Questo studio descrive un metodo personalizzabile per creare un modello di funzione miocardica in Miro mediante legatura di precisione dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra attraverso la micromanipolazione. Questo protocollo riduce la durata della procedura, garantisce dimensioni dell'infarto controllabili e migliora la sopravvivenza del topo. Utilizzare un OT rettangolare con un termoforo preriscaldato a 37 gradi Celsius durante la procedura chirurgica.
Prima della procedura, disinfettare la scheda con luce ultravioletta e alcol al 70%. Inizia posizionando il mouse sull'OT in posizione supina con una garza sotto la testa per evitare di surriscaldare gli occhi. Applicare un unguento oftalmico sugli occhi per evitare che si secchino.
Utilizzare una crema per la rimozione del pelo sul torace e massaggiare uniformemente con un batuffolo di cotone sterile per un minuto. Pulisci il pelo in eccesso con una garza. Usa lo iodio povidone seguito da alcol al 70% per pulire l'area e copri il torace con una garza.
Utilizzare una sutura 4-O sotto gli incisivi superiori e fissarla al punto di ancoraggio per mantenere la bocca leggermente aperta e facilitare l'incannulamento. Tira la coda per mantenere il corpo dritto e fissala all'OT usando del nastro adesivo. Fissare i quattro flettenti con del nastro adesivo e stringerli sui punti di ancoraggio.
Non allungare eccessivamente gli arti anteriori per evitare compromissioni respiratorie. Usa le pinze per aprire la mascella e sollevare la lingua. Quindi usa un illuminatore per visualizzare la gola e la glottide.
Inserire delicatamente una cannula calibro 22 con un ago tronco smussato attraverso la bocca nella trachea, a circa un centimetro lungo la gola. Usa una mano per tenere la lingua e muovila leggermente verso l'alto con una pinza smussata. Contemporaneamente utilizzare l'altra mano per inserire delicatamente il tubo nella trachea.
Fare attenzione a non inserire il tubo nell'esofago. Rimuovere con cautela l'ago. Prima di collegarlo al ventilatore, controllare l'intubazione inserendo il tubo nell'acqua per verificare la formazione di bolle.
Collegare il tubo endotracheale a un ventilatore impostato a 120 al minuto e il volume corrente regolato a 250 microlitri. Verificare l'intubazione controllando l'espansione simmetrica bilaterale del torace. Quindi fissare la connessione all'OT con del nastro adesivo per evitare che cada.
Posizionare gli elettrodi ECG sulle zampe e collegarli al registratore ECG. Monitorare l'elettrofisiologia cardiaca durante tutta la procedura. Rimuovere la garza sul torace.
Disinfettare l'area dell'incisione utilizzando tre cicli di scrub con alcol al 70%. Per ridurre la contaminazione del sito chirurgico, coprire il topo con un telo chirurgico sterile con un foro sul campo operatorio. Dopo aver praticato un'incisione cutanea obliqua con un bisturi, esporre le costole eseguendo una dissezione smussata dei tessuti sottocutanei.
Fare attenzione a non ferire i vasi, le costole e i polmoni. Utilizzare applicatori di cotone sterili per fermare l'emorragia. Identifica il terzo spazio intercostale e fai un'incisione di circa sei-otto millimetri.
Quindi aprire la cavità toracica eseguendo una dissezione smussata dei tessuti nello spazio intercostale. Fare attenzione a non ferire l'arteria toracica interna. Coprire lo spazio intercostale usando le pinze.
Inserire divaricatori fatti in casa pre sterilizzati nella gabbia toracica e tirare indietro per allargare l'incisione a circa sei millimetri di larghezza. Fissare i divaricatori all'OT con elastici. Rimuovere con cautela i tessuti circostanti per esporre completamente il cuore.
Staccare delicatamente il pericardio con una pinza curva senza ferire il cuore. Utilizzare un microscopio da dissezione e dirigere una luce focalizzata e appropriata per la visualizzazione LAD. Premere delicatamente il sito sotto la posizione di legatura scelta per ingrandire temporaneamente il LAD, quindi ricontrollare il LAD.
Sotto un microscopio da dissezione, usa un ago affusolato per passare un 8-0 legatura di seta sotto il LAD. Assicurarsi che l'ago non sia abbastanza profondo da entrare nel ventricolo sinistro e non troppo poco profondo per evitare di danneggiare il LAD. Legare la legatura con un doppio nodo sciolto.
Posizionare un tubo in PE-10 da due a tre millimetri in un anello parallelo all'arteria. Stringere delicatamente l'ansa di legatura fino a quando non si trova intorno all'arteria e al tubo. Quindi fissare l'anello con un nodo scorsoio.
Fare attenzione a non danneggiare la parete miocardica con un'eccessiva pressione di serraggio. Una colorazione del pallore nella parete anteriore del ventricolo sinistro dopo la legatura conferma la cessazione del flusso sanguigno nel LAD. Se è necessaria una legatura permanente, procedere come descritto nel manoscritto del testo.
Rimuovere i divaricatori dall'incisione. Quindi chiudere temporaneamente la ferita con una pinza bulldog. Assicurarsi che il mouse continui a essere collegato al ventilatore.
Al termine del periodo di ischemia, rimuovere la pinza bulldog e inserire i divaricatori per aprire l'incisione ed esporre il cuore e il sito di legatura. Sciogliere il nodo scorsoio e rimuovere il tubo in PE-10. Il cambiamento della colorazione pallida in rosa-rosso conferma il ripristino del flusso sanguigno.
Allo stesso tempo, per rilevare la riperfusione, osservare l'ECG per una potenziale dissoluzione dell'elevazione del tratto ST. Lascia l'8-0 legatura in situ se si esegue la successiva colorazione Evans blue e TTC. In caso contrario, rimuovere la sutura in questa fase.
Rimuovere i divaricatori e chiudere l'incisione suturando la terza e la quarta costola con una sutura di seta 4-O. Fare attenzione a non ferire il polmone. Premere delicatamente il torace mentre si legano i nodi di sutura per espellere l'aria che potrebbe essere intrappolata nella cavità toracica.
Chiudere gli strati muscolari con suture continue di seta 4-O. Le immagini standard del processo sperimentale sono state acquisite dall'intubazione endotracheale, dall'incisione cutanea, dalla toracotomia, dall'identificazione LAD e dalla legatura, fino alla riperfusione. Le immagini ECG rappresentative hanno verificato l'ischemia miocardica e la riperfusione con significativo sopraslivellamento del tratto ST dopo la legatura.
E lo scioglimento dell'elevazione ST dopo che il nodo scorsoio è stato sciolto. Prima della toracotomia, è molto importante mantenere aperte le vie aeree e la cosa più importante è assicurarsi che il LAD sia saldamente legato ed evitare danni. Questa procedura sarà seguita da un'ecocardiografia per valutare la funzione cardiaca e da una TTC per valutare il danno miocardico.
