La prueba de velocidad del locomotor de Planarian es un medio para evaluar rápidamente los efectos estimulantes y posibles de abstinencia para una variedad de agentes modificadores biológicos que podrían afectar la motilidad. Este ensayo se controla fácilmente y proporciona un método sencillo y accesible para generar datos de comportamiento fiables incluso en los entornos de investigación más básicos. Dado que el sistema nervioso plano tiene un cerebro rudimentario centralizado, una simetría bilateral y sistemas de neurotransmisores análogos, los estudios conductuales que utilizan estos organismos ofrecen información preclínica sobre posibles respuestas de vertebrados.
Los experimentos pueden verse afectados aún más por modificadores de vías fisiológicas, fármacos o incluso planarios modificados genéticamente para proporcionar información sobre los mecanismos biológicos asociados. Es importante tener el planario para que las transferencias entre contenedores no los estreses y para estandarizar las curvas de línea de rejilla entre los miembros del laboratorio. La mejor manera de obtener resultados consistentes de este experimento de ensayo de comportamiento, es viendo cómo los usuarios experimentados los realizaron.
Después de establecer un cultivo plano, alimentar a los gusanos ad libitum en un horario regular de dos veces por semana de huevos cocidos orgánicos picados o hígado de res orgánico mezclado durante una o dos horas. Después de la alimentación, retire el agua sucia del recipiente y utilice un cepillo de pintura de acuarela plana para transferir los restos de comida y la baba adherida al recipiente a una toalla de papel. Utilice agua dulce de manantial y suave remolino o agitación para desalojar a los planarios y acampar los gusanos en un recipiente limpio.
Deslice una punta de pipeta de diámetro ancho debajo de cualquier planarios que permanezcan adheridos al recipiente antiguo para facilitar su transferencia al nuevo plato y para decantar cuidadosamente el agua de transferencia. A continuación, cubra los planarios en el nuevo recipiente con agua dulce de manantial. Para realizar una prueba de velocidad del locomotor planoiano, primero asegúrese de que los planarios hambrientos de cinco a 10 días estén completamente formados con cabezas y colas completas y pigmentadas.
Si los planarios están listos coloque un plato limpio de 10 centímetros de diámetro Petri en una pieza de papel de rejilla prelaminado con cuadrados de 0,5 centímetros por grupo experimental y agregue 20 mililitros de agua de manantial sin adulterar para el grupo de control o 20 mililitros de agua de manantial que contengan la concentración adecuada del producto natural que se está probando en cada plato. Coloque una cámara por encima de la antena paralmotor preparada y añada de cinco a 10 mililitros de agua de manantial no adulterada o agua de manantial que contenga la concentración adecuada del compuesto experimental a un recipiente de habituación de tamaño adecuado. A continuación, utilice un pequeño pincel de acuarela limpia para transferir suavemente un planorio del recipiente de cultivo al recipiente de habituación preparado y permita que el planario habitule a la solución durante dos minutos.
La investigación permitirá a los planarios moverse sobre el maleza y levantar cuidadosamente a los animales sin forzarlos. Al final del período de habituación, utilice el cepillo para transferir cuidadosamente el planoario al centro de la antena de estimulación de la velocidad locomotora preparada que contiene la misma solución que el contenedor de habituación e inicie la cámara para grabar de 10 a 11 minutos de movimiento del plano. Para probar los efectos de la abstinencia al final del período de habituación, enjuague el plano en un plato de cinco centímetros que contenga agua de manantial solamente.
Antes de transferir el gusano al centro de la antena de velocidad del locomotor preparada que contiene agua de manantial fresca e iniciar la cámara para grabar de 10 a 11 minutos de movimiento. La configuración de la cámara permite una vista clara del papel plano y de la rejilla y permite una evaluación precisa del progreso del animal durante la duración del experimento. La recopilación de datos debe incluir el número total de líneas de cuadrícula cruzadas, así como el número total acumulado de líneas cruzadas por minuto del experimento.
Para estandarizar los resultados de cada ensayo, las ejecuciones de velocidad del locomotor plano se pueden calcular y trazar como el número de cajas cruzadas en relación con el progreso del gusano de control coincidente. Como punto de referencia, los planarios en agua de manantial suelen cubrir aproximadamente 25 cajas en tres minutos. Se puede examinar una serie de concentraciones de reactivos de ensayo para determinar la motilidad planaria en respuesta a los compuestos de ensayo de interés.
Los datos de retirada pueden evaluarse cuantificando el número de líneas de rejilla cruzadas en el agua de manantial en relación con el control del agua de manantial después de que los animales se hayan habituado en el producto bio modulador que se está examinando. Los planarios de control de agua de manantial se mueven sobre las líneas de rejilla durante el experimento. A veces, sin embargo, los planarios de prueba dejan de cruzar las líneas de cuadrícula durante el ensayo con comportamientos característicos para el producto que se está probando.
Esto sugiere que podría ser necesario un método de análisis diferente. Estos casos pueden ser rastreados y los datos pueden ilustrarse como el porcentaje del número total de animales expuestos a una concentración de reactivos particular. Es esencial manipular el plano para que no se dañen durante la transferencia entre platos.
Después de determinar los efectos de diferentes concentraciones de un producto natural, se pueden añadir modificadores de vías biológicas para observar cualquier cambio dinámico en los resultados iniciales. La prueba de velocidad del locomotor de Planarian se utilizó para probar la estimulación y la abstinencia utilizando agentes farmacológicos conocidos. Adaptamos el sistema para estudiar estos mismos conceptos con productos naturales.
