著者
お問い合わせ

サインイン

このコンテンツを視聴するには、JoVE 購読が必要です。 サインイン又は無料トライアルを申し込む。

この記事について

  • 要約
  • 要約
  • 概要
  • プロトコル
  • 結果
  • ディスカッション
  • 開示事項
  • 謝辞
  • 資料
  • 参考文献
  • 転載および許可

要約

ナノのエンドトキシンの検出は、ナノメディシン分野の難問の 1 つを表します。ナノ粒子の潜在的なエンドトキシン汚染を推定する 3 種類のラール フォーマットで構成されるフレームワークを説明する事例を紹介します。

要約

グラム陰性細菌の細胞壁コンポーネント内毒素 (リポ多糖とも呼ばれます) は、炎症、発熱、低刺激や高血圧を引き起こすことができ、極端な場合、可能性があります組織・臓器の損傷につながることができます医薬品に存在、する場合致命的になります。したがって、医薬品中のエンドトキシン量は規制厳しく。エンドトキシンの検出と定量に使用できる方法の中でカブトガニ リムラス ライセート (ラル) 試金、世界中に使用されます。一方、医薬品は、ラール アッセイに干渉できる、ナノ処方はその複雑さのための特定の挑戦を表しています。本稿の目的は、ナノ、ナノ粒子配合薬で大原の推定に経験の浅い研究者に実用的なガイドを提供することです。ここで、濁度、発色性を含む 3 つのラール形式やゲル血栓アッセイを行うため実用的な推奨事項を説明します。これらのアッセイは、ナノテクノロジーに基づく医薬品、ワクチン、アジュバントのエンドトキシン汚染を決定する使用できます。

概要

エンドトキシンは、グラム陰性細菌の細胞壁1,2の建物ブロックです。それは非常に免疫細胞をアクティブにすることができます (picogram) 濃度1,2を低します。発熱、低血圧、高血圧、多臓器不全を含むより深刻な健康上の問題のため、エンドトキシンに応答細胞によって生成される炎症性メディエーター (サイトカイン、ロイコトリエン、エイコサノイド等)は、します。1,2,3.、免疫介在性の副作用のエンドトキシンによって引き起こされる重大度エンドトキシンの組成と構造によって決定され、国際エンドトキシン単位 (IUs または EUs)3単位、その効力に依存します。体重の 1 キログラムあたりこれらの単位数を使用して、しきい値発熱性エンドトキシン投与量を設定します。この線量は、医薬品 5 EU/kg 投与による髄腔内のルートがすべてのルートです。髄腔内投与によるルートの製品、放射性医薬品、眼内液ボディ表面の平方メートル当たり投与薬がある 100 EU/m2、0.2 EU/mL、175 EU/V は、異なるしきい値の発熱量 (V は、管理するためのもの製品の容積)、および 0.2 EU/kg、それぞれ4。さまざまな医薬品やデバイス、発熱性しきい値線量の詳細については提供され、他の場所で説明した4,5,6。

動物は、エンドトキシン反応への感度が大きく異なります。人間、非ひと霊長類、ウサギ、大原3に最も敏感の種。患者におけるエンドトキシンを介した副作用を回避し、非臨床毒性評価と有効性の研究の不正確な結論を防ぐため、正確に検出し、両方の臨床および前臨床グレードの製剤でエンドトキシンを定量化することが不可欠です。現在利用可能ないくつかのメソッドは、このタスクを実現できます。それらの 1 つは、カブトガニ リムラス ライセート (ラル) 試金、広く世界中潜在的なエンドトキシン汚染だけでなく細菌感染症7,8,9を検出するため画面バイオメディカル製品に使われています。ライセートは amoebocytes から作製した、カブトガニカブトガニ ポリュフェモスの血液に存在するセル7北アメリカ大陸の東海岸に存在します。興味深いことに、いくつかの異なる種のカブトガニがある (日本のマガキとカブトガニ)アジア10で。日本リムラス ライセート (TAL) は、アジア数カ国でその他に関する史的10で、ラルを使用する方法と同様のエンドトキシンの検出に使用されます。(タル ・ ラル) 溶解液には、活性化プロテアーゼ活性を付与する蛋白質のグループが含まれています。これらの蛋白質、いわゆる係数 C の 1 つは、エンドトキシンとの接触時にアクティブになります。活性化因子 C 切断係数 B は、順番にも、プロテアーゼとなり凝固酵素を生産するプロ凝固酵素を裂きます。この反応の連鎖の結果はサンプル濁度と、発色基質ゲル血栓、濁度、および発色アッセイのための基盤として、色の製品の外観の存在下で増加、ゲルの形成それぞれ。米国食品医薬品局 (FDA) のガイダンスで説明必須のラール形式はありません、ゲル血栓分析5 に基づいて業界ドキュメント、ラルの異なるフォーマット間のテストの結果に相違がある場合決定が行われます.

一般的に使用される多くの研究所化学薬品 (e.g。、EDTA) 製品 (例えば、ペニシリン) がラールを妨げる知られていた薬剤の試金の11と。干渉は、通常試験材料を含む溶液に濃度既知のスパイク エンドトキシン標準のリカバリを評価することによって識別されます。スパイクの回復が 50% 未満、または 200% 以上、ラルの結果分析の場合特定のテスト材料が阻害や促進、それぞれ4のため正しくありません。ナノテクノロジーに基づく製剤は、しばしば複雑、メカニズム12,13,14のさまざまなラルを妨げます。干渉を克服するために多くの方法を記載されている: サンプル溶解特定のバッファーと界面活性剤で加熱し、加熱し、過剰なサンプルを補うことによって脂質中空材の破壊タンパク質不活性化二価陽イオン5,12,13,14,15。ラル干渉を克服することができない場合の代替方法も記載されている: ELISA、HEK TLR4 レポーター細胞ライン試金および質量16,17,18, 19。

ここで、ゲル血栓、濁度、および発色のラール アッセイを実施の実験プロシージャを示します。これらの試金はプロトコル STE1.2 (濁度ラル)、STE1.3 (ゲル血栓ラル) ナノテクノロジー キャラクタリゼーション ラボ (NCL) ウェブサイト20利用頂けますと STE1.4 (発色ラル)。同じナノ処方を特徴付けるために少なくとも 2 つの異なる形式を実施することをお勧めします。濁度と発色のラルの結果に反対、ゲル血栓結果は5が考慮されます。ラルの 2 つの形式の結果が一致しない場合ラルを確認する単球活性化テスト (マット) またはウサギ発熱性物質試験 (RPT) を用いた研究の結果、その他は21を実施しました。エンドトキシン検出の各メソッドを使用し、pyrogenicity 評価、利点と制限21,22,23,24に注意することが重要です。指定されたナノテクノロジーの定式化を特徴付けるために使用プロシージャの制限を認識しそのナノ定式化に最適のプロシージャの使用のための科学的根拠を得るために不可欠です。

本研究では、ペグ化リポソーム封入ドキソルビシンはモデル ナノ粒子製剤として使用されました。この定式化を 1995 年に米国 FDA に承認されており、癌患者世界25の治療に使用します。

プロトコル

1. ナノ粒子サンプルの準備

  1. ラルの研究サンプルのグレードの水を準備します。
  2. サンプルの pH は、6-8 の範囲外は、パイロジェン フリー水酸化ナトリウムや塩酸を用いて pH を調整します。
  3. ラルを使用してグレード水は研究サンプルのいくつかの希釈液を準備します。最高の希釈が最大有効希釈 (MVD) を超えていないことを確認します。MVD 推定の詳細についての議論を参照してください。

2. 試薬ラル フォーマット間共通の準備

  1. 0.1 n. の濃度で作業ソリューションを準備する LAL 試薬水のパイロジェン フリーを使用して希釈濃水酸化ナトリウム素材
  2. LAL 試薬水のパイロジェン フリーを使用して濃塩酸株式を希釈し、0.1 n. の最終的な集中で実用的なソリューションを準備
  3. コントロールの標準的なエンドトキシン (CSE) の準備
    1. メーカーによって供給された分析の証明書によると CSE を再構成します。
      注: は、証明書で提供される情報に関する重要な注意事項の説明を参照してください。材料表カタログ番号とラルの異なる形式で特定の CSE の定式化のアプリケーションの詳細についてを参照してください。
  4. LAL 試薬の調製
    1. 製造元によって提供される分析の証明書によると LAL 試薬を再構成します。
      注: は LAL 試薬調製に関する重要な詳細についての議論を参照してください。材料表カタログ番号とラルの別の形式で与えられた LAL 試薬製剤の応用の詳細についてを参照してください。

3. 濁度ラル アッセイ

  1. 標準試料の作製
    1. ラル グレード水量 900 μ L と CSE の 100 μ L を使用すると、0.001 から 1 EU/ml の濃度範囲の標準校正の準備を有効にするために必要な多くの中間希釈を準備します。
    2. 最初のラベルのチューブ、各チューブにラル グレード水量 900 μ L を追加します。1EU/mL の濃度の校正標準を準備する 10 の EU/mL solutionn の 100 μ L を追加します。
    3. 3 つの低いキャリブレーション基準を準備する上記のように連続 10 倍希釈を繰り返します。至る 0.001 EU/mL の 1 4 つの校正基準が用意されていることを確認します。
  2. 品質管理の準備
    1. ラル グレード水 950 μ L で 1 EU/mL CSE 溶液 50 μ L を組み合わせることにより 0.05 EU/mL 品質管理を準備します。
      注: は、コントロールの準備の詳細について議論を参照してください。
  3. コントロールの抑制/強化 (IEC) の準備
    1. 1 EU/mL CSE ソリューションを 25 μ l 添加し、指定された希釈テスト ナノマテリアルの 475 μ L を組み合わせることにより 0.05 EU/mL の濃度と IEC を準備します。
      メモ: 追加の詳細についての説明を参照します。
  4. 実験手順
    1. 事前に約 30 分のそれを回すことによってウォーム アップする楽器を許可します。セットアップ検出波長 660 にこの nm は、ラール濁度の適切な。
    2. ユーザー名とパスワードを入力してサインインします。
    3. コンピューターの画面上の対応するアイコンをクリックしてソフトウェア (材料のテーブル) を開きます。
    4. ソフトウェア ホーム画面にデータを収集を選択します。ホーム画面で[全般] タブでの対応する領域にテスト ID とデータのグループ情報を入力します。
    5. ハードウェアタブをクリックしてドロップ ダウン メニューから計測器のタイプを選択します。
    6. 設定、検出波長 660 nm、適した chosing によって混濁ラル ラル混濁法。
    7. シリアル番号、システム ID とシリアル ポートに関する情報が画面に表示されることを確認します。[Ok]をクリックします。確認するもう一度OKをクリックします。
    8. サンプルをテストする順序と同じ順序でサンプル ID を入力します。既定のボタンを使用すると、ネガティブ コントロール、標準曲線とテスト サンプルを入力します。
    9. 各サンプルの重複するチューブを用意し、あらかじめラベル付きのガラス管に 200 μ L (テスト比 4:1) またはネガティブ コントロール (水)、校正規格、品質管理、テストは IEC およびナノ粒子の 100 μ L (テスト比 1:1) を追加します。
    10. 最初テスト バイアル、渦それは簡潔とテストに挿入楽器カルーセルのスロットに 50 μ L (テスト比 4:1) または LAL 試薬を 100 μ l 添加 (テスト比 1:1) を追加します。1:1 の比率を使用している場合、LAL 試薬の量は 100 μ L です。
    11. 他のサンプルについて上記の手順を繰り返します。プロセスは、一度に 1 つずつをサンプリングします。
      注: は、詳細については、ディスカッションを参照してください。

4. 発色ラル

  1. 標準試料の作製
    1. ラル グレード水量 900 μ L と CSE の 100 μ L を使って、1 EU/mL の濃度校正基準の準備を有効にするために必要な多くの中間希釈を準備します。
    2. 900 μ L ラル グレードの水と 1 の EU/mL 校正基準の 100 μ L を使用して、0.1 EU/mL の濃度で 2 番目の校正標準を準備します。
    3. 2 つの低いキャリブレーション基準を準備する上記のように連続 10 倍希釈を繰り返します。至る 0.001 EU/mL の 1 4 つの校正基準が用意されていることを確認します。
  2. 品質管理の準備。
    1. ラル グレード水 950 μ L で 1 EU/mL CSE 溶液 50 μ L を組み合わせることにより 0.05 EU/mL 品質管理を準備します。
      注: は、コントロールの準備の詳細について議論を参照してください。
  3. コントロールの抑制/強化 (IEC) の準備
    1. 1 EU/mL CSE ソリューションの 25 μ L を組み合わせてテスト ナノマテリアルの 475 μ 0.05 EU/mL を準備します。
      メモ: 追加の詳細についての説明を参照します。
  4. 実験手順
    1. 事前に約 30 分のそれを回すことによってウォーム アップする楽器を許可します。セットアップ検出波長 405 にこの nm は、ラール濁度の適切な。
    2. コンピューターの画面上の対応するアイコンをクリックしてソフトウェアを開きます。ユーザー名とパスワードを入力してサインインします。
    3. ソフトウェア ホーム画面にデータを収集を選択します。ホーム画面で[全般] タブでの対応する領域にテスト ID とデータ グループの情報を入力します。
    4. ハードウェアタブをクリックしてドロップ ダウン メニューから計測器のタイプを選択します。計測器を選択します。
    5. シリアル番号、システム ID とシリアル ポートに関する情報が画面に表示されることを確認します。[Ok]をクリックします。確認するもう一度OKをクリックします。
    6. サンプルをテストする順序と同じ順序でサンプル ID を入力します。否定的なコントロールを入力する既定のボタンを使用して標準曲線とテスト サンプル。
    7. 各サンプルの重複するチューブを用意し、あらかじめラベル付きのガラス管に 200 μ L (テスト比 4:1) またはネガティブ コントロール (水)、校正規格、品質管理、テストは IEC およびナノ粒子の 100 μ L (テスト比 1:1) を追加します。
    8. 最初テスト バイアル、渦それは簡潔とテストに挿入楽器カルーセルのスロットに 50 μ L (テスト比 4:1) または LAL 試薬を 100 μ l 添加 (テスト比 1:1) を追加します。1:1 の比率を使用している場合、LAL 試薬の量は 100 μ L です。
    9. 他のサンプルについて上記の手順を繰り返します。プロセスは、一度に 1 つずつをサンプリングします。

5. ゲル血栓ラル

注: このアッセイは、目視と反応管の血栓の検出に基づくサンプルのエンドトキシンの存在を識別します。実験の手順は次のとおりです。ベンチ シートを使用して、結果を記録します。このベンチ シートは必須ではありません、測定結果を記録する他の方法も許容できます。このようなベンチ シートの例は、読者の便宜のための補足資料で提供されます。ラムダ (l) ゲル血栓アッセイの感度、0.03 EU/mL。

  1. 分析試験サンプルの数に合わせて必要に応じてできるだけ多くの反応管にラベルを付けます。ベンチ シート ステップ 1、ステップ 2 およびステップ 3 の試金で使用される複製の数の詳細についてを参照してください。
  2. チューブごとに水、コントロールまたはテスト サンプルの分注 100 μ L。
  3. 最終濃度が 4λ に等しいようなカスタム検索エンジンを準備します。
  4. 上記 2λ の CSE の最終的な集中を達成するために水やテスト サンプルの 100 μ L の標準の 100 μ L を組み合わせます。ラムダと半分ラムダとラムダの四分の一を達成するために 3 回繰り返します。
  5. 風呂の水の温度が 37 ° C であることを確認してください。
  6. 試験管、渦を簡潔にあたりライセートの 100 μ L を追加し、1 時間風呂の水に管だらけでラックを配置します。
  7. 滑らかな動きとチューブを反転します。
  8. 「+」(しっかりした血栓) を使用して手動でレコードの結果または「-」(血栓または緩い血栓) ベンチ シート。
  9. USP ベット 854によると分析を続行; ベンチ シートを使用して、マテリアルのサポートとして

結果

ラルの試金でこの定式化をテストした後に生成されるデータの例は表 1に示します。希釈 5 で発色のラルとペグ化リポソーム封入ドキソルビシンの干渉。ただし、この干渉は、大きい希薄によって克服されました。この製剤は希釈 50 と濁度と発色ラル、500 および濁度ラルで希釈 5 テストされたとき、スパイク回復は 50 と 200% の間だった。希釈倍率によっ...

ディスカッション

このプロトコルで提供される情報は15,26の前に記述され、米国食品医薬品局 (US FDA または FDA) や米国薬局方 (USP)4刊規制のいくつかの文書に依存しています。,5,6,27、プロトコル STE1.2 (濁度ラル)、STE1.3 (ゲル血栓ラル) の NCL のウェブサイト20<...

開示事項

著者が明らかに何もありません。

謝辞

調査は国立がん研究所から連邦政府の資金によってサポートされた国立衛生研究所、契約 HHSN261200800001E の下で。この文書のコンテンツ ビューまたは政策の保健社会福祉省、必ずしも反映しないも言及されている商号、商品、または組織は、米国政府によって裏書を意味します。

資料

NameCompanyCatalog NumberComments
Turbidity LAL Assay
Sodium HydroxideSigmaS2770When needed, it is used to adjust sample pH to be between 6-8
Hydrochloric acidSigmaH9892When needed, it is used to adjust sample pH to be between 6-8
LAL ReagentAssociates of Cape CodT0051This reagent can be used with turbidity assay only
Control Endotoxin StandardAssociates of Cape CodE0005This reagent can be used with turbidity and gel-clot assays
LAL grade waterAssociates of Cape CodWP0501This reagent can be used with any LAL format
Glucashield BufferAssociates of Cape CodGB051-25Used to prevent false-positive response from beta-glucans
Disposable endotoxin-free glass dilution tubes 12 x 75 mmAssociates of Cape CodTB240These tubes can be used with all three assays
Disposable endotoxin-free glass reaction tubes 8 x 75 mmAssociates of Cape CodTK100These tubes can be used with turbidity and chromogenic assays
Pyrogen-free tips with volumes 0.25 and 1.0 mLRAININPPT25, PPT10Tips and pipettes may adsorb endotoxin and release leachables which interfere with LAL assay. These RAININ tips are used because their optimal performance in the LAL assay was verified and confirmed
Pyrogen-free microcentrifuge tubes, 2.0 mLEppendorf22600044Other equivalent supplies can be used
Pyrogen-fee combitips, 5mLEppendorf30089669Other equivalent supplies can be used
Repeat pipettorEppendorf4982000020Other equivalent supplies can be used
Microcetrifugeany brandAny brand can be used
Refrigerator, 2-8 Cany brandAny brand can be used
Vortexany brandAny brand can be used
Freezer, -20 Cany brandAny brand can be used
Pyros Kinetix or Pyros Kinetix Flex readerAssociates of Cape CodPKF96Other instruments can be used. However, LAL reagents and endotoxin standards used in this assay may require optimization. When other instrumentation is used, please refer to the instrument and LAL kit manufacturers for instructions
Chromogenic LAL Assay
Pyrochrome LAL ReagentAssociates of Cape CodCG1500-5This reagent is specific to the Chromogenic Assay
Control Endotoxin StandardAssociates of Cape CodEC010This standard is different than that used for turbidity and gel-clot LALs; it is optimized for optimal performance in the chromogenic assay
Sodium HydroxideSigmaS2770When needed, it is used to adjust sample pH to be between 6-8
Hydrochloric acidSigmaH9892When needed, it is used to adjust sample pH to be between 6-8
LAL grade waterAssociates of Cape CodWP0501This reagent can be used with any LAL format
Glucashield BufferAssociates of Cape CodGB051-25Used to prevent false-positive response from beta-glucans
Disposable endotoxin-free glass dilution tubes 12 x 75 mmAssociates of Cape CodTB240These tubes can be used with all three assays
Disposable endotoxin-free glass reaction tubes 8 x 75 mmAssociates of Cape CodTK100These tubes can be used with turbidity and chromogenic assays
Pyrogen-free tips with volumes 0.25 and 1.0 mlRAININPPT25, PPT10Tips and pipettes may adsorb endotoxin and release leachables which interfere with LAL assay. These RAININ tips are used because their optimal performance in the LAL assay was verified and confirmed
Pyrogen-free microcentrifuge tubes, 2.0 mLEppendorf22600044Other equivalent supplies can be used
Pyrogen-fee combitips, 5mLEppendorf30089669Other equivalent supplies can be used
Repeat pipettorEppendorf4982000020Other equivalent supplies can be used
Microcetrifugeany brandAny brand can be used
Refrigerator, 2-8 Cany brandAny brand can be used
Vortexany brandAny brand can be used
Freezer, -20 Cany brandAny brand can be used
Pyros Kinetix or Pyros Kinetix Flex readerAssociates of Cape CodPKF96Other instruments can be used. However, LAL reagents and endotoxin standards used in this assay may require optimization. When other instrumentation is used, please refer to the instrument and LAL kit manufacturers for instructions
Gel-Clot LAL Assay
LAL ReagentAssociates of Cape CodG5003This reagent is specific to the gel-clot assay
Control Endotoxin StandardAssociates of Cape CodE0005This reagent can be used with turbidity and gel-clot assays
Sodium HydroxideSigmaS2770When needed, it is used to adjust sample pH to be between 6-8
Hydrochloric acidSigmaH9892When needed, it is used to adjust sample pH to be between 6-8
LAL grade waterAssociates of Cape CodWP0501This reagent can be used with any LAL format
Glucashield BufferAssociates of Cape CodGB051-25Used to prevent false-positive response from beta-glucans
Disposable endotoxin-free glass dilution tubes 12 x 75 mmAssociates of Cape CodTB240These tubes can be used with all three assays
Disposable endotoxin-free glass reaction tubes 10 x 75 mmAssociates of Cape CodTS050These tubes are for use with the gel-clot assay
Pyrogen-free tips with volumes 0.25 and 1 mLRAININPPT25, PPT10Tips and pipettes may adsorb endotoxin and release leachables which interfere with LAL assay. These RAININ tips are used because their optimal performance in the LAL assay was verified and confirmed
Pyrogen-free microcentrifuge tubes, 2.0 mLEppendorf22600044Other equivalent supplies can be used
Pyrogen-fee combitips, 5mLEppendorf30089669Other equivalent supplies can be used
Repeat pipettorEppendorf4982000020Other equivalent supplies can be used
Microcetrifugeany brandAny brand can be used
Refrigerator, 2-8 Cany brandAny brand can be used
Vortexany brandAny brand can be used
Freezer, -20 Cany brandAny brand can be used
Water bath, 37 Cany brandAny brand can be used, however, it is important either to switch off water circulation or use non-circualting water bath because water flow will affect clot formation and lead to false-negative results

参考文献

  1. Perkins, D. J., Patel, M. C., Blanco, J. C., Vogel, S. N. Epigenetic Mechanisms Governing Innate Inflammatory Responses. Journal of Interferon & Cytokine Research. 36 (7), 454-461 (2016).
  2. Vogel, S. N., Awomoyi, A. A., Rallabhandi, P., Medvedev, A. E. Mutations in TLR4 signaling that lead to increased susceptibility to infection in humans: an overview. Journal of Endotoxin Research. 11 (6), 333-339 (2005).
  3. Dobrovolskaia, M. A., Vogel, S. N. Toll receptors, CD14, and macrophage activation and deactivation by LPS. Microbes and Infection. 4 (9), 903-914 (2002).
  4. US Pharmacopeia. . Bacterial Endotoxins Test. , (2011).
  5. FDA, U. . Guidance for Industry: Pyrogen and Endotoxins Testing: Questions and Answers. , (2012).
  6. FDA, U. . Endotoxin Testing Recommendations for Single-Use Intraocular Ophthalmic Devices. , (2015).
  7. Fennrich, S., et al. More than 70 years of pyrogen detection: Current state and future perspectives. Alternatives to Laboratory Animals. 44 (3), 239-253 (2016).
  8. Kumar, M. S., Ghosh, S., Nayak, S., Das, A. P. Recent advances in biosensor based diagnosis of urinary tract infection. Biosensors and Bioelectronics. 80, 497-510 (2016).
  9. Solano, G., Gomez, A., Leon, G. Assessing endotoxins in equine-derived snake antivenoms: Comparison of the USP pyrogen test and the Limulus Amoebocyte Lysate assay (LAL). Toxicon. , 13-18 (2015).
  10. Akbar John, B., Kamaruzzaman, B. Y., Jalal, K. C. A., Zaleha, K. TAL - a source of bacterial endotoxin detector in liquid biological samples. International Food Research Journal. 19 (2), 423-425 (2012).
  11. Fujita, Y., Tokunaga, T., Kataoka, H. Saline and buffers minimize the action of interfering factors in the bacterial endotoxins test. Analytical Biochemistry. 409 (1), 46-53 (2011).
  12. Dobrovolskaia, M. A. Pre-clinical immunotoxicity studies of nanotechnology-formulated drugs: Challenges, considerations and strategy. Journal of Controlled Release. 220 (Pt B), 571-583 (2015).
  13. Dobrovolskaia, M. A., et al. Ambiguities in applying traditional Limulus amebocyte lysate tests to quantify endotoxin in nanoparticle formulations. Nanomedicine (London). 5 (4), 555-562 (2010).
  14. Dobrovolskaia, M. A., Neun, B. W., Clogston, J. D., Grossman, J. H., McNeil, S. E. Choice of method for endotoxin detection depends on nanoformulation. Nanomedicine (London). 9 (12), 1847-1856 (2014).
  15. Neun, B. W., Dobrovolskaia, M. A. Considerations and Some Practical Solutions to Overcome Nanoparticle Interference with LAL Assays and to Avoid Endotoxin Contamination in Nanoformulations. Methods in Molecular Biology. 1682, 23-33 (2018).
  16. Boratynski, J., Szermer-Olearnik, B. Endotoxin Removal from Escherichia coli Bacterial Lysate Using a Biphasic Liquid System. Methods in Molecular Biology. 1600, 107-112 (2017).
  17. Li, H., Hitchins, V. M., Wickramasekara, S. Rapid detection of bacterial endotoxins in ophthalmic viscosurgical device materials by direct analysis in real time mass spectrometry. Analytica Chimica Acta. 943, 98-105 (2016).
  18. Uhlig, S., et al. Profiling of 3-hydroxy fatty acids as environmental markers of endotoxin using liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry. Journal of Chromatography A. 1434, 119-126 (2016).
  19. Smulders, S., et al. Contamination of nanoparticles by endotoxin: evaluation of different test methods. Particle and Fibre Toxicology. 9, 41 (2012).
  20. . NCL assay cascade Available from: https://ncl.cancer.gov/resources/assay-cascade-protocols (2015)
  21. Dobrovolskaia, M. A., Germolec, D. R., Weaver, J. L. Evaluation of nanoparticle immunotoxicity. Nature Nanotechnology. 4 (7), 411-414 (2009).
  22. Borton, L. K., Coleman, K. P. Material-mediated pyrogens in medical devices: Applicability of the in vitro Monocyte Activation Test. Altex. , (2018).
  23. Stoppelkamp, S., et al. Speeding up pyrogenicity testing: Identification of suitable cell components and readout parameters for an accelerated monocyte activation test (MAT). Drug Testing and Analysis. 9 (2), 260-273 (2017).
  24. Vipond, C., Findlay, L., Feavers, I., Care, R. Limitations of the rabbit pyrogen test for assessing meningococcal OMV based vaccines. Altex. 33 (1), 47-53 (2016).
  25. Barenholz, Y. Doxil(R)--the first FDA-approved nano-drug: lessons learned. Journal of Controlled Release. 160 (2), 117-134 (2012).
  26. Neun, B. W., Dobrovolskaia, M. A. Detection and quantitative evaluation of endotoxin contamination in nanoparticle formulations by LAL-based assays. Methods in Molecular Biology. 697, 121-130 (2011).
  27. FDA, U. . Guidance for Industry: Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers. , (2005).
  28. Mohan, P., Rapoport, N. Doxorubicin as a molecular nanotheranostic agent: effect of doxorubicin encapsulation in micelles or nanoemulsions on the ultrasound-mediated intracellular delivery and nuclear trafficking. Molecular Pharmaceutics. 7 (6), 1959-1973 (2010).
  29. Dabbagh, A., et al. Low-melting-point polymeric nanoshells for thermal-triggered drug release under hyperthermia condition. International Journal of Hyperthermia. 31 (8), 920-929 (2015).
  30. Li, Y., et al. Optimising the use of commercial LAL assays for the analysis of endotoxin contamination in metal colloids and metal oxide nanoparticles. Nanotoxicology. 9 (4), 462-473 (2015).
  31. Li, Y., et al. Bacterial endotoxin (lipopolysaccharide) binds to the surface of gold nanoparticles, interferes with biocorona formation and induces human monocyte inflammatory activation. Nanotoxicology. 11 (9-10), 1157-1175 (2017).

転載および許可

このJoVE論文のテキスト又は図を再利用するための許可を申請します

許可を申請

さらに記事を探す

143 pyrogenicity

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

個人情報保護方針

利用規約

一般データ保護規則

お問い合わせ

図書館への推薦

JoVE ニュースレター

研究

教育

著者

図書館員

JoVEについて

Copyright © 2023 MyJoVE Corporation. All rights reserved