細胞毒性研究のための農薬処理ニンジンカルスからの農薬代謝物へのCaco-2細胞の曝露

暴露試験の実施に進みます。十分な数の細胞が採取されたら、細胞を含むフラスコの壁を軽くたたいて細胞を均一に分散させ、細胞懸濁液を15ミリリットルの遠心チューブに移します。細胞懸濁液をDMEMで希釈し、サイトメトリーと組み合わせて、目的の細胞密度を達成します。

フラスコの壁を軽くたたいて、細胞が均一に分布するようにします。次に、96ウェルプレートの外側のウェルに100マイクロリットルのPBSを添加して、エッジ効果による培地の蒸発を防ぎます。100マイクロリットルの細胞懸濁液をプレートの左側のウェルに加え、10分間休ませます。

細胞を摂氏37度で5%二酸化炭素と48時間インキュベートします。インキュベーターから96ウェルプレートを取り出した後、培地を廃棄します。農薬代謝物グループを設定するには、調製したさまざまな残留農薬曝露溶液を100マイクロリットルを指定された各ウェルに追加します。

次に、調製した異なる親農薬曝露溶液を100マイクロリットルの異なる親農薬曝露溶液を指定された各ウェルに追加して比較し、農薬の親グループを確立します。ブランクコントロールを設定するには、0.3%DMSOを含む100マイクロリットルのDMEMを各指定ウェルに追加します。細胞を摂氏37度で5%二酸化炭素と24時間インキュベートします。