この作品は、健康のペンシルバニア部からの助成金によって支えられて。 博士ミゲルガルシアトスカーノはこの調査中にアルフォンソマルティンエスクデロ財団が資金提供テンプル大学でポスドクだった。 我々は、ビデオの製作のためにIliya YordanovとケビンKotredesに感謝したいと思います。

1。ヒト敗血症のマウスモデルとして盲腸結紮穿刺この手順のC57BL / 6マウスのために（7-9週齢）に使用されています。 <ol><li>腹腔内に1時01分ケタミン（75mg/kg）とキシラジン（15mg/kg）の溶液を注入することにより、マウスを麻酔。参考として、20グラムのマウスに1:1溶液30μlを注入する。また、マウスは、麻酔薬の気化器を用いて吸入イソフルランで麻酔をすることができます。 </li><li>マウスの腹部をひげをそると最初の70％アルコールに浸した綿棒（下の写真の順序で番号1）で拭い続いbetadineのソリューションを適用することによって領域を消毒する。クロルヘキシジンは、代替の防腐剤として使用することができます。オプション：滅菌ドレープがきれいな部分を維持するために使用されることがあります。 </li><li>無菌条件下では、1〜2センチメートル正中開腹術を練習し、隣接する腸（2と3）と盲腸を公開。 </li><li>盲腸はしっかり6.0絹縫合糸（6-0 PROLENE、8680G、エチコン）と連結する回腸盲腸弁下に、そのベースにある、と同じで穴あき一度か二度19ゲージ針（4と5）となります盲腸の側面。ライゲーションのポイントに盲腸の先端からの距離として定義されて連結された盲腸の長さは、重症度を決定することに注意してください。 ≤1cmの距離が中〜低学年の敗血症を生成しながら&gt; 1cmの距離は、高品位の敗血症を生成します。また、ここに示されて盲腸穿孔のメソッドを使用しても、（盲腸を通して針を導入する）を介して穿刺の技術を利用して、標準とは異なることに注意してください。どちらのメソッドも同じ敗血症の予後を確実に生成する。しかし、根っからの技術の欠点の1つは、盲腸が絞られているときに押し出された糞の量を制御すること容易にしないことです。 </li><li>盲腸は、その後、静かに穿孔部位（6）から糞の少量を押し出すために圧迫されています。盲腸を腹腔内に返され、腹膜が6.0絹縫合糸で閉じられます。 （7）。 </li><li>皮膚は、リフレックス7ミリメートルクリップ（RS - 9258、Roboz手術器具）やミシェルの創傷クリップ（7ミリメートル、RS - 9270）（8）で閉じられます。 </li><li> 25G針を用いて予め温めておいた0.9％生理食塩水の皮下1mlを注入することにより、マウスを復活させる。この流体の蘇生措置は、敗血症の亢進相を誘導する。この重要なステップは、議論のセクションで詳しく説明されています。 </li><li>オプション：術後鎮痛のために皮下ブプレノルフィン（0.05mg / kg体重）またはトラマドールの（20mg/kg体重）注入。これらの麻薬は、呼吸や運動を抑制することができることをお勧めすると、これらの効果は、敗血症の兆候として誤って解釈することができます。 </li><li>動物は、加熱パッドを一時的に置くか、彼らは麻酔から回復するまで交互に150Wの赤外線加熱ランプへの曝露とのケージに直ちに返されます。回復時間は30分〜1時間からです。 </li><li>ケージの底部に配置食べ物と水（ハイドロゲル）への無料アクセスを提供します。 </li><li>マウスは1週間から2週間生存のために12時間ごとに監視したり、様々なパラメータの解析のために異なる時点で安楽死されています。 </li></ol>実験的な設計のための対照として、偽の動物は結紮穿刺することなく開腹術のテクニックに従う。 外科的処置のマウスの後の6〜12時間は、無気力になり、発熱、立毛、下痢、拠り所、および倦怠感を開発し、敗血症のすべての症状。非常に重症敗血症のマウスは、ほとんど死亡前に移動し、体温の劇的な低下を示すことができる。このステップのマウスでの長時間の痛みと苦しみを避けるために安楽死されるべきである。 <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig0.jpg" alt="図0" /> 2。最も一般的な分析されたパラメータ手続きの結果を評価するために、異なるパラメータが臓器、細胞抽出物または体液で分析することができます。サンプルは、外科的処置後3時間から一週間に異なるタイムポイントで収集することができます。 <ol><li>マウスの生存率。 </li><li>血清、腹腔内および臓器抽出物におけるサイトカインとケモカイン。 <ol><li> インターロイキン6：単球、樹状細胞、マクロファージ、B細胞、T細胞、顆粒球、マスト細胞と、より多くの細胞型により産生され、放出。それは急性相反応と炎症において重要な役割を果たしている。 </li><li> 腫瘍壊死因子-α：炎症およびアポトーシスにおいて中心的な役割を果たすPleiotrophicサイトカイン。単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞と線維芽細胞によって産生さ。 </li><li> nterleukin -1β：単球、NK細胞、樹状細胞、B細胞とT細胞により産生される。発熱や急性期タンパク質の合成を誘導する。 </li><li> インターロイキン10：貪食取り込みおよびTh2応答を促進するがantig抑制ENプレゼンテーションとTh1の炎症性応答。 </li><li> インターロイキン10：貪食取り込みおよびTh2応答を促進するが、抗原の提示とTh1の炎症反応を抑制します。 </li><li> 単球走化性タンパク質-1（もCCL2とも呼ばれる）：新兵の単球、メモリーT細胞、および組織損傷や感染症のサイトへの樹状細胞。 </li><li> KC（CXCL1）：マクロファージと血管内皮細胞により産生される。マウスKCは、強力な好中球の誘引及び活性剤です。 </li><li> RANTES：単球走化性。それは、非刺激CD4 + / CD45RO +メモリーT細胞と刺激CD4 +およびNaのVEとメモリの表現型を有するCD8 + T細胞を化学的に誘引することができます。 </li><li> インターフェロン-γ：Th1細胞、細胞傷害性T細胞、樹状細胞とナチュラルキラー（NK）細胞から分泌される。マクロファージの抗原提示と溶解活性を増加させ、Th2細胞の活性を抑制する。白血球遊走に必要な接着との結合を促進し、NK細胞活性を促進する。 </li><li> 高移動度群B - 1蛋白質：単球では、敗血症の後期段階における炎症性メディエーターの放出を活性化する、事前の糖化最終産物の細胞受容体（RAGE）に結合することにより、核因子カッパB活性化因子である。 </li></ol></li><li>好中球浸潤の指標としての臓器におけるミエロペルオキシダーゼの定量。ミエロペルオキシダーゼは（MPO）好中球顆粒球の中で最も豊富に存在するペルオキシダーゼ酵素です。それは好中球のアズール顆粒に格納されたリソソーム蛋白質である。 MPOは、膿や粘液のいくつかの形態として、好中球の豊富な分泌物で、その緑の色を、引き起こすヘム色素を持っています。 </li><li>臓器や血流中の細菌負荷、ミリリットル当たりコロニー形成単位の数として測定する。 </li></ol> 3。代表的な結果 CLPの手順は、最初にC57BL / 6マウスの系統で実施した。我々は図1と図2に示すように針のライゲーションと厚さの長さを変えることによって敗血症の重症度を調節するためにいくつかのパラメータをテスト。これら二つの因子の中で、ライゲーションの長さは、生存率を変更するために、針の太さよりも効果的と思われる。 図1に示すように、1センチメートル以上でライゲーションの長さを増加させると≤1cmのライゲーションを有するマウスに比べて100％の死亡率の増加を引き起こす。針の太さを大きくすると、2つの穴を開けて100％（22G針を使用して）から55％（19G針を使用して）に生存率を減少させた。我々はまた、異なるマウス系統は、CLP -誘導敗血症に類似または異なる感受性を表示するかどうかを判断するためにC57BL / 6と129SvJマウスにCLPの効果を試験した。図3と同じ条件の下で、129SvJマウスは増加パーセントの死亡率で示されたC57BL / 6、より感染を受けやすくなったことを示している。 <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig1.jpg" alt="図1" /> 図1。動物の生存に盲腸の結紮の長さの効果。CLPは、盲腸結紮二つの異なる長さを使用して、C57BL / 6マウスで行われた。この単一のパラメータは、劇的に1cmの約のライゲーションの面積を有する動物の群と比較して3日未満で死亡した1cm未満長いライゲーションエリアと群の動物のすべて以来、動物の生存に影響を与えます。 （N = 8）。 <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig2.jpg" alt="図2" /> 図2。生存に対する針板厚の影響は。CLPは、19Gおよび22Gつの異なる針サイズを、使用してC57BL / 6マウスで行われた。 19G針を用いて穿孔盲腸とマウスは、55〜60パーセントの生存率を示した。彼らは最初の3-4日間は炎症の典型的な症状を経験したものの、これとは対照的に、22G針を用いて穿孔盲腸とマウスは100％の生存率を示したが、これは（n = 8）を4日後に消失した。 <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig3.jpg" alt="図3" /> 図3。二つの異なるマウス系統間で敗血症の感受性の比較。CLPモデルは、同じ条件で129SvJとC57BL / 6で行われた。評価期間の終了時に129SvJ株の生存率は、複数菌感染により誘導される炎症に高い感受性を示し、C57BL / 6系統に比べて25％低かった。 （N = 6）。

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利害の衝突は宣言されません。<br /&gt;動物実験は、ケアと実験動物の使用のための健康ガイドの国立研究所にしたがって行われ、テンプル大学で動物のケアと使用に関する委員会によって承認された。

ここでは、マウスにCLPモデルを実行する方法を詳細に示し、重症度を調節している。 敗血症の他の動物モデルと比較すると、CLPは、異なる年齢と性別のいずれかのマウス系統で行うことができます。それは比較的簡単で安価な手術です。このモデルでは、重症度のグレードは、生存の割合に直接影響を与えます。ライゲーションの長さ、針の太さとパンクの数は、CLPの?...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント</th></tr><tr><td>ケタミン</td><td> Ketaset </td><td> 0856-2013-01 </td><td></td></tr><tr><td>キシラジン</td><td> AnaSed </td><td> NADA＃139から236 </td><td></td></tr><tr><td>インスリン注射器の29G </td><td>エクセル</td><td> 26028 </td><td></td></tr><tr><td>絹縫合糸、6から0 PROLENE </td><td>エチコン</td><td> 8680G </td><td></td></tr><tr><td> 19Gと25Gニードル</td><td> BD </td><td> 305186 </td><td></td></tr><tr><td>シェーバー</td><td>一般的な供給</td><td>一般的な供給</td><td></td></tr><tr><td>赤外線加熱ランプ</td><td>一般的な供給</td><td>一般的な供給</td><td></td></tr><tr><td>ミシェルは、クリップ7mmの巻き</td><td> Roboz手術InStr関数</td><td> RS - 9270 </td><td></td></tr><tr><td>耳ループマスク</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 19-130-4181 </td><td></td></tr><tr><td>解剖はさみ</td><td> Roboz手術InStr関数</td><td> RS - 6702 </td><td></td></tr><tr><td> Betadineソリューション</td><td> VWR </td><td> 63410-992 </td><td></td></tr><tr><td>手術用鉗子</td><td> Roboz手術InStr関数</td><td> RS - 5135 </td><td></td></tr><tr><td> 70％のイソプロピルアルコールパッド</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> 22-031-350 </td><td></td></tr><tr><td>ブプレノルフィン</td><td>ベッドフォード研究所</td><td> 55390-100-10 </td><td></td></tr><tr><td>トラマドール</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> 42965 </td><td></td></tr></tbody></table>

cecal ligation puncture procedure

人間の敗血症は、ローカルホストによって含まれていることに失敗した集中的かつ大規模な感染に応答して、全身反応のセットによって特徴付けられる。現在、米国集中治療室1の死亡率のトップ10に名の間で敗血症のランク。敗血症時には重複する可能性が確立された2つの血行動態のフェーズがあります。初期段階は（亢進）マクロファージと血管透過性（低血圧につながる）、心機能に影響を及ぼし、組織の壊死や臓器不全​​で最高潮に達する代謝の変化を誘発する好中球による炎症性サイトカインや活性酸素種の大規模な生産として定義されています。その結果、死亡率の最も一般的な原因は、急性腎障害である。第2フェーズが（hypodynamic）改変された単球、抗原提示を含む抗炎症プロセスであり、リンパ球の増殖および機能とアポトーシスの増加を減少させた。免疫抑制や免疫抑うつと呼ばれるこの状態は急激にnocosomial感染し、最終的に、死のリスクを増大させる。これらの病態生理学的プロセスのメカニズムは十分に特徴付けされていません。敗血症の両方のフェーズでは不可逆的と取り返しのつかない損傷を与える可能性があるので、それは患者の免疫学的および生理学的状態を判断するために不可欠です。これは、多くの治療薬が失敗した主な理由です。敗血症のさまざまな段階で与えられた同じ薬剤は、治療またはその他の有害な場合または効果2,3がないかもしれません。さまざまなレベルで敗血症を理解するには、疾患の臨床経過を再現した適切かつ包括的な動物モデルを持つことが重要です。敗血症時に発生する病態生理学的メカニズムを特徴づけるし、潜在的な治療薬をテストするためのモデルの条件を制御することが重要です。 人間の敗血症の研究者の病因を研究するために別の動物モデルを開発しました。最も広く使用されている臨床モデルでは、盲腸結紮穿刺（CLP）です。 CLPモデルでは、腹腔内に糞便材料のリリースでは、複数菌感染により誘導される悪化免疫応答を生成できるように盲腸の穿孔から構成されています。このモデルは、臨床的に関連している人間の条件を満たしています。人間のように、流体蘇生でCLPを受けるマウスは、時間に秒（後期）hypodynamic段階に進行する最初（初期）亢進相を示す。さらに、サイトカインプロフィールは、リンパ球アポトーシスを（4,5でレビューさ）が増大されている場所、人間の敗血症で見られるものと似ています。敗血症に関与し、複数のと重複するメカニズムにより、研究者が一貫して再現性のある結果を得るために制御された重篤度の適切な敗血症モデルを必要としています。

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Cecal Ligation Puncture Procedure

人間の敗血症の研究のための貴重なツールとして、盲腸結紮穿刺のマウスモデル。

盲腸結紮穿刺手順

Human sepsis is characterized by a set of systemic reactions in response to intensive and massive infection that failed to be locally contained by the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

54.6K ビュー.  Temple University. 人間の敗血症の研究のための貴重なツールとして、盲腸結紮穿刺のマウスモデル。

ビデオ: Cecal Ligation Puncture Procedure

The C-seal: A Biofragmentable Drain Protecting the Stapled Colorectal Anastomosis from Leakage

Colorectal anastomotic leakage (AL) is a serious complication in colorectal surgery leading to high morbidity and mortality rates1. The incidence of AL varies between 2.5 and 20% 2-5. Over the years, many strategies aimed at lowering the incidence of anastomotic leakage have been examined6, 7. 
The cause of AL is probably multifactorial. Etiological factors include insufficient arterial blood supply, tension on the anastomosis, hematoma and/or infection at the anastomotic site, and co-morbid factors of the patient as diabetes and atherosclerosis8. Furthermore, some anastomoses may be insufficient from the start due to technical failure.
Currently a new device is developed in our institute aimed at protecting the colorectal anastomosis and lowering the incidence of AL. This so called C-seal is a biofragmentable drain, which is stapled to the anastomosis with the circular stapler. It covers the luminal side of the colorectal anastomosis thereby preventing leakage.
The C-seal is a thin-walled tube-like drain, with an approximate diameter of 4 cm and an approximate length of 25 cm (figure 1). It is a tubular device composed of biodegradable polyurethane. Two flaps with adhesive tape are found at one end of the tube. These flaps are used to attach the C-seal to the anvil of the circular stapler, so that after the anastomosis is made the C-seal can be pulled through the anus. The C-seal remains in situ for at least 10 days. Thereafter it will lose strength and will degrade to be secreted from the body together with the gastrointestinal natural contents.
The C-seal does not prevent the formation of dehiscences. However, it prevents extravasation of faeces into the peritoneal cavity. This means that a gap at the anastomotic site does not lead to leakage.
Currently, a phase II study testing the C-seal in 35 patients undergoing (colo-)rectal resection with stapled anastomosis is recruiting. The C-seal can be used in both open procedures as well as laparoscopic procedures. The C-seal is only applied in stapled anastomoses within 15cm from the anal verge. In the video, application of the C-seal is shown in an open extended sigmoid resection in a patient suffering from diverticular disease with a stenotic colon.

The C-seal is a biofragmentable drain protecting the stapled colorectal anastomosis. In this video, details of the manufacturing, deployment and use are shown.

C -シール：漏れから結腸直腸器械吻合を保護Biofragmentableドレイン

Colorectal anastomotic leakage (AL) is a serious complication in colorectal surgery leading to high morbidity and mortality rates1. The incidence of AL ...

医学

Cecal Ligation and Puncture-induced Sepsis as a Model To Study Autophagy in Mice

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is provided to induce sepsis of varying severity in mice using the CLP technique. Autophagy is a fundamental tissue response to stress and pathogen invasion. Two current protocols to assess autophagy in vivo in the context of experimental sepsis are also presented here. (I) Transgenic mice expressing green fluorescence protein (GFP)-LC3 fusion protein are subjected to CLP. Localized enhancement of GFP signal (puncta), as assayed either by immunohistochemical or confocal assays, can be used to detect enhanced autophagosome formation and, thus, altered activation of the autophagy pathway. (II) Enhanced autophagic vacuole (autophagosome) formation per unit tissue area (as a marker of autophagy stimulation) can be quantified using electron microscopy. The study of autophagic responses to sepsis is a critical component of understanding the mechanisms by which tissues respond to infection. Research findings in this area may ultimately contribute towards understanding the pathogenesis of sepsis, which represents a major problem in critical care medicine.

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method. Current protocols to assess autophagy in vivo in the context of CLP-induced sepsis are presented here: A protocol for measuring autophagy using (GFP)-LC3 mice, and a protocol for measuring autophagosome formation by electron microscopy.

マウスにおけるオートファジーを研究するためのモデルとして、盲腸結紮穿刺誘発性敗血症

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is ...

免疫・感染学

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the outside world. As such, the intestine plays a pivotal role in immunosurveillance and protection from enteric pathogens. Investigating intestinal physiology and immunology commonly employs 'intestinal loops' as an experimental model. The majority of these loop models are non-recovery surgical procedures that study short-term (&lt;24 hr) changes in the intestine (1-3). We previously created a recovery intestinal loop model to specifically measure long-term (&lt;6 mo) immunological changes in the intestine of sheep following exposure to vaccines, adjuvants, and viruses (4). This procedure localized treatments to a specific 'loop', allowing us to sample this area of the intestine. A significant drawback of this method is the single window of opportunity to administer treatments (i.e. at the time of surgery). Furthermore, samples of both the intestinal mucosa and luminal contents can only be taken at the termination of the project. Other salient limitations of the above model are that the surgical manipulation and requisite post-operative measures (e.g. administration of antibiotics and analgesics) can directly affect the treatment itself and/or alter immune function, thereby confounding results. Therefore, we modified our intestinal loop model by inserting long-term catheters into the loops. Sheep recover fully from the procedure, and are unaffected by the exteriorized catheters. Notably, the establishment of catheters in loops allows us to introduce multiple treatments over an extended interval, following recovery from surgery and clearance of drugs administered during surgery and the post-operative period.

We describe a novel surgical method for catheterizing 'intestinal loops' within the ileum of sheep. Once animals have recovered from surgery and have cleared antibiotics and analgesics, multiple treatments can be deposited directly in loops via the catheters.

反芻動物の腸ループのカテーテル

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

生物学

Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal (central) efferent lymph. Importantly, the collection of central lymph from the intestine enables researchers to study both the mechanisms and lipid constitutes associated with lipid metabolism, intestinal inflammation and cancer metastasis, as well as cells involved in immune function and immunosurveillance. A ventral mid-line surgical approach permits excellent surgical exposure to the cranial abdomen and relatively easy access to the intestinal lymph trunk vessel that lies near the pancreas and the right ventral segment of the portal vein underneath the visceral aspect of the right liver lobe. The vessel is meticulously dissected and released from the surrounding fascia and then dilated with sutures allowing for insertion and subsequent securing of the catheter into the vessel. The catheter is exteriorized and approximately 1 L/24 hr of lymph is collected over a 7 day period. While this technique enables the collection of large quantities of central lymph over an extended period of time, the success depends on careful surgical dissection, tissue handling and close attention to proper surgical technique. This is particularly important with surgeries in young animals as the lymph vessels can easily tear, potentially leading to surgical and experimental failure. The video demonstrates an excellent surgical technique for the collection of intestinal lymph.

We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

新生豚のリンパ節の腸リンパトランクやコレクションの長期カテーテル法

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple organs. With the development of therapies, most patients survive the hyperinflammatory phase but progress to an immunosuppressive phase, which increases the emergence of secondary infections. Therefore, improved understanding of the pathogenesis underlying secondary hospital-acquired infections in the immunosuppressive phase during sepsis is of tremendous importance. Reported here is a model to test infectious outcomes by creating double-hit infections in mice. A standard surgical procedure is used to induce polymicrobial peritonitis by cecal ligation and puncture (CLP) and followed by intranasal infection of Staphylococcus aureus to simulate pneumonia occurring in immune suppression that is frequently seen in septic patients. This dual model can reflect the immunosuppressive state occurring in patients with protracted sepsis and susceptibility to secondary infection from nosocomial pneumonia. Hence, this model provides a simple experimental approach to investigate the pathophysiology of sepsis-induced secondary bacterial pneumonia, which may be used for discovering novel treatments for sepsis and its complications.

This protocol describes techniques to measure infectious outcomes underlying secondary hospital-acquired infections in the immunosuppressive condition, first by establishing cecal ligation/puncture mice then challenging them with intranasal infection to create a clinically relevant model of immunosuppression sepsis.

敗血症誘発免疫抑制のセカルライゲーションと穿刺および鼻腔感染の二重モデルの設計

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple ...

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as coccidiosis and diet, with gavage or administration via the feed using Clostridium perfringens. In these models, the comparison of multiple C. perfringens strains for virulence studies requires a large number of hosts to obtain significant results. Mortality during the course of the study can be high depending on the experimental model, hence raising ethical concerns regarding animal welfare in research. The development of new infection models requiring fewer animals to study pathogenesis, yet providing statistically significant and valid results, is important in reducing animal use in research. Intestinal ligated loop models have been used to study clostridial infections in various species such as mice, rabbits and calves. Following surgical procedures to create ligated loop segments, C. perfringens strains are injected directly into the loops to establish a close contact between the bacteria and the intestinal mucosa. Samples of the small intestine and luminal contents are taken at the termination of the procedures after a few hours. Multiple bacterial strains can be inoculated in each animal, hence reducing the number of required subjects in the experiments. Also, procedures are performed under general anesthesia to reduce animal pain. In chickens, this model would be more appropriate than oral administration to compare C. perfringens strain pathogenicity because fewer animals are needed, no predisposing factors are required to induce the disease, and pain is controlled by analgesics. The intestinal ligated loop model is poorly described in chickens and standardization is essential for its optimal use. This manuscript provides all the necessary steps to create numerous intestinal ligated loops in chickens and brings information on the critical points to obtain valid results.

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Here we present a protocol to surgically create &#39;intestinal ligated loops&#39; in chicken small intestines. This procedure allows for the comparison of multiple Clostridium perfringens strains&#39; virulence in situ in a single host. This method markedly decreases the number of chickens usually necessary for similar in vivo experiments.

ウェルシュ病原性を研究する麻酔特定病原体フリー鶏における腸管結紮ループ モデル

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity is disturbed in gastrointestinal, cardiovascular and metabolic diseases, which may result in easier access of biologically active compounds, such as gut bacterial metabolites, to the bloodstream. Thus, the permeability of the GBB may be a marker of both intestinal and extraintestinal diseases. Furthermore, the increased penetration of bacterial metabolites may affect the functioning of the entire organism.
Commonly used methods for studying the GBB permeability are performed ex vivo. The accuracy of those methods is limited, because the functioning of the GBB depends on intestinal blood flow. On the other hand, commonly used in vivo methods may be biased by liver and kidney performance, as those methods are based on evaluation of urine or/and peripheral blood concentrations of exogenous markers. Here, we present a direct measurement of GBB permeability in rats using an in vivo method based on portal blood sampling, which preserves intestinal blood flow and is virtually not affected by the liver and kidney function. 
Polyurethane catheters are inserted into the portal vein and inferior vena cava just above the hepatic veins confluence. Blood is sampled at baseline and after administration of a selected marker into a desired part of the gastrointestinal tract. Here, we present several applications of the method including (1) evaluation of the colon permeability to TMA, a gut bacterial metabolite, (2) evaluation of liver clearance of TMA, and (3) evaluation of a gut-portal blood-liver-peripheral blood pathway of gut bacteria-derived short-chain fatty acids. Furthermore, the protocol may also be used for tracking intestinal absorption and liver metabolism of drugs or for measurements of portal blood pressure.

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

The access of nutrients, microbiota metabolites and medicines to the circulation is controlled by the gut-blood barrier (GBB). We describe a direct method for measuring the GBB permeability in vivo, which, in contrast to commonly used indirect methods, is virtually not affected by liver and kidney functions.

腸血液関門と微生物叢製品の肝代謝を評価するためのIn Vivo法

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

Evaluation of a Reliable Biomarker in a Cecal Ligation and Puncture-Induced Mouse Model of Sepsis

Sepsis is a severe life-threatening and rapidly developing disease that causes millions of deaths annually worldwide. Researchers have made tremendous efforts to elucidate the pathophysiology of sepsis using various animal models; the mouse model of sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP) is widely used in laboratories. The three technical aspects that affect the severity and replicability of the CLP model are the percentage of cecum ligated, the size of the needle used for cecal puncture, and the volume of feces squeezed into the abdominal cavity. The rapid and specific diagnosis of sepsis is a crucial factor that affects the outcome. The gold standard for sepsis diagnosis is microbial culture; however, this process is time-consuming and sometimes inaccurate. The detection of sepsis-specific biomarkers is fast, but the existing biomarkers are unsatisfactory due to a short half-life, non-specificity, and insufficient sensitivity. Therefore, there is an urgent need for a reliable biomarker of sepsis in the early stages. Previous publications suggest that excessive neutrophil extracellular traps (NETs) occur in sepsis. Citrullinated histone H3 (CitH3), as a NET component, is elevated both in septic animals and patients, and the presence of CitH3 is a reliable diagnostic biomarker of sepsis. The present study aimed to describe a standardized mouse model of CLP-induced sepsis and establish a reliable blood biomarker of sepsis. Our work may contribute to the early and accurate diagnosis of sepsis in the future.

This protocol presents the operative details of cecal ligation and puncture (CLP) in a mouse model of sepsis. CLP is one of the most widely used techniques to create an animal model of sepsis. Therefore, a standardized CLP protocol is required for the attainment of reliable research results.

敗血症の盲腸結紮および穿刺誘発マウスモデルにおける信頼性の高いバイオマーカーの評価

Sepsis is a severe life-threatening and rapidly developing disease that causes millions of deaths annually worldwide. Researchers have made tremendous ...

Laparoscopic Non-Mesh Cerclage Pectopexy for Pelvic Organ Prolapse

Pelvic organ prolapse (POP) is widespread among the female population and significantly impairs the patient's quality of life. It is important to restore apical support for treating POP. Sacrocolpopexy and pectopexy are indicated for apical prolapse. Using a synthetic mesh in these techniques increases success by enhancing apical support. However, the implantation of synthetic mesh is associated with mesh-related complications. In addition, the exorbitant cost of synthetic mesh and lack of universal access limit the popularity of these procedures. The current study develops a unique technique known as laparoscopic non-mesh cerclage pectopexy (LNMCP), in which permanent cervical cerclage sutures are embedded in the round ligament until the iliopectineal ligament. The iliopectineal ligament was sutured, resulting in a firm cervical suspension. The procedure was successfully performed in 16 cases in the hospital. The surgical duration was 67.8 min &plusmn; 15.5 min, and the blood loss was 73.1 mL &plusmn; 51.1 mL. No procedural complications were seen. LNMCP is associated with an objective success rate of 100% and a subjective success rate of 93.8%. LNMCP for patients with apical prolapse obviates the need for a mesh, thereby avoiding complications associated with mesh erosion and reducing medical costs. In addition, it is easy to perform even in resource-poor areas without access to synthetic mesh.

The present pilot study describes the development of laparoscopic non-mesh cerclage pectopexy to treat pelvic organ prolapse. The procedure can be used to prevent any complications associated with the use of mesh.

骨盤臓器脱のための腹腔鏡下非メッシュ子宮頸管胸部固定術

Pelvic organ prolapse (POP) is widespread among the female population and significantly impairs the patient's quality of life. It is important to restore ...

Surgical Technique for Lumbar Spinal Catheter Insertion in Pigs Enabling Continuous Access to the Thecal Sac in a Terminal Setup

Pigs are increasingly used as a large animal model for pharmacologic CNS research due to the anatomical and physiological similarities between the porcine and human central nervous systems (CNS). However, accessing the cerebrospinal fluid (CSF) in larger pig breeds by conventional lumbar puncture techniques can be challenging due to an oblique orientation of the spinal spinous processes and a limited interlaminar space. Accordingly, an open surgical procedure for inserting a lumbar spinal catheter for continuous CSF sampling at the L4/L5 level in pigs is thoroughly described in this work. After positioning the pig and identifying the anatomical landmarks, a dorsal midline surgical incision is made to expose the spinous processes. By advancing the introducer needle, the spinal catheter is inserted inside the thecal sac of the spinal canal while leaving the bone structures of the spine intact. This method allows continuous infusion into or sampling from the porcine thecal sac with minimal bleeding or CSF leakage. The procedure is simple, time-efficient, and reproducible across different experimental setups, offering significant potential for various pre-clinical studies, including pharmacokinetic research, surgical training, and spinal cord injury models.

We present a technique for inserting a lumbar spinal catheter at the L4-L5 level in a 3-month-old Danish Landrace pig as part of a terminal research protocol, enabling continuous infusion or CSF sampling from the thecal sac.

ピグの腰椎カテーテル挿入のための外科的技術により、ターミナルセットアップで髄腔嚢への継続的なアクセスが可能

Pigs are increasingly used as a large animal model for pharmacologic CNS research due to the anatomical and physiological similarities between the porcine ...

盲腸結紮穿刺手順

要約

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C -シール：漏れから結腸直腸器械吻合を保護Biofragmentableドレイン

マウスにおけるオートファジーを研究するためのモデルとして、盲腸結紮穿刺誘発性敗血症

反芻動物の腸ループのカテーテル

新生豚のリンパ節の腸リンパトランクやコレクションの長期カテーテル法

敗血症誘発免疫抑制のセカルライゲーションと穿刺および鼻腔感染の二重モデルの設計

ウェルシュ病原性を研究する麻酔特定病原体フリー鶏における腸管結紮ループモデル

腸血液関門と微生物叢製品の肝代謝を評価するためのIn Vivo法

敗血症の盲腸結紮および穿刺誘発マウスモデルにおける信頼性の高いバイオマーカーの評価

骨盤臓器脱のための腹腔鏡下非メッシュ子宮頸管胸部固定術

ピグの腰椎カテーテル挿入のための外科的技術により、ターミナルセットアップで髄腔嚢への継続的なアクセスが可能

盲腸結紮穿刺手順

要約

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敗血症誘発免疫抑制のセカルライゲーションと穿刺および鼻腔感染の二重モデルの設計

ウェルシュ病原性を研究する麻酔特定病原体フリー鶏における腸管結紮ループ モデル

腸血液関門と微生物叢製品の肝代謝を評価するためのIn Vivo法

敗血症の盲腸結紮および穿刺誘発マウスモデルにおける信頼性の高いバイオマーカーの評価

骨盤臓器脱のための腹腔鏡下非メッシュ子宮頸管胸部固定術

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ウェルシュ病原性を研究する麻酔特定病原体フリー鶏における腸管結紮ループモデル