The research was supported by the National Research Council (CNR) of Italy. The authors thank GIRE members for collecting seed samples and are grateful to Alison Garside for revising the English.

1. Seed Campionamento e conservazione <ol><li> Monitorare campi coltivati ​​per ingiustificato scarse prestazioni erbicida, cioè non a causa delle condizioni climatiche avverse o per trattamenti erbicidi di bassa qualità. </li><li> Raccogliere un campione di seme da una specie alla volta e assegnare un codice univoco. Semi maturi sono di solito raccolti prima coltivazione raccolta da piante che erano sopravvissute al trattamento erbicida (s). Monitor tempestiva per osservare se i semi sono capannone da pianta madre a maturità. </li><li> Compilare un modulo per ogni campione che indica il codice univoco assegnato, il nome della specie, la data di raccolta, coordinate GPS, comune, il nome del contadino, dimensioni del campo, il livello di infestazione, ritagliare, erbicidi (s), utilizzati durante la stagione e documenti storici del settore . </li><li> Raccogliere semi da almeno 30 piante selezionate casualmente rappresentativi di infestazione campo. Assicurarsi che il campione seme contiene almeno 5.000 semi maturi. Per un obbligati out-cross specie infestanti(Ad esempio, Lolium spp. O Amaranthus spp.), Ridurre il numero di piante per 10-15, mantenendo il numero totale di semi circa 5.000 11. </li><li> Sottocampione il campo se le patch di erbacce sono sparsi su aree di grandi dimensioni (più di un ettaro) sono selezionati come diversi biotipi resistenti agli erbicidi. </li><li> Conservare i semi in sacchetti di carta non sigillati etichettati con il codice univoco assegnato. </li><li> Lasciar evaporare l&#39;umidità, ma non esporre i semi ad alte temperature (ad esempio, evitare di lasciare in una macchina sotto il sole) o alle fluttuazioni di temperatura estreme per evitare l&#39;induzione di dormienza secondaria. </li><li> Clean (rimuovere chaff, semi de-scafo, etc.) e conservarli a temperatura ambiente in un luogo asciutto. Dopo aver condotto il primo test di resistenza, memorizzare i semi per lunghi periodi di tempo in una stanza buia a 4 ° C, preferibilmente in sacchetti di plastica sottovuoto. In questo modo i semi di preservare la loro vitalità per un tempo significativamente più lungo. </li></ol> NOTA: Seed dormienza fornisce un meccanismo flessibile ed efficiente che permette di adattare le erbacce e persistere in ecosistemi agricoli. Per rompere dormienza e consentire la germinazione dei semi, differenti protocolli devono essere utilizzati a seconda delle specie infestanti, cioè il tipo di dormienza 16. Ci sono tre modi principali per rimuovere dormienza: <ol><li> Vernalizzazione NOTA: Per ottenere la germinazione simultanea e l&#39;emergenza delle piantine, un periodo di vernalizzazione seme che vanno da pochi giorni a una settimana è necessario rimuovere la dormienza fisiologica di molte specie: ad esempio., Amaranthus retroflexus, Chenopodium album, Lolium spp, Avena fatua, persicaria Polygonum , Falaride paradoxa 17-19. È richiesto un periodo fino a 15 giorni in più per rhoeas, difformis Cyperus e Ammania coccinea e fino a 30 giorni per Schoenoplectus mucronatus <sup&gt; 20. <ol><li> Metti un po &#39;di acqua deionizzata in piatti di plastica. Tagliate due strati di carta da filtro e ammollo in acqua, rimuovere l&#39;eccesso. Mettere i semi essiccati sulla carta. Trasferire le piastre di plastica per un frigorifero a 4 ° C per il periodo di tempo richiesto. </li></ol></li><li> Scarificazione NOTA: Alcune specie infestanti sono più recalcitranti alla germinazione di altri a causa di dormienza meccaniche, vale a dire le caratteristiche tegumento, e richiedono l&#39;uso di una scarificazione chimica con acido solforico al 21 germinare. <ol><li> Preparare un bicchiere con acido solforico concentrato (95-98%). Preparare un bicchiere pieno d&#39;acqua. Mettete i semi in una busta di tessuto non tessuto. </li><li> Immergere esempio, Echinochloa spp. O sorgo semi halepense per 20 min o 5 min, rispettivamente in acido solforico concentrato. </li><li> Prendere la busta fuori del bicchiere con un paio di pinzette e metterlo nel bicchiere pieno d&#39;acqua. Apri ilbusta, mettere i semi in un piccolo colino e sciacquare abbondantemente con acqua corrente. </li></ol> Variante: A. plantago-aquatica ha bisogno di un diverso protocollo 22, 23 <ol><li> Mettere a bagno i semi per 2 minuti in cloroformio. Risciacquare con acqua deionizzata i semi e asciugarle con carta assorbente. Dunk la semi in 80% di acido solforico per 5 min. </li><li> Mettete i semi in un piccolo colino e sciacquare accuratamente sotto acqua corrente. </li></ol></li><li> Post-raccolta maturazione del seme NOTA: I semi di altre specie infestanti non germinano affatto per alcuni mesi dopo la maturità, a prescindere dal metodo utilizzato per rompere dormienza. <ol><li> Conservare i semi per un periodo di almeno 3-4 mesi a temperatura ambiente e bassa umidità e quindi seguire i protocolli di cui sopra per dormienza rottura (ad esempio, Oryza sativa var. Sylvatica o P. rhoeas). </li></ol></li></ol> 3. Seed Germinazione <ol><li> Semi posto per essere germinated in plaspiatti tic contenenti 0,6% (m / v) di agar con nitrato di potassio 0,1% (KNO 3) ha aggiunto: <ol><li> Preparare una soluzione di agar allo 0,6% + 0.1% KNO 3 con acqua deionizzata. Sciogliere l&#39;agar in un forno a microonde. </li><li> Versare la soluzione di agar in piatti di plastica. Raffreddare il substrato e poi mettere nei semi. </li></ol> Variante: suolo può anche essere usato come substrato in piatti di plastica. Questa pratica è particolarmente efficace per Echinochloa spp., S. halepense e Lolium spp. </li><li> Inserire piatti di plastica in un armadio di germinazione per circa una settimana con condizioni di luce e temperatura a seconda delle condizioni ottimali per ogni specie infestanti. Per la maggior parte delle specie d&#39;inverno, l&#39;escursione termica è 15/25 ° C la notte / giorno e 12 ore fotoperiodo con tubi al neon che forniscono una densità fotosintetica Photon Flux (PPFD) del 15-30 mmol m-2 sec -1. Per molte specie estive, l&#39;intervallo di temperatura è 15/30 ° C notte / giorno. Variante: Some specie, come S. halepense, hanno bisogno di un trattamento termico. Pertanto dopo la scarificazione, semi di S. halepense sono sottoposti alle seguenti condizioni: cicli di 4 ore a 45 ° C e 20 ore a 24 ° C per tre giorni nell&#39;armadietto germinazione, e successivamente tre giorni in condizioni normali. </li></ol> 4. piantina trapianto e crescita <ol><li> Trapianto quindici-venti piantine in vassoi di plastica (325 x 265 x 95 mm) riempito con una miscela standard di invasatura (60% del suolo argilloso limosa, il 15% di sabbia, il 15% e il 10% agriperlite di torba - in volume). NOTA: Trapianto, invece di semina diretta, permette un supporto uniforme piante nella stessa fase di crescita da ottenere, che è un importante prerequisito per ottimizzare le prestazioni del trattamento erbicida. </li><li> Identificare ogni vassoio con un codice a barre comprese tutte le informazioni per l&#39;identificazione univoca: codice popolazione, diserbanti in fase di test, replicare il numero e il numero progressivo del vassoio &lt;./ Li&gt; <li> Luogo vassoi in una serra e piante acquatiche riscaldate come necessario per mantenere il substrato in prossimità o capacità di campo. NOTA: la temperatura di crescita varia a seconda delle specie infestanti. Spesso i test vengono effettuati durante l&#39;autunno / inverno / primavera, quindi la luce è integrata con 400 W lampade a ioduri metallici, che forniscono una PPFD di circa 150 mmol m-2 sec -1 ed un fotoperiodo 12 ore 24, specie 19. Erbaccia estate con C 4 ciclo fotosintetico di solito richiedono maggiore intensità luminosa e, pertanto, le prove sono fatte in primavera-estate in ritardo o l&#39;intensità della luce integrata è di circa 400 mmol m-2 sec -1 con un fotoperiodo 14 hr. </li><li> Utilizzare un protocollo diverso per alcune specie infestanti infestanti risone, ad esempio, A. plantago-aquatica, S. mucronatus e C. difformis come descritto in 22. <ol><li> Trapianti le piantine in vassoi di polistirolo con 24 cellule rotonde (55 mm di diametro, 64 mm di profondità) Filled con 60% terreno argilloso limoso, 30% sabbia e 10% di torba (in volume). </li><li> Impostare i vassoi nei formati 12 cm contenitori di plastica profonde riempite con acqua e battened giù da tondini in acciaio inox avvitate per impedire loro galleggiante (Figura 1). </li><li> Mantenere il livello dell&#39;acqua in contenitori a 1-2 cm sotto il livello della superficie del suolo e aggiungere 1,5 g di solfato di rame per ogni contenitore (che contiene 10-12 L di acqua) per evitare il proliferare di alghe. </li></ol></li></ol> 5. trattamenti erbicidi <ol><li> I trattamenti con erbicidi pre-emergenza: <ol><li> Dopo circa tre giorni nel gabinetto di germinazione, come descritto nella sezione 3, trapiantare i semi germinano in vassoi di plastica contenenti il ​​substrato sopra descritto e coprire con uno strato di terreno (circa 1 cm). Questa è una fase critica per garantire che le piantine non emergeranno per effetto erbicida piuttosto che una profondità di seppellimento eccessivo. </li><li> Prendete il substrato campo capacittà collocando i vassoi, che hanno alcuni fori sul fondo, su piattini pieni d&#39;acqua. </li><li> Un giorno dopo il trapianto, trattare i vassoi con l&#39;erbicida di pre-emergenza 25. </li><li> Mantenere il substrato o la capacità campo vicino aggiungendo acqua se necessario sia dall&#39;alto e dal basso per capillarità dal piattino. Questa procedura favorisce la permanenza dell&#39;erbicida alla profondità corretta (cioè dove i semi germinano sono) per una buona efficacia del trattamento. </li></ol></li><li> I trattamenti con erbicidi post-emergenza: <ol><li> Spruzzi le piante quando raggiungono lo stadio di 2-3 foglie (cioè, la fase di crescita del 12-13 Extended scala crescita BBCH 26). </li><li> A partire dal giorno dopo il trattamento, impostare il sistema di irrigazione secondo le esigenze idriche di specie infestanti e la stagione (ad esempio, per Echinochloa spp. Eroga acqua per 3 min 4 volte al giorno, ad intervalli regolari dalle 9 alle 9 pm). L&#39;acqua è discontribuito con un sistema automatico di irrigazione a pioggia. Variante: glifosato è applicato nello stabilimento fase BBCH 14-21. </li></ol></li><li> Preparazione erbicidi e la distribuzione. NOTA: Tutte le erbicidi (pre e post-emergenza) sono quelle in vigore formulazioni commerciali con tensioattivi raccomandate a due dosi, la dose raccomandata di campo (1x) e tre volte quella (3x). <ol><li> Se necessario, preparare la soluzione tensioattivo di rinfuse secondo le istruzioni riportate sull&#39;etichetta; la concentrazione finale è generalmente espresso come percentuale del volume finale (ad esempio, 0,3%) o il volume da distribuire per unità di superficie (ad esempio, 1 L ha -1). </li><li> Utilizzare la soluzione tensioattivo come solvente per la soluzione erbicidi (soluto) al fine di mantenere la corretta concentrazione del principio attivo. Preparare la soluzione erbicida più concentrata prima (3x). Calcolare la quantità di prodotto commerciale da disciogliere nella soluzione tensioattivo (o in acqua deionizzata se untensioattivo non è necessario) mediante la seguente equazione: Dose erba = [(Dose campo x Dose max) x V def] / V del Dove: Dose erba = dose di erbicida (ml), Dose Dose campo = campo erbicida (ml ha -1), Dose max = massima dose erogata, V fin = volume finale della soluzione (L), V = del volume erogato dalla panchina spruzzatore (L ha -1). </li><li> Diluire (2: 1, v / v) l&#39;erbicida soluzione 3x preparare quella meno concentrata (1x). Questa procedura riduce la possibilità di commettere errori nel valutare o pipettaggio erbicidi. Concentrazione della soluzione Erbicida è espressa come il volume da distribuire per unità di superficie (L ha -1). </li><li> Avviare la sequenza di trattamento con la dose più bassa erbicidi (1x). In questo modo non è necessario lavare l&#39;armadietto di spruzzatura tra due trattamenti con lo stesso erbicida. </li><li> Distribuire il solutio erbicidin utilizzando uno spruzzatore panchina precisione erogare 300 L ha -1 (± 1%), ad una pressione di 215 kPa, e una velocità di 0,75 m sec -1, con un braccio dotato di tre piatti-ventilatore (range esteso) ugelli idraulici . </li><li> Lavare due volte il mobile a spruzzo quando l&#39;erbicida viene modificato con candeggina 1% (v / v) e poi risciacquare. Variante: glifosato è applicata con un volume di spruzzo di 200 L ha -1 27. NOTA: Una particolare attenzione deve essere pagato quando diserbanti altamente biologico, tale il sulfometuron sulfaniluree o flazasulfuron, vengono utilizzati. In quest&#39;ultimo caso effettuare una lavaggio con una soluzione di candeggina e un altro con ammoniaca (2,5% v / v), seguita da un risciacquo accurato con acqua. </li></ol></li></ol> 6. Raccolta e analisi dei dati <ol><li> Attraverso un lettore di codice a barre, che identifica automaticamente ogni vassoio, registrare il numero di piante che sono sopravvissuti al trattamento, nonché la biomassa stimato Visuale (VEB). Le piante sono culonon elaborato come essere morto se non mostrano crescita attiva a prescindere dal colore o l&#39;altro aspetto. <ol><li> Effettuare la valutazione di tre o quattro settimane dopo il trattamento (WAT) a seconda delle erbicidi provati (per es, tre WAT inibitori ACCase e quattro WAT per SLA inibitori o glifosato). </li><li> Valutare l&#39;efficacia generale trattamento includendo una popolazione suscettibile (check S) in tutti gli esperimenti, cioè, una popolazione raccolti in un sito che è stato mai o raramente trattati con erbicidi. </li><li> La sopravvivenza delle piante espresso come percentuale del numero di piante trattate, contato poco prima del trattamento erbicida, e calcolare l&#39;errore standard (SE) per il valore medio (valore delle due repliche media). </li><li> Il VEB è ottenuta attraverso un confronto visivo di biomassa vegetale tra trattato e controllo della stessa popolazione 25, 28 non trattati. Un punteggio, che vanno da 10 a piante non interessati dalla erbicidi (rispetto al controllo non trattato) a 0 quandole piante sono chiaramente morti, è dato a ciascun vassoio trattata. </li></ol></li><li> Popolazioni attribuiscono a quattro categorie sulla base dei risultati ottenuti dai trattamenti con due dosi di erbicidi: S quando meno del 5% delle piante sono sopravvissuti i 1x dosi di erbicidi, SR quando i sopravvissuti variava dal 5% al ​​20% a 1x dosi di erbicidi, R quando più di il 20% delle piante è sopravvissuto alle 1x dosi di erbicidi e RR quando i sopravvissuti sono più del 20% alla dose di erbicida 1x e oltre il 10% alla dose di erbicida 3x 17. </li></ol>

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L., var. sylvatica.) in Clearfield&#174; Italian paddy rice.</a> Agronomy. 2 (4), 371-383 (2012).</li><li>Zelaya, I. A., Anderson, J. A. H., Owen, M. D. K., Landes, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+spectrophotometric+and+HPLC+methods+for+shikimic+acid+determination+in+plants:+Models+in+glyphosate-resistant+and-susceptible+crops.">Evaluation of spectrophotometric and HPLC methods for shikimic acid determination in plants: Models in glyphosate-resistant and-susceptible crops.</a> J. Agric. Food Chem. 59 (6), 2202-2212 (2011).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Diversi passaggi all&#39;interno dei protocolli sono critici per una valutazione di successo di resistenza agli erbicidi in una popolazione: 1) semi devono essere raccolti quando sono maturi da piante sopravvissute trattamento erbicida (s). Maturazione dei semi sulla pianta madre è fondamentale per evitare difficoltà nella germinazione del seme più tardi; 2) la corretta conservazione dei semi si consiglia di evitare la proliferazione di muffe che potrebbero impedire la germinazione; 3) piantine devono essere trattati...

<html> Gli erbicidi sono la misura diserbo più ampiamente utilizzato, che rappresentano fino al 50% del mercato globale fitosanitari 1. Si tratta di strumenti relativamente a buon mercato, di evitare di suolo pratiche di coltivazione e di tempo ad alta intensità di manodopera, e concludersi con la produzione di costo-efficace, sicuro e redditizio cibo 2. Tuttavia, la grande variabilità genetica fenologica e presente in molte specie infestanti, insieme con un eccessivo affidamento sulla erbicidi, spesso si traduce nella selezione delle popolazioni infestanti resistenti agli erbicidi. L&#39;introduzione di erbicidi selettivi con una specifica destinazione metabolica 3-5 è notevolmente aumentato il numero di casi di resistenza nel tempo. Ad oggi, 240 specie di piante infestanti dicotiledoni (140 e 100) in tutto il mondo monocotiledoni sono evoluti resistenza a diversi siti erbicidi di Azione (SOA) 4. Questa è una grande preoccupazione per la gestione delle infestanti e più in generale per la produzione agricola sostenibile. e_content &quot;&gt; La diagnosi precoce della resistenza, basata su prove attendibili, spesso eseguiti in una serra, è un passo fondamentale per gestire le erbe infestanti resistenti agli erbicidi. Diversi approcci sono stati sviluppati secondo le finalità, richiesto livello di precisione, il tempo e le risorse disponibili, come nonché le specie infestanti considerate 6-12. Tuttavia, quando è richiesta la conferma dello stato di resistenza di un nuovo biotipo infestanti (cioè, un gruppo di individui che condividono alcune caratteristiche fisiologiche, inclusa la capacità di sopravvivere uno o più erbicidi appartenenti ad un particolare gruppo utilizzato in una dose che normalmente li controllo), un robusto tutta saggio biologico impianto deve essere eseguita in un ambiente controllato 4, 11. Un biotipo è raramente resistente a un solo erbicida. Ogni biotipo è quindi caratterizzato da un certo profilo di resistenza, cioè, il numero e il tipo di SoA degli erbicidi è resistente, e da una determinata resistenzalivello per ogni erbicidi 13. La determinazione precoce e affidabile del modello di croce o resistenza multipla 5, 14 è importante per la gestione della resistenza di campo. Vale la pena ricordare che la resistenza agli erbicidi non ha nulla a che fare con la tolleranza naturale che alcuni presentano erbaccia specie nei confronti di alcuni erbicidi, per esempio, dicot specie contro erbicidi ACCase-inibitori, specie monocot vs 2,4-D, equiseto arvense vs. glifosato. Questo articolo presenta un approccio robusto per testare biotipi resistenti agli erbicidi putativo campionati in campi in cui era stato segnalato uno scarso controllo da erbicidi (s). Varianti rilevanti ai protocolli standard in relazione alle specie infestanti coinvolti sono presentati. I vantaggi rispetto alternativi tecniche / protocolli basati su entrambi interi biosaggi vegetali utilizzando soltanto una dose erbicida 15, o semi trattamento in piastre Petri 8 sono legati alla maggiore reliability e la possibilità di ricavare il livello di resistenza a causa dell&#39;inclusione di due dosi erbicidi negli esperimenti. Tuttavia, per la prova di resistenza di routine, gli stessi metodi possono essere applicati a una sola dose erbicida, così riducendo i costi. Oltre a permettere conferma dello status di resistenza, le informazioni ottenute possono essere utilizzate sia per ottimizzare le seguenti operazioni di ricerca e / o elaborare strategie di gestione della resistenza sonori.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Paper bags</td>
			<td>Celcar SAS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic dishes</td>
			<td>ISI plast S.p.A.</td>
			<td>SO600</td>
			<td>Transparent plastic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfuric acid 95-98%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>320501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-woven fabric</td>
			<td>Carretta Tessitura</td>
			<td>Art.TNT17</td>
			<td>Weight&#160; 17 gr m-&#178;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform &#62;99.5%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C2432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A1296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium nitrate &#62;99.0%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8394</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic containers</td>
			<td>Giganplast</td>
			<td>1875/M</td>
			<td>600 x 400 x 110 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic trays</td>
			<td>Piber plast</td>
			<td>G1210A</td>
			<td>325 x 265 x 95 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene trays</td>
			<td>Plastisavio</td>
			<td>S24</td>
			<td>537x328x72 mm, 24 round cells (6x4)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>451657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agriperlite</td>
			<td>Blu Agroingross sas</td>
			<td>AGRI100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peat</td>
			<td>Blu Agroingross sas</td>
			<td>TORBA250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germination cabinet</td>
			<td>KW</td>
			<td>W87R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nozzles</td>
			<td>Teejet</td>
			<td>&#160;XR11002-VK, TP11001-VH</td>
			<td>The second type of nozzles are used only for glyphosate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barcode generator</td>
			<td>Toshiba TEC</td>
			<td>SX4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labels with barcode</td>
			<td>Felga</td>
			<td>TT20200</td>
			<td>Stick-in labels with rounded corners</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barcode reader</td>
			<td>Cipherlab</td>
			<td>8300-L</td>
			<td>Portable data terminal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bench sprayer</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Built in house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2">HERBICIDES INCLUDED IN THE RESULTS:</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial product</td>
			<td>Active ingredient</td>
			<td>Company</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Altorex</td>
			<td>imazamox</td>
			<td>BASF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Azimut&#160;</td>
			<td>florasulam</td>
			<td>Dow AgroSciences</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopower</td>
			<td></td>
			<td>Bayer Crop Science</td>
			<td>Surfact to be used with Hussar WG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dash</td>
			<td></td>
			<td>BASF</td>
			<td>Surfact to be used with Altorex</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Granstar&#160;</td>
			<td>tribenuron-methyl</td>
			<td>Dupont</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gulliver&#160;</td>
			<td>azimsulfuron</td>
			<td>Dupont</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hussar WG&#160;</td>
			<td>iodosulfuron</td>
			<td>Bayer Crop Science</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nominee&#160;</td>
			<td>bispyribac-Na</td>
			<td>Bayer Crop Science</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roundup</td>
			<td>glyphosate</td>
			<td>Monsanto</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trend</td>
			<td></td>
			<td>Dupont</td>
			<td>Surfact to be used with Granstar and Gulliver</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viper&#160;</td>
			<td>penoxsulam</td>
			<td>Dow AgroSciences</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weedone LV4</td>
			<td>2,4-D</td>
			<td>Isagro</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocols for robust herbicide resistance testing in different weed species

Robust protocols to test putative herbicide resistant weed populations at whole plant level are essential to confirm the resistance status. The presented protocols, based on whole-plant bioassays performed in a greenhouse, can be readily adapted to a wide range of weed species and herbicides through appropriate variants. Seed samples from plants that survived a field herbicide treatment are collected and stored dry at low temperature until used. Germination methods differ according to weed species and seed dormancy type. Seedlings at similar growth stage are transplanted and maintained in the greenhouse under appropriate conditions until plants have reached the right growth stage for herbicide treatment. Accuracy is required to prepare the herbicide solution to avoid unverifiable mistakes. Other critical steps such as the application volume and spray speed are also evaluated. The advantages of this protocol, compared to others based on whole plant bioassays using one herbicide dose, are related to the higher reliability and the possibility of inferring the resistance level. Quicker and less expensive in vivo or in vitro diagnostic screening tests have been proposed (Petri dish bioassays, spectrophotometric tests), but they provide only qualitative information and their widespread use is hindered by the laborious set-up that some species may require. For routine resistance testing, the proposed whole plant bioassay can be applied at only one herbicide dose, so reducing the costs.

Per valutare lo stato di resistenza di una popolazione resistente putativo, è fondamentale comprendere un controllo suscettibile nel test per verificare l&#39;efficacia erbicida. I risultati di un test di screening condotto su P. popolazioni rhoeas, un&#39;erba infestante campi di grano, sono riportati in Figura 2, in cui l&#39;efficacia di quattro erbicidi post-emergenza su un assegno suscettibile (09-36) e sul sospetta una resistenza (10-91) sono rappresentati. Popolazione 09-36 è ...

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Protocols for Robust Herbicide Resistance Testing in Different Weed Species

A robust and flexible approach to confirm herbicide resistance in weed populations is presented. This protocol allows the herbicide resistance levels to be inferred and applied to a wide range of weed species and herbicides with minor adaptations.

Protocolli per Robust erbicidi Test della resistenza in diversi Weed Specie

Robust protocols to test putative herbicide resistant weed populations at whole plant level are essential to confirm the resistance status. The presented ...

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Research

JoVE Journal

Environment

14.4K Views.  National Research Council (CNR), Italy. A robust and flexible approach to confirm herbicide resistance in weed populations is presented. This protocol allows the herbicide resistance levels to be inferred and applied to a wide range of weed species and herbicides with minor adaptations.

Video: Protocols for Robust Herbicide Resistance Testing in Different Weed Species

An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates

Bacteriophage isolation from environmental samples has been performed for decades using principles set forth by pioneers in microbiology. The isolation of phages infecting Arthrobacter hosts has been limited, perhaps due to the low success rate of many previous isolation techniques, resulting in an underrepresented group of Arthrobacter phages available for study. The enrichment technique described here, unlike many others, uses a filtered extract free of contaminating bacteria as the base for indicator bacteria growth, Arthrobactersp. KY3901, specifically. By first removing soil bacteria the target phages are not hindered by competition with native soil bacteria present in initial soil samples. This enrichment method has resulted in dozens of unique phages from several different soil types and even produced different types of phages from the same enriched soil sample isolate. The use of this procedure can be expanded to most nutrient rich aerobic media for the isolation of phages in a vast diversity of interesting host bacteria.

An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates

We present an enrichment protocol for the isolation of bacteriophages infecting bacteria in the Arthrobacter genus. This enrichment protocol produces fast and reproducible results for the isolation and amplification of Arthrobacter phages from soil isolates.

Una tecnica di arricchimento Ottimizzato per l&#39;isolamento di<em&gt; Arthrobacter</em&gt; Batteriofago Specie campione di terreno Isolati

Bacteriophage isolation from environmental samples has been performed for decades using principles set forth by pioneers in microbiology. The isolation of ...

Ricerca

Ambiente

Measuring Rates of Herbicide Metabolism in Dicot Weeds with an Excised Leaf Assay

In order to isolate and accurately determine rates of herbicide metabolism in an obligate-outcrossing dicot weed, waterhemp (Amaranthus tuberculatus), we developed an excised leaf assay combined with a vegetative cloning strategy to normalize herbicide uptake and remove translocation as contributing factors in herbicide-resistant (R) and &#8211;sensitive (S) waterhemp populations. Biokinetic analyses of organic pesticides in plants typically include the determination of uptake, translocation (delivery to the target site), metabolic fate, and interactions with the target site. Herbicide metabolism is an important parameter to measure in herbicide-resistant weeds and herbicide-tolerant crops, and is typically accomplished with whole-plant tests using radiolabeled herbicides. However, one difficulty with interpreting biokinetic parameters derived from whole-plant methods is that translocation is often affected by rates of herbicide metabolism, since polar metabolites are usually not mobile within the plant following herbicide detoxification reactions. Advantages of the protocol described in this manuscript include reproducible, accurate, and rapid determination of herbicide degradation rates in R and S populations, a substantial decrease in the amount of radiolabeled herbicide consumed, a large reduction in radiolabeled plant materials requiring further handling and disposal, and the ability to perform radiolabeled herbicide experiments in the lab or growth chamber instead of a greenhouse. As herbicide resistance continues to develop and spread in dicot weed populations worldwide, the excised leaf assay method developed and described herein will provide an invaluable technique for investigating non-target site-based resistance due to enhanced rates of herbicide metabolism and detoxification.

This manuscript describes how herbicide metabolism rates can be effectively quantified with excised leaves from a dicot weed, thereby reducing variability and removing any possible confounding effects of herbicide uptake or translocation typically observed in whole-plant assays.

Misurare Tassi di erbicida Metabolismo in Dicot Erbacce con un saggio asportati Foglia

In order to isolate and accurately determine rates of herbicide metabolism in an obligate-outcrossing dicot weed, waterhemp (Amaranthus tuberculatus), we ...

Potentiodynamic Corrosion Testing

Different metallic materials have different polarization characteristics as dictated by the open circuit potential, breakdown potential, and passivation potential of the material. The detection of these electrochemical parameters identifies the corrosion factors of a material. A reliable and well-functioning corrosion system is required to achieve this.
Corrosion of the samples was achieved via a potentiodynamic polarization technique employing a three-electrode configuration, consisting of reference, counter, and working electrodes. Prior to commencement a baseline potential is obtained. Following the stabilization of the corrosion potential (Ecorr), the applied potential is ramped at a slow rate in the positive direction relative to the reference electrode. The working electrode was a stainless steel screw. The reference electrode was a standard Ag/AgCl. The counter electrode used was a platinum mesh. Having a reliable and well-functioning in vitro corrosion system to test biomaterials provides an in-expensive technique that allows for the systematic characterization of the material by determining the breakdown potential, to further understand the material's response to corrosion. The goal of the protocol is to set up and run an in vitro potentiodynamic corrosion system to analyze pitting corrosion for small metallic medical devices.

Here, we present a protocol to set up and run an in vitro potentiodynamic corrosion system to analyze pitting corrosion for small metallic medical devices.

Potenziodinamiche Corrosion Testing

Different metallic materials have different polarization characteristics as dictated by the open circuit potential, breakdown potential, and passivation ...

Protocols for Quantifying Transferable Pesticide Residues in Turfgrass Systems

Plant canopies in established turfgrass systems can intercept an appreciable amount of sprayed pesticides, which can be transferred through various routes onto humans. For this reason, transferable pesticide residue experiments are required for registration and re-registration by the United States Environmental Protection Agency (USEPA). Although such experiments are required, limited specificity is required pertaining to experimental approach. Experimental approaches used to assess pesticide transfer to humans including hand wiping with cotton gloves, modified California roller (moving a roller of known mass over cotton cloth) and soccer ball roll (ball wrapped with sorbent strip) over three treated turfgrass species (creeping bentgrass, hybrid bermudagrass and tall fescue maintained at 0.4, 5 and 9 cm, respectively) are presented. The modified California roller is the most extensively utilized approach to date, and is best suited for use at low mowing heights due to its reproducibility and large sampling area. The soccer ball roll is a less aggressive transfer approach; however, it mimics a very common occurrence in the most popular international sport, and has many implications for nondietary pesticide exposure from hand-to-mouth contact. Additionally, this approach may be adjusted for other athletic activities with limited modification. Hand wiping is the best approach to transfer pesticides at higher mowing heights, as roller-based approaches can lay blades over; however, it is more subjective due to more variable sampling pressure. Utility of these methods across turfgrass species is presented, and additional considerations to conduct transferable pesticide residue research in turfgrass systems are discussed.

Transferable pesticide residue experiments in turfgrass systems are integral components of human risk exposure assessments. Experimental approaches to measure transferable residues should be adjusted to the human interaction of interest and turfgrass system dynamics. Three transferable pesticide residue protocols are presented and the suitability across three turfgrass systems is discussed.

Protocolli per la quantificazione residui di antiparassitari Valori in Turfgrass Sistemi

Plant canopies in established turfgrass systems can intercept an appreciable amount of sprayed pesticides, which can be transferred through various routes ...

Dispersion of Nanomaterials in Aqueous Media: Towards Protocol Optimization

The sonication process is commonly used for de-agglomerating and dispersing nanomaterials in aqueous based media, necessary to improve homogeneity and stability of the suspension. In this study, a systematic step-wise approach is carried out to identify optimal sonication conditions in order to achieve a stable dispersion. This approach has been adopted and shown to be suitable for several nanomaterials (cerium oxide, zinc oxide, and carbon nanotubes) dispersed in deionized (DI) water. However, with any change in either the nanomaterial type or dispersing medium, there needs to be optimization of the basic protocol by adjusting various factors such as sonication time, power, and sonicator type as well as temperature rise during the process. The approach records the dispersion process in detail. This is necessary to identify the time points as well as other above-mentioned conditions during the sonication process in which there may be undesirable changes, such as damage to the particle surface thus affecting surface properties. Our goal is to offer a harmonized approach that can control the quality of the final, produced dispersion. Such a guideline is instrumental in ensuring dispersion quality repeatability in the nanoscience community, particularly in the field of nanotoxicology.

Here, we present a step-wise protocol for the dispersion of nanomaterials in aqueous media with real-time characterization to identify the optimal sonication conditions, intensity, and duration for improved stability and uniformity of nanoparticle dispersions without impacting the sample integrity.

Dispersione dei nanomateriali in mezzi acquosi: verso l'ottimizzazione dei protocolli

The sonication process is commonly used for de-agglomerating and dispersing nanomaterials in aqueous based media, necessary to improve homogeneity and ...

RGB and Spectral Root Imaging for Plant Phenotyping and Physiological Research: Experimental Setup and Imaging Protocols

Better understanding of plant root dynamics is essential to improve resource use efficiency of agricultural systems and increase the resistance of crop cultivars against environmental stresses. An experimental protocol is presented for RGB and hyperspectral imaging of root systems. The approach uses rhizoboxes where plants grow in natural soil over a longer time to observe fully developed root systems. Experimental settings are exemplified for assessing rhizobox plants under water stress and studying the role of roots. An RGB imaging setup is described for cheap and quick quantification of root development over time. Hyperspectral imaging improves root segmentation from the soil background compared to RGB color based thresholding. The particular strength of hyperspectral imaging is the acquisition of chemometric information on the root-soil system for functional understanding. This is demonstrated with high resolution water content mapping. Spectral imaging however is more complex in image acquisition, processing and analysis compared to the RGB approach. A combination of both methods can optimize a comprehensive assessment of the root system. Application examples integrating root and aboveground traits are given for the context of plant phenotyping and plant physiological research. Further improvement of root imaging can be obtained by optimizing RGB image quality with better illumination using different light sources and by extension of image analysis methods to infer on root zone properties from spectral data.

An experimental protocol is presented for assessment of soil grown plant root systems with RGB and hyperspectral imaging. Combination of RGB image time series with chemometric information from hyperspectral scans optimizes insights into plant root dynamics.

RGB e Imaging spettrale radice per pianta Phenotyping e ricerca fisiologica: messa a punto sperimentale e protocolli di Imaging

Better understanding of plant root dynamics is essential to improve resource use efficiency of agricultural systems and increase the resistance of crop ...

Ecosystem Fabrication (EcoFAB) Protocols for The Construction of Laboratory Ecosystems Designed to Study Plant-microbe Interactions

Beneficial plant-microbe interactions offer a sustainable biological solution with the potential to boost low-input food and bioenergy production. A better mechanistic understanding of these complex plant-microbe interactions will be crucial to improving plant production as well as performing basic ecological studies investigating plant-soil-microbe interactions. Here, a detailed description for ecosystem fabrication is presented, using widely available 3D printing technologies, to create controlled laboratory habitats (EcoFABs) for mechanistic studies of plant-microbe interactions within specific environmental conditions. Two sizes of EcoFABs are described that are suited for the investigation of microbial interactions with various plant species, including Arabidopsis thaliana, Brachypodium distachyon, and Panicum virgatum. These flow-through devices allow for controlled manipulation and sampling of root microbiomes, root chemistry as well as imaging of root morphology and microbial localization. This protocol includes the details for maintaining sterile conditions inside EcoFABs and mounting independent LED light systems onto EcoFABs. Detailed methods for addition of different forms of media, including soils, sand, and liquid growth media coupled to the characterization of these systems using imaging and metabolomics are described. Together, these systems enable dynamic and detailed investigation of plant and plant-microbial consortia including the manipulation of microbiome composition (including mutants), the monitoring of plant growth, root morphology, exudate composition, and microbial localization under controlled environmental conditions. We anticipate that these detailed protocols will serve as an important starting point for other researchers, ideally helping create standardized experimental systems for investigating plant-microbe interactions.

Ecosystem Fabrication EcoFAB Protocols for The Construction of Laboratory Ecosystems Designed to Study Plant-microbe Interactions

This article describes detailed protocols for ecosystem fabrication of devices (EcoFABs) that enable the studies of plants and plant-microbe interactions in highly controlled laboratory conditions.

Protocolli di fabbricazione (EcoFAB) di ecosistema per la costruzione degli ecosistemi di laboratorio progettato per studiare le interazioni piante-microrganismi

Beneficial plant-microbe interactions offer a sustainable biological solution with the potential to boost low-input food and bioenergy production. A ...

Composition and Distribution Analysis of Bioaerosols Under Different Environmental Conditions

Variable microorganisms in particulate matter (PM) under different environmental conditions may have significant impacts on human health. In this study, we described a protocol for multiple analyses of the biological compositions in environmental PM. Five experiments are presented: (1) PM number monitoring by using a laser particle counter; (2) PM collection by using a cyclonic aerosol sampler; (3) PM collection by using a high-volume air sampler with filters; (4) culturable microbes collection by the Andersen six-stage sampler; and (5) detection of biological composition of environmental PM by bacterial 16SrDNA and fungal ITS region sequencing. We selected hazy days and a livestock farm as two typical examples of the application in this protocol. In this study, these two sampling methods, cyclonic aerosol sampler and filter sampler, showed different sampling efficiency. The cyclonic aerosol sampler performed much better in terms of collecting bacteria, while these two methods showed the same efficiency in collecting fungi. Filter samplers can work under low temperature conditions while cyclonic aerosol samplers have a sampling limitation for temperature. A solid impacting sampler, such as an Andersen six-stage sampler, can be used to sample bioaerosols directly into the culture medium, which increases the survival rate of culturable microorganisms. However, this method mainly relies on culture while more than 99% of microbes cannot be cultured. DNA extracted from the culturable bacteria collected by the Andersen six-stage sampler and samples collected by cyclonic aerosol sampler and filter sampler were detected by bacterial 16S rDNA and fungal ITS region sequencing.All the methods above may have wide application in many fields of study, such as environmental monitoring and airborne pathogen detection. From these results, we can conclude that these methods can be used under different conditions and may help other researchers further explore the health impacts of environmental bioaerosols.

Understanding the biological composition of environmental particulate matter is important for the study of its significant impacts on human health and disease spread. Here, we used three types of bioaerosol sampling methods and a biological analysis of airborne microbes to better explore airborne microbial communities under different environmental conditions.

Composizione e analisi della distribuzione di Bioaerosols in diverse condizioni ambientali

Variable microorganisms in particulate matter (PM) under different environmental conditions may have significant impacts on human health. In this study, ...

Identifying Per- and Polyfluorinated Chemical Species with a Combined Targeted and Non-Targeted-Screening High-Resolution Mass Spectrometry Workflow

Historical and emerging per- and polyfluoroalkyl substances (PFASs) have garnered significant interest from the public and government agencies from the local to federal levels. The continuing evolution of PFAS chemistries presents a challenge to the environmental monitoring, where ongoing development of targeted methods necessarily lags the discovery of new chemical compounds. There is a need, therefore, to have forward-looking methodologies that can detect emerging and unexpected compounds, monitor these species over time, and resolve details of their chemical structure to enable future work in human health. To this end, non-targeted analysis by high-resolution mass spectrometry offers a broad base detection approach that can be combined with almost any sample preparation scheme and provides significant capabilities for compound identification after detection. Herein, we describe a solid-phase extraction (SPE) based sample concentration method tuned for shorter chain and more hydrophilic PFAS chemistries, such as per fluorinated ether acids and sulfonates, and describe analysis of samples prepared in this fashion in both targeted and non-targeted modes. Targeted methods provide superior quantification when reference standards are available but are intrinsically limited to expected compounds when performing analysis. In contrast, a non-targeted approach can identify the presence of unexpected compounds and provide some information about their chemical structure. Information about chemical features can be used to correlate compounds across sample locations and track abundance and occurrence over time.

Here, we present a protocol for the sequential targeted quantification and non-targeted analysis of fluorinated compounds in water by mass spectrometry. This methodology provides quantitative levels of known fluorochemical compounds and identifies unknown chemicals in related samples with semi-quantitative estimates of their abundance.

Identificazione- e specie chimica di Polyfluorinated con un flusso di lavoro combinato mirati e Screening di mirati spettrometria di massa ad alta risoluzione

Historical and emerging per- and polyfluoroalkyl substances (PFASs) have garnered significant interest from the public and government agencies from the ...

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides in attempts to control its populations eliminates natural enemies and competitor flower thrips species, thereby increasing its populations. An unsustainable situation develops with concomitant resistant pest populations, secondary pest outbreaks, and environmental degradation. Integrated pest management utilizes knowledge of pest and natural enemy relationships to implement tactics that are environmentally friendly and sustainable. Minute pirate bugs are the most important worldwide predators of thrips. They can suppress and ultimately control Frankliniella species flower thrips. Flower samples taken at least weekly are needed to understand predator-prey dynamics. Shown here is the sampling of the flowers of fruiting vegetables and companion plants to estimate the densities of individual thrips and minute pirate bug species. Representative data illustrates how the protocol is used to determine the efficacy of management tactics over time and how to evaluate the benefits of predation by minute pirate bugs. The sampling protocol is similarly adaptable to sampling thrips and minute pirate bugs in other plant species hosts.

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

Presented here is a protocol to determine the number of thrips and minute pirate bug predators in crops over multiple dates in field experiments. Also illustrated is how to determine the efficacy of management tactics against thrips and evaluate the benefits of predation by minute pirate bugs.

Campionamento per la stima delle specie di Frankliniella Dei corci e dei predatori delle specie di Orio negli esperimenti sul campo

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides ...