АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Обнаружения эндотоксинов в инженерии наноматериалов представляет собой один из Гранд вызовы в области наномедицины. Здесь мы представляем тематическое исследование, которое описывает платформу, состоящий из трех различных форматов Лал оценить потенциальное загрязнение эндотоксина в наночастиц.

Аннотация

Когда присутствует в фармацевтической продукции, грамотрицательных бактериальных клеточных стенок компонент эндотоксина (часто также называют липополисахарида) может вызвать воспаление, лихорадка, гипо - или гипертензия и, в крайних случаях, может привести к повреждения тканей и органов, которые может стать смертельным. Таким образом, количество эндотоксина в фармацевтической продукции, строго регламентированы. Среди методов, доступных для обнаружения эндотоксинов и количественной оценки пробирного Limulus Lysate Amoebocyte (Лал) широко используется во всем мире. Хотя любой фармацевтический продукт может мешать Лал assay, нано составы представляют собой особую проблему из-за их сложности. Этот документ призван служить практическим руководством для исследователей неопытных в оценке эндотоксинов в инженерии наноматериалов и сформулированы наночастиц наркотиков. Здесь обсуждаются практические рекомендации для выполнения трех Лал форматов, включая мутность, Хромогенный и гель сгусток анализов. Эти анализы могут использоваться для определения эндотоксина загрязнения на основе нанотехнологий лекарственных препаратов, вакцин и адъювантов.

Введение

Эндотоксина является строительным блоком грамотрицательных бактериальных клеточных стенок1,2. Он может активировать клетки иммунной системы в очень низкой концентрации (пикограмм)1,2. Провоспалительных медиаторов (цитокинов, лейкотриенов, эйкозаноидов, и т.д.) производятся клетками в ответ на эндотоксина отвечают за лихорадка, гипотония, гипертония и более серьезные проблемы здравоохранения, включая несколько полиорганной недостаточности 1 , 2 , 3. тяжесть иммунной опосредованного побочных эффектов, вызванных эндотоксина зависит от его потенции определяется эндотоксина состав и структура и измеряется в международных эндотоксина единиц (IUs или EUs)3. Количество этих единиц на килограмм массы тела используется для задания порога пирогенных дозы эндотоксина. Эта доза является 5 ЕС/кг для лекарственных средств осуществляется через все маршруты но Интратекальное маршрут. Препараты, дозированной на квадратный метр поверхности тела, внутриглазной жидкости, радиофармацевтические препараты и продукты управляемых через Интратекальное маршрута имеют разные порог пирогенных дозу, которая составляет 100 ЕС/м2, 0,2 ЕС/мл, 175 ЕС/V (где V- объем продукта, предназначенные для администрирования) и 0,2 ЕС/кг, соответственно4. Подробнее о порог пирогенных дозы для различных лекарственных средств и устройств предоставляются и обсуждаться в другом месте4,5,6.

Животные отличаются в их чувствительность к эндотоксинов опосредованной реакций. Среди наиболее чрезвычайно чувствительны к эндотоксинов3видов людей, нечеловеческих приматов и кроликов. Чтобы избежать эндотоксинов опосредованной побочных эффектов у пациентов и предотвратить неточные выводы доклинических токсичности и эффективности исследований, важно для точного выявления и количественной оценки эндотоксинов в обе формулировки доклинические и клинические класса. Несколько имеющихся в настоящее время методов можно добиться выполнения этой задачи. Одним из них является assay Limulus Lysate Amoebocyte (Лал), который широко используется во всем мире для экрана биомедицинских продуктов для потенциальных эндотоксина загрязнения, а также относительно выявления бактериальных инфекций7,8,9. Lysate готовится из amoebocytes, клетки присутствует в крови подковы крабов Limulus Полифема проживающих в Восточном берегу континента Северной Америке7. Интересно, что есть несколько различных видов подковы крабов (Tachypleus gigas и Tachypleus tridentatus) в Азии10. Tachypleus Lysate Amoebocyte (Таль) используется в нескольких странах Азии для обнаружения эндотоксинов аналогичны как Лал используется в других cuntries10. Лизатов (Лал и Таль) содержат группы белков, которые после активации предоставляют активности протеаз. Один из этих белков, так называемый фактор C активируется при контакте с эндотоксин. Активированный фактор C расщепляет фактор B, который в свою очередь также становится протеазы и расщепляет про свертывания фермента производить фермент свертывания крови. Результатом этой цепи реакций является формирование гель, увеличение образца мутности и, при наличии Хромогенный субстрат, появление цветных продукта, которые служат основой для гель сгусток, мутность и хромогенных анализов, соответственно. Пока не существует обязательной Лал формата, США продуктов питания и медикаментов (FDA) объясняет в руководстве для промышленности документа, что в случае расхождения в результатах теста между различными форматами Лал, решение принимается на основании гель сгусток assay5 .

Многие часто используемые Лабораторные химикаты (например., ЭДТА) и известных наркотиков продуктов (например, пенициллин) вмешиваться в Лал assays11. Вмешательство обычно определяется путем оценки восстановления стандартных эндотоксина шипами в известных концентрациях в решение, содержащее тестовый материал. Если Спайк восстановления менее чем 50% или более чем на 200%, то в результате Лал проба для данного испытания материал является недопустимым из-за торможения или повышение, соответственно4. Составы на основе нанотехнологий часто сложны и мешать Лал через различные механизмы12,,1314. Были описаны многие подходы для преодоления вмешательства: пример воссоздания в конкретных буферов и ПАВ, инактивация белка путем нагревания, уничтожение липидов-материалов на основе полых путем нагрева и дополняющего образца с избытком двухвалентной катионов5,12,13,14,15. Также были описаны альтернативные методы для ситуаций, когда Лал вмешательство не может преодолеть: ELISA, мобильный репортер ГЭС-TLR4 линия пробирного и масс-спектрометрии16,,1718, 19.

Здесь описаны экспериментальной процедуры для проведения гель сгусток, мутность и хромогенных Лал анализов. Эти анализы также доступны на веб-сайт Лаборатории характеристика нанотехнологий (NCL)20 в протоколах STE1.2 (мутность Лал), STE1.3 (гель сгусток Лал) и STE1.4 (хромогенных Лал). Рекомендуется проводить по крайней мере два различных форматов характеризовать же нано разработке. Когда результаты мутность и хромогенных Лал согласны, гель сгусток результаты считаются5. Когда результаты двух форматов Лал согласны, дополнительные исследования с использованием Моноцит активации тест (мат) или кролик пирогена тест (RPT) для проверки Лал выводы, провел21. Важно отметить, что каждый метод, используемый для обнаружения эндотоксинов и pyrogenicity оценки имеет свои преимущества и недостатки21,,2223,24. Признавая ограничения процедуры, используемые для характеристики данного нанотехнологии формулировка имеет важное значение для получения научного обоснования оптимального для этого нано разработки процедуры для использования.

В этом исследовании Пегилированный липосомальных доксорубицин был использован как формулировка наночастиц модели. Эта формулировка был одобрен FDA США в 1995 году и используется для лечения раковых больных во всем мире25.

протокол

1. подготовка проб наночастиц

  1. Подготовьте исследование образца в Лал класс воды.
  2. Если образец pH находится за пределами диапазона 6-8, настройте pH с помощью пирогена свободного гидроксида натрия или соляной кислоты.
  3. С помощью Лал класс воды подготовить несколько разведений исследование образца. Убедитесь, что высокого разрежения не превышает максимально допустимые разрежения (МВД). Обратитесь к разделу обсуждения для подробной информации о МВД оценки.

2. Подготовка реагентов общего между форматами Лал

  1. Разбавьте концентрированный гидроксида натрия складе с использованием свободных пирогена Лал реагента воды приготовить рабочий раствор в концентрации 0,1 н.
  2. Разбавить фондовой концентрированной соляной кислоты с помощью пирогена свободной воды Лал реагента и приготовить рабочий раствор в конечной концентрации 0,1 н.
  3. Подготовка элемента управления стандартный эндотоксина (CSE)
    1. Воссоздать CSE согласно сертификатом анализа, поставляемые производителем.
      Примечание: Обратитесь к разделу обсуждения для важные примечания относительно информации, представленной в сертификате. Обратитесь к Таблице материалов для деталей относительно номер каталога и применения данного CSE разработки в различных форматах Лал.
  4. Подготовка реагента Лал
    1. Воссоздать Лал реагента по данным сертификатом анализа, предоставляемых производителем.
      Примечание: Обратитесь к разделу обсуждения для важные детали относительно подготовки Лал реагента. Обратитесь к Таблице материалов для деталей относительно номер каталога и применения данной формулировки Лал реагента в другом формате Лал.

3. мутности Лал Assay

  1. Подготовка стандартов калибровки
    1. С помощью 900 мкл Лал класс воды и 100 мкл CSE, подготовьте столько промежуточных разведениях как необходимо включить подготовку эталоном с диапазоном концентрации от 0,001 до 1 ЕС/мл.
    2. Первый этикетке трубки и добавить 900 мкл воды Лал класса в каждую пробирку. Затем добавьте 100 мкл 10 ЕС/мл solutionn подготовить стандарт калибровки с концентрацией 1EU/мл.
    3. Повторите серийный десятикратного разрежения, как описано выше, подготовить три нижних стандартов калибровки. Убедитесь, что были подготовлены четыре калибровочных стандартов, начиная от 0,001 до 1 ЕС/мл.
  2. Подготовка процедур контроля качества
    1. Подготовьте 0,05 контроля качества ЕС/мл, объединяя 50 мкл раствора 1 КСЭ ЕС/мл с 950 мкл воды Лал класса.
      Примечание: Обратитесь к разделу обсуждения относительно управления подготовки.
  3. Подготовка контроля ингибирования/повышение (IEC)
    1. Подготовьте IEC с концентрации 0,05 ЕС/мл, объединяя 25 мкл КСЭ ЕС/мл раствора 1 и 475 мкл Наноматериал тест на данной разрежения.
      Примечание: Обратитесь к разделу обсуждения для получения дополнительной информации.
  4. Экспериментальная процедура
    1. Разрешить инструмент для разминки, повернув его на приблизительно 30 мин заранее. Настройка обнаружения волны до 660 нм, как это подходит для мутность Лал.
    2. Войдите, введя имя пользователя и пароль.
    3. Откройте программное обеспечение (Таблица материалов), нажав на соответствующий значок на экране компьютера.
    4. Выберите собирать данные на домашнем экране программного обеспечения. Введите тест ID и данные группы информацию в соответствующее пространство на вкладке Общие на домашнем экране.
    5. Нажмите на вкладку аппаратное обеспечение выберите тип документа из ниспадающего меню.
    6. Настройка обнаружения волны до 660 нм как это подходит для мутность Лал, избрав метод Лал мутность.
    7. Убедитесь, что серийный номер, идентификатор системы и последовательный порт информация отображаются на экране. Нажмите кнопку ОК. Нажмите кнопку OK еще раз для подтверждения.
    8. Введите идентификатор образца в том же порядке, протестированных образцов. Используйте кнопки по умолчанию для ввода отрицательного контроля, стандартной кривой и испытаний образцов.
    9. Подготовьте дубликаты трубы для каждого образца и добавить 200 мкл (коэффициент 4:1 тест) или 100 мкл (тест соотношение 1:1) отрицательного контроля (вода), калибровки стандартов, контроль качества, IEC и тест наночастиц в предварительно помечены стеклянных трубок.
    10. Добавьте 50 мкл (коэффициент 4:1 тест) или 100 мкл (тест соотношение 1:1) реагента Лал первый тест флакон, вихря, он кратко и вставить в тест слот в инструмент карусель. Если используется соотношение 1:1, объем реагента Лал-100 мкл.
    11. Повторите процедуру, описанную выше для других образцов. Процесс образцов по одному.
      Примечание: Обратитесь к разделу обсуждения для получения более подробной информации.

4. хромогенных Лал

  1. Подготовка стандартов калибровки
    1. С помощью 900 мкл Лал класс воды и 100 мкл CSE, подготовьте столько промежуточных разведениях как необходимо включить подготовку калибровки стандартных с концентрацией 1 ЕС/мл.
    2. С помощью 900 мкл Лал класс воды и 100 мкл 1 ЕС/мл эталоном, подготовьте второй стандарт калибровки в концентрации 0,1 ЕС/мл.
    3. Повторите серийный десятикратного разрежения, как описано выше, подготовить два нижних стандартов калибровки. Убедитесь, что были подготовлены четыре калибровочных стандартов, начиная от 0,001 до 1 ЕС/мл.
  2. Подготовка служб контроля качества.
    1. Подготовьте 0,05 контроля качества ЕС/мл, объединяя 50 мкл раствора 1 КСЭ ЕС/мл с 950 мкл воды Лал класса.
      Примечание: Обратитесь к разделу обсуждения относительно управления подготовки.
  3. Подготовка контроля ингибирования/повышение (IEC)
    1. Готовят 0,05 ЕС/мл, объединяя 25 мкл раствора 1 КСЭ ЕС/мл с 475 мкл Наноматериал теста.
      Примечание: Обратитесь к разделу обсуждения для получения дополнительной информации.
  4. Экспериментальная процедура
    1. Разрешить инструмент для разминки, повернув его на приблизительно 30 мин заранее. Настройка обнаружения волны до 405 нм как это подходит для мутность Лал.
    2. Откройте программное обеспечение, нажав на соответствующий значок на экране компьютера. Войдите, введя имя пользователя и пароль.
    3. Выберите собирать данные на домашнем экране программного обеспечения. Введите тест ID и данные группы информацию в соответствующие места на вкладке Общие на домашнем экране.
    4. Нажмите на вкладку аппаратное обеспечение выберите тип документа из ниспадающего меню. Выберите инструмент.
    5. Убедитесь, что серийный номер, идентификатор системы и последовательный порт информация отображаются на экране. Нажмите кнопку ОК. Нажмите кнопку OK еще раз для подтверждения.
    6. Введите идентификатор образца в том же порядке, протестированных образцов. Используйте кнопки по умолчанию для ввода отрицательного контроля, стандартной кривой и испытаний образцов.
    7. Подготовьте дубликаты трубы для каждого образца и добавить 200 мкл (коэффициент 4:1 тест) или 100 мкл (тест соотношение 1:1) отрицательного контроля (вода), калибровки стандартов, контроль качества, IEC и тест наночастиц в предварительно помечены стеклянных трубок.
    8. Добавьте 50 мкл (коэффициент 4:1 тест) или 100 мкл (тест соотношение 1:1) реагента Лал первый тест флакон, вихря, он кратко и вставить в тест слот в инструмент карусель. Если используется соотношение 1:1, объем реагента Лал-100 мкл.
    9. Повторите процедуру, описанную выше для других образцов. Процесс образцов по одному.

5. гель сгусток Лал

Примечание: Этот assay определяет наличие эндотоксинов в образце на основе визуального наблюдения и обнаружения сгусток в пробке реакции. Экспериментальные шаги описаны ниже. Используйте лист скамейке для записи результатов. Это скамейке листа не является обязательным, и другие способы записи результатов анализа также являются приемлемыми. Пример такого листа скамейке приводится в дополнительных материалах для удобства читателя. Лямбда (l) является чувствительность гель сгусток пробирного и 0,03 ЕС/мл.

  1. Ярлык столько реакции трубы, как требуется, чтобы вместить количество анализируемых проб. Обратитесь к скамейке лист для подробной информации о количестве повторных измерений, используемых в шаге 1, шаг 2 и шаг 3 assay.
  2. Аликвота 100 мкл воды, элементы управления или тестирования образца в трубку.
  3. Подготовьте CSE, таким образом, что конечная концентрация равна 4λ.
  4. Объединить 100 мкл упомянутых выше с 100 мкл воды или тестирования образца для достижения конечной концентрации CSE 2λ стандарта. Повторите три раза для достижения лямбда и половину лямбда и четверти лямбда.
  5. Убедитесь, что температура в ванне воды 37 ° C.
  6. Добавить 100 мкл lysate в пробирку, вихревой кратко и место стойки с все трубы в ванну воды для 1 h.
  7. Инвертируйте трубку с плавным движением.
  8. Запишите результаты, используя «+» (фирмы сгусток) или «-» (не сгусток или потерять сгусток) на листе скамейке.
  9. Продолжите анализ в соответствии с USP ставка 854; используйте лист скамейке как вспомогательные материалы

Результаты

В таблице 1приведен пример данных, сформированное после тестирования эта формулировка в Лал анализов. Пегилированный липосомальных доксорубицин вмешивались хромогенных Лал при разбавлении 5. Однако это вмешательство было преодолено больше разведений. Спай?...

Обсуждение

Информация, представленная в настоящем протоколе было описано до15,26 и опирается на ряд нормативных документов, опубликованных в США продуктов питания и медикаментов (FDA, США или FDA) и Фармакопеи США (USP)4 , 5 , 6

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Это исследование было поддержано федеральным фондам от национального института рака, национальные институты здравоохранения, по контракту HHSN261200800001E. Содержание этой публикации, не обязательно отражают взгляды или политику Департамента здравоохранения и социальных служб, ни упоминание названия торговых марок, коммерческих продуктов, или организаций означает одобрения правительства США.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Turbidity LAL Assay
Sodium HydroxideSigmaS2770When needed, it is used to adjust sample pH to be between 6-8
Hydrochloric acidSigmaH9892When needed, it is used to adjust sample pH to be between 6-8
LAL ReagentAssociates of Cape CodT0051This reagent can be used with turbidity assay only
Control Endotoxin StandardAssociates of Cape CodE0005This reagent can be used with turbidity and gel-clot assays
LAL grade waterAssociates of Cape CodWP0501This reagent can be used with any LAL format
Glucashield BufferAssociates of Cape CodGB051-25Used to prevent false-positive response from beta-glucans
Disposable endotoxin-free glass dilution tubes 12 x 75 mmAssociates of Cape CodTB240These tubes can be used with all three assays
Disposable endotoxin-free glass reaction tubes 8 x 75 mmAssociates of Cape CodTK100These tubes can be used with turbidity and chromogenic assays
Pyrogen-free tips with volumes 0.25 and 1.0 mLRAININPPT25, PPT10Tips and pipettes may adsorb endotoxin and release leachables which interfere with LAL assay. These RAININ tips are used because their optimal performance in the LAL assay was verified and confirmed
Pyrogen-free microcentrifuge tubes, 2.0 mLEppendorf22600044Other equivalent supplies can be used
Pyrogen-fee combitips, 5mLEppendorf30089669Other equivalent supplies can be used
Repeat pipettorEppendorf4982000020Other equivalent supplies can be used
Microcetrifugeany brandAny brand can be used
Refrigerator, 2-8 Cany brandAny brand can be used
Vortexany brandAny brand can be used
Freezer, -20 Cany brandAny brand can be used
Pyros Kinetix or Pyros Kinetix Flex readerAssociates of Cape CodPKF96Other instruments can be used. However, LAL reagents and endotoxin standards used in this assay may require optimization. When other instrumentation is used, please refer to the instrument and LAL kit manufacturers for instructions
Chromogenic LAL Assay
Pyrochrome LAL ReagentAssociates of Cape CodCG1500-5This reagent is specific to the Chromogenic Assay
Control Endotoxin StandardAssociates of Cape CodEC010This standard is different than that used for turbidity and gel-clot LALs; it is optimized for optimal performance in the chromogenic assay
Sodium HydroxideSigmaS2770When needed, it is used to adjust sample pH to be between 6-8
Hydrochloric acidSigmaH9892When needed, it is used to adjust sample pH to be between 6-8
LAL grade waterAssociates of Cape CodWP0501This reagent can be used with any LAL format
Glucashield BufferAssociates of Cape CodGB051-25Used to prevent false-positive response from beta-glucans
Disposable endotoxin-free glass dilution tubes 12 x 75 mmAssociates of Cape CodTB240These tubes can be used with all three assays
Disposable endotoxin-free glass reaction tubes 8 x 75 mmAssociates of Cape CodTK100These tubes can be used with turbidity and chromogenic assays
Pyrogen-free tips with volumes 0.25 and 1.0 mlRAININPPT25, PPT10Tips and pipettes may adsorb endotoxin and release leachables which interfere with LAL assay. These RAININ tips are used because their optimal performance in the LAL assay was verified and confirmed
Pyrogen-free microcentrifuge tubes, 2.0 mLEppendorf22600044Other equivalent supplies can be used
Pyrogen-fee combitips, 5mLEppendorf30089669Other equivalent supplies can be used
Repeat pipettorEppendorf4982000020Other equivalent supplies can be used
Microcetrifugeany brandAny brand can be used
Refrigerator, 2-8 Cany brandAny brand can be used
Vortexany brandAny brand can be used
Freezer, -20 Cany brandAny brand can be used
Pyros Kinetix or Pyros Kinetix Flex readerAssociates of Cape CodPKF96Other instruments can be used. However, LAL reagents and endotoxin standards used in this assay may require optimization. When other instrumentation is used, please refer to the instrument and LAL kit manufacturers for instructions
Gel-Clot LAL Assay
LAL ReagentAssociates of Cape CodG5003This reagent is specific to the gel-clot assay
Control Endotoxin StandardAssociates of Cape CodE0005This reagent can be used with turbidity and gel-clot assays
Sodium HydroxideSigmaS2770When needed, it is used to adjust sample pH to be between 6-8
Hydrochloric acidSigmaH9892When needed, it is used to adjust sample pH to be between 6-8
LAL grade waterAssociates of Cape CodWP0501This reagent can be used with any LAL format
Glucashield BufferAssociates of Cape CodGB051-25Used to prevent false-positive response from beta-glucans
Disposable endotoxin-free glass dilution tubes 12 x 75 mmAssociates of Cape CodTB240These tubes can be used with all three assays
Disposable endotoxin-free glass reaction tubes 10 x 75 mmAssociates of Cape CodTS050These tubes are for use with the gel-clot assay
Pyrogen-free tips with volumes 0.25 and 1 mLRAININPPT25, PPT10Tips and pipettes may adsorb endotoxin and release leachables which interfere with LAL assay. These RAININ tips are used because their optimal performance in the LAL assay was verified and confirmed
Pyrogen-free microcentrifuge tubes, 2.0 mLEppendorf22600044Other equivalent supplies can be used
Pyrogen-fee combitips, 5mLEppendorf30089669Other equivalent supplies can be used
Repeat pipettorEppendorf4982000020Other equivalent supplies can be used
Microcetrifugeany brandAny brand can be used
Refrigerator, 2-8 Cany brandAny brand can be used
Vortexany brandAny brand can be used
Freezer, -20 Cany brandAny brand can be used
Water bath, 37 Cany brandAny brand can be used, however, it is important either to switch off water circulation or use non-circualting water bath because water flow will affect clot formation and lead to false-negative results

Ссылки

  1. Perkins, D. J., Patel, M. C., Blanco, J. C., Vogel, S. N. Epigenetic Mechanisms Governing Innate Inflammatory Responses. Journal of Interferon & Cytokine Research. 36 (7), 454-461 (2016).
  2. Vogel, S. N., Awomoyi, A. A., Rallabhandi, P., Medvedev, A. E. Mutations in TLR4 signaling that lead to increased susceptibility to infection in humans: an overview. Journal of Endotoxin Research. 11 (6), 333-339 (2005).
  3. Dobrovolskaia, M. A., Vogel, S. N. Toll receptors, CD14, and macrophage activation and deactivation by LPS. Microbes and Infection. 4 (9), 903-914 (2002).
  4. US Pharmacopeia. . Bacterial Endotoxins Test. , (2011).
  5. FDA, U. . Guidance for Industry: Pyrogen and Endotoxins Testing: Questions and Answers. , (2012).
  6. FDA, U. . Endotoxin Testing Recommendations for Single-Use Intraocular Ophthalmic Devices. , (2015).
  7. Fennrich, S., et al. More than 70 years of pyrogen detection: Current state and future perspectives. Alternatives to Laboratory Animals. 44 (3), 239-253 (2016).
  8. Kumar, M. S., Ghosh, S., Nayak, S., Das, A. P. Recent advances in biosensor based diagnosis of urinary tract infection. Biosensors and Bioelectronics. 80, 497-510 (2016).
  9. Solano, G., Gomez, A., Leon, G. Assessing endotoxins in equine-derived snake antivenoms: Comparison of the USP pyrogen test and the Limulus Amoebocyte Lysate assay (LAL). Toxicon. , 13-18 (2015).
  10. Akbar John, B., Kamaruzzaman, B. Y., Jalal, K. C. A., Zaleha, K. TAL - a source of bacterial endotoxin detector in liquid biological samples. International Food Research Journal. 19 (2), 423-425 (2012).
  11. Fujita, Y., Tokunaga, T., Kataoka, H. Saline and buffers minimize the action of interfering factors in the bacterial endotoxins test. Analytical Biochemistry. 409 (1), 46-53 (2011).
  12. Dobrovolskaia, M. A. Pre-clinical immunotoxicity studies of nanotechnology-formulated drugs: Challenges, considerations and strategy. Journal of Controlled Release. 220 (Pt B), 571-583 (2015).
  13. Dobrovolskaia, M. A., et al. Ambiguities in applying traditional Limulus amebocyte lysate tests to quantify endotoxin in nanoparticle formulations. Nanomedicine (London). 5 (4), 555-562 (2010).
  14. Dobrovolskaia, M. A., Neun, B. W., Clogston, J. D., Grossman, J. H., McNeil, S. E. Choice of method for endotoxin detection depends on nanoformulation. Nanomedicine (London). 9 (12), 1847-1856 (2014).
  15. Neun, B. W., Dobrovolskaia, M. A. Considerations and Some Practical Solutions to Overcome Nanoparticle Interference with LAL Assays and to Avoid Endotoxin Contamination in Nanoformulations. Methods in Molecular Biology. 1682, 23-33 (2018).
  16. Boratynski, J., Szermer-Olearnik, B. Endotoxin Removal from Escherichia coli Bacterial Lysate Using a Biphasic Liquid System. Methods in Molecular Biology. 1600, 107-112 (2017).
  17. Li, H., Hitchins, V. M., Wickramasekara, S. Rapid detection of bacterial endotoxins in ophthalmic viscosurgical device materials by direct analysis in real time mass spectrometry. Analytica Chimica Acta. 943, 98-105 (2016).
  18. Uhlig, S., et al. Profiling of 3-hydroxy fatty acids as environmental markers of endotoxin using liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry. Journal of Chromatography A. 1434, 119-126 (2016).
  19. Smulders, S., et al. Contamination of nanoparticles by endotoxin: evaluation of different test methods. Particle and Fibre Toxicology. 9, 41 (2012).
  20. . NCL assay cascade Available from: https://ncl.cancer.gov/resources/assay-cascade-protocols (2015)
  21. Dobrovolskaia, M. A., Germolec, D. R., Weaver, J. L. Evaluation of nanoparticle immunotoxicity. Nature Nanotechnology. 4 (7), 411-414 (2009).
  22. Borton, L. K., Coleman, K. P. Material-mediated pyrogens in medical devices: Applicability of the in vitro Monocyte Activation Test. Altex. , (2018).
  23. Stoppelkamp, S., et al. Speeding up pyrogenicity testing: Identification of suitable cell components and readout parameters for an accelerated monocyte activation test (MAT). Drug Testing and Analysis. 9 (2), 260-273 (2017).
  24. Vipond, C., Findlay, L., Feavers, I., Care, R. Limitations of the rabbit pyrogen test for assessing meningococcal OMV based vaccines. Altex. 33 (1), 47-53 (2016).
  25. Barenholz, Y. Doxil(R)--the first FDA-approved nano-drug: lessons learned. Journal of Controlled Release. 160 (2), 117-134 (2012).
  26. Neun, B. W., Dobrovolskaia, M. A. Detection and quantitative evaluation of endotoxin contamination in nanoparticle formulations by LAL-based assays. Methods in Molecular Biology. 697, 121-130 (2011).
  27. FDA, U. . Guidance for Industry: Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers. , (2005).
  28. Mohan, P., Rapoport, N. Doxorubicin as a molecular nanotheranostic agent: effect of doxorubicin encapsulation in micelles or nanoemulsions on the ultrasound-mediated intracellular delivery and nuclear trafficking. Molecular Pharmaceutics. 7 (6), 1959-1973 (2010).
  29. Dabbagh, A., et al. Low-melting-point polymeric nanoshells for thermal-triggered drug release under hyperthermia condition. International Journal of Hyperthermia. 31 (8), 920-929 (2015).
  30. Li, Y., et al. Optimising the use of commercial LAL assays for the analysis of endotoxin contamination in metal colloids and metal oxide nanoparticles. Nanotoxicology. 9 (4), 462-473 (2015).
  31. Li, Y., et al. Bacterial endotoxin (lipopolysaccharide) binds to the surface of gold nanoparticles, interferes with biocorona formation and induces human monocyte inflammatory activation. Nanotoxicology. 11 (9-10), 1157-1175 (2017).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

143pyrogenicity

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены