boundary of a high-volume prostate and separate it into three lobes with a diode laser by burning two rings and one groove (like a Cupid&#39;s arrow). Compared to other procedures, mDiLEP has fewer intraoperative complications, a shorter learning curve, and achieves more tissue resection.

Here, we present a protocol for modified 980 nm diode laser enucleation to treat large volume benign prostatic hyperplasia.

Enucleazione della prostata per il trattamento dell'iperplasia prostatica benigna mediante laser a diodi da 980 nm

In the aging male population, the occurrence of lower urinary tract symptoms (LUTS) caused by benign prostatic hyperplasia (BPH) is a common problem. ...

Direct Drug Delivery to Kidney via the Renal Artery

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research field. Accumulation of drugs in certain organs may give rise to adverse and unwanted effects, depending on the nature of injectate. To minimize spillover and/or accumulation in other tissues, the herein described method directs the formulation into the renal artery bloodstream by inserting a catheter in the infra renal aorta, just below where it branches into the renal artery, resulting in the kidney as first reached organ and distributing of formulation throughout the kidney.
This manuscript provides a detailed description of the method, as well as its challenges and difficulties. It guides the experimenter to become skillful with this type of microsurgery that requires accuracy under sterile conditions. Speed is crucial for minimizing the ischemia and practicing the procedure will increase the chance of successful injections without adverse effects. By modulating the time between injection and reperfusion as well as the injected volume, the risk of spillover to other organs is mitigated. 
Note that this technique is suitable for single dosing strategies.

This manuscript describes a method for targeted delivery to a single kidney via a catheter placed in the infrarenal abdominal aorta in the mouse.

Consegna diretta di farmaci ai reni attraverso l'arteria renale

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to detect drug exposure. The rat blood sampling method determines the quality of the plasma and further affects the precision of the test results. The subclavian vein blood collection method described in this protocol collects blood samples repeatedly in the conscious state of animals to meet the needs of PK and TK tests. The skills of restraint handling and appropriate procedure of needle incision ensure the success rate of blood collection. It is easy to operate while ensuring the quality of plasma and at the same time catering to animal welfare. However, this method requires skilled operation, and an improper one may cause animal weakness, pain, lameness, and even mortality. The current method has been used in the testing facility for a 4-week oral toxicity study in Sprague Dawley (SD) rats with TK. The maximum amount of blood collected within 24 h did not exceed 20% of the animal's total blood. The animals' body weight was more than 200 g for males and females. The data showed that the animals' bodyweight increased steadily every week, and the clinical observation was normal after repetitive sample collection.

The present protocol describes a simple and efficient method for collecting blood from the subclavian vein in rats. It enables rapid, timely, and easily identifiable sampling without anesthesia and obtains high-quality blood through repetitive sample collection.

Campionamento ripetitivo di sangue dalla vena succlavia del ratto cosciente

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...

A Retrograde Implantation Approach for Peritoneal Dialysis Catheter Placement in Mice

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive peritoneal membrane failure in humans, which remains an area of intense investigation due to its profound clinical implications in managing patients with end-stage kidney disease (ESKD). Despite the clinical importance of PD and its related complications, current experimental murine models suffer from key technical challenges that compromise the models&#39; performance. These include PD catheter migration and kinking and usually warrant earlier catheter removal. These limitations also drive the need for a greater number of animals to complete a study. Addressing these drawbacks, this study introduces technical improvements and surgical nuances to prevent commonly observed PD catheter complications in a murine model. Moreover, this modified model is validated by inducing peritoneal inflammation and fibrosis using lipopolysaccharide injections. In essence, this paper describes an improved method to create an experimental model of PD.

This article describes modifications of a procedure to implant a peritoneal dialysis catheter in a murine model to avoid major technical issues observed with the conventional techniques.