Generalitat Valenciana, PROMETEOII / 2014/063; Ministero della salute, servizi sociali e l'uguaglianza. Delegazione del governo per il piano nazionale sulle droghe, progetti di ricerca sulle dipendenze di droga, 2014I007; Ministero dell'economia e competitività (MINECO), Istituto di salute Carlos III, rete di Addictive disordini (RTA) RD12 / 0028/0005 e RD16 / 17/07/00 e Unione europea, FEDER fondi "una manera de hacer Europa" e PSI2014-51847-R.

Tutte le procedure che coinvolgono topi e la loro cura osservanza di leggi nazionali, regionali e locali e i regolamenti, che sono in conformità con la direttiva 2010/63/UE del Parlamento europeo e del Consiglio, del 22 settembre 2010 sulla protezione degli animali utilizzati a fini fini scientifici. L'uso di animali e Comitato a cura dell'Università di Valencia ha approvato il presente protocollo.
1. materiali e set-up per Conditioned Place Preference:
<ol><li>Gestire topi 3 giorni prima della prova per 1-2 minuti ciascuno. La base della coda dovrebbe essere afferrata. Il corpo dovrebbe essere sostenuto se possibile. Questo viene fatto per ridurre al minimo il dolore e l'angoscia quando si maneggia un animale ed evitare variabili interferenti, come lo stress. Nota: Di topo maschio 1 60 giorni di età (giovani adulti) 35-40 g di peso sono stati impiegati negli esperimenti attuali. Reintegrazione di droga-indotta può essere eseguita in topi di entrambi i sessi. Tuttavia, per quanto riguarda la reintegrazione indotta da stress, il paradigma di sconfitta sociale è progettato solo per roditori maschi, come fanno le femmine non inducono una risposta aggressiva nei topi residente.</li>
	<li>Per posto condizionata, utilizzare scatole identiche con due scomparti identici (30,7 cm long × 31,5 cm larghezza × 34,5 cm di altezza), separati da una zona grigia centrale più piccola (13,8 long × 31,5 centimetri di larghezza × 34,5 alta). Nota: Comparti hanno pavimento diverse texture e colori parete (un pavimento liscio nel vano di nero e un pavimento grezzo in quello bianco). Ogni vano della finestra di CPP contiene quattro fasci di luce infrarosse e sei nello scomparto centrale. Questo permette la registrazione degli incroci tra compartimenti e la posizione dell'animale.</li>
	<li>Impostare fino le luci della camera (off o abbassate) ogni giorno. Utilizzare luci rosse (consigliati), come gli animali non ve ne accorgete e si è attenuato per lo sperimentatore (circa 40 lux misurati a 1 m sopra il livello del pavimento).</li>
	<li>Impostare il programma per registrare 15 min per il condizionamento pre- e post-test (vedere la Tabella materiali per software) (Figura 2)</li>
	<li>Preparare la soluzione di cocaina richiesta per l'intero esperimento. Sciogliere il cloridrato di cocaina in 0,9% NaCl (soluzione fisiologica) in un volume di peso corporeo 0,1 mL/10 g. Miscela di vortice e conservare a 4 ° C alla fine della giornata. Nota: Concentrazioni di cocaina possono variare a seconda delle finalità dello studio. Se l'obiettivo è di valutare le dosi sottosoglia di cocaina, una concentrazione di 1 mg/kg potrebbe essere utilizzata, che è inefficace negli animali di controllo, come si è visto in precedenti studi24,35. Se una dose efficace è lo scopo, una concentrazione di 6 mg/kg può essere scelta, che è efficace, ma non induce la reintegrazione24, o una concentrazione di 25 mg/kg, che è efficace e induce la reintegrazione del preferenza19.</li>
	<li>Testare gli animali durante la loro fase scura e utilizzare la stessa casella per ogni animale in giorni.</li>
	<li>Portare animali ogni giorno per la sala di collaudo nelle loro gabbie casa e lasciarli indisturbati per 15 min come un periodo di assuefazione per tutti i rumori relative ai test.</li>
</ol>2. test
<ol><li>Acquisizione Nota: La procedura di condizionamento posto, imparziali in termini di preferenza spontanea iniziale, costituito da tre fasi: pre-condizionamento, condizionata e post-condizionata (Figura 1).<ol>
<li>
Pre-condizionamento (Pre-C) (3 giorni) (nella figura 2, Figura 3, Figura 4) Nota: Qui, viene valutato il valore neutro dei compartimenti nella finestra di CPP. Misurare il tempo trascorso in ogni vano e poi confrontarlo con quello trascorso nello stesso contenitore del test post-condizionata.<ol>
<li>Portare gli animali per la camera di prova e lasciarli abituati per 15 min.</li>
			<li>Verifica che le ghigliottine vengono rimossi dalla gabbia.</li>
			<li>Impostare il computer e il programma. Inserisci animal ID e premere il comando di "Prova" e "Start" (Figura 2).</li>
			<li>Posizionare il mouse delicatamente in camera di mezzo (vano grigio) e lasciare la sala di collaudo con minimo rumore.</li>
			<li>Riportare tutti gli animali in gabbie usate per casa e salvare i dati quando il processo è finito.</li>
			<li>Consentire di topi per accedere a entrambi i compartimenti dell'apparato per 15 min (900 s) al giorno per 3 giorni consecutivi.</li>
			<li>Il giorno 3, annotare il tempo trascorso in ogni vano per un periodo di s 900 e salvarlo per l'assegnazione degli scompartimenti nella fase successiva (Figura 3).</li>
			<li>Assegnare la metà degli animali in ogni gruppo per ricevere il farmaco o il veicolo in uno scomparto (ad es., nero) e l'altra metà nel vano di (ad es., bianco) (Figura 4). Nota: La distribuzione finale degli animali deve garantire che la metà degli animali sono assegnata a vano inizialmente preferito e l'altra metà al vano non preferite. Inoltre, la metà degli animali hanno ricevuto il farmaco in uno scomparto (ad esempio, quello nero) e l'altra metà in altro (in questo caso, quello bianco).</li>
			<li>Punteggi di equilibrio nel gruppo all'interno di entrambi i comparti, così come tra i gruppi (le differenze del gruppo test con un'analisi della varianza (ANOVA)). Come guida approssimativa, i valori dovrebbero essere circa 360-370 s nel test Pre-C (Figura 4). Nota: nessuna differenza significativa dovrebbe essere rilevata tra il tempo trascorso negli scompartimenti abbinate in droga e abbinato al veicolo durante la prova di Pre-C.</li>
			<li>Escludere gli animali che presentano una forte avversione o la preferenza per ogni vano. Considera avversione come spendere meno tempo al 33% nel vano e considerare la preferenza quando l'animale ha trascorso oltre il 67% del tempo totale nel compartimento.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Condizionata (4 giorni) (Figura 5)
		<ol>
<li>Pesare gli animali e usare questi pesi per dosi di cocaina durante condizionata.</li>
			<li>Preparare siringhe con cocaina o salino basato sul peso corporeo.</li>
			<li>Iniettare un mouse contemporaneamente intraperitonealmente (ip) e inserire subito delicatamente nel vano assegnato di bianco o nero della loro casella.</li>
			<li>Dopo un intervallo di 4 h, iniettare la dose di farmaco immediatamente prima che il mouse è limitato al comparto droga-accoppiato per 30 min (Figura 5).</li>
			<li>Si alternano questa procedura ogni giorno, iniziando con la cocaina nei giorni 1 e 3 e saline nei giorni 2 e 4.</li>
			<li>Verificare che il confinamento è effettuato in entrambi i casi chiudendo la porta a ghigliottina che separa i due compartimenti, per rendere inaccessibile la zona centrale. Nota: In questa fase, non c'è nessun bisogno di impostare il programma di PC.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Post-condizionata (Post-C) (1 giorno)
		<ol>
<li>Portare gli animali per la camera di prova e lasciarli abituati per 15 min.</li>
			<li>Rimuovere la porta a ghigliottina che separa i due compartimenti.</li>
			<li>Impostare il computer e il programma. Inserisci animal ID e premere il comando "start".</li>
			<li>Registrare il tempo trascorso dai topi non trattati in ogni compartimento durante un periodo di osservazione di s 900.</li>
			<li>Quando il processo è finito, riportare tutti gli animali in gabbie usate per casa e salvare i dati.</li>
			<li>Considera che la droga ha indotto la preferenza di posto se il tempo trascorso nel vano di droga-accoppiato durante il Post-C è significativamente maggiore nel test Pre-C. Se si verifica il contrario, considera un'avversione per il vano di droga-accoppiato.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Estinzione
	<ol>
<li>Condurre una sessione settimanale di estinzione in tutti i gruppi/animali che ha sviluppato una preferenza per il vano di droga-accoppiato.</li>
		<li>Metti l'animale nell'apparato (senza ghigliottine) per 15 min (stesso come i test di pre- e Post-C) (Figura 1). Nota: Se la dose impiegata CPP è alto (25 mg/kg), eseguire 1 sessione di estinzione per settimana. Se una dose di sottosoglia è usato (1 mg/kg), quindi eseguire 2 estinzione sessioni a settimana (ad esempio lunedì e giovedì).</li>
		<li>Prendere in considerazione la preferenza estinta quando i dati della prova di estinzione non mostrano differenze per quanto riguarda il test di Pre-C, ma mostrano differenze per quanto riguarda il test Post-C.</li>
		<li>Ripetere il test 24 ore più tardi al fine di confermare l'estinzione.</li>
	</ol></li>
	<li>Reintegrazione di CPP
	<ol>
<li>
Reintegrazione indotta da innesco
		<ol>
<li>Valutare gli effetti di una dose di adescamento di cocaina 24 h dopo l'estinzione è stata confermata. Nota: Le dosi di adescamento sono metà della dose precedente che l'animale ha ricevuto durante condizionata. Il test di reintegrazione subisce lo stesso protocollo come Pre-C e C-Post test, tranne per il fatto che gli animali devono ricevere la dose di cocaina in un non contingente posto 15 min prima della prova. L'efficacia di adescamento di droga nell'induzione della reintegrazione può essere migliorata dopo ripetute estinzione/reintegrazione esperienze23, anche se l'ordine delle dosi sembra non per giocare un ruolo nei risultati ottenuti36.</li>
			<li>Portare gli animali in un'altra camera dalla sala di collaudo (non contingente posto) (Figura 6).</li>
			<li>Iniettare loro con metà della dose precedente di cocaina (ad esempio, se gli animali sono stati condizionati con 25 mg/kg di cocaina, una dose di adescamento sarebbe 12,5 mg/kg).</li>
			<li>Riportarli al loro vivaio per 15 min.</li>
			<li>Portarli in sala prove e sistemare gli animali nell'apparato immediatamente (senza le porte a ghigliottina che separa gli scompartimenti) per 15 min (come il pre- e Post-C test).</li>
			<li>Considera la differenza in secondi tra il tempo trascorso nel vano di droga-accoppiato durante l'ultima sessione di estinzione e il test di ripristino come misura del grado di reintegrazione della preferenza indotta dalla droga.</li>
			<li>Ripetere la procedura di estinzione-reintegrazione ogni volta con diminuendo le dosi fino a quando è confermato di essere inefficace. Nota: Un controllo di iniezione salina può essere utilizzato per controllare la capacità di innesco di cocaina (e non di iniezione stesso) per indurre la reintegrazione.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Reintegrazione indotta da stress
		<ol>
<li>Valutare gli effetti di una reintegrazione indotta da stress 24 h dopo l'estinzione è stata confermata Nota: Test di reintegrazione sono gli stessi di quelli effettuati in Post-C (deambulazione libera per 15 min), tranne per il fatto che gli animali vengono esaminati 15 min dopo la sconfitta sociale in un agonistico incontro (Figura 6)</li>
			<li>Prendere gli animali in una camera diversa dalla camera CPP.</li>
			<li>Posizionare il mouse sperimentale con un sesso avversario aggressivo abbinato di pari età e peso corporeo nella gabbia plastica (Figura 6). Nota: L'incontro agonistico consiste di una prova di 10 min in una gabbia in plastica trasparente neutra (23x13.5x13cm) con un risultato di sconfitta per il mouse sperimentale. Per preparare l'avversario aggressivo, in primo luogo isolare gli animali diversi che corrispondono a età e peso corporeo come topi sperimentali per 3 settimane. Addestrarli ad acquisire esperienza di combattimento e testarli per avere alti livelli di aggressività territoriale. Per ottenere aggressivi conspecifici, topi devono essere isolati per almeno 3 settimane e poi addestrati in aggressivo e attaccare i comportamenti. Gli animali sono addestrati in un ambiente neutro, di fronte a loro a coppie. Li lasciamo mordere i tempi avversario 2 o 3 e farli fuori dalla gabbia, sempre terminare l'allenamento prima che uno dei due topi presenta presentazione, affinché l'esperienza dell'incontro rafforza il comportamento aggressivo. Dopo aver subito aggressioni (minaccia e attacco dai conspecifici aggressivo), topi sperimentali dovrebbero presentare evitamento/fuggire e comportamento difensivo/sottomesso. Il criterio è quello di adottare una postura specifica della sconfitta, caratterizzata da una posizione eretta e sottomessa, limp zampe anteriori, testa inclinata verso l'alto e retratto orecchie (Figura 6). Secondo Burke et al., 2016, consideriamo che l'incontro sociale è terminata all'inizio se l'intruso viene visualizzato una postura supina sottomissione per > 8 s o se 13 punture di attacco si è verificato. Un'altra opzione per gli animali di schermo senza rischio di ferita significativa potrebbe essere di ritmo l'animale in un recinto di rete metallica con un foro, non abbastanza grande per entrambi animale passare.  Aggressione potrebbe essere rilevata senza sottoporre gli animali a dirigere il comportamento aggressivo.  Se un animale subisce una ferita con una ferita di 1cm di diametro e/o l'esposizione diretta del muscolo, è escluso dallo studio e dovrebbe essere euthanized.</li>
			<li>Dopo 10 min di incontro agonistico, prendere i topi in sala prove e sistemare gli animali nell'apparato CPP immediatamente (senza le porte a ghigliottina che separa gli scompartimenti) per 15 min (come il pre- e Post-C test).</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>3. elaborazione statistica
Nota: Dimensione del campione ideale dovrebbe essere un minimo di 15 animali per gruppo.
<ol><li>Analizzare il tempo medio trascorso nel vano di droga-accoppiato del gruppo per mezzo di una ANOVA mista con uno tra variabile, trattamento, con due livelli (gruppo di controllo, gruppo sperimentale, esempio dei due gruppi è in Figura 7 c) e uno all'interno variabile – giorni, con 2 livelli (Pre-C e Post-C). Nota: Nel gruppo di controllo, gli animali ricevono la droga ma non hanno nessuna manipolazione ambientale. D'altra parte, nel gruppo sperimentale animali sono esposti a diverse condizioni ambientali. Confrontare il tempo trascorso nel vano di droga-accoppiato il giorno Post-C rispetto al Pre-C prova per vedere se ci sono differenze significative nella sensibilità al farmaco.</li>
	<li>Inoltre, eseguire analisi post-hoc di Bonferroni per controllare uno dei punteggi significativi.</li>
	<li>Analizzare i dati relazionati ai valori di estinzione e la reintegrazione nei gruppi che preferenza sviluppato mediante dello studente t-test per continuare con la procedura di estinzione-reintegrazione nel corso dell'esperimento, ma al momento finale, analizzarli con un'ANOVA con all'interno variabile (giorni) con il numero di livelli a seconda di ciascun gruppo. Nota: Quando è aumentato il numero di confronti, il numero di quelli che saranno significativi per caso anche aumentato. Come tale, per evitare falsi positivi (errori di tipo 1) abbiamo 'corretti' il valore di p, rendendo in tal modo il test più conservatore con la correzione di Bonferroni per t-test multipli. Tuttavia, per la prova di reintegrazione, il confronto occorre tra il test di reintegrazione e l'ultimo test di estinzione. Pertanto, non esiste alcuna necessità di correzione.</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Il punto chiave della ricerca di dipendenza droga è lo sviluppo di trattamenti che diminuiscono il desiderio e, di conseguenza, ridurre la vulnerabilità alla ricaduta. Grazie al modello di reintegrazione del paradigma CPP, è possibile studiare l'influenza di diversi fattori ambientali e procedurali che modulano la ricaduta, che è una priorità della ricerca futura. Ci sono alcuni punti importanti da considerare, come il paradigma CPP è un test che è altamente sensibile ai fattori ambientali.
<p class="jove_cont...

Il paradigma di Conditioned Place Preference (CPP) offre un modo semplice per valutare la ricompensa condizionata indotta da stimoli diversi1,2ed è stato usato largamente per studiare gli effetti gratificanti condizionati di droghe d'abuso3 . Si basa sul condizionamento pavloviano, valutando il valore motivazionale della droga-collegato di stimoli ambientali per il mantenimento di comportamenti di dipendenza4. In questo modello, stimoli ambientali acquisiscono proprietà secondaria appetitiva (effetti gratificanti condizionati) quando accoppiato con un rinforzo primario3. Ad esempio, un posto inizialmente neutro (ad esempio il colore di uno scomparto nella gabbia CPP) è accoppiato con gli specifici effetti di una droga di abuso durante alcune condizionata sessioni5, mentre un altro vano è associato con l'iniezione di un veicolo. Seguito, condizionata, se l'animale passa più tempo nel vano precedentemente connesso con la droga, si presume che il CPP ha sviluppato3. L'istituzione della preferenza è raggiunta quando l'animale dà un valore positivo per gli stimoli ambientali legati alla droga, che è il rinforzo primario. Di conseguenza, gli animali si esibiranno risposte comportamentali di droga in Cerca in risposta a tali indizi contestuali6. Il modello CPP consente la valutazione delle proprietà gratificanti di sottosoglia dosi del farmaco, indicando se gli animali in una condizione specifica (ad esempio, dopo aver sofferto in precedenza di sconfitta sociale) sono più vulnerabili e sensibili alle dosi che sono non è efficace nel ingenuo animali7.
Il modello CPP è stato utilizzato anche per valutare l'estinzione/reintegrazione come modello animale per studiare la ricaduta3, che è l'obiettivo del presente protocollo. Ci sono tre diverse fasi: acquisizione, estinzione e reintegrazione (Figura 1). Nel modello di reintegrazione CPP, animali prima acquisiscono il CPP per un raggruppamento di droga-accoppiato, e poi si eseguono diverse sessioni di estinzione. Definiamo estinzione come il momento in cui l'animale riduce le risposte comportamentali di approssimazione ad uno stimolo condizionato gratificante che è stato rimosso (ad esempio, la droga)8. Durante le sessioni di estinzione, animali esplorare i compartimenti in assenza del farmaco, in modo che la preferenza acquisita è gradualmente attenuati9. Una questione importante da considerare è che il cambiamento comportamentale che l'animale si presenta durante l'estinzione (la diminuzione progressiva nel tempo trascorso nel vano di droga-accoppiato) può essere a causa di nuovi processi di apprendimento che competono con la precedente risposta istruita, o dovuto ad una diminuzione nello stato interno motivazionale del soggetto3. Infine, il ristabilimento della preferenza posto attraverso gli indizi di contesto o droga sarebbe il nostro modello di ripristino1.
Somministrare un'iniezione di adescamento del farmaco associato, è possibile ripristinare la preferenza, che è considerata un ristabilimento dell'approssimazione per gli indizi contestuali. Reintegrazione di adescamento del farmaco si verifica a causa della memoria persistente degli effetti piacevoli della droga, che ha indotto assetati e motiva gli animali a cercare gli stimoli ambientali legati alla ricompensa.
Alcuni vantaggi del modello reintegrazione CPP sono che la procedura sia non-invasiva (in contrasto con il self-administration, che richiede un intervento chirurgico), poco costoso e semplice. Inoltre, questo modello ha una validità di buon criterio, in quanto imita bene ciò che avviene in esseri umani10,11, inducendo la reintegrazione con gli stimoli che inducono la ricaduta, come ri-esposizione al farmaco12,13 o 14di sforzo.
Ci sono altre tecniche come l'estinzione – modello di reintegrazione di autosomministrazione endovenosa. Qui, gli animali premere una leva per amministrare la droga, che permette la valutazione della risposta dell'operatore dell'animale, compulsività e motivazione14,15,16. Il vantaggio principale del CPP rispetto alle procedure di auto-amministrazione è che la reintegrazione di CPP è considerato per riflettere la riattivazione del valore incentivo-motivazionale degli stimoli contesto accoppiato con la droga, che consiste della ricomparsa dell'approccio comportamento al contesto17. Inoltre, non-droga stimoli, quali stress, possono anche indurre la reintegrazione18,19. Ad esempio, uno studio di autosomministrazione non descritto effetti sul ripristino dell'assunzione dell'eroina in ratti dopo un piede scossa o ritenuta stress20. Autori hanno discusso che era infruttuoso, perché tali fattori di stress sono stati testati all'esterno della camera di autosomministrazione in un contesto diverso. Al contrario, quando si utilizza il modello CPP di reintegrazione, c'era un chiaro ristabilimento del CPP indotta da morfina dopo l'utilizzo di fattori di stress stessi e applicata in un contesto diverso a quello del CPP e in tempi diversi (0 e 15 min dopo lo stress di esposizione)18 .
Diversi studi in letteratura hanno dimostrato modi diversi di droga e reintegrazione indotta da stress. Da un lato, reintegrazione farmaco-indotta è stata segnalata in ratti ed in topi facendo uso di morfina5,21,22,23, cocaina24,25, anfetamina26, 27, etanolo28,29e30di 3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA). D'altra parte, l'esposizione allo stress può essere un fattore determinante nella vulnerabilità all'abuso di droga. Lo stress è noto per aumentare gli effetti gratificanti della droga7,31,32 e il loro ruolo nella ricaduta è affermata33,34. Ad esempio, sconfitta nelle interazioni sociali con un conspecifico reintegra morfina e cocaina CPP18,19. Inoltre, gli animali esposti a ripetuta sconfitta sociale sono più vulnerabili agli effetti gratificanti condizionati di sottosoglia dosi di cocaina e ripristinare la preferenza con dosi molto basse di cocaina7.
Applicazione del modello reintegrazione CPP è un modo utile e sensibile per valutare la vulnerabilità alla ricaduta negli animali e permette la valutazione di diverse sottili manipolazioni ambientali, che sono i principali trigger che minacciano la ricaduta umana, come reintegrazione indotta da farmaci o stress.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>MONPRE 2Z software</td>
			<td>CIBERTEC S.A., Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Identical Plexiglas boxes with two equal sized compartments separated by a grey central area.</td>
			<td>CIBERTEC S.A., Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td>The compartments have different colored walls (black vs white) and distinct floor textures (fine grid in the black compartment and wide grid in the white one). All boxes are equipped with four infrared light beams in each compartment of the box and six in the central area which allow the recording of the position of the animal and its crossings from one compartment to the other.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cocaine hydrochloride</td>
			<td>Laboratorios Alcaliber S.A., Madrid, Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animals: mice of the OF1 outbred strain</td>
			<td>Charles River, Barcelona Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Male mice who arrive to the laboratory on PND 42 and on PND 60 perform the CPP test. These animals are specially indicated for social defeat and aggression models.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Diet- Teklad Global Diet 2014</td>
			<td>Supplied by Harlan Laboratories Models, S. L. (Barcelona, Spain)</td>
			<td></td>
			<td>13 kcal % fat, 67 kcal % carbohydrates and 20% kcal protein; 2.9 kcal/g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High fat diet TD.06415</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>45 kcal % fat, 36 kcal % carbohydrates and 19% kcal protein; 4.6 kcal/g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reinstatement of drug-seeking in mice using the conditioned place preference paradigm

Il presente protocollo descrive la preferenza di posto condizionata (CPP) come modello di ricaduta nella tossicodipendenza. In questo modello, gli animali sono addestrati prima di acquisire una preferenza di posto condizionata in un vano di droga-accoppiato, e dopo il test post-condizionata, eseguono diverse sessioni per estinguere la preferenza stabilita. Il CPP consente la valutazione degli effetti gratificanti condizionati dei suggerimenti relativi alla tutela dell'ambiente da farmaci. Quindi, l'estinto CPP può essere ripristinato robustamente dall'amministrazione non contingente di una dose di innesco della droga e dall'esposizione a stimoli stressanti. Entrambi i metodi verranno spiegati qui. Quando l'animale reinitiates la risposta comportamentale, è considerato una reintegrazione della ricompensa condizionata hanno avuto luogo.
I principali vantaggi di questo protocollo sono che è non invasivo, poco costoso e semplice con criteri di buona validità. Inoltre, permette lo studio di diverse manipolazioni ambientali, come lo stress o la dieta, che possa modulare la ricaduta nella droga che cercano di comportamenti. Tuttavia, una limitazione è che, se il ricercatore si propone di esplorare la motivazione ed effetti di rinforzo primari del farmaco, deve essere completato con le procedure di auto-amministrazione, quanto coinvolgono operante risposte degli animali.

In primo luogo, risultati rappresentativi dalla reintegrazione indotta da stress e adescamento sono mostrati nella Figura 7 utilizzando topi del maschio adulto OF1.
I dati nella Figura 7a-b che rappresenta il tempo trascorso nella droga-accoppiato comparti in pre- e Post-C prova sono stati analizzati con un misure ripetute ANOVA con giorni variabile ent...

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Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

Questo protocollo descrive la preferenza di posto condizionata (CPP) come modello di ricaduta. Questa procedura permette di misurare di ricaduta in animali da laboratorio, considerando l'impatto della droga-collegato di stimoli ambientali come desiderio e ricaduta nelle persone dedite di astensione è attualmente al centro dei programmi di trattamento di abuso di droga.

Reintegrazione di droga in Cerca nei topi utilizzando il paradigma di Conditioned Place Preference

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...

reinstatement-drug-seeking-mice-using-conditioned-place-preference

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Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Behavior

Unit 1

Pharmacotherapy of Depression and Anxiety Disorders

SCIENTISTS IN ACTION

11.3K Views.  Universitat de València. Questo protocollo descrive la preferenza di posto condizionata (CPP) come modello di ricaduta. Questa procedura permette di misurare di ricaduta in animali da laboratorio, considerando l'impatto della droga-collegato di stimoli ambientali come desiderio e ricaduta nelle persone dedite di astensione è attualmente al centro dei programmi di trattamento di abuso di droga.

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The Crossmodal Congruency Task as a Means to Obtain an Objective Behavioral Measure in the Rubber Hand Illusion Paradigm

The rubber hand illusion (RHI) is a popular experimental paradigm. Participants view touch on an artificial rubber hand while the participants' own hidden hand is touched. If the viewed and felt touches are given at the same time then this is sufficient to induce the compelling experience that the rubber hand is one's own hand. The RHI can be used to investigate exactly how the brain constructs distinct body representations for one's own body. Such representations are crucial for successful interactions with the external world. To obtain a subjective measure of the RHI, researchers typically ask participants to rate statements such as "I felt as if the rubber hand were my hand". Here we demonstrate how the crossmodal congruency task can be used to obtain an objective behavioral measure within this paradigm.
The variant of the crossmodal congruency task we employ involves the presentation of tactile targets and visual distractors. Targets and distractors are spatially congruent (i.e. same finger) on some trials and incongruent (i.e. different finger) on others. The difference in performance between incongruent and congruent trials - the crossmodal congruency effect (CCE) - indexes multisensory interactions. Importantly, the CCE is modulated both by viewing a hand as well as the synchrony of viewed and felt touch which are both crucial factors for the RHI.
The use of the crossmodal congruency task within the RHI paradigm has several advantages. It is a simple behavioral measure which can be repeated many times and which can be obtained during the illusion while participants view the artificial hand. Furthermore, this measure is not susceptible to observer and experimenter biases. The combination of the RHI paradigm with the crossmodal congruency task allows in particular for the investigation of multisensory processes which are critical for modulations of body representations as in the RHI.

We demonstrate how an objective measure can be employed in the widely employed rubber hand illusion paradigm. This measure is obtained by modifying the well-established crossmodal congruency task. This task allows the investigation of multisensory processes which are critical for modulations of body representations as in the rubber hand illusion.

La Task Congruenza crossmodali come un mezzo per ottenere una misura comportamentale Obiettivo della mano di gomma Illusion Paradigma

The rubber hand illusion (RHI) is a popular experimental paradigm. Participants view touch on an artificial rubber hand while the participants' own hidden ...

Ricerca

Comportamento

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes of interest allows for enhanced temporally- and regionally-specific control of gene deletion, compared to existing methods. While conditional deletion can also be achieved by mating mice that express Cre recombinase under the control of specific gene promoters with mice carrying a floxed gene, stereotaxic microinjection allows for targeting of discrete brain areas at experimenter-determined time points of interest. In the context of cocaine conditioned place preference, and other cocaine behavioral paradigms such as self-administration or psychomotor sensitization that can involve withdrawal, extinction and/or reinstatement phases, this technique is particularly useful in exploring the unique contribution of target genes to these distinct phases of behavioral models of cocaine-induced plasticity. Specifically, this technique allows for selective ablation of target genes during discrete phases of a behavior to test their contribution to the behavior across time. Ultimately, this understanding allows for more targeted therapeutics that are best able to address the most potent risk factors that present themselves during each phase of addictive behavior.

This article describes how to microinject viral vectors into mouse brain and then test in a conditioned place preference paradigm that includes an acquisition, extinction and reinstatement phase.

Microiniezione stereotassica di vettori virali che esprimono Cre ricombinasi per studiare il ruolo di geni bersaglio in cocaina condizionata place preference

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to drugs of abuse make lasting alterations in the brain function of vulnerable individuals, and these persistent alterations likely serve to maintain the maladaptive drug seeking and taking behaviors characteristic of addiction/dependence2. In rodents, reward experience and contextual associations are frequently measured using the conditioned place preference assay, or CPP, wherein preference for a previously drug-paired context is measured. Behavioral sensitization, on the other hand, is an increase in a drug-induced behavior that develops progressively over repeated exposures. Since sensitized behaviors can often be measured after several months of drug abstinence, depending on the dose and length of initial exposure, they are considered observable correlates of lasting drug-induced plasticity. Researchers have found these assays useful in determining the neurobiological substrates mediating aspects of addiction as well as assessing the potential of different interventions in disrupting these behaviors. This manuscript describes basic, effective protocols for mouse CPP and locomotor behavioral sensitization to cocaine.

This protocol is intended to enable researchers to conduct experiments designed to test these aspects of addiction using the conditioned place preference and locomotor behavioral sensitization assays.

Valutazione della cocaina indotta sensibilizzazione comportamentale e conditioned place preference nei topi

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

Place and Response Learning in the Open-field Tower Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for examining how rats learn to use a place- or response-learning to successfully navigate in an open-field arena. Additionally, this protocol describes how the OFTM differs from other behavioral maze paradigms that are commonly used to study spatial learning in rodents. The OFTM described in this article was adapted from the one previously described by Cole, Clipperton, and Walt (2007). Specifically, the OFTM was created to test spatial learning in rodents without the experimenter having to consider how &#8220;stress&#8221; might play a role as a confounding variable. Experiments have shown that stress-alone can significantly affect cognitive function1. The representative results section contains data from an experiment that used the OFTM to examine the effects of estradiol treatment on place- and response-learning in adult female Sprague Dawley rats2. Future studies will be designed to examine the role of the hippocampus and striatum in place- and response-learning in the OFTM.

The Open-field Tower Maze (OFTM) is a maze created to study the behavioral and neural mechanisms of spatial learning (e.g., place- or response-learning) in rats. This maze is especially useful for experimenters who want to use a non-stressful maze paradigm to investigate spatial learning in their research.

Posizionare e risposta apprendimento nel campo aperto Torre Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for ...

Examining Recall Memory in Infancy and Early Childhood Using the Elicited Imitation Paradigm

The ability to recall the past allows us to report on details of previous experiences, from the everyday to the significant. Because recall memory is commonly assessed using verbal report paradigms in adults, studying the development of this ability in preverbal infants and children proved challenging. Over the past 30 years, researchers have developed a non-verbal means of assessing recall memory known as the elicited or deferred imitation paradigm. In one variant of the procedure, participants are presented with novel three-dimensional stimuli for a brief baseline period before a researcher demonstrates a series of actions that culminate in an end- or goal-state. The participant is allowed to imitate the demonstrated actions immediately, after a delay, or both. Recall performance is then compared to baseline or to performance on novel control sequences presented at the same session; memory can be assessed for the individual target actions and the order in which they were completed. This procedure is an accepted analogue to the verbal report techniques used with adults, and it has served to establish a solid foundation of the nature of recall memory in infancy and early childhood. In addition, the elicited or deferred imitation procedure has been modified and adapted to answer questions relevant to other aspects of cognitive functioning. The broad utility and application of imitation paradigms is discussed, along with limitations of the approach and directions for future research.

The elicited imitation procedure was established to examine the development of recall memory in infancy and early childhood. This procedure has been widely used to establish a solid foundation of the nature of recall memory in infancy and early childhood.

Esaminando Richiamo Memoria in prima e seconda infanzia Utilizzando il suscitato imitazione Paradigma

The ability to recall the past allows us to report on details of previous experiences, from the everyday to the significant. Because recall memory is ...

Using Eye Movements Recorded in the Visual World Paradigm to Explore the Online Processing of Spoken Language

In a typical eye tracking study using the visual world paradigm, participants' eye movements to objects or pictures in the visual workspace are recorded via an eye tracker as the participant produces or comprehends a spoken language describing the concurrent visual world. This paradigm has high versatility, as it can be used in a wide range of populations, including those who cannot read and/or who cannot overtly give their behavioral responses, such as preliterate children, elderly adults, and patients. More importantly, the paradigm is extremely sensitive to fine grained manipulations of the speech signal, and it can be used to study the online processing of most topics in language comprehension at multiple levels, such as the fine grained acoustic phonetic features, the properties of words, and the linguistic structures. The protocol described in this article illustrates how a typical visual world eye tracking study is conducted, with an example showing how the online processing of some semantically complex statements can be explored with the visual world paradigm.

The visual world paradigm monitors participants' eye movements in the visual workspace as they are listening to or speaking a spoken language. This paradigm can be used to investigate the online processing of a wide range of psycholinguistic questions, including semantically complex statements, such as disjunctive statements.

Utilizzando i movimenti di occhio registrati nel paradigma mondo visivo per esplorare l'elaborazione Online di lingua parlata

In a typical eye tracking study using the visual world paradigm, participants' eye movements to objects or pictures in the visual workspace are recorded ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

Un protocollo di Conditioned Place Preference per l'incubazione di Craving nei ratti di misura

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

Using the Visual World Paradigm to Study Sentence Comprehension in Mandarin-Speaking Children with Autism

Sentence comprehension relies on the ability to rapidly integrate different types of linguistic and non-linguistic information. However, there is currently a paucity of research exploring how preschool children with autism understand sentences using different types of cues. The mechanisms underlying sentence comprehension remains largely unclear. The present study presents a protocol to examine the sentence comprehension abilities of preschool children with autism. More specifically, a visual world paradigm of eye-tracking is used to explore the moment-to-moment sentence comprehension in the children. The paradigm has multiple advantages. First, it is sensitive to the time course of sentence comprehension and thus can provide rich information about how sentence comprehension unfolds over time. Second, it requires minimal task and communication demands, so it is ideal for testing children with autism. To further minimize the computational burden of children, the present study measures eye movements that arise as automatic responses to linguistic input rather than measuring eye movements that accompany conscious responses to spoken instructions.

We present a protocol to examine the use of morphological cues during real-time sentence comprehension by children with autism.

Usando il paradigma del mondo visivo per studiare frase comprensione in lingua Mandarina i bambini con autismo

Sentence comprehension relies on the ability to rapidly integrate different types of linguistic and non-linguistic information. However, there is ...

Exploring Infant Sensitivity to Visual Language using Eye Tracking and the Preferential Looking Paradigm

We discuss the use of the preferential looking paradigm in eye tracking studies in order to study how infants develop, understand, and attend to the world around them. Eye tracking is a safe and non-invasive way to collect gaze data from infants, and the preferential looking paradigm is simple to design and only requires the infant to be attending to the screen. By simultaneously showing two visual stimuli that differ in one dimension, we can assess whether infants show different looking behavior for either stimulus, thus demonstrating sensitivity to that difference. The challenges in such experimental approaches are that experiments must be kept brief (no more than 10 min) and be carefully controlled such that the two stimuli differ in only one way. The interpretation of null results must also be carefully considered. In this paper, we illustrate a successful example of an infant eye tracking study with a preferential looking paradigm to discover that 6-month-olds are sensitive to linguistic cues in a signed language despite having no prior exposure to signed language, suggesting that infants possess intrinsic or innate sensitivities to these cues.

Eye tracking studies using a preferential looking paradigm can be used to study infants&#39;&#160;emerging understanding of, and attention to, their external visual world.

Esplorare la sensibilità del bambino al linguaggio visivo utilizzando eye tracking e il paradigma dall'aspetto preferenziale

We discuss the use of the preferential looking paradigm in eye tracking studies in order to study how infants develop, understand, and attend to the world ...

A System for Tracking the Dynamics of Social Preference Behavior in Small Rodents

Exploring the neurobiological mechanisms of social behavior requires behavioral tests that can be applied to animal models in an unbiased and observer-independent manner. Since the beginning of the millennium, the three-chamber test has been widely used as a standard paradigm to evaluate sociability (social preference) and social novelty preference in small rodents. However, this test suffers from multiple limitations, including its dependence on spatial navigation and negligence of behavioral dynamics. Presented and validated here is a novel experimental system that offers an alternative to the three-chamber test, while also solving some of its caveats. The system requires a simple and affordable experimental apparatus and publicly available open-source analysis system, which automatically measures and analyzes multiple behavioral parameters at individual and population levels. It allows detailed analysis of the behavioral dynamics of small rodents during any social discrimination test. We demonstrate the efficiency of the system in analyzing the dynamics of social behavior during the social preference and social novelty preference tests as performed by adult male mice and rats. Moreover, we validate the ability of the system to reveal modified dynamics of social behavior in rodents following manipulations such as whisker trimming. Thus, the system allows for rigorous investigation of social behavior and dynamics in small rodent models and supports more accurate comparisons between strains, conditions, and treatments.

Described here is a novel automated experimental system that offers an alternative to the three-chamber test and also solves several caveats. This system supplies multiple behavioral parameters that enable rigorous analysis of small rodent behavioral dynamics during the social preference and social novelty preference tests.