Ce travail a été soutenu par une subvention de la Pennsylvania Department of Health. Le Dr Miguel Garcia Toscano a été boursier postdoctoral à l&#39;Université Temple, financé par la Fondation Alfonso Martin Escudero cours de cette étude. Nous tenons à remercier Iliya Yordanov et Kotredes Kevin pour la réalisation de la vidéo.

1. La ligature du cæcum et de la perforation comme un modèle de souris pour sepsis humain Pour cette procédure de C57BL / 6 souris (7-9 semaines) sont utilisés. <ol><li> Anesthésier la souris par l&#39;injection intrapéritonéale d&#39;une solution de 01h01 kétamine (75mg/kg) et de xylazine (15mg/kg). Comme référence, injecter 30 ul de la solution de 01h01 dans une souris pesant 20 grammes. Alternativement, les souris peuvent être anesthésiés à l&#39;isoflurane inhalées en utilisant un vaporisateur anesthésique. </li><li> Rasage de l&#39;abdomen de la souris et désinfecter région en solution de bétadine appliquant d&#39;abord suivi en essuyant avec un alcool à 70% écouvillon (numéro 1 dans la séquence d&#39;images ci-dessous). La chlorhexidine peut être utilisé comme un antiseptique alternative. En option: un champ stérile peut être utilisée pour maintenir les lieux propres. </li><li> Dans des conditions aseptiques, la pratique de 1 à 2 cm laparotomie médiane et exposer le caecum avec l&#39;intestin attenante (2 et 3). </li><li> Le cæcum est étroitement lié avec une suture de soie 6.0 (6-0 PROLENE, 8680G, Ethicon) à sa base en dessous de la valvule iléo-caecale, et est perforée une ou deux fois avec une aiguille de calibre 19 (4 et 5) sur le même côté du caecum. S&#39;il vous plaît noter que la longueur du cæcum ligaturé définie comme la distance de l&#39;extrémité distale du caecum au point la ligature va déterminer le degré de sévérité. Une distance de&gt; 1 cm produit de haute qualité tout en septicémie une distance de ≤ 1 cm produit une septicémie de grade moyen à faible. A noter également que selon la méthode de perforation cæcale montré ici est différente de la norme à travers et grâce à la technique de ponction (introduction d&#39;une aiguille à travers le cæcum). Les deux méthodes produisent de façon fiable le résultat septicémie mêmes. Cependant, un inconvénient de la technique à travers et grâce, c&#39;est qu&#39;elle ne facilite pas le contrôle de la quantité de matières fécales extrudé lorsque le caecum est pressé. </li><li> Le caecum est ensuite délicatement pressés d&#39;extruder une petite quantité de matières fécales provenant des sites de perforation (6). Le caecum est retourné à la cavité péritonéale et le péritoine est fermée avec 6,0 points de suture en soie. (7). </li><li> La peau est fermée avec Reflex clips 7mm (RS-9258, Instruments Roboz chirurgicale) ou des clips plaies Michel (7 mm, RS-9270) (8). </li><li> Réanimer les souris par l&#39;injection sous-cutanée de 1 ml de pré-chauffé solution saline à 0,9% en utilisant une aiguille 25G. Cette mesure sera la réanimation liquidienne induire la phase hyperdynamique du sepsis. Cette étape cruciale est décrite dans la section discussion. </li><li> En option: Injecter par voie sous cutanée buprénorphine (0,05 mg / kg de poids corporel) ou de tramadol (20mg/kg de poids corporel) pour l&#39;analgésie post-opératoire. Soyez avisé que ces opiacés peut supprimer la respiration et la locomotion et ces effets peuvent être interprétés comme des signes de sepsis. </li><li> Les animaux sont placés temporairement sur un coussin chauffant ou bien retourné immédiatement à une cage à l&#39;exposition à une lampe chauffante infrarouge de 150W jusqu&#39;à ce qu&#39;ils se remettre de l&#39;anesthésie. Le temps de récupération est de 30 min à 1 heure. </li><li> Fournir un accès libre à la nourriture et d&#39;eau (hydrogel) placé sur le fond de la cage. </li><li> Les souris sont surveillés toutes les 12 heures pour la survie d&#39;une à deux semaines ou euthanasiés à différents temps de l&#39;analyse des différents paramètres. </li></ol> Comme le contrôle de la conception expérimentale, des animaux simulacre suivrait la technique laparotomie sans ligature et la ponction. Six à 12 heures après l&#39;intervention chirurgicale sera souris deviennent léthargiques et développent une fièvre, horripilation, des diarrhées, se blottir, et malaise; tous les symptômes de la septicémie. Souris atteints de sepsis sévère peut à peine bouger avant son décès et présentent une diminution spectaculaire de la température du corps. Lors de cette étape souris devrait être euthanasié pour éviter la douleur et la souffrance prolongée. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig0.jpg" alt="Figure 0" /> 2. La plupart des communes paramètres analysés Pour évaluer le résultat de la procédure, différents paramètres peuvent être analysés dans les organes, des extraits cellulaires ou des fluides corporels. Les échantillons peuvent être prélevés à différents temps de 3 heures à une semaine après l&#39;intervention chirurgicale. <ol><li> La survie des souris. </li><li> Cytokines et de chimiokines dans le sérum, la cavité péritonéale et extraits d&#39;organes. <ol><li> L&#39;interleukine-6: produits et libérés par les monocytes, cellules dendritiques, les macrophages, les lymphocytes B, les lymphocytes T, les granulocytes, les mastocytes et les types de cellules beaucoup plus. Elle joue un rôle important dans la réaction de phase aiguë et l&#39;inflammation. </li><li> Facteur de nécrose tumorale-α: cytokine Pleiotrophic qui joue un rôle central dans l&#39;inflammation et l&#39;apoptose. Produit par les monocytes, les macrophages, les neutrophiles, les cellules dendritiques et les fibroblastes. </li><li> nterleukin-1β: Produit par les monocytes, les cellules NK, cellules dendritiques, cellules B et les lymphocytes T. Induit la fièvre aiguë et la synthèse des protéines de phase. </li><li> L&#39;interleukine 10: Favorise l&#39;absorption phagocytaire et réponses Th2 mais supprime antigPrésentation de bains et réponses Th1 pro-inflammatoire. </li><li> L&#39;interleukine 10: Favorise l&#39;absorption phagocytaire et réponses Th2 mais supprime la présentation des antigènes et des réponses Th1 pro-inflammatoire. </li><li> Monocyte chimiotactiques protein-1 (aussi connu comme CCL2): Recrues monocytes, les cellules T mémoire, et les cellules dendritiques vers les sites des lésions tissulaires et l&#39;infection. </li><li> KC (CXCL1): Produit par les macrophages et les cellules endothéliales. Souris KC est un attractant des neutrophiles puissant et activateur. </li><li> RANTES: Un chimiotactique des monocytes. Il peut chemoattract CD4 + stimulées / CD45RO + cellules T CD4 mémoire et stimulé + et CD8 + T avec ai na et les phénotypes de la mémoire. </li><li> L&#39;interféron γ-: Sécrétée par les cellules Th1, les cellules T cytotoxiques, les cellules dendritiques et les tueuses naturelles (cellules NK). Augmente la présentation des antigènes et de l&#39;activité lytique dans les macrophages et supprime l&#39;activité des cellules Th2. Favorise l&#39;adhérence et contraignant requis pour la migration des leucocytes et favorise l&#39;activité des cellules NK. </li><li> Haute-mobilité du groupe B-1 protéine: Dans les monocytes est un facteur nucléaire kappa B activateur en se liant au récepteur cellulaire pour les produits de l&#39;avance de glycation (RAGE), en activant la libération de médiateurs pro-inflammatoires dans la phase tardive de la septicémie. </li></ol></li><li> La détermination myéloperoxydase dans les organes comme une mesure de l&#39;infiltration de neutrophiles. Myéloperoxydase (MPO) est une enzyme peroxydase plus abondamment présentes dans les granulocytes neutrophiles. Elle est une protéine lysosomale stockées dans les granules azurophiles des neutrophiles. MPO a un pigment héminique, ce qui provoque sa couleur verte dans les sécrétions riches en neutrophiles, comme le pus et certaines formes de mucus. </li><li> Les bactéries de charge dans les organes et la circulation sanguine, mesure que le nombre d&#39;unités formant colonie par millilitre. </li></ol> 3. Les résultats représentatifs La procédure a été initialement réalisée CLP dans la souche de souris C57BL / 6. Nous avons testé plusieurs paramètres afin de moduler la sévérité du sepsis en modifiant la longueur de la ligature et l&#39;épaisseur de l&#39;aiguille, comme indiqué dans les figures 1 et 2. Parmi ces deux facteurs, la longueur de la ligature semble être plus efficace que l&#39;épaisseur de l&#39;aiguille d&#39;altérer la survie pour cent. Comme le montre la figure 1, l&#39;augmentation de la longueur de la ligature par plus de 1 cm provoque une augmentation de la mortalité de 100% par rapport à des souris ayant une ligature de ≤ 1 cm. L&#39;augmentation de l&#39;épaisseur de l&#39;aiguille a aussi diminué la survie de 100% pour cent (à l&#39;aide d&#39;une aiguille 22G) à 55% (en utilisant une aiguille 19G) avec deux crevaisons. Nous avons également testé l&#39;effet de la CLP sur C57BL / 6 et 129SvJ souris pour déterminer si des souches de souris différentes affichage susceptibilité semblables ou distincts pour CLP-induite septicémie. La figure 3 montre que dans les mêmes conditions, les souris 129SvJ étaient plus sensibles aux infections que les souris C57BL / 6, indiqué par un pour cent de mortalité accru. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig1.jpg" alt="Figure 1" /> Figure 1. Effet de la longueur ligature du cæcum dans la survie des animaux. CLP a été réalisée en souris C57BL / 6 en utilisant deux longueurs différentes de la ligature du cæcum. Ce seul paramètre affecte considérablement la survie des animaux puisque tous les animaux dans le groupe avec une zone de ligature plus de 1 cm est mort en moins de 3 jours en comparaison avec un groupe d&#39;animaux ayant une superficie de 1 ligature cm env. (N = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig2.jpg" alt="Figure 2" /> Figure 2. Influence de la grosseur de l&#39;aiguille sur la survie. CLP a été réalisée en souris C57BL / 6 avec deux tailles d&#39;aiguilles différentes, 19G et 22G. Les souris dont le caecum perforés à l&#39;aide d&#39;une aiguille 19G a montré une survie de 55-60%. En revanche, les souris avec le caecum perforés à l&#39;aide d&#39;une aiguille 22G montré survie de 100% alors qu&#39;ils présentaient des symptômes typiques d&#39;une inflammation au cours des 3-4 premiers jours, ce qui a disparu après 4 jours (n = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig3.jpg" alt="Figure 3" /> Figure 3. Comparaison de la sensibilité septicémie entre deux souches de souris différentes. Le modèle CLP a été réalisée en 129SvJ et C57BL / 6 dans les mêmes conditions. A la fin de la période d&#39;évaluation de la survie pour cent de la souche 129SvJ était de 25% de moins que dans la souche C57BL / 6, indiquant une plus grande susceptibilité à l&#39;inflammation induite par l&#39;infection polymicrobienne. (N = 6).

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Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.<br /Les expérimentations animales&gt; ont été effectuées en conformité avec l&#39;Institut National de Guide de santé pour les soins et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire, et approuvé par le comité de soins des animaux et l&#39;utilisation à l&#39;Université Temple.

Ici, nous montrons en détail comment effectuer le modèle CLP chez la souris et de moduler le degré de gravité. Comparé à d&#39;autres modèles animaux de sepsis, CLP peut être effectuée dans n&#39;importe quelle souche de souris d&#39;âge et de sexe différents. C&#39;est une procédure relativement simple et peu coûteux de chirurgie. Dans ce modèle, le grade de sévérité a un impact direct sur le pourcentage de survie. La longueur de la ligature, l&#39;épaisseur de l&#39;aigui...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires </th></tr><tr><td> La kétamine </td><td> Ketaset </td><td> 0856-2013-01 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> AnaSed </td><td> NADA # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> 29G seringue à insuline </td><td> Exel </td><td> 26028 </td><td></td></tr><tr><td> Soie de suture, 6-0 PROLENE </td><td> Ethicon </td><td> 8680G </td><td></td></tr><tr><td> Aiguille 19G et 25G </td><td> BD </td><td> 305186 </td><td></td></tr><tr><td> Rasoir </td><td> Approvisionnement général </td><td> Approvisionnement général </td><td></td></tr><tr><td> Lampe chauffante infrarouge </td><td> Approvisionnement général </td><td> Approvisionnement général </td><td></td></tr><tr><td> Michel plaies clips 7mm </td><td> Roboz Surgical Instruments </td><td> RS-9270 </td><td></td></tr><tr><td> Oreille Boucle Masque </td><td> Fisher Scientific </td><td> 19-130-4181 </td><td></td></tr><tr><td> Ciseaux de dissection </td><td> Roboz Surgical Instruments </td><td> RS-6702 </td><td></td></tr><tr><td> Solution de Betadine </td><td> VWR </td><td> 63410-992 </td><td></td></tr><tr><td> Pinces chirurgicales </td><td> Roboz Surgical Instruments </td><td> RS-5135 </td><td></td></tr><tr><td> 70% pad alcool isopropylique </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-031-350 </td><td></td></tr><tr><td> La buprénorphine </td><td> Labs Bedford </td><td> 55390-100-10 </td><td></td></tr><tr><td> Le tramadol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 42965 </td><td></td></tr></tbody></table>

cecal ligation puncture procedure

Sepsis humain est caractérisé par un ensemble de réactions systémiques en réponse à l&#39;infection intensive et massive qui a échoué à être contenues localement par l&#39;hôte. Actuellement, les rangs septicémie parmi les dix premières causes de mortalité dans les unités de soins intensifs de l&#39;USA 1. Au cours du sepsis, il ya deux phases établies hémodynamiques qui peuvent se chevaucher. La phase initiale (hyperdynamique) est défini comme une production massive de cytokines pro-inflammatoires et des espèces réactives de l&#39;oxygène par les macrophages et les neutrophiles qui affecte la perméabilité vasculaire (conduisant à une hypotension), la fonction cardiaque et induit des changements métaboliques aboutissant à une nécrose des tissus et de défaillance d&#39;un organe. En conséquence, la cause la plus fréquente de mortalité est lésions rénales aiguës. La deuxième phase (hypodynamique) est un processus anti-inflammatoire impliquant modifié la présentation des antigènes de monocytes, une diminution de la prolifération des lymphocytes et la fonction et l&#39;apoptose accrue. Cet état connu comme une immunosuppression ou immunodépression augmente fortement le risque d&#39;infections nosocomiales et, finalement, la mort. Les mécanismes de ces processus physiopathologiques ne sont pas bien caractérisés. Parce que les deux phases du sepsis peut causer des dommages irréversibles et irréparables, il est essentiel de déterminer le statut immunologique et physiologique du patient. C&#39;est la principale raison pour laquelle de nombreux médicaments ont échoué. Le même médicament donné à différents stades du sepsis peut être thérapeutique ou autrement nuisibles ou n&#39;ont pas d&#39;effet 2,3. Pour comprendre la septicémie à différents niveaux, il est crucial d&#39;avoir un modèle animal approprié et complet qui reproduit l&#39;évolution clinique de la maladie. Il est important de caractériser les mécanismes physiopathologiques survenant au cours de la septicémie et contrôler les conditions de modèle pour tester des agents thérapeutiques potentiels. Pour étudier l&#39;étiologie de chercheurs sepsis humain ont développé différents modèles animaux. Le modèle le plus largement utilisé est la ligature du cæcum cliniques et la ponction (CLP). Le modèle CLP compose de la perforation du cæcum permettant la libération de matières fécales dans la cavité péritonéale pour générer une réponse immunitaire induite par exacerbé infection polymicrobienne. Ce modèle répond à la condition humaine qui est cliniquement pertinent. Comme chez les humains, les souris qui subissent CLP avec la réanimation liquidienne montrent les premiers (premières) phase hyperdynamique que le temps progresse à la deuxième (en retard) de phase hypodynamique. En outre, le profil des cytokines est similaire à celle observée dans le sepsis humain où il ya une augmentation apoptose des lymphocytes (examiné en 4,5). Grâce à des mécanismes multiples et se chevauchent impliqués dans le sepsis, les chercheurs ont besoin d&#39;un modèle de septicémie convient de gravité contrôlé afin d&#39;obtenir des résultats cohérents et reproductibles.

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Cecal Ligation Puncture Procedure

Le modèle murin de la ligature et ponction du caecum comme un outil précieux pour l&#39;étude du sepsis humain.

Caecale procédure Crevaison ligature

Human sepsis is characterized by a set of systemic reactions in response to intensive and massive infection that failed to be locally contained by the ...

Research

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Medicine

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Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo. With the advent of genetic modifications to the whole organism or the myocardium and an array of biological and/or synthetic materials, there is great potential for any combination of these to assuage the extent of acute ischemic injury and impede the onset of heart failure pursuant to myocardial remodeling. 
Here we present the methods and materials used to reliably perform this microsurgery and the modifications involved for temporary (with reperfusion) or permanent coronary artery occlusion studies as well as intramyocardial injections. The effects on the heart that can be seen during the procedure and at the termination of the experiment in addition to histological evaluation will verify efficacy. 
Briefly, surgical preparation involves anesthetizing the mice, removing the fur on the chest, and then disinfecting the surgical area. Intratracheal intubation is achieved by transesophageal illumination using a fiber optic light. The tubing is then connected to a ventilator. An incision made on the chest exposes the pectoral muscles which will be cut to view the ribs. For ischemia/reperfusion studies, a 1 cm piece of PE tubing placed over the heart is used to tie the ligature to so that occlusion/reperfusion can be customized. For intramyocardial injections, a Hamilton syringe with sterile 30gauge beveled needle is used. When the myocardial manipulations are complete, the rib cage, the pectoral muscles, and the skin are closed sequentially. Line block analgesia is effected by 0.25% marcaine in sterile saline which is applied to muscle layer prior to closure of the skin. The mice are given a subcutaneous injection of saline and placed in a warming chamber until they are sternally recumbent. They are then returned to the vivarium and housed under standard conditions until the time of tissue collection. At the time of sacrifice, the mice are anesthetized, the heart is arrested in diastole with KCl or BDM, rinsed with saline, and immersed in fixative. Subsequently, routine procedures for processing, embedding, sectioning, and histological staining are performed. 
Nonsurgical intubation of a mouse and the microsurgical manipulations described make this a technically challenging model to learn and achieve reproducibility. These procedures, combined with the difficulty in performing consistent manipulations of the ligature for timed occlusion(s) and reperfusion or intramyocardial injections, can also affect the survival rate so optimization and consistency are critical.

Numerous genetic manipulations and/or intramyocardial injections of genes, proteins, cells, and/or biomaterials are superimposed upon the dimension of time in studies of acute ischemia/ reperfusion injury and chronic remodeling in mice. This video illustrates the microsurgical procedures for ischemia/reperfusion, permanent coronary artery ligation, and intramyocardial injection studies.

Ligature de l&#39;artère coronaire et injection intramyocardique dans un modèle murin d&#39;infarctus

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Recherche

Médecine

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

L&#39;application de la ligature permanente artère cérébrale moyenne chez la souris

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI we need better knowledge about pathophysiology of myocardial ischemia. This knowledge may be valuable to define new therapeutic targets for innovative cardiovascular therapies4. Experimental MI model in mice is an increasingly popular small-animal model in preclinical research in which MI is induced by means of permanent or temporary ligation of left coronary artery (LCA)5. In this video, we describe the step-by-step method of how to induce experimental MI in mice.
The animal is first anesthetized with 2% isoflurane. The unconscious mouse is then intubated and connected to a ventilator for artificial ventilation. The left chest is shaved and 1.5 cm incision along mid-axillary line is made in the skin. The left pectoralis major muscle is bluntly dissociated until the ribs are exposed. The muscle layers are pulled aside and fixed with an eyelid-retractor. After these preparations, left thoracotomy is performed between the third and fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The proximal segment of LCA artery is then ligated with a 7-0 ethilon suture which typically induces an infarct size ~40% of left ventricle. At the end, the chest is closed and the animals receive postoperative analgesia (Temgesic, 0.3 mg/50 ml, ip). The animals are kept in a warm cage until spontaneous recovery.

The surgical procedure used to induce experimental myocardial infarction in mice begins with left thoracotomy between the third and the fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The left coronary artery is ligated, the chest is closed and the mouse is allowed to recover spontaneously.

Technique de modification de ligature de l&#39;artère coronaire chez la souris

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

Bile ligature du canal chez la souris: induction de inflammatoire lésions hépatiques et les fibrose par obstructive cholestase

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Reduction of Iatrogenic Atrial Septal Defects with an Anterior and Inferior Transseptal Puncture Site when Operating the Cryoballoon Ablation Catheter

The cryoballoon catheter ablates atrial fibrillation (AF) triggers in the left atrium (LA) and pulmonary veins (PVs) via transseptal access. The typical transseptal puncture site is the fossa ovalis (FO) &#8211; the atrial septum&#8217;s thinnest section. A potentially beneficial transseptal site, for the cryoballoon, is near the inferior limbus (IL). This study examines an alternative transseptal site near the IL, which may decrease the frequency of acute iatrogenic atrial septal defect (IASD). Also, the study evaluates the acute pulmonary vein isolation (PVI) success rate utilizing the IL location. 200 patients were evaluated by retrospective chart review for acute PVI success rate with an IL transseptal site. An additional 128 IL transseptal patients were compared to 45 FO transseptal patients by performing Doppler intracardiac echocardiography (ICE) post-ablation to assess transseptal flow after removal of the transseptal sheath. After sheath removal and by Doppler ICE imaging, 42 of 128 (33%) IL transseptal patients demonstrated acute transseptal flow, while 45 of 45 (100%) FO transseptal puncture patients had acute transseptal flow. The difference in acute transseptal flow detection between FO and IL sites was statistically significant (P &#60;0.0001). Furthermore, 186 of 200 patients (with an IL transseptal puncture) did not need additional ablation(s) and had achieved an acute PVI by a &#8220;cryoballoon only&#8221; technique. An IL transseptal puncture site for cryoballoon AF ablations is an effective location to mediate PVI at all four PVs. Additionally, an IL transseptal location can lower the incidence of acute transseptal flow by Doppler ICE when compared to the FO. Potentially, the IL transseptal site may reduce later IASD complications post-cryoballoon procedures.

The goal of this study is to demonstrate the preferential location of transseptal puncture during a cryoballoon catheter ablation procedure for the treatment of atrial fibrillation.

Réduction des défauts iatrogène communication interauriculaire avec une antérieure et inférieure du site Transseptal ponction lors du fonctionnement du cathéter d&#39;ablation cryoballon

The cryoballoon catheter ablates atrial fibrillation (AF) triggers in the left atrium (LA) and pulmonary veins (PVs) via transseptal access. The typical ...

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver metastases, the amount of liver tissue left behind after liver resection has become the main limiting factor of resectability of large or multiple liver tumors. A minimal amount of functional tissue is required to avoid the severe complication of post-hepatectomy liver failure, which has high morbidity and mortality. Inducing liver growth of the prospective remnant prior to resection has become more established in liver surgery, either in the form of portal vein embolization by interventional radiologists or in the form of portal vein ligation several weeks prior to resection. Recently, it was shown that liver regeneration is more extensive and rapid, when the parenchymal transection is added to portal vein ligation in a first stage and then, after only one week of waiting, resection performed in a second stage (Associating Liver Partition and Portal vein ligation for Staged hepatectomy = ALPPS). ALPPS has rapidly become popular across the world, but has been criticized for its high perioperative mortality. The mechanism of accelerated and extensive growth induced by this procedure has not been well understood. Animal models have been developed to explore both the physiological and molecular mechanisms of accelerated liver regeneration in ALPPS. This protocol presents a rat model that allows mechanistic exploration of accelerated regeneration.

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

Inducing rapid liver hypertrophy using Associating Liver Partition and Portal vein ligation for a Staged hepatectomy (ALPPS) has been proposed for resection of borderline resectable liver tumors. This model may elucidate mechanisms involved in rapid hypertrophy and allows testing of drugs that promote or block the acceleration of regeneration.

Modèle de rat de la Partition du foie associant et la ligature de la veine porte pour la procédure de mise en scène une hépatectomie (ALPPS)

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

Induite par la ponction de néovascularisation Iris comme un modèle de souris de Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Ponction de la veine sous-clavière comme méthode Alternative de prélèvement d’échantillons de sang chez les Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in research work. Tail blood collection is a popular method when a small amount of blood sample is needed. Orbital artery could be considered if a large amount of blood is needed but this blood collection method has ethical issues. Formerly, we demonstrated the feasibility and safety of blood sample collection through subclavian vein puncture in rats, and here we investigate whether this method could be used in mice. We report that this method is safe and practical for blood collection in mice. Blood collection through the subclavian vein puncture in mice can be a convenient method in daily research works.

Here, we present a protocol to take blood samples from the subclavian vein of mice.

Prélèvement sanguin par piqûre de veine Subclavienne chez la souris

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine models of MI with permanent ligation of left-anterior descending (LAD) coronary artery closely mimics MI in humans. Murine models benefit from the extensive genetic engineering available nowadays. Here we propose a reproducible murine surgical model of myocardial infarction by permanent LAD coronary ligation. Our technique comprises anesthesia with ketamine/xylazine that can be rapidly reversed by administration of an antagonist, intubation without tracheotomy for mechanical-assisted ventilation, ventilation with application of extrinsic positive end-expiratory pressure (PEEP) to avoid alveolar collapse, a thoracotomy method limiting to the minimum surgical lesions made to skeletal muscles, and lung inflation without thoracentesis. This method is sparsely invasive, reproducible and reduces post-surgery mortality and complications.

Herein we describe a surgical procedure showing how to achieve permanent ligation of the left-anterior descending coronary artery in mice. This model is of high relevance to investigate the pathophysiology of myocardial infarction and the concomitant biological processes.

Modèle d'infarctus myocarde de Murine utilisant la ligation permanente de l'artère coronaire descendante antérieure gauche

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...