Il dispositivo di valutazione del dolore orofacciale, o OPAD, è uno strumento prezioso per la ricerca preclinica sul dolore in quanto utilizza un paradigma di conflitto di ricompensa operante. Ciò comprende la nocicezione, l'apprendimento e la motivazione, che sono importanti nell'esperienza del dolore umano e una migliore validità traslazionale. Un vantaggio significativo dell'OPAD rispetto ai tradizionali test basati sui riflessi è che è completamente automatizzato, il che elimina la necessità di trattenere gli animali prevenendo gli effetti dello stress correlato e riduce anche i pregiudizi degli sperimentatori.
A dimostrare la chirurgia CCI del nervo infraorbitale sarà Darrice Montgomery, un tecnico di laboratorio del mio laboratorio. Inizia con l'impostazione del dispositivo di valutazione del dolore orofacciale, o OPAD, posizionando i vassoi antigoccia del latte, le gabbie in plexiglass e le griglie metalliche per pavimenti. Collegare il cablaggio alle gabbie e far scivolare il portabottiglie sul palo metallico sul retro del dispositivo.
Quindi, posizionare le bottiglie di latte di ricompensa sul portabottiglie in modo che il beccuccio possa essere raggiunto dall'animale. Stringere la manopola sul lato sinistro del supporto per fissare il flacone in posizione. Quindi, accendere il pannello frontale e accendere le gabbie.
Per impostare il protocollo, aprire il software, immettere la password e fare clic su Accedi o premere Invio. Fare clic su Nuovo esperimento vuoto e sul menu Protocollo. In Apparatus, fare clic su Protocollo senza nome e selezionare la modalità che verrà utilizzata da questo protocollo.
In Modalità specifiche dell'apparecchiatura, selezionare Modalità gabbia meccanica OPAD e assegnare un nome al protocollo. Dopo essersi assicurati che tutte le gabbie siano accese, aggiungere le gabbie OPAD facendo clic su Apparato e Aggiungi elemento nella parte superiore del riquadro del protocollo, quindi selezionando Nuova gabbia OPAD e Aggiungi tutte le gabbie OPAD collegate. Per aggiungere le fasi di test dell'esperimento, vai alla scheda Test per selezionare le fasi e alle schede Prima fase, quindi assegna un nome alla fase.
Aggiungi 10 minuti come durata del test. Per aggiungere altri passaggi, fare clic su Aggiungi scheda elemento, quindi su Nuova fase. Quindi, assegna i gruppi facendo clic su Ulteriori informazioni e gruppi di trattamento.
Controllare i gruppi di trattamento utilizzati quindi selezionando l'opzione L'utente assegnerà manualmente gli animali ai loro gruppi. Assegna le identificazioni degli animali facendo clic sul menu Protocollo. In Ulteriori informazioni, fai clic su ID animale e seleziona l'opzione Usa i miei ID per fare riferimento agli animali.
Imposta l'esperimento digitando il titolo dell'esperimento prima di fare clic su Visualizza trattamenti e digitare i nomi dei trattamenti. Aggiungi animali e assegna i trattamenti e gli ID animali facendo clic su Visualizza animali e Aggiungi animali. Inserisci il numero di animali da testare, seguito da OK.
Una volta visualizzata la lista degli animali, aggiungi l'ID animale e il trattamento per ogni ratto. Salvare il protocollo facendo clic sul menu Protocollo seguito da Salva protocollo. Immettere il nome del file e la password del software e fare clic su Salva.
Quindi, salva il file dell'esperimento facendo clic sul file, quindi su Salva, digitando la password del software e facendo clic sulla scheda Salva. Dopo aver acceso le gabbie, cerca la luce verde sulla gabbia che indica che la gabbia è pronta per il test. Apri il file dell'esperimento salvato con un doppio clic.
Immettere la password, fare clic su Accedi o premere Invio. Sul lato sinistro dello schermo, annotare il numero di animali e la gabbia corrispondente, la fase in corso in quel giorno e lo stato del test. Osservare l'ID dell'animale da esperimento sullo schermo della gabbia.
Posizionare il topo nella gabbia e premere il pulsante sulla gabbia corrispondente. Si noti che la luce verde si trasforma in una luce arancione una volta iniziato il test. Assicurarsi che l'animale possa accedere alla bottiglia di ricompensa mentre fa un contatto sufficiente con le punte meccaniche.
Sul lato destro dello schermo, osserva il grafico di ciascun animale che mostra il numero di leccate e contatti. Un suono di avviso viene sentito al termine della sessione di test. Posizionare il ratto anestetizzato su un banco di lavoro chirurgico e trattenerlo.
Mantenere la temperatura corporea a 37 gradi Celsius utilizzando una piastra riscaldante. Applicare un unguento oftalmico sugli occhi per evitare che si secchino. Utilizzare la lama di bisturi 15 per fare una piccola incisione tra la gengiva dorsale e il labbro.
Rimuovere il tessuto molle usando la lama del bisturi e rivelare il ramo dei nervi infraorbitali, o ION. Con l'aiuto di un ago da siringa piegato smussato, posizionare due legature intestinali cromiche 5-O attorno allo ION, quindi chiudere la ferita usando un adesivo tissutale. I tentativi di contatto e i dati di leccamento di un singolo ratto operato da CCI ION e Sham durante la sessione di test standard di 10 minuti al basale e due settimane, quattro settimane e sei settimane dopo l'intervento chirurgico sono presentati qui.
Il modello ha rivelato che durante i periodi non nocivi i ratti hanno lunghe sessioni di bere. Dopo la lesione, l'animale non può mantenere il contatto facciale con le barre chiodate per una lunga durata con conseguente diminuzione del numero di leccate. Nel gruppo Sham, non sono stati osservati cambiamenti significativi per il periodo di bere.
Il numero medio di leccate tra i ratti operati da CCI ION e Sham al basale non ha mostrato differenze significative. Tuttavia, CCI ION ha ridotto significativamente il numero di leccate fino a quattro settimane dopo l'intervento chirurgico e ha aumentato la latenza per la prima leccata durante la settimana post-operatoria e una settimana dopo la lesione nervosa che indica iperalgesia meccanica. Non c'è stato alcun cambiamento significativo nei ratti operati da Sham.
Durante l'utilizzo dell'OPAD, ottimizzare la distanza della bottiglia di latte e la larghezza delle punte. È importante mantenere questo coerente per ridurre gli errori durante la raccolta dei dati.
