JoVE Journal

Neuroscience

Author Produced

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir.

Primer hipokampal nöronlarda patolojik proteinlerin aksonal taşıma üzerindeki etkilerini ölçmek için canlı hücre görüntülemenin kullanılması

Transkript

Nöronlar, fonksiyonel sinapsis ve nöral bağlantıyı sürdürmek için akson boyunca yükün çift yönlü taşınmasına güvenir. Taşımadaki eksikliklerin, çeşitli nörodejeneratif hastalıkların patogenezine kritik katkıda bulunduğu düşünülmektedir. Tau proteininde hastalıkla ilişkili modifikasyonların aksonal transportu bozduğu mekanizmaları tanımlamayı amaçlıyoruz.

Tau proteininin çoklu patolojik formlarının memeli nöronlarında normal aksonal transportu bozduğunu tespit ettik. Bu etki, aksonal taşımayı düzenleyen fosforilasyon tabanlı sinyal yollarındaki değişikliklere bağlıdır. Bu bozulmalar, hastalıkta tau kaynaklı nörotoksisitenin potansiyel bir mekanizmasını temsil eder.

Spesifik proteinlerin modifiye edilmiş formları, çeşitli nörodejeneratif hastalıklarda normal hızlı aksonal transportu bozabilir. Ancak, bu etkilerin altında yatan mekanizmaları tam olarak anlamıyoruz. Bu, hastalıkla ilişkili proteinlerin ekspresyonunun memeli nöronlarında hızlı aksonal taşımayı nasıl etkilediğini belirlemek için tekrarlanabilir ve basit bir protokol sağlar.

Bu protokol, memeli primer nöronlarında aksonal taşıma için tekrarlanabilir bir test sağlar, bu da spesifik patolojik modifikasyonlarla ilgilenilen proteinlerin ekspresyonu ile birlikte çeşitli kargo proteinlerini içerecek şekilde kolayca değiştirilebilir. Ayrıca, belirli mekanik ayrıntıları test etmek için diğer yol bileşenlerinin hedefli olarak sökülmesine de izin verir.

Burada, aksonal taşıma üzerindeki patolojik protein kaynaklı etkileri analiz etmek ve bu etkilere aracılık eden mekanik yolları belirlemek için primer hipokampal kemirgen nöronlarının transfeksiyonunun canlı hücre konfokal görüntüleme ile nasıl birleştirileceğini gösteriyoruz.

Bu videodaki bölümler

0:00

Introduction

1:30

Harvesting of Primary Hippocampal Neurons for Live‐Cell Imaging

4:06

Primary Hippocampal Neuron Dissociation and Plating for the Measurement of the Effects of Pathological Proteins on Axonal Transport

6:38

Live‐Cell Imaging of Primary Hippocampal Neurons for the Measurement of the Effects of Pathological Proteins on Axonal Transport

İlgili Videolar

Sitemizdeki deneyiminizi iyileştirmek için çerezleri kullanıyoruz

Sitemizi kullanmaya devam ederek ya da "Devam et" butonuna tıklayarak, çerezleri kabul edebilirsiniz.