生細胞イメージングを使用して、初代海馬ニューロンの軸索輸送に対する病理学的タンパク質の影響を測定する

ニューロンは、機能的なシナプスと神経接続を維持するために、軸索に沿った貨物の双方向輸送に依存しています。輸送の欠損は、いくつかの神経変性疾患の病因に重大な貢献をしていると考えられています。私たちは、タウタンパク質の疾患関連修飾が軸索輸送を破壊するメカニズムを特定することを目指しています。

私たちは、複数の病理学的形態のタウタンパク質が哺乳類のニューロンにおける正常な軸索輸送を破壊することを確立しました。この効果は、軸索輸送を調節するリン酸化ベースのシグナル伝達経路の変化に依存します。これらの混乱は、疾患におけるタウ誘発性神経毒性の潜在的なメカニズムを表しています。

特定のタンパク質の改変型は、いくつかの神経変性疾患にわたる正常な高速軸索輸送を妨害する可能性があります。しかし、これらの効果の根底にあるメカニズムを完全には理解していません。これにより、疾患関連タンパク質の発現が哺乳類ニューロンの高速軸索輸送にどのように影響するかを特定するための再現性のある簡単なプロトコルが提供されます。

このプロトコルは、哺乳類の初代ニューロンにおける軸索輸送の再現性のあるアッセイを提供し、特定の病理学的修飾を有する目的のタンパク質の発現とともに、種々のカーゴタンパク質を含むように容易に変更可能である。また、他の経路コンポーネントのターゲットを絞ったノックダウンを使用して、特定のメカニズムの詳細をテストすることもできます。