The research was supported by the National Research Council (CNR) of Italy. The authors thank GIRE members for collecting seed samples and are grateful to Alison Garside for revising the English.

1. As sementes de amostragem e armazenamento <ol><li> Monitorar campos cultivados para injustificada mau desempenho herbicida, ou seja, não devido a condições climáticas desfavoráveis ​​ou a tratamentos herbicidas de baixa qualidade. </li><li> Coletar uma amostra de sementes de uma espécie de cada vez e atribuir um código único. As sementes maduras são geralmente recolhidos antes da colheita das culturas de plantas que haviam sobrevivido ao tratamento (s) herbicida. Monitor de oportuna para observar se as sementes são derramadas por planta mãe quando maduro. </li><li> Preencher um formulário para cada amostra, indicando o código único atribuído, o nome da espécie, data da coleta, coordenadas GPS, município, nome do fazendeiro, tamanho do campo, nível de infestação, colheita, herbicida (s) utilizados durante a temporada e registros históricos do campo . </li><li> Coletar sementes de pelo menos 30 plantas selecionadas aleatoriamente, que sejam representativas da infestação campo. Certifique-se de que a amostra de sementes contém pelo menos 5.000 sementes maduras. Para um obrigatórios de cruzamento espécies de plantas daninhas(Por exemplo, Lolium spp. Ou Amaranthus spp.), Reduzir o número de plantas a 10-15, mantendo-se o número total de sementes em torno de 5000 11. </li><li> Sub-provar o campo se manchas de ervas daninhas estão espalhados em grandes áreas (mais de um hectare) como diferentes biótipos resistentes a herbicidas são selecionados. </li><li> Armazene sementes em sacos de papel sem lacre marcados com o código único atribuído. </li><li> Permitir que a umidade evapore, mas não exponha sementes a alta temperatura (isto é, evite deixá-los em um carro sob o sol) ou a flutuações extremas de temperatura para evitar a indução de dormência secundária. </li><li> Limpo (remover palha, sementes de-casco, etc.) e armazená-los à temperatura ambiente em um quarto seco. Após a realização dos testes de resistência primeiros, armazenar as sementes por longos períodos de tempo em um quarto escuro a 4 ° C, de preferência em selado a vácuo sacos de plástico. Em desta forma preservar a sua viabilidade das sementes por um tempo significativamente maior. </li></ol> NOTA: dormência das sementes fornece um mecanismo flexível e eficiente que permite que as ervas daninhas se adaptar e persistem em agro-ecossistemas. Para quebrar a dormência e permitir a germinação de sementes, protocolos diferentes têm de ser utilizados dependendo das espécies de ervas daninhas, isto é, o tipo de dormência 16. Existem três maneiras principais para remover dormência: <ol><li> Vernalização NOTA: Para obter germinação e emergência das plântulas em simultâneo, um período de vernalização semente que varia de alguns dias a uma semana é necessária para remover dormência fisiológica de muitas espécies.: Por exemplo, Amaranthus retroflexus, Chenopodium album, Lolium spp, Avena fátua, persicaria Polygonum , Phalaris paradoxa 17-19. É necessário um longo período de até 15 dias para rhoeas, difformis Cyperus e Ammania coccinea e até 30 dias para Schoenoplectus mucronatus <sup&gt; 20. <ol><li> Coloque um pouco de água deionizada em pratos de plástico. Corte duas camadas de papel de filtro e mergulhe-os em água, retire todo o excesso. Coloque as sementes secas ao ar no papel. Transferir as placas de plástico para um frigorífico a 4 ° C durante o período de tempo requerido. </li></ol></li><li> Escarificação NOTA: Algumas espécies de plantas daninhas são mais recalcitrante a germinação do que outros devido a dormência mecânica, ou seja, características do revestimento de semente, e exigir a utilização de uma escarificação química usando ácido sulfúrico a germinar 21. <ol><li> Prepara-se uma proveta com ácido sulfúrico concentrado (95-98%). Prepare um copo cheio de água. Coloque as sementes num envelope de tecido não-tecido. </li><li> Soak, por exemplo, Echinochloa spp. Sorghum halepense ou sementes durante 20 minutos ou 5 minutos, respectivamente, em ácido sulfúrico concentrado. </li><li> Pegue o envelope para fora do copo usando um par de pinças e colocá-lo no copo cheio de água. Abra oenvelope, coloque as sementes em um pequeno coador e lave-os com água corrente. </li></ol> Variante: A. plantago-aquatica precisa de um protocolo diferente de 22, 23 <ol><li> Embeber as sementes durante 2 min em clorofórmio. Lave as sementes com água deionizada e seque-os com papel absorvente. Húmido das sementes em ácido sulfúrico 80% durante 5 min. </li><li> Coloque as sementes em um pequeno coador e lave-os com água corrente. </li></ol></li><li> Maturação das sementes pós-colheita NOTA: Sementes de outras espécies de plantas daninhas não germinam em tudo por alguns meses após o vencimento, independentemente do método utilizado para quebrar a dormência. <ol><li> Armazenar as sementes por um período de, pelo menos, 3-4 meses à temperatura ambiente e baixa umidade e siga os protocolos acima para quebra de dormência (por exemplo, Oryza sativa var. Sylvatica ou P. rhoeas). </li></ol></li></ol> A germinação 3. Semente <ol><li> Coloque as sementes de ser germinadas em plastic pratos contendo 0,6% (v / m) de ágar com nitrato de potássio a 0,1% (KNO 3) adicionado: <ol><li> Prepara-se uma solução de agar a 0,6% + 0,1% de KNO 3 usando água desionizada. Dissolve-se o ágar em um forno de microondas. </li><li> Despeje a solução agar em pratos de plástico. Arrefecer o substrato e, em seguida, colocar nas sementes. </li></ol> Variante: O solo pode também ser utilizado como um substrato em pratos de plástico. Esta prática é particularmente eficiente para Echinochloa spp., S. halepense e Lolium spp. </li><li> Coloque pratos de plástico em uma câmara de germinação por cerca de uma semana com luz e temperatura condições, dependendo das condições óptimas para cada espécie de erva daninha. Para a maioria das espécies de inverno, a temperatura é 15/25 ° C dia / noite e 12 horas de fotoperíodo com tubos de néon proporcionando uma densidade de fluxo de fótons fotossintéticos (DFFF) de 15-30 mol m -2 s -1. Para muitas espécies de verão, a gama de temperaturas é de 15/30 ° C dia / noite. Variante: Some espécies, tais como S. halepense, precisa de um tratamento térmico. Portanto, após a escarificação, as sementes de S. halepense são submetidos às seguintes condições: ciclos de 4 horas a 45 ° C e 20 h a 24 ° C durante três dias no gabinete de germinação, e, em seguida, três dias em condições normais. </li></ol> 4. das mudas e Crescimento <ol><li> Transplante de quinze a vinte mudas em bandejas plásticas (325 x 265 x 95 mm) carregada com uma mistura padrão de envasamento (60% solo franco silty, 15% de areia, 15% e 10% agriperlite turfa - por volume). NOTA: O transplante, em vez de sementeira directa, permite um suporte uniforme de plantas, na mesma fase de crescimento a ser obtido, que é um importante pré-requisito para optimizar o rendimento do tratamento com herbicida. </li><li> Identificar cada bandeja com um código de barras, incluindo todas as informações para a identificação única: Código população, herbicida que está sendo testado, replicar número e número da bandeja progressiva &lt;./ Li&gt; <li> Coloque as bandejas em uma aquecida com efeito de estufa e água plantas como necessários para manter o substrato em ou perto de capacidade de campo. NOTA: A temperatura de crescimento varia dependendo das espécies de ervas daninhas. Muitas vezes, os testes são feitos durante o outono / inverno / primavera, para que a luz é completada utilizando lâmpadas de 400 W halógenas, que fornecem uma PPFD de cerca de 150 mol m -2 s -1 e fotoperíodo de 12 h 24, 19 espécies de plantas daninhas. Verão com C 4 ciclo fotossintético geralmente exigem maior intensidade de luz e, portanto, os testes são feitos no final de primavera-verão ou a intensidade da luz é completada cerca de 400 mol m -2 s -1 com um fotoperíodo de 14 horas. </li><li> Use um protocolo diferente para algumas espécies de plantas daninhas que infestam o arroz em casca, por exemplo, A. plantago-aquatica, S. mucronatus e C. difformis, tal como descrito em 22. <ol><li> Transplante as mudas em bandejas de poliestireno com 24 células redondas (55 mm de diâmetro, 64 mm de profundidade) filliderou com 60% solo franco silty, 30% de areia e 10% de turfa (em volume). </li><li> Definir as bandejas 12 centímetros em recipientes de plástico cheios de água profundas e battened para baixo por hastes de aço inoxidável para impedi-los aparafusadas flutuante (Figura 1). </li><li> Manter o nível de água nos recipientes em 1-2 cm abaixo do nível da superfície do solo e adicionar 1,5 g de sulfato de cobre para cada recipiente (que contém 10-12 L de água) para evitar a proliferação de algas. </li></ol></li></ol> 5. tratamentos herbicidas <ol><li> Os tratamentos com herbicidas pré-emergentes: <ol><li> Após cerca de três dias na câmara de germinação, conforme descrito na seção 3, transplantar as sementes germinam em bandejas plásticas contendo substrato descrito acima e cubra com uma camada de solo (cerca de 1 cm). Este é um passo crítico para assegurar que as plantas não vão emergir devido ao efeito herbicida em vez de uma profundidade de enterramento excessiva. </li><li> Leve o substrato para o campo capacidade, colocando os tabuleiros, que têm alguns furos na parte inferior, sobre discos cheios de água. </li><li> Um dia após o transplante, tratar as bandejas com o herbicida pré-emergência 25. </li><li> Manter o substrato na ou perto da capacidade de campo por adição de água conforme necessário, tanto a partir de cima e abaixo, por capilaridade a partir do disco. Este procedimento favorece a permanência do herbicida na profundidade apropriada (isto é, onde as sementes em germinação são) para uma boa eficácia do tratamento. </li></ol></li><li> Os tratamentos com herbicidas pós-emergentes: <ol><li> Spray de plantas quando atingem a fase de 2-3 folhas (isto é, fase de crescimento 12-13 da escala de crescimento BBCH estendida 26). </li><li> A partir do dia após o tratamento, defina o sistema de irrigação de acordo com as necessidades de água das espécies de plantas daninhas e da época (por exemplo, para Echinochloa spp. Que fornece água para 3 min 4 vezes por dia, em intervalos regulares, das 9 horas às 9 pm). A água é disbuído usando um sistema de irrigação por aspersão automática. Variante: glifosato é aplicada na planta fase BBCH 14-21. </li></ol></li><li> Preparação herbicida e distribuição. NOTA: Todos os herbicidas (pré e pós-emergência) são aplicadas como formulações comerciais com surfactantes recomendadas em duas doses, dose recomendada campo (1x) e três vezes que (3x). <ol><li> Se necessário, preparar a solução de agente tensioactivo em massa de acordo com as instruções do rótulo; a concentração final é normalmente expresso como uma percentagem do volume final (por exemplo, 0,3%) ou como o volume a ser distribuído por unidade de área (por exemplo, 1 L ha -1). </li><li> Utilizar a solução de agente tensioactivo, como solvente para a solução de herbicida (soluto) de modo a manter a concentração correcta do ingrediente activo. Preparar a solução herbicida mais concentrada primeiro (3x). Calcular a quantidade do produto comercial para ser dissolvido na solução de agente tensioactivo (ou em água desionizada se umtensioactivo não é necessário) usando a seguinte equação: Dose erva = [(Dose Dose campo x max) x V aleta] / V del Onde: Dose erva = dose de herbicida (ml), de dose Dose campo = campo herbicida (ml ha -1), Dose Max = dose máxima entregue, V fin = volume final da solução (l), V del = volume entregue pela Pulverizador banco (L ha -1). </li><li> Diluir (2: 1, v / v) a solução 3x herbicida para preparar o menos concentrada (1x). Este procedimento reduz a chance de cometer erros quando pesagem ou pipetando os herbicidas. Concentração da solução herbicida é expressa como o volume a ser distribuído por unidade de área (L ha -1). </li><li> Iniciar a sequência de tratamento com a dose de herbicida inferior (1x). Desta forma não há necessidade de lavar o armário de pulverização entre dois tratamentos com o mesmo herbicida. </li><li> Distribua o solutio herbicidan, usando um pulverizador de banco precisão entregar 300 L ha -1 (± 1%), a uma pressão de 215 kPa e uma velocidade de 0,75 m seg-1, com um braço equipado com três ventoinha plana (faixa estendida) bicos hidráulicos . </li><li> Lave o gabinete de pulverização duas vezes quando o herbicida é alterada utilizando água sanitária 1% (v / v) e depois enxaguar. Variante: glifosato é aplicado com um volume de calda de 200 L ha -1 27. NOTA: Particular atenção tem de ser pago quando herbicidas altamente biológicos, como o sulfometuron sulfoniluréias ou flazasulfuron, são usados. Neste último caso, fazer uma lavagem com uma solução alcalina e um outro com amónia (2,5% v / v), seguido de uma lavagem cuidadosa com água. </li></ol></li></ol> 6. Coleta e análise dos dados <ol><li> Através de um leitor de código de barras, que identifica automaticamente cada bandeja, gravar o número de plantas que sobreviveram ao tratamento, bem como a biomassa Visual estimado (VEB). As plantas são assEssed como sendo mortos se eles não mostram o crescimento ativo independentemente da cor ou outra aparência. <ol><li> Faça a avaliação de três ou quatro semanas após o tratamento (WAT), dependendo dos herbicidas testados (por exemplo, três WAT para os inibidores de ACCase e quatro WAT para os inibidores de ALS ou glifosato). </li><li> Avaliar a eficácia do tratamento geral, incluindo uma população suscetível (verifique S) em todos os experimentos, ou seja, uma população coletada em um site que nunca ou raramente tratado com herbicidas era. </li><li> Expresso de sobrevivência das plantas, como percentagem do número de plantas tratadas, contado imediatamente antes do tratamento herbicida, e calcular o erro padrão (EP) por valor médio (valor das duas repetições média). </li><li> O VEB é obtido através de uma comparação visual de biomassa vegetal entre tratados e não-tratados de verificação da mesma população 25, 28. Um escore, variando de 10 para as plantas não afetadas pelo herbicida (em comparação com o check-tratados não) para 0 quandoas plantas são claramente morta, é dada a cada bandeja tratada. </li></ol></li><li> Populações atribuir a quatro categorias com base nos resultados obtidos a partir dos tratamentos com duas doses de herbicida: S, quando menos do que 5% das plantas sobreviveram os 1x dose do herbicida, quando SR sobreviventes variou de 5% a 20% em 1x dose do herbicida, quando mais do que R 20% das plantas sobreviveram os 1x dose do herbicida e RR sobreviventes quando são mais do que 20% na dose de herbicida 1x e mais do que 10% na dose de herbicida 3x 17. </li></ol>

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L., var. sylvatica.) in Clearfield&#174; Italian paddy rice.</a> Agronomy. 2 (4), 371-383 (2012).</li><li>Zelaya, I. A., Anderson, J. A. H., Owen, M. D. K., Landes, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+spectrophotometric+and+HPLC+methods+for+shikimic+acid+determination+in+plants:+Models+in+glyphosate-resistant+and-susceptible+crops.">Evaluation of spectrophotometric and HPLC methods for shikimic acid determination in plants: Models in glyphosate-resistant and-susceptible crops.</a> J. Agric. Food Chem. 59 (6), 2202-2212 (2011).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Várias medidas no âmbito dos protocolos são críticos para uma avaliação bem sucedida de resistência a herbicidas em uma população: 1) sementes devem ser coletadas quando madura a partir de plantas que sobreviveram ao tratamento (s) herbicida. Maturação das sementes na planta mãe é crucial para evitar dificuldades na germinação das sementes mais tarde; 2) É recomendado o armazenamento adequado das sementes para evitar a proliferação de fungos que possam impedir a germinação; 3) mudas devem ser tratada...

<html> Os herbicidas são a medida controle de plantas daninhas mais amplamente utilizado, sendo responsável por até 50% do mercado global de proteção de plantas 1. Eles são ferramentas relativamente baratas, evitar práticas de cultivo do solo e demorado de trabalho intensivo, e, finalmente, resultar na produção de custo-eficaz, segura e rentável comida 2. No entanto, a grande variabilidade genética fenológico e presente em muitas espécies de plantas daninhas, em conjunto com um excesso de confiança no uso de herbicidas, freqüentemente resulta na seleção de populações de plantas daninhas resistentes a herbicidas. A introdução de herbicidas selectivos com um alvo metabólica muito específico 3-5 aumentou dramaticamente o número de casos de resistência ao longo dos anos. Até o momento, 240 espécies de plantas daninhas dicotiledôneas (140 e 100 monocotiledôneas) no mundo todo desenvolveram resistência a diferentes herbicidas Sites de Ação (SoA) 4. Esta é uma grande preocupação para manejo de plantas daninhas e mais em geral, para a produção agrícola sustentável. e_content &quot;&gt; A detecção precoce da resistência, com base em testes confiáveis, freqüentemente realizados em casa de vegetação, é um passo fundamental para manejo de ervas daninhas resistentes a herbicidas. Diferentes abordagens têm sido desenvolvidas de acordo com os objectivos, necessário nível de precisão, o tempo e os recursos disponíveis, como bem como as espécies de ervas daninhas considerados 12/06. No entanto, quando é requerida a confirmação do estado de resistência de um novo biótipo de ervas daninhas (isto é, um grupo de indivíduos que partilham várias características fisiológicas, incluindo a capacidade de sobreviver a um ou mais herbicidas pertencentes a um grupo particular utilizado a uma dose que normalmente controlá-los), uma planta inteira robusta bioensaio tem de ser realizada num ambiente controlado, 4, 11. Um biótipo raramente é resistente a apenas um herbicida. Cada biótipo é, portanto, caracterizada por um determinado padrão de resistência, isto é, o número e tipo de SOA dos herbicidas é resistente a, e por uma dada resistêncianível de cada herbicida 13. A determinação precoce e confiável do padrão de cruz ou resistência múltipla 5, 14 é importante para o manejo da resistência de campo. Vale ressaltar que a resistência a herbicidas tem nada a ver com a tolerância natural que algumas exposições de plantas daninhas em relação a alguns herbicidas, por exemplo, espécies dicot vs. herbicidas inibidores da ACCase, espécies monocotiledôneas vs. 2,4-D, Equisetum arvense vs. glifosato. Este artigo apresenta uma abordagem robusta para testar biótipos resistentes a herbicidas putativo amostradas em campos onde mau controle por herbicida (s) haviam sido relatados. Variantes relevantes para os protocolos padrão em relação às espécies de plantas daninhas envolvidos são apresentados. As vantagens sobre as técnicas alternativas / protocolos baseados em inteiros quer bioensaios vegetais utilizando apenas uma dose de herbicida 15, ou o tratamento de sementes em placas de Petri de 8 estão relacionados com a maior reliability e inferir a possibilidade de o nível de resistência devido à inclusão de duas doses do herbicida nas experiências. No entanto, para o teste de resistência de rotina, os mesmos métodos podem ser aplicados no apenas uma dose do herbicida, assim reduzindo os custos. Bem como permitindo a confirmação do estado de resistência, a informação obtida pode ser usada para optimizar tanto as seguintes etapas de pesquisa e / ou a concepção de estratégias de gestão da resistência de som.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Paper bags</td>
			<td>Celcar SAS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic dishes</td>
			<td>ISI plast S.p.A.</td>
			<td>SO600</td>
			<td>Transparent plastic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfuric acid 95-98%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>320501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-woven fabric</td>
			<td>Carretta Tessitura</td>
			<td>Art.TNT17</td>
			<td>Weight&#160; 17 gr m-&#178;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform &#62;99.5%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C2432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A1296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium nitrate &#62;99.0%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8394</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic containers</td>
			<td>Giganplast</td>
			<td>1875/M</td>
			<td>600 x 400 x 110 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic trays</td>
			<td>Piber plast</td>
			<td>G1210A</td>
			<td>325 x 265 x 95 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene trays</td>
			<td>Plastisavio</td>
			<td>S24</td>
			<td>537x328x72 mm, 24 round cells (6x4)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>451657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agriperlite</td>
			<td>Blu Agroingross sas</td>
			<td>AGRI100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peat</td>
			<td>Blu Agroingross sas</td>
			<td>TORBA250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germination cabinet</td>
			<td>KW</td>
			<td>W87R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nozzles</td>
			<td>Teejet</td>
			<td>&#160;XR11002-VK, TP11001-VH</td>
			<td>The second type of nozzles are used only for glyphosate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barcode generator</td>
			<td>Toshiba TEC</td>
			<td>SX4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labels with barcode</td>
			<td>Felga</td>
			<td>TT20200</td>
			<td>Stick-in labels with rounded corners</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barcode reader</td>
			<td>Cipherlab</td>
			<td>8300-L</td>
			<td>Portable data terminal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bench sprayer</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Built in house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2">HERBICIDES INCLUDED IN THE RESULTS:</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial product</td>
			<td>Active ingredient</td>
			<td>Company</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Altorex</td>
			<td>imazamox</td>
			<td>BASF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Azimut&#160;</td>
			<td>florasulam</td>
			<td>Dow AgroSciences</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopower</td>
			<td></td>
			<td>Bayer Crop Science</td>
			<td>Surfact to be used with Hussar WG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dash</td>
			<td></td>
			<td>BASF</td>
			<td>Surfact to be used with Altorex</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Granstar&#160;</td>
			<td>tribenuron-methyl</td>
			<td>Dupont</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gulliver&#160;</td>
			<td>azimsulfuron</td>
			<td>Dupont</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hussar WG&#160;</td>
			<td>iodosulfuron</td>
			<td>Bayer Crop Science</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nominee&#160;</td>
			<td>bispyribac-Na</td>
			<td>Bayer Crop Science</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roundup</td>
			<td>glyphosate</td>
			<td>Monsanto</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trend</td>
			<td></td>
			<td>Dupont</td>
			<td>Surfact to be used with Granstar and Gulliver</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viper&#160;</td>
			<td>penoxsulam</td>
			<td>Dow AgroSciences</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weedone LV4</td>
			<td>2,4-D</td>
			<td>Isagro</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocols for robust herbicide resistance testing in different weed species

Robust protocols to test putative herbicide resistant weed populations at whole plant level are essential to confirm the resistance status. The presented protocols, based on whole-plant bioassays performed in a greenhouse, can be readily adapted to a wide range of weed species and herbicides through appropriate variants. Seed samples from plants that survived a field herbicide treatment are collected and stored dry at low temperature until used. Germination methods differ according to weed species and seed dormancy type. Seedlings at similar growth stage are transplanted and maintained in the greenhouse under appropriate conditions until plants have reached the right growth stage for herbicide treatment. Accuracy is required to prepare the herbicide solution to avoid unverifiable mistakes. Other critical steps such as the application volume and spray speed are also evaluated. The advantages of this protocol, compared to others based on whole plant bioassays using one herbicide dose, are related to the higher reliability and the possibility of inferring the resistance level. Quicker and less expensive in vivo or in vitro diagnostic screening tests have been proposed (Petri dish bioassays, spectrophotometric tests), but they provide only qualitative information and their widespread use is hindered by the laborious set-up that some species may require. For routine resistance testing, the proposed whole plant bioassay can be applied at only one herbicide dose, so reducing the costs.

Para avaliar o estado de resistência de uma população resistente putativo, é fundamental para incluir um controlo susceptível no ensaio, a fim de verificar a eficácia do herbicida. Os resultados de um teste de rastreio realizados em P. populações rhoeas, uma erva daninha infestante campos de trigo, são relatados na Figura 2, onde a eficácia de quatro herbicidas em pós-emergência sobre um cheque suscetível (09-36) e sobre a suspeita de um resistente (10-91) são apresentado...

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Protocols for Robust Herbicide Resistance Testing in Different Weed Species

A robust and flexible approach to confirm herbicide resistance in weed populations is presented. This protocol allows the herbicide resistance levels to be inferred and applied to a wide range of weed species and herbicides with minor adaptations.

Protocolos para Robust Teste de resistência a herbicidas em diferentes espécies de plantas daninhas

Robust protocols to test putative herbicide resistant weed populations at whole plant level are essential to confirm the resistance status. The presented ...

protocols-for-robust-herbicide-resistance-testing-different-weed

Research

JoVE Journal

Environment

14.4K visualizações.  National Research Council (CNR), Italy. A robust and flexible approach to confirm herbicide resistance in weed populations is presented. This protocol allows the herbicide resistance levels to be inferred and applied to a wide range of weed species and herbicides with minor adaptations.

Vídeo: Protocols for Robust Herbicide Resistance Testing in Different Weed Species

An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates

Bacteriophage isolation from environmental samples has been performed for decades using principles set forth by pioneers in microbiology. The isolation of phages infecting Arthrobacter hosts has been limited, perhaps due to the low success rate of many previous isolation techniques, resulting in an underrepresented group of Arthrobacter phages available for study. The enrichment technique described here, unlike many others, uses a filtered extract free of contaminating bacteria as the base for indicator bacteria growth, Arthrobactersp. KY3901, specifically. By first removing soil bacteria the target phages are not hindered by competition with native soil bacteria present in initial soil samples. This enrichment method has resulted in dozens of unique phages from several different soil types and even produced different types of phages from the same enriched soil sample isolate. The use of this procedure can be expanded to most nutrient rich aerobic media for the isolation of phages in a vast diversity of interesting host bacteria.

An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates

We present an enrichment protocol for the isolation of bacteriophages infecting bacteria in the Arthrobacter genus. This enrichment protocol produces fast and reproducible results for the isolation and amplification of Arthrobacter phages from soil isolates.

Uma técnica de enriquecimento Aperfeiçoado para o isolamento de<em&gt; Arthrobacter</em&gt; Bacteriophage Espécie de amostra de solo Isolados

Bacteriophage isolation from environmental samples has been performed for decades using principles set forth by pioneers in microbiology. The isolation of ...

Ambiente

Measuring Rates of Herbicide Metabolism in Dicot Weeds with an Excised Leaf Assay

In order to isolate and accurately determine rates of herbicide metabolism in an obligate-outcrossing dicot weed, waterhemp (Amaranthus tuberculatus), we developed an excised leaf assay combined with a vegetative cloning strategy to normalize herbicide uptake and remove translocation as contributing factors in herbicide-resistant (R) and &#8211;sensitive (S) waterhemp populations. Biokinetic analyses of organic pesticides in plants typically include the determination of uptake, translocation (delivery to the target site), metabolic fate, and interactions with the target site. Herbicide metabolism is an important parameter to measure in herbicide-resistant weeds and herbicide-tolerant crops, and is typically accomplished with whole-plant tests using radiolabeled herbicides. However, one difficulty with interpreting biokinetic parameters derived from whole-plant methods is that translocation is often affected by rates of herbicide metabolism, since polar metabolites are usually not mobile within the plant following herbicide detoxification reactions. Advantages of the protocol described in this manuscript include reproducible, accurate, and rapid determination of herbicide degradation rates in R and S populations, a substantial decrease in the amount of radiolabeled herbicide consumed, a large reduction in radiolabeled plant materials requiring further handling and disposal, and the ability to perform radiolabeled herbicide experiments in the lab or growth chamber instead of a greenhouse. As herbicide resistance continues to develop and spread in dicot weed populations worldwide, the excised leaf assay method developed and described herein will provide an invaluable technique for investigating non-target site-based resistance due to enhanced rates of herbicide metabolism and detoxification.

This manuscript describes how herbicide metabolism rates can be effectively quantified with excised leaves from a dicot weed, thereby reducing variability and removing any possible confounding effects of herbicide uptake or translocation typically observed in whole-plant assays.

Medindo Taxas de Herbicida Metabolismo em Dicot Weeds com um ensaio extirpado Folha

In order to isolate and accurately determine rates of herbicide metabolism in an obligate-outcrossing dicot weed, waterhemp (Amaranthus tuberculatus), we ...

Potentiodynamic Corrosion Testing

Different metallic materials have different polarization characteristics as dictated by the open circuit potential, breakdown potential, and passivation potential of the material. The detection of these electrochemical parameters identifies the corrosion factors of a material. A reliable and well-functioning corrosion system is required to achieve this.
Corrosion of the samples was achieved via a potentiodynamic polarization technique employing a three-electrode configuration, consisting of reference, counter, and working electrodes. Prior to commencement a baseline potential is obtained. Following the stabilization of the corrosion potential (Ecorr), the applied potential is ramped at a slow rate in the positive direction relative to the reference electrode. The working electrode was a stainless steel screw. The reference electrode was a standard Ag/AgCl. The counter electrode used was a platinum mesh. Having a reliable and well-functioning in vitro corrosion system to test biomaterials provides an in-expensive technique that allows for the systematic characterization of the material by determining the breakdown potential, to further understand the material's response to corrosion. The goal of the protocol is to set up and run an in vitro potentiodynamic corrosion system to analyze pitting corrosion for small metallic medical devices.

Here, we present a protocol to set up and run an in vitro potentiodynamic corrosion system to analyze pitting corrosion for small metallic medical devices.

Potenciodinâmica Corrosão Testing

Different metallic materials have different polarization characteristics as dictated by the open circuit potential, breakdown potential, and passivation ...

Protocols for Quantifying Transferable Pesticide Residues in Turfgrass Systems

Plant canopies in established turfgrass systems can intercept an appreciable amount of sprayed pesticides, which can be transferred through various routes onto humans. For this reason, transferable pesticide residue experiments are required for registration and re-registration by the United States Environmental Protection Agency (USEPA). Although such experiments are required, limited specificity is required pertaining to experimental approach. Experimental approaches used to assess pesticide transfer to humans including hand wiping with cotton gloves, modified California roller (moving a roller of known mass over cotton cloth) and soccer ball roll (ball wrapped with sorbent strip) over three treated turfgrass species (creeping bentgrass, hybrid bermudagrass and tall fescue maintained at 0.4, 5 and 9 cm, respectively) are presented. The modified California roller is the most extensively utilized approach to date, and is best suited for use at low mowing heights due to its reproducibility and large sampling area. The soccer ball roll is a less aggressive transfer approach; however, it mimics a very common occurrence in the most popular international sport, and has many implications for nondietary pesticide exposure from hand-to-mouth contact. Additionally, this approach may be adjusted for other athletic activities with limited modification. Hand wiping is the best approach to transfer pesticides at higher mowing heights, as roller-based approaches can lay blades over; however, it is more subjective due to more variable sampling pressure. Utility of these methods across turfgrass species is presented, and additional considerations to conduct transferable pesticide residue research in turfgrass systems are discussed.

Transferable pesticide residue experiments in turfgrass systems are integral components of human risk exposure assessments. Experimental approaches to measure transferable residues should be adjusted to the human interaction of interest and turfgrass system dynamics. Three transferable pesticide residue protocols are presented and the suitability across three turfgrass systems is discussed.

Protocolos para quantificar os resíduos de pesticidas transferíveis em Sistemas de relva

Plant canopies in established turfgrass systems can intercept an appreciable amount of sprayed pesticides, which can be transferred through various routes ...

Dispersion of Nanomaterials in Aqueous Media: Towards Protocol Optimization

The sonication process is commonly used for de-agglomerating and dispersing nanomaterials in aqueous based media, necessary to improve homogeneity and stability of the suspension. In this study, a systematic step-wise approach is carried out to identify optimal sonication conditions in order to achieve a stable dispersion. This approach has been adopted and shown to be suitable for several nanomaterials (cerium oxide, zinc oxide, and carbon nanotubes) dispersed in deionized (DI) water. However, with any change in either the nanomaterial type or dispersing medium, there needs to be optimization of the basic protocol by adjusting various factors such as sonication time, power, and sonicator type as well as temperature rise during the process. The approach records the dispersion process in detail. This is necessary to identify the time points as well as other above-mentioned conditions during the sonication process in which there may be undesirable changes, such as damage to the particle surface thus affecting surface properties. Our goal is to offer a harmonized approach that can control the quality of the final, produced dispersion. Such a guideline is instrumental in ensuring dispersion quality repeatability in the nanoscience community, particularly in the field of nanotoxicology.

Here, we present a step-wise protocol for the dispersion of nanomaterials in aqueous media with real-time characterization to identify the optimal sonication conditions, intensity, and duration for improved stability and uniformity of nanoparticle dispersions without impacting the sample integrity.

Dispersão de nanomateriais em meios aquosos: para otimização de protocolo

The sonication process is commonly used for de-agglomerating and dispersing nanomaterials in aqueous based media, necessary to improve homogeneity and ...

RGB and Spectral Root Imaging for Plant Phenotyping and Physiological Research: Experimental Setup and Imaging Protocols

Better understanding of plant root dynamics is essential to improve resource use efficiency of agricultural systems and increase the resistance of crop cultivars against environmental stresses. An experimental protocol is presented for RGB and hyperspectral imaging of root systems. The approach uses rhizoboxes where plants grow in natural soil over a longer time to observe fully developed root systems. Experimental settings are exemplified for assessing rhizobox plants under water stress and studying the role of roots. An RGB imaging setup is described for cheap and quick quantification of root development over time. Hyperspectral imaging improves root segmentation from the soil background compared to RGB color based thresholding. The particular strength of hyperspectral imaging is the acquisition of chemometric information on the root-soil system for functional understanding. This is demonstrated with high resolution water content mapping. Spectral imaging however is more complex in image acquisition, processing and analysis compared to the RGB approach. A combination of both methods can optimize a comprehensive assessment of the root system. Application examples integrating root and aboveground traits are given for the context of plant phenotyping and plant physiological research. Further improvement of root imaging can be obtained by optimizing RGB image quality with better illumination using different light sources and by extension of image analysis methods to infer on root zone properties from spectral data.

An experimental protocol is presented for assessment of soil grown plant root systems with RGB and hyperspectral imaging. Combination of RGB image time series with chemometric information from hyperspectral scans optimizes insights into plant root dynamics.

RGB e raiz Spectral Imaging para fenotipagem de planta e pesquisa fisiológica: instalação Experimental imagem e protocolos

Better understanding of plant root dynamics is essential to improve resource use efficiency of agricultural systems and increase the resistance of crop ...

Ecosystem Fabrication (EcoFAB) Protocols for The Construction of Laboratory Ecosystems Designed to Study Plant-microbe Interactions

Beneficial plant-microbe interactions offer a sustainable biological solution with the potential to boost low-input food and bioenergy production. A better mechanistic understanding of these complex plant-microbe interactions will be crucial to improving plant production as well as performing basic ecological studies investigating plant-soil-microbe interactions. Here, a detailed description for ecosystem fabrication is presented, using widely available 3D printing technologies, to create controlled laboratory habitats (EcoFABs) for mechanistic studies of plant-microbe interactions within specific environmental conditions. Two sizes of EcoFABs are described that are suited for the investigation of microbial interactions with various plant species, including Arabidopsis thaliana, Brachypodium distachyon, and Panicum virgatum. These flow-through devices allow for controlled manipulation and sampling of root microbiomes, root chemistry as well as imaging of root morphology and microbial localization. This protocol includes the details for maintaining sterile conditions inside EcoFABs and mounting independent LED light systems onto EcoFABs. Detailed methods for addition of different forms of media, including soils, sand, and liquid growth media coupled to the characterization of these systems using imaging and metabolomics are described. Together, these systems enable dynamic and detailed investigation of plant and plant-microbial consortia including the manipulation of microbiome composition (including mutants), the monitoring of plant growth, root morphology, exudate composition, and microbial localization under controlled environmental conditions. We anticipate that these detailed protocols will serve as an important starting point for other researchers, ideally helping create standardized experimental systems for investigating plant-microbe interactions.

Ecosystem Fabrication EcoFAB Protocols for The Construction of Laboratory Ecosystems Designed to Study Plant-microbe Interactions

This article describes detailed protocols for ecosystem fabrication of devices (EcoFABs) that enable the studies of plants and plant-microbe interactions in highly controlled laboratory conditions.

Protocolos de fabricação (EcoFAB) ecossistema para a construção de ecossistemas de laboratório projetado para estudar interações planta-micróbio

Beneficial plant-microbe interactions offer a sustainable biological solution with the potential to boost low-input food and bioenergy production. A ...

Composition and Distribution Analysis of Bioaerosols Under Different Environmental Conditions

Variable microorganisms in particulate matter (PM) under different environmental conditions may have significant impacts on human health. In this study, we described a protocol for multiple analyses of the biological compositions in environmental PM. Five experiments are presented: (1) PM number monitoring by using a laser particle counter; (2) PM collection by using a cyclonic aerosol sampler; (3) PM collection by using a high-volume air sampler with filters; (4) culturable microbes collection by the Andersen six-stage sampler; and (5) detection of biological composition of environmental PM by bacterial 16SrDNA and fungal ITS region sequencing. We selected hazy days and a livestock farm as two typical examples of the application in this protocol. In this study, these two sampling methods, cyclonic aerosol sampler and filter sampler, showed different sampling efficiency. The cyclonic aerosol sampler performed much better in terms of collecting bacteria, while these two methods showed the same efficiency in collecting fungi. Filter samplers can work under low temperature conditions while cyclonic aerosol samplers have a sampling limitation for temperature. A solid impacting sampler, such as an Andersen six-stage sampler, can be used to sample bioaerosols directly into the culture medium, which increases the survival rate of culturable microorganisms. However, this method mainly relies on culture while more than 99% of microbes cannot be cultured. DNA extracted from the culturable bacteria collected by the Andersen six-stage sampler and samples collected by cyclonic aerosol sampler and filter sampler were detected by bacterial 16S rDNA and fungal ITS region sequencing.All the methods above may have wide application in many fields of study, such as environmental monitoring and airborne pathogen detection. From these results, we can conclude that these methods can be used under different conditions and may help other researchers further explore the health impacts of environmental bioaerosols.

Understanding the biological composition of environmental particulate matter is important for the study of its significant impacts on human health and disease spread. Here, we used three types of bioaerosol sampling methods and a biological analysis of airborne microbes to better explore airborne microbial communities under different environmental conditions.

Composição e análise da distribuição de Bioaerossóis sob diferentes condições ambientais

Variable microorganisms in particulate matter (PM) under different environmental conditions may have significant impacts on human health. In this study, ...

Identifying Per- and Polyfluorinated Chemical Species with a Combined Targeted and Non-Targeted-Screening High-Resolution Mass Spectrometry Workflow

Historical and emerging per- and polyfluoroalkyl substances (PFASs) have garnered significant interest from the public and government agencies from the local to federal levels. The continuing evolution of PFAS chemistries presents a challenge to the environmental monitoring, where ongoing development of targeted methods necessarily lags the discovery of new chemical compounds. There is a need, therefore, to have forward-looking methodologies that can detect emerging and unexpected compounds, monitor these species over time, and resolve details of their chemical structure to enable future work in human health. To this end, non-targeted analysis by high-resolution mass spectrometry offers a broad base detection approach that can be combined with almost any sample preparation scheme and provides significant capabilities for compound identification after detection. Herein, we describe a solid-phase extraction (SPE) based sample concentration method tuned for shorter chain and more hydrophilic PFAS chemistries, such as per fluorinated ether acids and sulfonates, and describe analysis of samples prepared in this fashion in both targeted and non-targeted modes. Targeted methods provide superior quantification when reference standards are available but are intrinsically limited to expected compounds when performing analysis. In contrast, a non-targeted approach can identify the presence of unexpected compounds and provide some information about their chemical structure. Information about chemical features can be used to correlate compounds across sample locations and track abundance and occurrence over time.

Here, we present a protocol for the sequential targeted quantification and non-targeted analysis of fluorinated compounds in water by mass spectrometry. This methodology provides quantitative levels of known fluorochemical compounds and identifies unknown chemicals in related samples with semi-quantitative estimates of their abundance.

Identificação por- e espécies químicas perfluorados com um fluxo de trabalho combinada alvo e não alvo-triagem de alta resolução de espectrometria de massa

Historical and emerging per- and polyfluoroalkyl substances (PFASs) have garnered significant interest from the public and government agencies from the ...

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides in attempts to control its populations eliminates natural enemies and competitor flower thrips species, thereby increasing its populations. An unsustainable situation develops with concomitant resistant pest populations, secondary pest outbreaks, and environmental degradation. Integrated pest management utilizes knowledge of pest and natural enemy relationships to implement tactics that are environmentally friendly and sustainable. Minute pirate bugs are the most important worldwide predators of thrips. They can suppress and ultimately control Frankliniella species flower thrips. Flower samples taken at least weekly are needed to understand predator-prey dynamics. Shown here is the sampling of the flowers of fruiting vegetables and companion plants to estimate the densities of individual thrips and minute pirate bug species. Representative data illustrates how the protocol is used to determine the efficacy of management tactics over time and how to evaluate the benefits of predation by minute pirate bugs. The sampling protocol is similarly adaptable to sampling thrips and minute pirate bugs in other plant species hosts.

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

Presented here is a protocol to determine the number of thrips and minute pirate bug predators in crops over multiple dates in field experiments. Also illustrated is how to determine the efficacy of management tactics against thrips and evaluate the benefits of predation by minute pirate bugs.

Amostragem para estimar espécies de Frankliniella flor tripes e Orius espécies predadores em experimentos de campo

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides ...