I problemi attuali nel trapianto di fegato richiedono l'implementazione di modelli animali di grandi dimensioni. Questo protocollo descrive la tecnica del trapianto di fegato ortotopico suino senza l'uso di un bypass veno-venoso. Questa tecnica riduce significativamente la complessità logistica e tecnica della procedura.
Inoltre, attecchiando i fegati dopo 20 ore di conservazione statica a freddo, il nostro modello simula condizioni di donatore a criteri estesi. Iniziare posizionando il maiale donatore anestetizzato in posizione supina e fissare gli arti alla base del tavolo operatorio con elastici. Strofinare la pelle con un agente antisettico e coprire l'animale con tende sterili.
Dopo aver confermato la perdita del riflesso del petalo, eseguire una laparotomia della linea mediana a partire dal processo xifoideo utilizzando il cauterizzazione monopolare e recidere i legamenti falciformi e triangolari usando forbici e cauterizzazione bipolare. Dopo una sufficiente dissezione epatica, incidere la porzione sinistra del diaframma su una distanza da 5 a 10 centimetri usando le forbici per individuare il segmento toracico dell'aorta discendente. Circondare e posizionare una legatura in polifilamento 3-0 senza stringere.
Incidi la porzione destra del diaframma su una distanza da 5 a 10 centimetri usando le forbici e identifica la vena cava sopraepatica inferiore. Riposizionare l'intestino in alto a sinistra del donatore ed entrare nello spazio retroperitoneale mediante incisione trasversale del peritoneo su una distanza da 5 a 10 centimetri usando le forbici. Posizionare due legature di polifilamento 3-0 intorno all'aorta addominale.
Un cranio della biforcazione iliaca e uno di circa 3 centimetri cranialmente senza stringere. Posizionare un'altra legatura attorno alla vena cava infraepatica inferiore senza stringere. Stringere la prima legatura caudalmente situata intorno all'aorta addominale.
Dopo aver occluso l'aorta addominale cranialmente della seconda legatura, fare un'incisione trasversale tra entrambe le legature usando le forbici. Inserire la cannula nell'incisione e fissarla con la legatura rimanente. Usando le forbici, recidere la vena cava inferiore sopraepatica molto vicino cranicamente all'atrio destro.
Dopo una perdita di sangue di circa 1.500-2.000 millilitri, bloccare il segmento toracico dell'aorta discendente legando la legatura e iniziare la perfusione anterograda. Stringere la legatura posta attorno alla vena cava infraepatica inferiore. Incidere il vaso cranialmente della legatura e inserire l'aspiratore chirurgico.
Dopo la perfusione con 3.500 millilitri di soluzione di conservazione nel corso di circa 10-15 minuti, recidere la vena cava sopraepatica interna inferiore al maiale donatore, quindi recidere la vena cava infraepatica inferiore a livello della vena renale sinistra. Recidere il dotto biliare craniale del tessuto pancreatico tra due legature di polifilamenti 3-0 per evitare la fuoriuscita di bile, quindi recidere la vena porta cranica del pancreas. Individuare l'arteria celiaca dopo la preparazione smussata e seguire dorsalmente l'aorta addominale.
Eliminare il rispettivo segmento aortico per creare un cerotto per l'attecchimento. Eliminare il diaframma attorno alla vena cava super epatica inferiore e recidere le aderenze rimanenti usando le forbici. Estrarre il fegato e metterlo sul ghiaccio.
Eseguire una colecistectomia o stringere una legatura attorno al dotto cistico, quindi lavare il dotto biliare comune con almeno 20 millilitri di soluzione di conservazione. Posizionare la cannula di perfusione nella vena porta e lavare l'innesto con 500 millilitri di soluzione di conservazione. Posizionare l'innesto in una ciotola sterile posta sul ghiaccio.
Rimuovere il tessuto linfatico del segmento aortico e dell'arteria epatica, identificando e occludendo così i rami laterali arteriosi e i vasi linfatici con clip, legature o punti di sutura. Procedere in modo simile con la vena porta. Eseguire l'accorciamento dei vasi e la preparazione del cerotto aortico solo su e l'attecchimento per tenere conto delle circostanze anatomiche individuali.
Identificare la vena cava super epatica inferiore e posizionare le suture attorno a entrambe le vene diaframmatiche dopo aver rimosso il tessuto diaframmatico circostante. Posizionare il maiale ricevente anestetizzato in posizione supina. Entra nella cavità addominale e recidi i legamenti falciformi e triangolari dell'animale anestetizzato usando forbici e cauterizzazione bipolare come dimostrato in precedenza.
Dopo una sufficiente dissezione epatica, circondare sia la vena cava sopra che infraepatica inferiore vicino al parenchima epatico. Incidere lo strato peritoneale superficiale che copre il legamento epatoduodenale e identificare le arterie epatiche prima di entrare nel parenchima epatico. Sezionare usando il cauterizzazione bipolare o posizionando le clip, le legature o le suture.
Sezionare e recidere il dotto biliare comune sotto la giunzione del dotto cistico tra due legature. Identificare la vena porta e circondare vicino al parenchima epatico. Identificare l'aorta addominale dopo aver inciso lo strato avascolare tra i muscoli diaframmatici destro e sinistro.
Preparare l'aorta per l'anastomosi aortica rimuovendo il tessuto circostante. Eseguire l'epatectomia ricevente posizionando un morsetto vascolare traumatico sulla vena porta e recidere la vena porta vicino al parenchima epatico seguito dalla vena cava infraepatica. Posizionare un morsetto vascolare atraumatico sulla vena cava sopraepatica compreso il diaframma circostante mentre caudalmente si ritrae il fegato e recidere il vaso vicino al parenchima epatico.
Rimuovere il fegato ricevente dalla cavità addominale. Posizionare il fegato del donatore nella cavità addominale e accorciare la vena cava sovraepatica del donatore o del ricevente inferiore a una lunghezza adeguata, evitando attorcigliamenti o troppa tensione sull'anastomosi. Posizionare una singola sutura monofilamento 5-0 come filo di supporto adattando l'angolo destro della vena cava epatica inferiore del donatore e del ricevente.
Inizia il lato dorsale dell'anastomosi dall'angolo sinistro delle navi con una sutura a doppio braccio monofilamento 5-0. Rimuovere il filo di supporto quando si raggiunge l'angolo destro e fissare la sutura in esecuzione con un morsetto, quindi continuare con il lato ventrale dell'anastomosi, di nuovo, iniziando dall'angolo sinistro dei vasi. Dopo aver completato il lato ventrale dell'anastomosi, stringere la sutura con più nodi senza restringere il diametro del vaso per evitare stenosi.
Eseguire un'anastomosi vascolare della vena porta del donatore e del ricevente come dimostrato in precedenza utilizzando una sutura monofilamento 6-0 a doppio braccio. Iniziare la riperfusione venosa porta rimuovendo il morsetto vascolare, occludendo la vena porta ricevente e occludere la vena cava infraepatica del donatore inferiore con un morsetto vascolare dopo aver drenato circa 200-400 millilitri di sangue. Rimuovere lentamente il morsetto vascolare che occlude il ricevente della vena cava sopra epatica inferiore e cercare il sanguinamento attivo.
Accorciare la vena cava infraepatica inferiore del donatore e/o del ricevente. Quindi eseguire un'anastomosi vascolare della vena cava infraepatica inferiore del donatore e del ricevente. Dopo aver bloccato l'aorta addominale e aver praticato un'incisione per adattarsi al cerotto, iniziare l'anastomosi aortica con una sutura a doppio braccio monofilamento 6-0 nell'angolo cranico dell'incisione o del cerotto.
Quando si raggiunge l'angolo caudale, fissare la sutura in esecuzione con un morsetto e completare nuovamente l'anastomosi iniziando dall'angolo cranico. Stringere la sutura con più nodi e rimuovere lentamente il morsetto vascolare dopo aver controllato tutte le anastomosi vascolari. Posizionare un catetere nel dotto biliare comune e fissarlo con una singola legatura.
Chiudere temporaneamente l'addome adattando la fascia muscolare e la pelle con una sutura corrente e coprire l'addome con pellicola aderente o drappi per evitare perdite termiche. Il tempo medio di intervento è stato di 103,50 minuti, inclusa una fase media ed epatica di 27,13 minuti. Solo due riceventi sono stati sottoposti a una fase anepatica di oltre 30 minuti, mentre tutti i riceventi hanno mostrato una diminuzione delle concentrazioni sieriche di lattato 4 ore dopo la riperfusione venosa portale.
I riceventi hanno richiesto un aumento delle concentrazioni di noradrenalina immediatamente prima e durante la fase anepatica per stabilizzare la pressione arteriosa media a 60 millimetri di mercurio o superiore. Basse concentrazioni di adrenalina sono state utilizzate simultaneamente per aumentare la gittata cardiaca in questo periodo di tempo vulnerabile. Dopo l'attecchimento, la pressione arteriosa media e le dosi richieste di vasopressori sono rimaste stabili.
I valori di LiMAx ottenuti 6 ore dopo la riperfusione venosa portale erano paragonabili ai valori misurati nei donatori di fegato prima del prelievo di organi in tutti i riceventi tranne uno con una fase anepatica di 34 minuti. Questo modello può essere di particolare interesse come lettura per gli allenamenti incentrati sui meccanismi di ischemia e danno da riperfusione e sul ricondizionamento di organi donatori a criteri estesi.
