Usando imagens de células vivas para medir os efeitos de proteínas patológicas no transporte axonal em neurônios primários do hipocampo

Os neurônios dependem do transporte bidirecional de carga ao longo do axônio para manter a sinapse funcional e a conectividade neural. Acredita-se que os déficits no transporte sejam contribuintes críticos para a patogênese de várias doenças neurodegenerativas. Nosso objetivo é identificar mecanismos pelos quais as modificações associadas à doença na proteína tau interrompem o transporte axonal.

Estabelecemos que múltiplas formas patológicas da proteína tau interrompem o transporte axonal normal em neurônios de mamíferos. Esse efeito depende de mudanças nas vias de sinalização baseadas em fosforilação que regulam o transporte axonal. Essas interrupções representam um mecanismo potencial de neurotoxicidade induzida por tau na doença.

Formas modificadas de proteínas específicas podem interromper o transporte axonal rápido normal em várias doenças neurodegenerativas. No entanto, não entendemos completamente os mecanismos subjacentes a esses efeitos. Isso fornece um protocolo simples e reprodutível para identificar como a expressão de proteínas associadas à doença afeta o transporte axonal rápido em neurônios de mamíferos.

Este protocolo fornece um ensaio reprodutível para transporte axonal em neurônios primários de mamíferos, que é facilmente modificável para incluir várias proteínas de carga junto com a expressão de proteínas de interesse com modificações patológicas específicas. Ele também permite o knockdown direcionado de outros componentes da via para testar detalhes mecanicistas específicos.