Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave relative allo sviluppo, al trattamento e alla diagnosi del mesotelioma pleurico umano. Il vantaggio principale di questo affidabile modello ortotopico preclinica è che replica la progressione e la patologia della malattia umana in un microambiente vicino a quello riscontrato nei pazienti con mesotelioma pleurico. Pertanto, questo modello inestimabile è di grande importanza e l'uso di imaging molecolare non invasivo consente il monitoraggio longitudinale in linea con il concetto di tre R.
Prima di iniziare preparare il sistema di anestesia e l'area chirurgica in una cappa a flusso laminare spruzzando tutte le superfici con disinfettante. Posizionare le gabbie SPF micro-isolate nella cappa di flusso disinfettata. Posizionare un cuscinetto riscaldante, una soluzione di povidone-iodio siringa Hamilton calibro 30, strumenti chirurgici di garza e tamponi di cotone e micropipette e punte nella cappa di flusso laminare.
Una volta che il mouse è correttamente anestetizzato, iniettare per via sottocutanea 0,05 milligrammi per chilogrammo di Buprinorfina per il sollievo della padella post-operatoria. Quindi posizionare il mouse sul lato destro sopra il riscaldatore e pulire l'area chirurgica con soluzione di povidone-iodio e fare un'incisione di 5 millimetri della pelle. Cancellare il grasso e i muscoli circostanti con forbici smussate per esporre le costole.
Omogeneizzare le sospensioni cellulari e caricare 50 microlitri nella siringa Hamilton assicurandosi di evitare bolle d'aria. Pulire l'ago con il 70% di alcol prima di ogni iniezione. Iniettare lentamente le cellule nella cavità pleurica tra la sesta e la settima costola tenendo l'ago con un angolo di 30 gradi e da due a tre millimetri sotto i muscoli intercostali.
Tenere l'ago appena sotto le costole per evitare di iniettare nei polmoni. Dovrebbe essere visibile attraverso i muscoli. Al termine, chiudere la ferita con tre o quattro suture assorbibili e conservare il mouse in un ambiente riscaldato fino a quando non si sveglia.
Quando si esegue l'impianto è molto importante posizionare correttamente l'ago per limitare la profondità della penetrazione dell'ago. Utilizzare una pastiglia riscaldante a camera di riscaldamento o una lampada a infrarossi per prebellizzare i topi a 30 gradi Celsius per 30 minuti prima dell'iniezione di fluor-18 (FDG)Utilizzando un calcolatore di dose preparare da tre a quattro dosi di megabecquerel di fluoro-18 (FDG) in 150-200 microlitri di saline in 1 siringhe di insulina millilitro. Assicurarsi di registrare tutti i tempi di iniezioni di misurazioni della dose di radioattività e scansioni PET per calcolare i valori di assorbimento standard o i SUV.
Pesare i topi quindi iniettare per via endovenosa il fluor-18 (FDG)Dopo l'iniezione lasciare i topi svegli in condizioni calde per 45 minuti. Quindi caricare i topi sul letto dello scanner trasferire il letto su uno scanner e sottosotire gli animali a una TAC centrata sui polmoni. Spostare il letto nel sottosistema PET inserire l'acquisizione un'ora dopo l'iniezione fluor-18 (FDG) per una durata di 15 minuti.
Quindi rimuovere i topi dalla camera di imaging e consentire loro di riprendersi nella gabbia tenendoli in un'area dedicata al decadimento radioattivo. Prima dell'analisi delle immagini ricostruire le scansioni CT e PET come descritto nel manoscritto. Calibrare le immagini scansionando un cilindro fantasma e registrare automaticamente le scansioni in base alla soluzione software integrata.
Per analizzare le immagini caricare i dati CT come riferimento cliccando sull'icona open data. Quindi caricare i dati PET come input facendo clic sull'icona dei dati di accodamento. Regola la scala dei colori in modo che CT e PET contrastno le immagini per l'ispezione visiva.
Selezionare lo strumento ROI 3D dal menu a discesa, fare clic su aggiungi ROI e denominare i polmoni del file. Fare clic sugli algoritmi di segmentazione e sulla soglia di vicinato, quindi definire l'input come sfondo e immagine come ref. Immettere min e max in base ai valori di densità polmonare del topo.
Ispezionare i polmoni renderizzati in 3D facendo clic sull'icona VTK. Quindi fare clic sull'icona mostra tabella e recuperare il volume nella tabella generata. Per analizzare il fluor-18 (FDG) nei tumori convertire le immagini PET in SUV selezionando le aritmetiche dal menu a discesa.
Selezionare la molteplicità scalare, quindi utilizzare NP uno come selezionato e impostare il becquerel per millilitro sul fattore SUV come scalare. Infine, selezionare lo strumento ROI 3D dal menu a discesa e fare clic su aggiungi ROI e denominare i tumori dei file. Fare clic sulla modalità di vernice 3D e sulla sfera deselezionare solo il 2D e regolare le dimensioni della forma per circondare i tumori.
Fare clic sull'icona mostra tabella e recuperare il valore massimo del SUV dalla tabella generata. I rendering 3D delle scansioni CT forniscono una panoramica della localizzazione del tumore MPM e consentono il calcolo dei volumi polmonari. Le misurazioni del volume polmonare diminuiscono significativamente nel tempo dopo l'iniezione di tumori intrapleurali.
La scansione PET fornisce preziose informazioni sullo stato metabolico dei tumori MPM. I tumori erano distinguibili due settimane dopo l'innesto e l'assorbimento del fluor-18 (FDG) è stato quantificato estraendo SUV che erano positivamente correlati con il numero di giorni dopo l'iniezione. Inoltre, i volumi polmonari e l'avidità fluor-18 (FDG) sono correlati tra loro con un R al quadrato di 0,6 che supporta la forza di queste misurazioni per il monitoraggio dello sviluppo del tumore ortotopico MPM.
Seguendo questa procedura possono essere eseguiti altri metodi come l'istologia, l'immunoistochimica e la citometria del flusso al fine di rispondere a domande ortobiologiche come lo stato di proliferazione e la caratteristica fenotipico dei tumori e del microambiente. Per concludere, queste tecniche preclinica aprono la strada ai ricercatori per esplorare una nuova strategia diagnostica e di trattamento del mesotelioma pleurico. Inoltre, l'uso dell'imaging molecolare giustifica una rapida traduzione di nuovi risultati in clinica.
