Modello murino con ferita da taglio per lo studio dell'emorragia e dell'infiammazione nella lesione cerebrale traumatica

Siamo interessati a sviluppare un metodo per fermare l'emorragia e sopprimere l'infiammazione nella TVI, quindi abbiamo stabilito un protocollo per creare facilmente un modello di massa TVI utilizzando solo un ago. Il nostro modello TVI con ferita da taglio è vantaggioso perché lubrifica l'emorragia e l'attivazione grigia. Il nostro protocollo ha tre vantaggi principali rispetto ad altre tecniche.

Non sono necessarie attrezzature o strumenti specifici. Può essere fatto facilmente e rapidamente e la ferita è così piccola che non influisce sul comportamento del topo, quindi chiunque può eseguirlo con un'elevata riproducibilità. Il nostro laboratorio si concentrerà sulla comunicazione di neuroni, cellule grigie e cellule gliali e parassiti durante la riparazione di lesioni cerebrali traumatiche.

La comunicazione gioca un ruolo fondamentale nella riparazione. Tuttavia, finora non è stato compreso del tutto. Il nostro protocollo è molto utile per analizzare la comunicazione.

Per iniziare, posiziona il topo anestetizzato sul lato ventrale su un tovagliolo di carta. Verificare che il topo sia profondamente anestetizzato con un test di pizzicamento delle dita. Disinfettare il sito chirurgico alternando tre volte ciascuno i cicli di Betadine e scrub all'etanolo al 70%.

Ora, afferra la pelle occipitale con una pinza smussata e fai un'incisione larga da uno a 1,5 millimetri per esporre l'osso occipitale senza danneggiare il cranio o qualsiasi organo. Quindi apri delicatamente e lentamente l'incisione per osservare il confine tra la corteccia cerebrale e il cervelletto attraverso il cranio. Per eseguire la craniotomia del topo, creare un piccolo foro nell'emisfero destro dell'osso occipitale con un ago.

Ruotare delicatamente l'ago per creare un punto di inserimento per l'agugliatura della coltellata, facendo attenzione a non danneggiare il parenchima cerebrale. Per la coltellata, inserire l'ago appropriato dal punto di inserimento e pugnalare la corteccia cerebrale lungo l'asse caudale rostrale. Infine, sutura l'incisione cutanea utilizzando una sutura in nylon 3-0 con un ago a forma di semitondo.

La ferita dopo la procedura è stata confermata al microscopio. Lo stravaso di IGG ha raggiunto il picco un giorno dopo l'infortunio, seguito da un recupero progressivo e da una riduzione dell'intensità della colorazione a tre, cinque e sette giorni. La perdita di colorante blu di Evan nel parenchima cerebrale si è verificata immediatamente dopo l'infortunio con un picco di concentrazione di un'ora.

La concentrazione del colorante diminuiva gradualmente dopo uno e tre giorni. Il picco di accumulo di microglia IBA1 positivi e astrociti GFAP positivi si è verificato rispettivamente a cinque e tre giorni dopo l'infortunio, con una diminuzione della loro presenza di sette giorni. Le citochine infiammatorie, tra cui il fattore di necrosi tumorale alfa, l'interleuchina sei e l'interleuchina uno beta hanno mostrato il picco di espressione dell'mRNA un giorno dopo l'infortunio, mentre il fattore di crescita trasformante beta uno ha raggiunto il picco tre giorni dopo l'infortunio.