Questo lavoro è stato sostenuto dal Centro Interdisciplinare per la Ricerca Clinica (IZKF) Münster (SEED 12/3, SB).

1. Osservazioni generali per esperimenti del mouse <ol><li> Tutti gli esperimenti con i topi devono essere effettuate in conformità con le linee guida del rispettivo comitato cura degli animali istituzionale e l&#39;uso. </li><li> Mantenere i topi in condizioni esenti da organismi patogeni e di consentire loro di avere accesso a cibo e acqua ad libitum. Nota: E &#39;importante usare età e topi appaiati per sesso in gruppi sperimentali, perché la suscettibilità alla malattia può variare a seconda dell&#39;età e del sesso. </li><li> A seconda delle condizioni sperimentali adottate, un gruppo di controllo sham immunizzato può essere considerato in cui MOG 35-55 peptide viene sostituito dal PBS senza antigene o un peptide nonencephalitogenic. </li><li> Si prega di considerare aspetti metodologici precedenti esperimenti di partenza (vedi anche sotto). Si consiglia di coinvolgere uno o due osservatori in cieco per EAE punteggio. </li></ol> 2. Preparazione di MOG 35-55 Emulsione <ol><li> 200 ml di un rapporto 1:1 di MOG 35-55 soluzione peptide e CFA deve essere iniettato per ciascun topo. Vi è una certa perdita dell&#39;emulsione viscoso durante la preparazione e l&#39;iniezione. Pertanto, preparare 1,5-2x della quantità necessaria. Calcolare il volume totale dell&#39;emulsione e dividere per 2 per gli importi richiesti sia soluzione MOG 35-55 peptide e CFA. </li><li> Diluire MOG liofilizzato 35-55 in DDH 2 O a una concentrazione finale di 2 mg / ml. Usiamo solitamente 200 mg MOG 35-55 peptide per mouse. Tale importo è contenuta in 100 ml di soluzione di riserva. La soluzione peptide deve essere conservata a -20 ° C. </li><li> Posizionare il contenuto di 1 fiala di essiccata H37Ra Mycobacterium tuberculosis (100 mg) in un mortaio. <ol><li> Terra con mortaio e pestello per ottenere una polvere sottile. </li><li> Aggiungere 10 ml di coadiuvanti incompleto di Freund per ottenere una soluzione madre 10 mg / ml CFA che può essere conservato a 4 ° C. </li><li> Prima di immunizzazione, diluire CFA soluzione stock with IFA ad una concentrazione finale di 2 mg / ml. Mescolare accuratamente prima dell&#39;uso per risospenderne materiale particolato e prendere in considerazione una certa perdita di volume della soluzione viscosa durante i preparativi sperimentali. </li><li> Mescolare 1:1 con MOG 35-55 soluzione peptide fino / ml viene raggiunta la concentrazione finale di 1 mg. ATTENZIONE:-ucciso calore Mycobacterium tuberculosis stimola la risposta immunitaria innata. Evitare l&#39;inalazione, ingestione e contatto con la pelle e gli occhi. </li></ol></li><li> Preraffreddare soluzioni su ghiaccio. <ol><li> Elaborare 1 ml di 2 mg / ml CFA e 1 ml di 2 mg / ml soluzione MOG 35-55 in due siringhe da 2 ml. Calcolare il numero di siringhe necessarie in base al numero di animali immunizzati. ATTENZIONE: evitare assolutamente cucitura durante la preparazione di adiuvante in quanto può causare granulomi o indurre reazioni autoimmuni. </li><li> Utilizzare un G cannula 27 per il 35-55 soluzione MOG e G cannula 20 per il CFA. Evitare bolle d&#39;aria e collegare entrambe le siringhe con ahree-way-valvola. </li><li> Inviare l&#39;emulsione da una siringa all&#39;altra e miscelare accuratamente per almeno 10 min come una buona emulsificazione è un passaggio critico. Vicino chiudere la tre vie valvola a sostenere emulsione. La soluzione deve essere bianco, rigido e viscoso senza separazione di fasi. </li><li> Emulsione può essere conservato per diversi giorni prima dell&#39;immunizzazione. Attendere almeno 30 minuti dopo la preparazione delle emulsioni per osservare se sono stabili. Prima dell&#39;immunizzazione, disegnare la soluzione in una delle due siringhe e collegare un G cannula 27. </li></ol></li></ol> 3. Preparazione tossina della pertosse <ol><li> Diverse quantità di tossina della pertosse possono essere trovati in letteratura che dipende anche dalla via di somministrazione (ad esempio per via endovenosa o intraperitoneale). Il nostro laboratorio utilizza 400 ng di tossina della pertosse in 200 ml di PBS per via intraperitoneale nel giorno della vaccinazione e due giorni dopo. ATTENZIONE: pertosse tossina ha molti effetti biologici. Evitare l&#39;inalazione, ingestione e contatto con la pelle e gli occhi. </li><li> Ricostituire 50 mg di tossina della pertosse in 500 microlitri DDH 2 O per una soluzione stock di 100 pg / ml. Conservare a 4 ° C. </li><li> Diluire 1:50 con PBS. 200 ml contengono ora 400 ng di PBS. Preparare la quantità necessaria di siringhe e di prendere in considerazione un eccesso di volume aggiuntivo di ~ 100 microlitri per ogni hub ago. </li></ol> 4. Immunizzazione degli animali <ol><li> Si prega di fare riferimento alla cura degli animali e l&#39;uso comitato istituzionale per criteri specifici per la richiesta di eutanasia a breve termine. Il nostro laboratorio utilizza breve narcotizzazione con isoflurano, mentre altri protocolli come l&#39;iniezione di ketamina / xylazina o halothan può anche essere possibile. Attendere anestesia e utilizzare un pizzico piede convergenza anteriore per valutare il livello di anestesia. </li><li> Assicurarsi che la vaccinazione viene eseguita da una persona esperta di ridurre al minimo lo stress per gli animali e per garantire l&#39;immunizzazione ottimale. </li><li> Iniettare 100 ml di lottagen / CFA emulsione per via sottocutanea in due siti differenti su ogni fianco posteriore. Assicurarsi che una bulbose forma di massa sotto la pelle che dovrebbero persistere per tutta l&#39;esperimento. </li><li> Iniettare 200 ml di tossina della pertosse intraperitonelly. </li><li> Assicurarsi che i singoli topi possono essere facilmente identificati per la valutazione quotidiana, ad esempio segni di colore sulla base della coda. </li><li> Somministrare una seconda dose di tossina della pertosse secondo giorno dopo l&#39;immunizzazione. </li></ol> 5. Monitoraggio EAE <ol><li> Peso e score clinico devono essere valutati giornalmente. L&#39;insorgenza di EAE generalmente correlato a perdita di peso, che può essere utilizzato come indicatore di attività della malattia. Si prega di fare riferimento alla cura degli animali istituzionale e utilizzare comitato di predefinire criteri quando i singoli topi devono essere presi fuori degli esperimenti. Questo dovrebbe essere considerato quando la perdita di peso supera il 20% del peso corporeo iniziale oppure quando gravi segni clinici (EAE punteggio 7 o peggio) si verificano. Si prega di fare riferimento al reorientamenti prospettici del rispettivo comitato cura degli animali istituzionale e l&#39;uso per i punteggi massimi consentiti. </li><li> Quando i topi hanno sintomi clinici di EAE, è importante garantire che la bottiglia d&#39;acqua è ancora raggiungibile e che il cibo è posto sul pavimento della gabbia. </li><li> Diversi sintomi di punteggio possono essere usati. Nel nostro laboratorio è stabilita una scala 0-10. </li></ol><table border="1"><tbody><tr><td> Grado </td><td> Segno clinico </td><td> Commento </td></tr><tr><td> 0 </td><td> Nessun segno clinico </td><td> Andatura normale, coda si muove e può essere sollevata, la coda si avvolge intorno ad un oggetto rotondo se il mouse si tiene alla base della coda </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Coda Parzialmente limp </td><td> Andatura normale, punta della coda si strugge </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Coda Paralizzato </td><td> Andatura normale, la coda si strugge </td></tr><tr><td> 3 </td><td> Hind paresi degli arti, il movimento scoordinato </td&gt; <td> Andatura scoordinata, coda arranca, arti posteriori rispondono a pizzicare </td></tr><tr><td> 4 </td><td> Uno degli arti posteriori paralizzati </td><td> Andatura non coordinata con quella degli arti posteriori trascinamento, coda arranca, un arto posteriore non risponde a pizzicare </td></tr><tr><td> 5 </td><td> Entrambi gli arti posteriori paralizzati </td><td> Andatura non coordinata con entrambi gli arti posteriori trascinamento, coda arranca, entrambi gli arti posteriori non rispondono a pizzicare </td></tr><tr><td> 6 </td><td> Arti posteriori paralizzati, debolezza arti anteriori </td><td> Andatura non coordinata con le zampe anteriori lottano per tirare corpo, arti anteriori riflesso dopo la presa, la coda arranca </td></tr><tr><td> 7 </td><td> Arti posteriori paralizzati, una zampa anteriore paralizzato </td><td> Il mouse non può muoversi, una zampa anteriore risponde a pizzico punta, coda arranca </td></tr><tr><td> 8 </td><td> Arti posteriori paralizzati, entrambe le zampe anteriori paralizzate </td><td> Il mouse non può muoversi, entrambi arti anteriori non rispondono a pizzico punta, coda arranca </td></tr><tr><td> 9 </td&gt; <td> Moribondo </td><td> Nessun movimento, respirazione alterata </td></tr><tr><td> 10 </td><td> Morte </td><td></td></tr></tbody></table> Tabella 1. Sistema di punteggio clinico.

<ol>
	<li>McFarland, H. F., Martin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis:+a+complicated+picture+of+autoimmunity.">Multiple sclerosis: a complicated picture of autoimmunity.</a> Nat. Immunol. 8, 913-919 (2007).</li><li>Wiendl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroinflammation:+the+world+is+not+enough.">Neuroinflammation: the world is not enough.</a> Curr. Opin. Neurol. 25, 302-305 (2012).</li><li>vander Star, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+models+of+multiple+sclerosis.">In vitro and in vivo models of multiple sclerosis.</a> CNS Neurol. Disord. Drug Targets. 11, 570-588 (2012).</li><li>Pachner, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+multiple+sclerosis.">Experimental models of multiple sclerosis.</a> Curr. Opin. Neurol. 24, 291-299 (2011).</li><li>Bittner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TASK1+channel+inhibitor+A293+shows+efficacy+in+a+mouse+model+of+multiple+sclerosis.">The TASK1 channel inhibitor A293 shows efficacy in a mouse model of multiple sclerosis.</a> Exp. Neurol. 238, 149-155 (2012).</li><li>Handel, A. E., Lincoln, M. R., Ramagopalan, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men:+experimental+autoimmune+encephalitis+and+multiple+sclerosis.">Of mice and men: experimental autoimmune encephalitis and multiple sclerosis.</a> Eur. J. Clin. Invest. 41, 1254-1258 (2011).</li><li>Krishnamoorthy, G., Wekerle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EAE:+an+immunologist's+magic+eye.">EAE: an immunologist's magic eye.</a> Eur. J. Immunol. 39, 2031-2035 (2009).</li><li>Stromnes, I. M., Goverman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+induction+of+experimental+allergic+encephalomyelitis.">Active induction of experimental allergic encephalomyelitis.</a> Nat. Protoc. 1, 1810-1819 (2006).</li><li>Fletcher, J. M., Lalor, S. J., Sweeney, C. M., Tubridy, N., Mills, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+in+multiple+sclerosis+and+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">T cells in multiple sclerosis and experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Clin. Exp. Immunol. 162, 1-11 (2010).</li><li>Mendel, I., Kerlero de Rosbo, N., Ben-Nun, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+myelin+oligodendrocyte+glycoprotein+peptide+induces+typical+chronic+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+H-2b+mice:+fine+specificity+and+T+cell+receptor+V+beta+expression+of+encephalitogenic+T+cells.">A myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide induces typical chronic experimental autoimmune encephalomyelitis in H-2b mice: fine specificity and T cell receptor V beta expression of encephalitogenic T cells.</a> Eur. J. Immunol. 25, 1951-1959 (1995).</li><li>Hofstetter, H. H., Shive, C. L., Forsthuber, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pertussis+toxin+modulates+the+immune+response+to+neuroantigens+injected+in+incomplete+Freund's+adjuvant:+induction+of+Th1+cells+and+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+the+presence+of+high+frequencies+of+Th2+cells.">Pertussis toxin modulates the immune response to neuroantigens injected in incomplete Freund's adjuvant: induction of Th1 cells and experimental autoimmune encephalomyelitis in the presence of high frequencies of Th2 cells.</a> J. Immunol. 169, 117-125 (2002).</li></ol>

Gli autori dichiarano interessi finanziari concorrenti.

Una moltitudine di differenti modelli di EAE con i protocolli di immunizzazione attiva è stata descritta nel corso degli ultimi decenni. Mentre i modelli di ratto sono stati ampiamente utilizzati fino a poco tempo fa, i topi sono oggi il più popolare organismo modello per la ricerca EAE. Questo sviluppo è tra l&#39;altro a causa del repertorio ampio e sempre crescente di disponibili topi transgenici. Immunizzazione di topi C57BL / 6 con MOG 35-55 peptide è uno dei modelli più diffusi EAE e può essere considerato come un modello affidabile, riproducibile e ben impiego animale. In molti laboratori neuroimmunologici, MOG 35-55 EAE indotta è affermata come il modello di scelta, mentre altri modelli EAE sono utilizzati per più specifiche domande sperimentali. Un punto critico da considerare è la pianificazione delle impostazioni sperimentali per assicurare che gli esperimenti EAE vengono eseguiti metodologicamente corretto. Per la validità interna, segnando accecato dei sintomi della malattia è altamente raccomandato. Compegruppi imental devono essere di età, peso e sesso-abbinato e topi dovrebbero essere assegnati in modo casuale a gruppi di trattamento. Gli esperimenti devono essere sempre eseguiti in conformità con le normative sul benessere degli animali. Gli studi EAE sono spesso sottodimensionato e non tengono in considerazione gli errori statistici di tipo II. Pertanto, prima di esperimenti, calcoli dimensione del campione devono essere eseguite. Gruppi di dimensioni necessarie dipendono dalla dimensione prevista effetto. La consultazione di un esperto per l&#39;analisi statistica potrebbe essere considerato prima di iniziare gli esperimenti EAE. Alcune limitazioni del protocollo devono essere tenuti a mente. Ancora più importante, l&#39;interpretazione dei dati aEAE è compromessa dalla modalità di immunizzazione con l&#39;uso di adiuvante e tossina della pertosse che hanno influenza sia aggiunto a reazione immunologica. Va inoltre considerato che il modello MOG 35-55 EAE mostra principalmente una cellula CD4 + T guidato risposta immunologica. Cellule T CD8 + e cellule B giocanoun ruolo meno importante e protocolli alternativi devono essere considerati quando si affrontano questi tipi di cellule. Il decorso della malattia previsto è acuta, monofasico e auto-limitata. In alternativa, un decorso recidivante-remittente può essere raggiunto anche in modelli EAE alternativi. Un ulteriore importante limitazione del protocollo è una certa tendenza verso la componente immunologica della fisiopatologia MS. Nel corso degli ultimi anni, è diventato sempre più chiaro che la SM ha una forte componente neurodegenerativa. La morte degli oligodendrociti e neuroni risultati in un progressivo accumulo di deficit neurologici. Si deve tener conto che il modello EAE non può essere completamente adatto per affrontare questioni esperimenti relativi alle modalità neurodegenerative di infiammazione autoimmune. Modelli animali alternativi con un focus sul sistema nervoso centrale patologia potrebbero essere considerati - ad esempio, il modello cuprizone che compromette demielinizzazione tossica senza il coinvolgimento del sistema immunitario periferico. Il protocollo descritto da considerarsi come un modello di base neuroimmunologica sperimentale e può essere modificato per altre applicazioni. La procedura sperimentale sopra descritto può essere facilmente applicato ad altri protocolli EAE da diversi ceppi di topi o il tipo e la quantità di proteine ​​(ad esempio, utilizzare PLP 139-151 peptide e topi SJL per un corso della malattia EAE recidivante-remittente che è particolarmente adatto per la valutazione terapeutica effetti sulla recidive). Il protocollo descritto può anche essere usato per esperimenti di trasferimento adottivo (EAE passivo). In questo modello, C57BL / 6 topi sono immunizzati con MOG 35-55 peptide e CFA come descritto sopra. Al contrario, la tossina della pertosse non è necessaria. Dopo 7-15 giorni, milza o linfonodi sono isolate e le cellule immunitarie sono restimolati in vitro con MOG 35-55 peptide e varie citochine prima del trasferimento in un nuovo gruppo di topi C57BL/6se. Questi topi riceventi sviluppano EAE un paio di giorni di anticipo rispetto al momento clasimmunizzazione sico. Nelle condizioni in vitro possono essere variati per domande specifiche immunologici (ad es polarizzazione in T H 1 o T H 17 celle). A volte, bassa incidenza di malattia o sintomi di debolezza potrebbe essere una sfida sperimentale. Alcuni consigli per la risoluzione dei problemi sono: - La gravità della malattia può essere variato con diverse quantità di peptide / mouse. - Concentrazione ottimale CFA può variare da 1-5 mg / ml. Si consideri una titolazione di CFA nello stabilire gli esperimenti. Si prega di fare riferimento alle rispettive linee guida del rispettivo comitato cura degli animali istituzionale e l&#39;uso di concentrazioni di CFA accettati come molti regolamenti vietano concentrazioni CFA superiori a 2 mg / ml. - Diversi metodi sono descritti per preparare l&#39;emulsione. Metodi alternativi come il vortex per 1 ora o ultrasuoni possono essere considerate se il povero emulsione è considerato come possibfonte di errore le. - Età, sesso, stagione dell&#39;anno e delle condizioni ambientali all&#39;interno della struttura degli animali sono fattori importanti che influenzano la suscettibilità EAE. Occorre garantire che le condizioni siano comparabili tra esperimenti indipendenti. Come descritto sopra, il protocollo menzionato può essere utilizzato come punto di partenza per esperimenti EAE adottive. Questo modello è particolarmente adatto per la separazione effetti periferici e SNC di un fenotipo genetico (ad esempio trasferire cellule knockout encefalitogenici tipo selvatico in topi riceventi) e per specifiche domande immunologica del fenotipo delle cellule trasferiti si caratterizza accuratamente. L&#39;ultimo sviluppo nel campo della ricerca EAE nel corso degli ultimi anni sono T recettore delle cellule topi transgenici. Questi topi sviluppano sintomi EAE spontaneamente senza influenze esterne aggirando il problema della adiuvante inoculazione. Tuttavia, questo modello richiede grandi quantità di animali per breeding per garantire gruppi di dimensioni sufficienti. Valutazione dei topi knockout richiede incrocio prima di esperimenti EAE in contrasto aEAE. Come ogni topo sviluppa i sintomi della malattia in un giorno diverso, la valutazione di nuove sostanze può essere piuttosto complicato. Pertanto, il valore della classica aEAE per neuroimmunologica rimane incontrastato.

La sclerosi multipla (SM) è una malattia demielinizzante infiammatoria cronica del sistema nervoso centrale in cui la distruzione di oligodendrociti e neuroni provoca sintomi clinici eterogenei e accumulando. MS è considerato come un disturbo autoimmune prototipo del sistema nervoso centrale (CNS) e modelli animali sono stati sviluppati per far luce sulla sua complessa patogenesi. Inoltre, le terapie attuali sono solo parzialmente efficaci e mira principalmente la fase infiammatoria della malattia, mentre la componente neurodegenerativa è probabilmente la grande sfida per il futuro approcci terapeutici 1,2. Mentre l&#39;esatta eziologia della malattia è ancora chiaro, una reazione autoimmune contro epitopi sulla guaina mielinica degli assoni del SNC è assunto per provocare l&#39;insorgenza della malattia. Disregolazione del sistema immunitario, la vulnerabilità genetica e fattori ambientali (ad esempio infezioni, vitamina D) si ritieneinfluenza aspetti centrali dei meccanismi fisiopatologici della SM. Tre diversi tipi di modelli animali sono attualmente stabiliti per l&#39;esplorazione di modelli patologici della SM: modelli virali come il virus encefalomielite murino di Theiler (TMEV), modelli indotte da agenti tossici come cuprizone, e, infine, diverse varianti di encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) 3, 4. Anche se tutti imitano le caratteristiche della SM, essi differiscono enormemente per caratteristiche patologiche sottostanti, come il coinvolgimento del sistema immunitario adattativo. EAE è il modello animale più comune in quanto è particolarmente utile per studiare percorsi neuroinfiammatorie e spesso serve da modello &quot;prova di principio&quot; per l&#39;efficacia di strategie terapeutiche innovative 5,6. EAE può essere indotta in molti animali diversi (ad esempio topi, ratti, miniswine, cavie, polli o primati). Tuttavia, i topi sono diventati la specie più diffusa di utilizzare, che è almeno in parte dovutoad ampliare il repertorio di sofisticate transgenici o topi knockout 7. La fisiopatologia della EAE è basato sulla reazione del sistema immunitario contro antigeni specifici cerebrali. Questa reazione provoca l&#39;infiammazione e la distruzione delle strutture portanti antigene, con conseguente caratteristiche neurologiche e patologiche comparabili a quelli osservati nei pazienti con SM. Tre approcci diversi possono distinguere: attivamente indotta EAE (aEAE; immunizzazione attiva), trasferiti passivamente EAE (pEAE, il trasferimento di cellule encefalitogeniche da un animale immunizzato), e modelli più recentemente spontanei del mouse EAE (SEAE), che consentono lo studio di autoimmune meccanismi senza alcuna manipolazione esogena. Il modello più semplice è inducibile aEAE nei topi che producono in risultati rapidi e solidi. Questo modello è considerato come il &quot;gold standard&quot; di modelli animali neuroimmunologici da molti ricercatori nel campo 8. Per l&#39;induzione aEAE, l&#39;animaleè immunizzato con una iniezione sottocutanea di un&#39;emulsione composta dell&#39;antigene scelto e completare adjuvans di Freund (CFA) accompagnati da una iniezione intraperitoneale di tossina della pertosse nel giorno di immunizzazione e due giorni dopo. Di conseguenza, i linfociti T specifici mielina sono attivati ​​in periferia e migrano nel sistema nervoso centrale attraverso il sangue-cervello-barriera. Al momento dell&#39;ingresso nel sistema nervoso centrale, le cellule T sono riattivati ​​dalle cellule presentanti l&#39;antigene locali e infiltranti conseguente successiva cascata infiammatoria, il coinvolgimento di altre cellule come monociti o macrofagi e, infine, a demielinizzazione e morte cellulare assonale 9. A seconda del protocollo di immunizzazione e combinazione di ceppo mouse (per esempio C57BL / 6, SJL / J, Biozzi) e l&#39;antigene (ad es mielina oligodendrociti glicoproteina (MOG), proteina basica della mielina (MBP), mielina proteina proteolipid (PLP)), la malattia Naturalmente può prendere una, il decorso della malattia remittente recidivante progressiva o cronica acuta. <p class= &quot;Jove_content&quot;&gt; C57BL / 6 topi sono diventati il ​​ceppo più comunemente usato per la costruzione topi transgenici e una moltitudine crescente di knockout o topi transgenici è disponibile. Abbiamo qui descrive un protocollo per l&#39;immunizzazione di topi C57BL / 6 con MOG 35-55 peptide 10 che si traduce in un EAE monofasica con primi sintomi dopo 9-14 giorni, massimo malattia circa 3-5 giorni dopo l&#39;insorgenza della malattia e recupero sintomo lenta e parziale nel corso dei prossimi 10-20 giorni. Poiché il potenziale immunogenico di MOG 35-55 peptide da sola non è sufficiente per indurre la malattia, adiuvanti come CFA sono necessarie. Si presume che i componenti di CFA attivano fagociti mononucleari inducono la fagocitosi di queste molecole e la secrezione di citochine. Ciò comporta il prolungamento della presenza di antigeni e un trasporto più efficiente di questi per il sistema linfatico. Induzione EAE è facilitata dalla applicazione di tossina della pertosse (PT) che è tra l&#39;altro stato suggerito per modularela barriera emato-encefalica e la reattività immunologica sé 11. Dopo l&#39;induzione della malattia, particolare cura deve essere presa per la valutazione giornaliera di topi per i sintomi della malattia.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="707">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Female C57BL/6 mice, age 10-12 weeks, ~20 g weight</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Jackson Laboratory, Charles River</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">MOG35-55 (MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK)</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Pepceuticals Ltd</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Incomplete Freund&#8217;s adjuvant (IFA)</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Sigma-Aldrich Co.</td>
			<td style="width:119px;">F5506</td>
			<td>Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Syringes, 1 ml with 26G3/8 needle&#160;</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Becton Dickinson &#38; Co.</td>
			<td style="width:119px;">309625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringes, 2 ml</td>
			<td style="width:205px;">e.g. B. Braun</td>
			<td style="width:119px;">7389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Needles, 25G5/8 and 30G1/2&#160;</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Becton Dickinson &#38; Co.,</td>
			<td style="width:119px;">305122, 305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Three way halve</td>
			<td style="width:205px;">e.g. B. Braun</td>
			<td style="width:119px;">16494 C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pertussis toxin, lyophilized in buffer</td>
			<td style="width:205px;">Enzo Life Sciences Inc.</td>
			<td style="width:119px;">BML-G100</td>
			<td>Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">M. tuberculosis H37 RA</td>
			<td style="width:205px;">BD Difco&#160;</td>
			<td style="width:119px;">231141</td>
			<td>Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

myelin oligodendrocyte glycoprotein (mog35-55) induced experimental autoimmune encephalomyelitis (eae) in c57bl/6 mice

La sclerosi multipla è una malattia cronica neuroinfiammatorie demielinizzante del sistema nervoso centrale con una forte componente neurodegenerativa. Mentre l&#39;esatta eziologia della malattia è ancora chiaro, linfociti T autoreattivi sono pensati per svolgere un ruolo centrale nella fisiopatologia. La terapia MS è solo parzialmente efficace finora e gli sforzi di ricerca continuano ad ampliare le nostre conoscenze sulla fisiopatologia della malattia e di sviluppare nuove strategie di trattamento. Encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) è il modello animale più comune per MS condividere molte caratteristiche cliniche e fisiopatologiche. C&#39;è una vasta diversità di modelli di EAE, che riflettono diversi aspetti clinici, immunologici ed istologici della SM umani. EAE Attivamente-indotta nei topi è il più semplice modello inducibile con risultati solidi e replicabili. E &#39;particolarmente adatto per lo studio degli effetti dei farmaci o di particolari geni, utilizzando topi transgenici contestati dalla Neuroi autoimmunenflammation. Pertanto, i topi sono immunizzati con omogenati SNC o peptidi di proteine ​​della mielina. A causa del basso potenziale immunogenico di questi peptidi, sono utilizzati coadiuvanti forti. EAE suscettibilità e fenotipo dipende l&#39;antigene scelto e ceppo roditore. Topi C57BL / 6 sono il ceppo comunemente utilizzato per la costruzione di topo transgenico e rispondono tra gli altri alla mielina oligodendrociti glicoproteina (MOG). L&#39;epitopo immunogenico MOG 35-55 è sospeso in adiuvante completo di Freund (CFA) prima dell&#39;immunizzazione e la tossina della pertosse si applica al giorno di immunizzazione e due giorni dopo. Topi sviluppano un &quot;classico&quot; EAE monofasico auto-limitata con crescente paralisi flaccida entro 9-14 giorni dalla vaccinazione. I topi vengono valutati quotidianamente utilizzando un sistema di punteggio clinico per 25-50 giorni. Considerazioni speciali per la cura prelievo di animali con EAE così come applicazioni potenziali e limiti di questo modello sono discussi.

Dopo l&#39;immunizzazione, i topi devono essere valutati quotidianamente per la variazione di peso e sintomi clinici. Insorgenza della malattia è tipicamente correlata con una riduzione di peso che potrebbe iniziare 1-2 giorni prima che i sintomi di EAE sono visibili. I segni clinici di EAE solito iniziano tra il giorno 9 e 14 post-vaccinazione. Poiché le lesioni sono prevalentemente localizzate al midollo spinale in MOG-EAE in C57BL / 6 topi, che in genere sviluppano sintomi prevalentemente motorie in un caudale per modello rostrale. Un quadro esemplare di un topo immunizzato con sintomi di EAE (punteggio 6) è mostrata in Figura 1A. Alcuni sintomi EAE atipici potrebbero verificarsi anche come rotolare in modo assiale rotante, l&#39;aspetto curvo o ipersensibilità che non trovano riscontro nella EAE classica score illustrati nella tabella 1. Poiché i sintomi motori sono la caratteristica principale di questo modello, questo punteggio ci dà una buona indicazione della gravità della malattia. Diversi sistemi di monitoraggio (ad esempio segnare 0 -5 o 0-6) e più punteggi compositi complessi valutando diverse disavanzi sono stati pubblicati. Si prega di notare che i topi con sintomi gravi devono essere portati fuori dal dell&#39;esperimento in base al rispettivo comitato cura degli animali istituzionale e l&#39;uso. Topi mostrano recupero generalmente parziale dei sintomi nei prossimi 10-20 giorni. Un decorso della malattia rappresentativo è rappresentato in Figura 1B. Ci sono diversi momenti nel corso della EAE che sono di interesse per valutare parametri di risultati. Alcuni saggi tipici che si trovano spesso vengono descritti molto brevemente. Al massimo malattia, i topi possono essere valutati per la produzione di citochine e la proliferazione dopo ristimolazione di isolate cellule immunitarie con MOG 35-55 peptide in vitro (test di richiamo MOG). Le cellule immunitarie possono anche essere isolati dal cervello e midollo spinale di topi con sintomi di EAE e ulteriormente elaborati, ad esempio mediante citometria a flusso. L&#39;analisi istologica delle sezioni del midollo spinale può essere effettuata in malattie massima per il carico lesionale e demielinizzazione, mentre al momento i punti marcatori per la neurodegenerazione e morte delle cellule neuronali potrebbe essere di interesse. <img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51275/51275fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51275/51275fig1.jpg" width="600px" /> Figura 1. Risultati rappresentativa EAE. A. immagine rappresentativa di un immunizzato C57BL / 6 mouse con sintomi EAE (EAE punteggio 6). Decorso della malattia B. rappresentativa dopo l&#39;immunizzazione oltre i 30 giorni. I dati sono mostrati come media ed errore standard della media (n = 5). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51275/51275fig1highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita</a> .

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Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) è un modello animale di sclerosi multipla. C57BL / 6 topi sono immunizzati con mielina oligodendrociti glicoproteina (MOG) peptide 35-55 (MOG 35-55), con un conseguente paralisi flaccida ascendente causata da cellule immunitarie autoreattive nel sistema nervoso centrale. Saranno discussi protocolli per l&#39;induzione della malattia e monitoraggio.

Mielina Oligodendrocyte glicoproteina (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Indotta encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) in C57BL / 6 Mice

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

80.9K Views.  University of Münster.  Encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) è un modello animale di sclerosi multipla. C57BL / 6 topi sono immunizzati con mielina oligodendrociti glicoproteina (MOG) peptide 35-55 (MOG 35-55), con un conseguente paralisi flaccida ascendente causata da cellule immunitarie autoreattive nel sistema nervoso centrale. Saranno discussi protocolli per l'induzione della malattia e monitoraggio. 

Video: Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

Induzione di ipofisite autoimmune sperimentale nei topi SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for study of the human demyelinating disease, multiple sclerosis (MS). EAE is characterized by pathologic infiltration of mononuclear cells into the CNS and by clinical manifestation of paralytic disease. Similar to MS, EAE is also under genetic control in that certain mouse strains are susceptible to disease induction while others are resistant. Typically, C57BL/6 (H-2b) mice immunized with myelin basic protein (MBP) fail to develop paralytic signs. This unresponsiveness is certainly not due to defects in antigen processing or antigen presentation of MBP, as an experimental protocol described here had been used to induce severe EAE in C57BL/6 mice as well as other reputed resistant mouse strains. In addition, encephalitogenic T cell clones from C57BL/6 and Balb/c mice reactive to MBP had been successfully isolated and propagated.
The experimental protocol involves using a cellular adoptive transfer system in which MBP-primed (200 &mu;g/mouse) C57BL/6 donor lymph node cells are isolated and cultured for five days with the antigen to expand the pool of MBP-specific T cells. At the end of the culture period, 50 million viable cells are transferred into naive syngeneic recipients through the tail vein. Recipient mice so treated normally do not develop EAE, thus reaffirming their resistant status, and they can remain normal indefinitely. Ten days post cell transfer, recipient mice are challenged with complete Freund adjuvant (CFA)-emulsified MBP in four sites in the flanks. Severe EAE starts to develop in these mice ten to fourteen days after challenge. Results showed that the induction of disease was antigenic specific as challenge with irrelevant antigens did not induce clinical signs of disease. Significantly, a titration of the antigen dose used to challenge the recipient mice showed that it could be as low as 5 &mu;g/mouse. In addition, a kinetic study of the timing of antigenic challenge showed that challenge to induce disease was effective as early as 5 days post antigenic challenge and as long as over 445 days post antigenic challenge. These data strongly point toward the involvement of a "long-lived" T cell population in maintaining unresponsiveness. The involvement of regulatory T cells (Tregs) in this system is not defined.

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Certain mouse strains are able to resist induction of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) with myelin basic protein. Described here is a simple immunization protocol that reverses the unresponsiveness and induces paralytic disease in several typical EAE resistant mouse stains.

Superare blocco nel encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) ceppi di topi resistenti dal trasferimento adottivo e uno stimolo antigenico

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) resulting in cognitive and motor impairment. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a useful animal model of MS, because it is also characterized by lesion formation in the CNS, motor impairment and is also driven by autoimmune and inflammatory reactions. One of the EAE models is induced with a peptide derived from the myelin oligodendrocyte protein (MOG)35-55 in mice. The EAE mice develop a progressive disease course. This course is divided into three phases: the preclinical phase (day 0 - 9), the disease onset (day 10 - 11) and the acute phase (day 12 - 14). MS and EAE are induced by autoreactive T cells that infiltrate the CNS. These T cells secrete chemokines and cytokines which lead to the recruitment of further immune cells. Therefore, the immune cell distribution in the spinal cord during the three disease phases was investigated. To highlight the time point of the disease at which the activation/proliferation/accumulation of T cells, B cells and monocytes starts, the immune cell distribution in lymph nodes, spleen and blood was also assessed. Furthermore, the levels of several cytokines (IL-1&#946;, IL-6, IL-23, TNF&#945;, IFN&#947;) in the three disease phases were determined, to gain insight into the inflammatory processes of the disease. In conclusion, the data provide an overview of the functional profile of immune cells during EAE pathology.

This manuscript describes the methods for induction and scoring of the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model, together with the assessment of immune cell distribution and mRNA cytokine levels in lymph nodes, spleen, blood and spinal cord using flow cytometry and quantitative PCR, respectively, at various disease phases.

Induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale nei topi e valutazione della distribuzione delle malattie-dipendente delle cellule immunitarie in vari tessuti

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses targeting myelin. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model of CNS autoimmune disease, and is typically induced via immunization with short peptides representing immunodominant CD4+ T cell epitopes of myelin proteins. However, B cells recognize unprocessed protein directly, and immunization with short peptide does not activate B cells that recognize the native protein. As recent clinical trials of B cell-depleting therapies in MS have suggested a role for B cells in driving disease in humans, there is an urgent need for animal models that incorporate B cell-recognition of autoantigen. To this end, we have generated a new fusion protein containing the extracellular domain of the mouse version of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) as well as N-terminal fusions of a His-tag for purification purposes and the thioredoxin protein to improve solubility (MOGtag). A tobacco etch virus (TEV) protease cleavage site was incorporated to allow the removal of all tag sequences, leaving only the pure MOG1-125 extracellular domain. Here, we describe a simple protocol using only standard laboratory equipment to produce large quantities of pure MOGtag or MOG1-125. This protocol consistently generates over 200 mg of MOGtag protein. Immunization with either MOGtag or MOG1-125 generates an autoimmune response that includes pathogenic B cells that recognize the native mouse MOG.

We describe a simple protocol using only basic lab equipment to generate and purify large quantities of a fusion protein that contains mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein. This protein can be used to induce experimental autoimmune encephalomyelitis driven by both T and B cells.

Produzione semplici ed efficaci e Purificazione di topo mielina Oligodendrocyte glicoproteina di encefalomielite autoimmune sperimentale Studi

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

Visualizing Impairment of the Endothelial and Glial Barriers of the Neurovascular Unit during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis In Vivo

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with embedded pericytes, and the glia limitans composed by the parenchymal basement membrane and astrocytic end-feed embracing the abluminal aspect of central nervous system (CNS) microvessels. In addition to maintaining CNS homeostasis the NVU controls immune cell trafficking into the CNS. During immunosurveillance of the CNS low numbers of activated lymphocytes can cross the endothelial barrier without causing BBB dysfunction or clinical disease. In contrast, during neuroinflammation such as in multiple sclerosis or its animal model experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) a large number of immune cells can cross the BBB and subsequently the glia limitans eventually reaching the CNS parenchyma leading to clinical disease. 
Immune cell migration into the CNS parenchyma is thus a two-step process that involves a sequential migration across the endothelial and glial barrier of the NVU employing distinct molecular mechanisms. If following their passage across the endothelial barrier, T cells encounter their cognate antigen on perivascular antigen-presenting cells their local reactivation will initiate subsequent mechanisms leading to the focal activation of gelatinases, which will enable the T cells to cross the glial barrier and enter the CNS parenchyma. Thus, assessing both, BBB permeability and MMP activity in spatial correlation to immune cell accumulation in the CNS during EAE allows to specify loss of integrity of the endothelial and glial barriers of the NVU. 
We here show how to induce EAE in C57BL/6 mice by active immunization and how to subsequently analyze BBB permeability in vivo using a combination of exogenous fluorescent tracers. We further show, how to visualize and localize gelatinase activity in EAE brains by in situ zymogaphy coupled to immunofluorescent stainings of BBB basement membranes and CD45+ invading immune cells.

Here, we present protocols to investigate impairment of the neurovascular unit during experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo. We specifically address how to determine blood-brain barrier permeability and gelatinase activity involved in leukocyte migration across the glia limitans.&#160;

Visualizzazione di danno delle barriere endoteliali e gliali dell'unità neurovascolare durante l'encefalomielite Autoimmune Sperimentale In Vivo

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T (iNKT) cells. Patients with active RA present fewer iNKT cells, defective cell function, and excessive polarization of Th1. In this study, an RA animal model was established using a mixture of hGPI325-339 and hGPI469-483 peptides. The iNKT cells were obtained by in vivo induction and in vitro purification, followed by infusion into RA mice for adoptive immunotherapy. The in vivo imaging system (IVIS) tracking revealed that iNKT cells were mainly distributed in the spleen and liver. On day 12 after cell therapy, the disease progression slowed down significantly, the clinical symptoms were alleviated, the abundance of iNKT cells in the thymus increased, the proportion of iNKT1 in the thymus decreased, and the levels of TNF-&#945;, IFN-&#947;, and IL-6 in the serum decreased. Adoptive immunotherapy of iNKT cells restored the balance of immune cells and corrected the excessive inflammation of the body.

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

This protocol uses G6PI mixed peptides to construct rheumatoid arthritis models that are closer to that of human rheumatoid arthritis in CD4+ T cells and cytokines. High purity invariant natural killer T cells (mainly iNKT2) with specific phenotypes and functions were obtained by in vivo induction and in vitro purification for adoptive immunotherapy.

Immunoterapia adottiva delle cellule iNKT in isomerasi indotta da glucosio (G6PI)

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible genetic background. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a typical disease model of MS widely used for investigating the pathogenesis in which T lymphocytes specific for myelin antigens initiate an inflammatory reaction in CNS. It is very important to assess how lymphocytes in the CNS regulate the development of disease. However, the approach for measuring the quantity and quality of infiltrated lymphocytes in the CNS is very limited due to the difficulties in isolating and detecting infiltrated lymphocytes from the brain. This manuscript presents a protocol for that is useful for the isolation, identification, and characterization of infiltrated lymphocytes from the CNS and will be helpful for our understanding of how lymphocytes are involved in the development of the CNS autoimmune disease.

This manuscript presents a protocol to induce active experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in mice. A method for the isolation and characterization of the infiltrated lymphocytes in the central nervous system (CNS) is also presented to show how lymphocytes are involved in the development of CNS autoimmune disease.

Analisi citometrica del flusso dell'infiltrazione di linfociti nel sistema nervoso centrale durante l'encefalomielite autoimmune sperimentale

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...

Potenziamento dell'immunogenicità da parte di Mycobacterium paratuberculosis nell'encefalomielite autoimmune

Adjuvant Activity of Mycobacterium paratuberculosis in Enhancing the Immunogenicity of Autoantigens During Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in complete Freund&#39;s adjuvant (CFA) containing inactivated Mycobacterium tuberculosis. The antigenic components of the mycobacterium activate dendritic cells to stimulate T-cells to produce cytokines that promote the Th1 response via toll-like receptors. Therefore, the amount and species of mycobacteria present during the antigenic challenge are directly related to the development of EAE. This methods paper presents an alternative protocol to induce EAE in C57BL/6 mice using a modified incomplete Freund&#39;s adjuvant containing the heat-killed Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis strain K-10.
M. paratuberculosis, a member of the Mycobacterium avium complex, is the causative agent of Johne&#39;s disease in ruminants and has been identified as a risk factor for several human T-cell-mediated disorders, including multiple sclerosis. Overall, mice immunized with Mycobacterium paratuberculosis showed earlier onset and greater disease severity than mice immunized with CFA containing the strain of M. tuberculosis H37Ra at the same doses of 4 mg/mL. The antigenic determinants of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP)&#160;strain K-10 were able to induce a strong Th1 cellular response during the effector phase, characterized by significantly higher numbers of T-lymphocytes (CD4+ CD27+), dendritic cells (CD11c+ I-A/I-E+), and monocytes (CD11b+ CD115+) in the spleen compared to mice immunized with CFA. Furthermore, the proliferative T-cell response to the MOG peptide appeared to be highest in M. paratuberculosis-immunized mice. The use of an encephalitogen (e.g., MOG35-55) emulsified in an adjuvant containing M. paratuberculosis in the formulation may be an alternative and validated method to activate dendritic cells for priming myelin epitope-specific CD4+ T-cells during the induction phase of EAE.

Autore in primo piano: Attività adiuvante del Mycobacterium paratuberculosis nel migliorare l'immunogenicità degli autoantigeni durante l'encefalomielite autoimmune sperimentale  

Here, we present an alternative protocol to actively induce experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice, using the immunogenic epitope myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG)35-55 suspended in incomplete Freund's adjuvant containing the heat-killed Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis.

Attività adiuvante del Mycobacterium paratuberculosis nel migliorare l'immunogenicità degli autoantigeni durante l'encefalomielite autoimmune sperimentale

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in ...