この作品は、スタートアップ助成金は、OKVに授与コーネル大学農業試験場（CUAES）NYC - 125433ハッチグラントとコーネルによってサポートされていました

パート1。植物栽培用固形培地の調製。 集中Murasigeと1％ショ糖および0.7％寒天を添加したスクーグ（MS）培地上で我々は通常、カルチャの植物。それは植物が健康を保つために必要なすべての成分が含まれています。 MSの1L、メディアのpH 5.7調製するための <ol><li> 1.5 - 2.0Lオートクレーブ可能なボトルに水800mlにMSの粉末2.15gを追加します。 </li><li>ボトルに攪拌棒を配置し、攪拌プレート上で培地を攪拌することにより、MSパウダーを溶かす。 </li><li>撹拌しながら、5.7にMS培地のpHを調整するために、滴、1N KOHを加える。 </li><li>ショ糖10 gを追加し、攪拌してください。 </li><li>寒天7gを追加* </li><li> 1000 mlに調製した培地の最終的な音量を調整し、オートクレーブで滅菌.* </li><li>場所は、攪拌プレート上で培地をオートクレーブ処理し、攪拌しながら、それを冷ます、その寒天が瓶の底に沈殿しないように。 〜60℃*に培地を冷やす</li><li> 100ミリメートルペトリ皿に注ぐ。 4でプレートを保つ℃に</li></ol> *ヒント1：寒天を溶解しようとしないでください。それは、オートクレーブ中に可溶化されます。 *ヒント2：オートクレーブ中に瓶の中に攪拌棒を保つには、後で必要になります。 *ヒント3：あなたが10秒間高圧蒸気滅菌瓶にあなたの手を保つことができるなら、それは媒体が十分冷えてからして、プレートを注いで開始できることを意味します。 パート2。植物材料と成長条件。 <ol><li> シロイヌナズナの種子を滅菌<ol><li>エッペンドルフ微量遠心チューブに種子100 mgを置き、70％エタノール1 mlを加える。よく混和して、2分間インキュベートする。 、種をスピンダウンし、上清を吸引除去する。 </li><li> 1.8％漂白剤溶液1mlを追加* 0.1％Tween - 20を含む。 10分間混ぜる。種子や吸引漂白剤溶液をスピンダウン。 </li><li>このステップでは、層流フードで行う必要があります。種に滅菌水1 mlを追加、よく混ぜる。水を吸引、種子をスピンダウン。このステップを5回繰り返します。 </li></ol></li><li>ステップ1プレート（100粒/プレート）で調製に種を広げる。 </li><li> 4℃で24〜48時間のためにシードのプレートを保持°層別化のための暗所で。 </li><li> 19分の23 ° Cの明/暗、温度体制で8時間light/16時間暗光周期（250マイクロモル、M -2 s -1の光合成光量子束密度時）で生育チャンバー内で14日間の植物を育て、75％の相対湿度。 </li></ol> *ヒント1：ブリーチ溶液を6％の次亜塩素酸ナトリウムを含む、0.1％の最終濃度にTween - 20を追加して、希釈家庭クロロックスがアップされています。 第3部。 シロイヌナズナ実生からのプロトプラストの単離。 <ol><li>濾過滅菌TVL溶液15mlで新鮮なカミソリの刃と14日齢の実生のスライス2グラム。我々は、無菌使い捨てペトリ皿に植物材料を切る。 </li><li> 200mlのビーカーに刻んだ組織を転送する、フィルター滅菌した酵素液、スワール酵素溶液で組織のミックスは、パラフィルムとアルミ箔でカバーできるようにビーカーの20mlを加える。 </li><li> 16〜18時間室温で暗所で35 rpmで植物組織を振る</li><li>チーズクロスの8層、W5ソリューションのプリウェットを通してふるいに50 mlのFalconチューブ中に放出されたプロトプラストを集める。 </li><li> W5溶液15mlで布を洗浄することによりチーズクロスつのより多くの時間からふるいプロトプラスト。 </li><li>糖勾配を乱さないように、W5溶液の10mlでプロトプラストを慎重にオーバーレイ、100 gで7分間遠</li><li>酵素液とW5ソリューション（図1B）の界面でのプロトプラストの10mlを収集し、新しい50 mlのFalconチューブに移す。 </li><li> 15ミリリットルW5溶液、60 gで5分間遠心分離を追加します。上清を取り除く。 </li><li> 60グラムで5分間遠、W5溶液の15ミリリットルでプロトプラストを懸濁することにより、酵素液から遊離プロトプラストを洗う</li><li> 1〜3ミリリットルW5溶液の上清、再懸濁しますペレットプロトプラストを削除します。 </li><li>血球計でカウント細胞によるプロトプラストの収量を評価する。 </li></ol>パート4。試薬： TVL：0.3 Mソルビトール、50mMのCaCl 2をフィルター滅菌し、-20℃で保存します。 酵素溶液：0.5 Mのショ糖、10mMのMES - ​​KOH [pHを5.7]、20mMのCaCl 2を 、40mMのKClを、1％セルラーゼ（小野塚R - 10）、1％Macerozyme（R10）。フィルター滅菌し、新鮮な使用。 W5解決策：0.1％（w / v）のグルコース、0.08％（w / v）の塩化カリウム、0.9％（w / v）の塩化ナトリウム、1.84％（w / v）のCaCl 2を 、2mMのMES - ​​KOH pHは5.7。ろ過滅菌し、室温で保管してください。 パート5：代表的な結果： パート1および2で説明したシロイヌナズナ培養条件を使用すると、プロトプラスト（図1A）を単離するのに適した健康な苗を、レンダリングします。プロトプラストは、ショ糖密度グラジエントによって精製されていますENTの遠心分離とW5と酵素のソリューション（図1B）のインターフェースで収集。第3部で説明したプロトプラストの単離法を用いて、我々は一般的に新鮮な苗1グラムから無傷のプロトプラストの5-10 10 6（図1C）を収穫。 <img src="/files/ftp_upload/1149/Fig1.jpg" alt="図1" /> 図1。シロイヌナズナ実生からのプロトプラストの単離。 、シロイヌナズナの14日齢の実生からの組織が ​​あるのは、変更手続き（チェンとHalkier、2000）によって収集し、プロトプラストに変換された。B、プロトプラストは、ショ糖密度勾配遠心法により精製し、酵素液の界面で収集していたW5 uffer（ 白矢印 ）。C、プロトプラストの明視野顕微鏡。顕微鏡はツァイスのAxioscope 2に加え、顕微鏡とインタフェース冷却CCDカメラを用いて収集した。

<ol>
	<li>Cocking, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Method+for+the+Isolation+of+Plant+Protoplasts+and+Vacuoles.">A Method for the Isolation of Plant Protoplasts and Vacuoles.</a> Nature. 187, 962-963 (1960).</li><li>Chen, S., Halkier, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+glucosinolate+uptake+by+leaf+protoplasts+of+Brassica+napus.">Characterization of glucosinolate uptake by leaf protoplasts of Brassica napus.</a> J Biol Chem. 275, 22955-22960 (2000).</li><li>Robert, S., Zouhar, J., Carter, C., Raikhel, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+intact+vacuoles+from+Arabidopsis+rosette+leaf-derived+protoplasts.">Isolation of intact vacuoles from Arabidopsis rosette leaf-derived protoplasts.</a> Nat. Protocols. 2, 259-262 (2007).</li><li>Yoo, S. D., Cho, Y. H., Sheen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+mesophyll+protoplasts:+a+versatile+cell+system+for+transient+gene+expression+analysis.">Arabidopsis mesophyll protoplasts: a versatile cell system for transient gene expression analysis.</a> Nat Protoc. 2, 1565-1572 (2007).</li><li>Zhai, Z., Sooksa-nguan, T., Vatamaniuk, O. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+RNAi+as+a+reverse+genetic+approach+for+gene+functional+analysis+in+protoplasts.">Establishing RNAi as a reverse genetic approach for gene functional analysis in protoplasts.</a> Plant Phys. 149, 642-652 (2009).</li></ol>

植物遺伝子の機能解析で、その使用のためにこの手順を記述した仮特許は、技術企業と商業化コーネルセンター（CCTEC）、2008年6月に提出されています。レシートは50341/015001ない：Vatamaniuk、[OK]を、そして斎、植物遺伝子の迅速な機能解析のためのZ.方法。

無傷のプロトプラストを高収率を確保するためには、健康な植物で、起動に非常に重要です。プロトプラストを単離するための溶液をろ過滅菌して使用してください。プロトプラストが壊れやすいことに注意してください。したがって、プロトプラストを処理する際に、ピペットまたはそれはそれらを制動される精力的に以来、渦、それらを混在させないでください。代わりに、徐々に遠心?...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Murashige and Skoog Basal Salt Mixture (MS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M5524</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A1296</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petri Dishes (100x15mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kreckeler Scientific</td>
<td>82-4001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cellulase (Onozuka R&#x2010;10)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>RPI Corp</td>
<td>C32200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Macerozyme (R10)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>RPI Corp</td>
<td>M22010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cheesecloth wipes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>06-665-29</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lab Rotator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>1167152Q</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Allegra X&#x2010;15R Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>392932</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Axioskop2 Plus Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zeiss</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation of protoplasts from tissues of 14-day-old seedlings of arabidopsis thaliana

プロトプラストは細胞壁が酵素的に除去あった植物細胞で​​ある。異なる植物組織からのプロトプラストの単離は、最初の40年以上前に報告された<sup&gt; 1</sup&gt;それ以来このような細胞内タンパク質の局在、無傷の細胞小器官の分離と二本鎖RNA干渉（RNAi）による遺伝子不活性化標的としての細胞プロセスの様々な、研究するために適応されています<sup&gt; 2月5日</sup&gt;。プロトプラストの分離プロトコルのほとんどは、成熟したシロイヌナズナの葉組織（例えば、35日齢の植物）を使用してください<sup&gt; 2月4日</sup&gt;。我々は、14日齢のシロイヌナズナの苗を用いることにより、既存のプロトコルを変更。この手順では、14日齢の実生の1グラムは、5 10が得られた<sup&gt; 6</sup&gt; -10<sup&gt; 7</sup&gt;少なくとも96時間そのまま残りますプロトプラスト。苗からのプロトプラストの収量は、成熟したシロイヌナズナの葉から調製品と同等ですが、代わりに35〜36日から、プロトプラストの単離は、15日間で完了します。これは成熟した植物を使用するときにプロトプラストを単離するために必要な時間と成長室のスペースを減少させることができ、そのままプロトプラストを必要と下流の研究を促進します。

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Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana

このビデオでは、シロイヌナズナの14日齢の実生の組織から無傷のプロトプラストを単離するための手順を示しています。分離されたプロトプラストは、少なくとも96時間のためにそのまま残るし、代わりに一ヶ月の成熟植物の苗から分離されていることを考えると、この手順は、無傷プロトプラストを必要とするアッセイを迅速に処理されます。

の14日齢の苗の組織からのプロトプラストの単離シロイヌナズナ</em

Protoplasts are plant cells that have had their cell walls enzymatically removed. Isolation of protoplasts  from different plant tissues was first ...

isolation-protoplasts-from-tissues-14-day-old-seedlings-arabidopsis

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana

35.8K ビュー.  Cornell University. このビデオでは、シロイヌナズナの14日齢の実生の組織から無傷のプロトプラストを単離するための手順を示しています。分離されたプロトプラストは、少なくとも96時間のためにそのまま残るし、代わりに一ヶ月の成熟植物の苗から分離されていることを考えると、この手順は、無傷プロトプラストを必要とするアッセイを迅速に処理されます。

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Efficient and Rapid Isolation of Early-stage Embryos from Arabidopsis thaliana Seeds

In flowering plants, the embryo develops within a nourishing tissue - the endosperm - surrounded by the maternal seed integuments (or seed coat). As a consequence, the isolation of plant embryos at early stages (1 cell to globular stage) is technically challenging due to their relative inaccessibility. Efficient manual dissection at early stages is strongly impaired by the small size of young Arabidopsis seeds and the adhesiveness of the embryo to the surrounding tissues. Here, we describe a method that allows the efficient isolation of young Arabidopsis embryos, yielding up to 40 embryos in 1 hr to 4 hr, depending on the downstream application. Embryos are released into isolation buffer by slightly crushing 250-750 seeds with a plastic pestle in an Eppendorf tube. A glass microcapillary attached to either a standard laboratory pipette (via a rubber tube) or a hydraulically controlled microinjector is used to collect embryos from droplets placed on a multi-well slide on an inverted light microscope. The technical skills required are simple and easily transferable, and the basic setup does not require costly equipment. Collected embryos are suitable for a variety of downstream applications such as RT-PCR, RNA sequencing, DNA methylation analyses, fluorescence in situ hybridization (FISH), immunostaining, and reporter gene assays.

Efficient and Rapid Isolation of Early-stage Embryos from Arabidopsis thaliana Seeds

We report an efficient and simple method to isolate embryos at early stages of development from Arabidopsis thaliana seeds. Up to 40 embryos can be isolated in 1 hr to 4 hr, depending on the downstream application. The procedure is suitable for transcriptome, DNA methylation, reporter gene expression, immunostaining and fluorescence in situ hybridization analyses.

から初期段階の胚の効率的かつ迅速な単離<em&gt;シロイヌナズナ</em&gt;種子

In flowering plants, the embryo develops within a nourishing tissue - the endosperm - surrounded by the maternal seed integuments (or seed coat). As a ...

生物学

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Arabidopsis thaliana is a model organism commonly used to understand and manipulate various cellular processes in plants, and it has been used extensively in the study of secondary cell wall formation. Secondary cell wall deposition occurs after the primary cell wall is laid down, a process carried out exclusively by specialized cells such as those forming vessel and fiber tissues. Most secondary cell walls are composed of cellulose (40&#8211;50%), hemicellulose (25&#8211;30%), and lignin (20&#8211;30%). Several mutations affecting secondary cell wall biosynthesis have been isolated, and the corresponding mutants may or may not exhibit obvious biochemical composition changes or visual phenotypes since these mutations could be masked by compensatory responses. Staining procedures have historically been used to show differences on a cellular basis. These methods are exclusively visual means of analysis; nevertheless their role in rapid and critical analysis is of great importance. Congo red and calcofluor white are stains used to detect polysaccharides, whereas M&#228;ule and phloroglucinol are commonly used to determine differences in lignin, and toluidine blue O is used to differentially stain polysaccharides and lignin. The seemingly simple techniques of sectioning, staining, and imaging can be a challenge for beginners. Starting with sample preparation using the A. thaliana model, this study details the protocols of a variety of staining methodologies that can be easily implemented for observation of cell and tissue organization in secondary cell walls of plants.

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Plant cell wall composition varies between tissue types and can include lignin, cellulose, hemicelluloses, and pectin. Various staining techniques have been developed to visualize differences at the cell-type level. This paper is a compilation of commonly used cell wall staining techniques.

の組織化学的染色<em&gt;シロイヌナズナ</em&gt;二次細胞壁の要素

Arabidopsis thaliana is a model organism commonly used to understand and manipulate various cellular processes in plants, and it has been used extensively ...

Rapid Analysis of Circadian Phenotypes in Arabidopsis Protoplasts Transfected with a Luminescent Clock Reporter

The plant circadian clock allows the anticipation of daily changes to the environment. This anticipation aids the responses to temporally predictable biotic and abiotic stress. Conversely, disruption of circadian timekeeping severely compromises plant health and reduces agricultural crop yields. It is therefore imperative that we understand the intricate regulation of circadian rhythms in plants, including the factors that affect motion of the transcriptional clockwork itself.
Testing circadian defects in the model plant Arabidopsis thaliana (Arabidopsis) traditionally involves crossing specific mutant lines to a line rhythmically expressing firefly luciferase from a circadian clock gene promoter. This approach is laborious, time-consuming, and could be fruitless if a mutant has no circadian phenotype. The methodology presented here allows a rapid initial assessment of circadian phenotypes. Protoplasts derived from mutant and wild-type Arabidopsis are isolated, transfected with a rhythmically expressed luminescent reporter, and imaged under constant light conditions for 5 days. Luminescent traces will directly reveal whether the free-running period of mutant plants is different from wild-type plants. The advantage of the method is that any Arabidopsis line can efficiently be screened, without the need for generating a stably transgenic luminescent clock marker line in that mutant background.

The circadian clock regulates about a third of the Arabidopsis transcriptome, but the percentage of genes that feed back into timekeeping remains unknown. Here we visualize a method to rapidly assess circadian phenotypes in any mutant line of Arabidopsis using luminescent imaging of a circadian reporter transiently expressed in protoplasts.

発光時計レポーターとシロイヌナズナプロトプラストトランスフェにおける概日表現型の迅速分析

The plant circadian clock allows the anticipation of daily changes to the environment. This anticipation aids the responses to temporally predictable ...

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Plant biologists often need to observe the growth behavior of their chosen species. To this end, the plants need constant environmental and stable light conditions, which are preferably variable in quantity and quality so that studies under different setups can be conducted. These requirements are met by climatic chambers featuring light emitting diodes (LED) lights, which can &#8211; in contrast to fluorescent lights &#8211; be set to different wavelengths. LEDs are energy conserving and emit virtually no heat even at light intensities, which often constitutes a problem with other light sources. The presented protocol provides a step-by-step guidance of how to program a climatic chamber equipped with variable LED lights as well as describing several approaches for in depth analysis of growth phenotypes. Depending on the experimental set-up various characteristics of the growing plants can be observed and analyzed. Here we describe how to determine fresh weight, leaf area, photosynthetic activity, and stomatal density. We demonstrate that in order to obtain reliable data and draw valid conclusions it is mandatory to use a sufficient number of individuals for statistical evaluation. Taking too few plants for this kind of analysis results in high statistical errors and consequently in less clear interpretations of the data.

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Here, we present a protocol for studying plant growth behavior and especially phenotypes in a reproducible manner. We show how to provide variable and at the same time stable light conditions. Proper analyses depend on sufficient sample numbers and valid statistical evaluations.

異なる光質におけるシロイヌナズナ成長挙動の解析

Plant biologists often need to observe the growth behavior of their chosen species. To this end, the plants need constant environmental and stable light ...

共焦点イメージングによるERL1ダイナミクスの時空間的研究

Image-Based Methods to Study Membrane Trafficking Events in Stomatal Lineage Cells

In eukaryotic cells, membrane components, including proteins and lipids, are spatiotemporally transported to their destination within the endomembrane system. This includes the secretory transport of newly synthesized proteins to the cell surface or the outside of the cell, the endocytic transport of extracellular cargoes or plasma membrane components into the cell, and the recycling or shuttling transport of cargoes between the subcellular organelles, etc. Membrane trafficking events are crucial to the development, growth, and environmental adaptation of all eukaryotic cells and, thus, are under stringent regulation. Cell-surface receptor kinases, which perceive ligand signals from the extracellular space, undergo both secretory and endocytic transport. Commonly used approaches to study the membrane trafficking events using a plasma membrane-localized leucine-rich-repeat receptor kinase, ERL1, are described here. The approaches include plant material preparation, pharmacological treatment, and confocal imaging setup. To monitor the spatiotemporal regulation of ERL1, this study describes the co-localization analysis between ERL1 and a multi-vesicular body marker protein, RFP-Ara7, the time series analysis of these two proteins, and the z-stack analysis of ERL1-YFP treated with the membrane trafficking inhibitors brefeldin A and wortmannin.

著者スポットライト:気孔系統細胞における膜輸送イベントを研究するための画像ベースの方法  

Several commonly used methods are introduced here to study the membrane trafficking events of a plasma membrane receptor kinase. This manuscript describes detailed protocols including the plant material preparation, pharmacological treatment, and confocal imaging setup.

気孔系譜細胞における膜輸送事象を研究するための画像ベースの手法

In eukaryotic cells, membrane components, including proteins and lipids, are spatiotemporally transported to their destination within the endomembrane ...

シロイヌナズナにおける花粉の水和プロファイルを測定するための改良された方法

A High-Resolution, Single-Grain, In Vivo Pollen Hydration Bioassay for Arabidopsis thaliana

Sexual reproduction in flowering plants requires initial interaction between the pollen grain and the stigmatic surface, where a molecular dialog is established between the interacting partners. Studies across a range of species have revealed that a series of molecular checkpoints regulate the pollen-stigma interaction to ensure that only compatible, generally intraspecific pollen is successful in effecting fertilization. In species that possess a 'dry stigma', such as the model plant Arabidopsis thaliana, the first post-pollination, prezygotic compatibility checkpoint is the establishment of pollen hydration. 
This phase of pollination is tightly regulated, whereby signals from the pollen grain elicit the release of water from the stigma, thus permitting pollen hydration. The ability to accurately measure and track pollen hydration over time is key to the design of experiments directed at understanding the regulation of this critical step in reproduction. Published protocols frequently utilize flowers that have been excised from the parent plant, maintained on liquid or solid media, and bulk pollinated. 
This paper describes a noninvasive, in vivo pollination bioassay that permits minute-by-minute hydration tracking of individual A. thaliana pollen grains at high resolution. The assay is highly reproducible, able to detect very subtle variations of pollen hydration profiles, and thus is suitable for the analysis of mutants that affect pathways regulating pollination. Although the protocol is lengthier than those described for bulk pollinations, the precision and reproducibility it provides, along with its in vivo nature, make it ideal for the detailed dissection of pollination phenotypes.

著者スポットライト:シロイヌナズナの高解像度、単一粒、In vivo花粉水和バイオアッセイ  

An improved method to measure pollen hydration profiles in Arabidopsis thaliana is described here. The new method offers higher resolution, is noninvasive, and is highly reproducible. The protocol represents a new tool for a finer dissection of the processes that regulate the early stages of pollination.

シロイヌナズナの高分解能単粒in in vivo花粉水和バイオアッセイ

Sexual reproduction in flowering plants requires initial interaction between the pollen grain and the stigmatic surface, where a molecular dialog is ...