Il Planarian Locomotor Velocity Test è un mezzo per valutare rapidamente gli stimolanti e i possibili effetti di astinenza per una varietà di agenti di modifica biologica che potrebbero influenzare la motilità. Questo saggio è facilmente controllabile e fornisce un metodo semplice e accessibile per generare dati comportamentali affidabili anche nelle impostazioni di ricerca più basilali. Poiché il sistema nervoso planaria ha un cervello rudimentale centralizzato, una simmetria bilaterale e sistemi di neurotrasmettitori analoghi, gli studi comportamentali che utilizzano questi organismi offrono intuizioni precliniche su possibili risposte ai vertebrati.
Gli esperimenti possono essere ulteriormente influenzati da modificatori fisiologici delle vie, farmaci o persino planari geneticamente modificati per fornire informazioni sui meccanismi biologici associati. È importante avere il planario in modo che i trasferimenti tra contenitori non li stressno e standardizzare le curve della linea della griglia tra i membri del lab. Il modo migliore per ottenere risultati coerenti da questo esperimento di saggio sul comportamento, è vedere come gli utenti esperti li hanno eseguiti.
Dopo aver impostato una coltura planariana, nutrire i vermi ad libitum con un programma regolare due volte a settimana di uova sode biologiche tritate o fegato di manzo biologico miscelato per una o due ore. Dopo l'alimentazione, rimuovere l'acqua sporca dal contenitore e utilizzare una spazzola di vernice ad acquerello piatta per trasferire eventuali detriti alimentari e melma che aderiscono al contenitore a un tovagliolo di carta. Utilizzare acqua di sorgente fresca e un delicato vorticoso o agitazione per spostare i planari e decampare i vermi in un contenitore pulito.
Far scorrere una punta di pipetta a foro largo sotto tutti i planarini rimasti aderenti al vecchio contenitore per facilitarne il trasferimento al nuovo piatto e decantare attentamente l'acqua di trasferimento. Quindi, coprire i planari nel nuovo contenitore con acqua di sorgente fresca. Per eseguire un test planario locomotore, assicurarsi innanzitutto che i planari affamati da cinque a 10 giorni siano completamente formati con teste e code complete e pigmentate.
Se i planari sono pronti, posizionare una piastra di Petri pulita di 10 centimetri di diametro su un pezzo di carta griglia pre laminata con quadrati di 0,5 centimetri per gruppo sperimentale e aggiungere 20 millilitri di acqua di sorgente non adulterata per il gruppo di controllo o 20 millilitri di acqua di sorgente contenenti l'appropriata concentrazione del prodotto naturale in fase di test su ogni piatto. Posizionare una telecamera sopra la piastra di stimolazione della velocità locomotoria preparata e aggiungere da cinque a 10 millilitri di acqua di sorgente non adulterata o acqua di sorgente contenente l'appropriata concentrazione del composto sperimentale in un contenitore di assuazione di dimensioni adeguate. Successivamente, utilizzare un piccolo pennello ad acquerello pulito per trasferire delicatamente un planariano dal contenitore di coltura al contenitore di assunzione preparato e consentire al planariano di abituarsi alla soluzione nel contenitore per due minuti.
La ricerca consentirà ai planari di passare al pennello e sollevare attentamente gli animali senza forzarli. Al termine del periodo di assunzione, utilizzare il pennello per trasferire con cura il planario al centro del piatto di stimolazione della velocità locomotoria preparato contenente la stessa soluzione del contenitore di assuazione e avviare la fotocamera per registrare da 10 a 11 minuti di movimento del planario. Per testare gli effetti del ritiro alla fine del periodo di assuazione, sciacquare il planario in un piatto di cinque centimetri contenente solo acqua di sorgente.
Prima di trasferire il verme al centro del piatto di velocità locomotore preparato contenente acqua di sorgente fresca e avviare la fotocamera per registrare da 10 a 11 minuti di movimento. La configurazione della telecamera consente una visione chiara della carta planaria e della griglia e consente una valutazione accurata dello stato di avanzamento dell'animale per tutta la durata dell'esperimento. La raccolta dei dati deve includere il numero totale di linee della griglia attraversate e il numero totale cumulativo di linee attraversate al minuto dell'esperimento.
Per standardizzare i risultati di ogni prova, le corse di velocità locomotoria planaria possono essere calcolate e tracciate come il numero di scatole incrociate rispetto allo stato di avanzamento del worm di controllo corrispondente. Come punto di riferimento, i planari nell'acqua di sorgente coprono in genere circa 25 scatole in tre minuti. Una serie di concentrazioni di reagenti di prova può essere esaminata per determinare la motilità planaria in risposta ai composti di prova di interesse.
I dati di prelievo possono essere valutati quantificando il numero di linee di rete attraversate nell'acqua di sorgente rispetto al controllo delle acque di sorgente dopo che gli animali sono stati abituati nel prodotto biomodulante in esame. I planari di controllo dell'acqua di sorgente si spostano sulle linee della rete per tutta la durata dell'esperimento. A volte, tuttavia, i planari di prova cessano di attraversare le linee della griglia durante il saggio con comportamenti caratteristici per il prodotto in fase di test.
Ciò suggerisce che potrebbe essere necessario un metodo di analisi diverso. Tali casi possono essere monitorati e i dati possono essere illustrati come la percentuale del numero totale di animali esposti a una particolare concentrazione di reagenti. È essenziale gestire il planario in modo che non siano danneggiati durante il trasferimento tra i piatti.
Dopo aver determinato gli effetti delle diverse concentrazioni di un prodotto naturale, è possibile aggiungere modificatori di vie biologiche per osservare eventuali cambiamenti dinamici ai risultati iniziali. Il test planario della velocità locomotoria è stato utilizzato per testare la stimolazione e il ritiro utilizzando agenti farmacologici noti. Abbiamo adattato il sistema per studiare questi stessi concetti con prodotti naturali.
