Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo del tratto sperimentale, ad esempio come ridurre l'associato a questi modelli e come migliorare la riproducibilità. Il vantaggio principale di questa tecnica è che consente la ri-perfusione attraverso l'arteria carotide comune, e quindi non dipende dal cerchio di Willis, che può variare anatomicamente tra gli animali, e quindi può contribuire alla variabilità vista nelle misure di esito sperimentale. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale, poiché le fasi di riparazione della nave CCA sono difficili da imparare a causa della difficoltà tecnica che comporta l'utilizzo del sigillante per garantire che il CCA sia completamente brevettato, dopo la riparazione.
Per iniziare, preparare e anestetizzare il mouse secondo il protocollo di test. Quindi utilizzare una lama bisturi numero 15 per fare un'incisione della linea mediana di 1,5 cm sul collo ventrale esposto. Utilizzando tecniche di dissezione smussata, ritrarre delicatamente le ghiandole salivari di lato, per esporre la trachea.
Quindi sezionare l'arteria carotide comune, o CCA, libera dal tessuto circostante e dal nervo vagale. Dopo questo, passare due piccole sezioni di una sutura 6-0 non dissolubile sotto il CCA, dorsale al CCA e ventrale al nervo vagale. Disegna una cravatta di seta più vicino al chirurgo e legala liberamente intorno al CCA.
Quindi legare liberamente una seconda cravatta di seta verso la biforcazione delle arterie carotide interne ed esterne. Quindi, applicare una clip microvascolare appena sopra la cravatta distale, assicurando che la biforcazione non sia ostruita. Utilizzare micro forbici venose per fare un piccolo foro nel CCA.
Inserire un micro filamento rivestito in silicone 7-0 nel CCA e spostarlo verso la clip microvascolare. Quindi stringere la cravatta distale per fissare il filamento in posizione. E utilizzare i porta clip per rimuovere la clip microvascolare.
Successivamente, avanzare il filamento nell'arteria carotide interna, o ICA. Una volta che la testa del filamento passa la cravatta distale, tirare la cravatta più stretta, per prevenire la perdita di sangue. Usando la cravatta di seta distale, sollevare e tirare il CCA sul lato esterno del corpo del mouse e guidare il filamento verso la piega, oltre l'apertura dell'arteria pterygopalatina, o PPA.
Una volta che il filamento è in posizione, fissarlo stringendo ulteriormente la cravatta di seta distale. Alla fine del periodo MCAO, ritrarre il filamento fino a quando la testa del filamento bianco è chiaramente visibile. Quindi allentare la cravatta CCA distale quanto basta per rimuovere la testa del filamento per la maggior parte della strada, fuori dal vaso.
Quindi, rimuovere completamente la testa del filamento dal vaso. Successivamente, posizionare una clip microvascolare in posizione orizzontale, verso la biforcazione CCA e accanto alla cravatta distale. Quindi posizionare un'altra clip sotto la cravatta CCA prossimale, verso il chirurgo.
Utilizzare con cura le forcelle Dumont 5 per rimuovere entrambe le cravatte di seta. E asciugare l'area usando cotton fioc sterili. Quindi aggiungere fibrinogeno e thrombin soluzioni sigillante uno e due, a una piastra di Petri sterile.
Utilizzando micro forbici venose e tecnica di dissezione smussata, ottenere una sottile fetta ventrale di muscolo sternocleidomastoideo. Quindi, utilizzando le forcelle Dumont 5, prendi il cuscinetto tissutale e mescolalo uniformemente attraverso le soluzioni di sigillante Fibrinogen e Thrombin. Qui è importante assicurarsi che il cuscinetto tissutale sia abbastanza grande da coprire l'incisione CCA.
E una volta miscelato tra le due soluzioni, deve essere immediatamente posizionato sopra l'incisione, per prevenire la sovra coagulazione e la scarsa adesione. Una volta miscelato tra le due soluzioni, rimuovere il cuscinetto tissutale all'incisione CCA. Posizionare il cuscinetto di tessuto piatto sull'incisione con media pressione e aprire le forcelle.
Rimuovere rapidamente la clip microvascolare distale, tenendo il cuscinetto tissutale in posizione. Successivamente, alleviare lentamente la pressione dal cuscinetto tissutale, permettendo al sangue di fluire sotto l'area di incisione. Ora, rilasciare lentamente e delicatamente la pressione dalla clip microvascolare prossimale, quindi rimuovere completamente.
La rimozione della clip superiore consente una piccola quantità di sangue per attivare il sigillante. Un rilascio costante della clip distale consente un graduale aumento della pressione nel sito di incisione, attivandosi ulteriormente e contribuendo a prevenire una riparazione fallita. Infine, una volta sigillato il vaso, suturare la ferita con suture dissolubili 6-0.
In questo protocollo, l'occlusione dell'arteria cerebrale media, o MCAO, è stata eseguita su 24 topi maschi adulti. Evitare la legazione della Corte dei conti europea e l'aggiunta di analgesia ha mostrato una tendenza alla riduzione della perdita di peso a 48 ore dopo l'MCAO. Cinque minuti dopo la rimozione del filamento, il flusso sanguigno cerebrale regionale è aumentato significativamente nella regione cerebrale dell'MCA.
La perfusione è stata mantenuta fino alla riparazione della nave, con un aumento della perfusione nel territorio MCA, dopo la riparazione della nave CCA. Ciò suggerisce che la riparazione della CCA permise una maggiore perfusione di sangue nel territorio ischemico, rispetto alla dipendenza dal solo cerchio di Willis. Una risonanza magnetica ponderata T2 è stata utilizzata per determinare le scansioni LV e DTI totali per determinare il LV di base a 48 ore dopo MCAO.
Non c'era alcuna differenza significativa tra questi due gruppi. È interessante notare che una variabilità per l'LV totale e core è stata significativamente ridotta nel gruppo di riparazione CCA. La nostra analisi ha indicato che sarebbe stato necessario un minor numero di animali per gruppo di trattamento per dimostrare una riduzione del 30% dell'LV, a seguito dell'MCAO, utilizzando la riparazione CCA, rispetto alla tipica procedura legata CCA.
Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di assicurarsi che la confezione tissutale sia di dimensioni sufficienti per coprire l'incisione CCA. Inoltre, la velocità è importante, per evitare che il sigillante sovracocinazione, prima di posizionare il pad sul CCA.
