Questo lavoro è stato sostenuto da un finanziamento della Pennsylvania Department of Health. Dr. Miguel Garcia Toscano è stato Fellow post-dottorato presso la Temple University, finanziato dalla Fondazione Martin Alfonso Escudero durante questo studio. Vogliamo ringraziare Iliya Yordanov e Kotredes Kevin per la realizzazione del video.

1. Legatura del cieco e la puntura come un modello murino di sepsi umani Per questa procedura C57BL / 6 topi (7-9 settimane) sono utilizzati. <ol><li> Anestetizzare il topo mediante iniezione intraperitoneale di una soluzione di 1:1 ketamina (75mg/kg) e xilazina (15mg/kg). Come riferimento, iniettare 30 ml di soluzione 1:01 in un topo peso di 20 grammi. In alternativa, i topi possono essere anestetizzati con isoflurano inalato utilizzando un vaporizzatore anestetico. </li><li> Shave l&#39;addome del mouse e disinfettare zona da prima soluzione di betadine applicando seguita strofinando con un tampone imbevuto di alcool al 70% (numero 1 nella sequenza di foto qui sotto). Clorexidina può essere usato come antisettico alternativa. Opzionale: una garza sterile può essere utilizzato per mantenere l&#39;area pulita. </li><li> In condizioni asettiche, pratica un 1-2 centimetri laparotomia mediana ed esporre il cieco con intestino adiacente (2 e 3). </li><li> Il cieco è strettamente legatura con una sutura di seta 6,0 (6-0 prolene, 8680G, Ethicon) alla sua base sotto la valvola ileo-cecale, ed è forata una o due volte con un 19-gauge (4 e 5) sullo stesso parte del cieco. Si prega di notare che la lunghezza del cieco legatura definita come la distanza tra l&#39;estremità distale del cieco al punto di legatura a determinare il grado di gravità. A distanza di&gt; 1 centimetro produce sepsi alto livello, mentre una distanza di ≤ 1 centimetro produce medio-basso grado di sepsi. Si noti inoltre che con il metodo del cieco perforazione mostrato qui è diversa da quella standard grazie e attraverso la tecnica puntura (introducendo un ago attraverso il cieco). Entrambi i metodi affidabile produrre lo stesso risultato sepsi. Tuttavia, uno svantaggio della tecnica tutto e per tutto è che non facilita il controllo della quantità di feci estruso quando il cieco è spremuto. </li><li> Il cieco è poi delicatamente spremuta di estrudere una piccola quantità di feci dai siti di perforazione (6). Il cieco è tornato alla cavità peritoneale e il peritoneo è chiuso con 6,0 punti di sutura di seta. (7). </li><li> La pelle è chiusa con Reflex clip 7mm (RS-9258, Roboz strumenti chirurgici) o clip ferita Michel (7 mm, RS-9270) (8). </li><li> Resuscitare i topi iniettando per via sottocutanea 1 ml di pre-riscaldato soluzione salina 0,9% utilizzando un ago 25G. Questa misura rianimazione fluido indurre la fase iperdinamica di sepsi. Questa fase critica è descritta ulteriormente nella sezione di discussione. </li><li> Opzionale: Iniettare per via sottocutanea buprenorfina (0.05 mg / kg di peso corporeo) o tramadolo (20mg/kg di peso corporeo) per la post operatorio analgesia. Essere informati che questi oppiacei possono sopprimere la respirazione e la locomozione e questi effetti possono essere male interpretate come segni di sepsi. </li><li> Gli animali sono posti temporaneamente su una piastra elettrica o in alternativa immediatamente rigettati in una gabbia con l&#39;esposizione a una lampada di riscaldamento a raggi infrarossi da 150W fino a riprendersi dalla anestesia. Il tempo di recupero è da 30 minuti a 1 ora. </li><li> Fornire l&#39;accesso libero a cibo e acqua (idrogel), posto sul fondo della gabbia. </li><li> I topi sono monitorati ogni 12 ore per la sopravvivenza di una o due settimane o eutanasia in diversi momenti per l&#39;analisi di diversi parametri. </li></ol> Come controllo per il disegno sperimentale, gli animali farsa avrebbe seguito la tecnica laparotomia senza legatura e puntura. Da sei a 12 ore dopo l&#39;intervento chirurgico topi diventerà letargico e sviluppare febbre, piloerezione, diarrea, stringendosi e malessere; tutti i sintomi di sepsi. I topi con sepsi molto grave riesce a malapena a passare prima della morte e mostrano una drastica riduzione della temperatura corporea. A questo topi passo dovrebbe essere l&#39;eutanasia per evitare il dolore e la sofferenza prolungata. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig0.jpg" alt="Cifra 0" /> 2. Parametri analizzati più comuni Per valutare l&#39;esito della procedura, diversi parametri possono essere analizzati in organi, estratti cellulari o fluidi corporei. I campioni possono essere raccolti in diversi momenti da 3 ore a una settimana dopo l&#39;intervento chirurgico. <ol><li> Topi sopravvivenza. </li><li> Citochine e chemochine nel siero, cavità peritoneale ed estratti d&#39;organo. <ol><li> Interleuchina-6: Prodotto e distribuito da monociti, le cellule dendritiche, macrofagi, cellule B, cellule T, granulociti, mastociti e molti altri tipi di cellule. Essa svolge un ruolo importante nella reazione di fase acuta e infiammazione. </li><li> Fattore di necrosi tumorale-α: Pleiotrophic citochina che svolge un ruolo centrale nei processi infiammatori e l&#39;apoptosi. Prodotto da monociti, macrofagi, i neutrofili, cellule dendritiche e fibroblasti. </li><li> nterleukin-1β: Prodotta dai monociti, le cellule NK, cellule dendritiche, cellule B e le cellule T. Induce la febbre e la sintesi delle proteine ​​di fase acuta. </li><li> L&#39;interleuchina 10: Promuove l&#39;assorbimento dei fagociti e le risposte Th2, ma sopprime antigit presentazione e risposte Th1 proinfiammatorie. </li><li> L&#39;interleuchina 10: Promuove l&#39;assorbimento dei fagociti e le risposte Th2, ma sopprime la presentazione dell&#39;antigene e Th1 risposte proinfiammatorie. </li><li> Proteina chemiotattica dei monociti-1 (conosciuta anche come CCL2): reclute monociti, le cellule T di memoria, e le cellule dendritiche a siti di danno tissutale e infezioni. </li><li> KC (CXCL1): Prodotta da macrofagi e cellule endoteliali. Topo KC è un attrattivo neutrofili potente e attivatore. </li><li> RANTES: un fattore chemiotattico dei monociti. Può chemoattract CD4 + non stimolate / CD45RO + cellule T CD4 di memoria e stimolato + e CD8 + T con ve na e fenotipi di memoria. </li><li> Interferone-γ: Secreta dal Th1 delle cellule, le cellule T citotossiche, cellule dendritiche e natural killer (NK). Aumenta la presentazione dell&#39;antigene e l&#39;attività litica nei macrofagi e sopprime l&#39;attività delle cellule Th2. Favorisce l&#39;adesione e vincolante richiesto per la migrazione dei leucociti e promuove l&#39;attività delle cellule NK. </li><li> Ad alta mobilità di gruppo B-1 proteina: in monociti è un fattore nucleare kappa B attivatore legandosi al recettore cellulare per i prodotti finali della glicazione avanzata (RAGE), attivando il rilascio di mediatori proinfiammatori in fase tardiva di sepsi. </li></ol></li><li> Determinazione mieloperossidasi di organi come misura di infiltrazione dei neutrofili. Mieloperossidasi (MPO) è un enzima perossidasi più abbondantemente presente nei granulociti neutrofili. Si tratta di una proteina lisosomiale memorizzati in granuli azzurrofili dei neutrofili. MPO è un pigmento eme, che causa il suo colore verde nelle secrezioni ricco di neutrofili, come pus e alcune forme di muco. </li><li> I batteri carico di organi e sangue, misurare il numero di unità formanti colonia per millilitro. </li></ol> 3. Rappresentante Risultati La procedura di CLP è stato effettuato inizialmente nel ceppo di topi C57BL / 6. Abbiamo testato diversi parametri di modulare la gravità della sepsi modificando la lunghezza della legatura e lo spessore dell&#39;ago come indicato nelle figure 1 e 2. Tra questi due fattori, la lunghezza della legatura sembra essere più efficace rispetto allo spessore dell&#39;ago di modificare la sopravvivenza per cento. Come mostrato nella Figura 1, aumentando la lunghezza della legatura di più di 1 centimetro provoca un aumento della mortalità del 100% rispetto ai topi con una legatura di ≤ 1 cm. Aumentando lo spessore dell&#39;ago ha anche diminuito la sopravvivenza per cento dal 100% (con un ago 22G) al 55% (con un ago 19G) con due forature. Abbiamo anche testato l&#39;effetto del CLP su C57BL / 6 e 129SvJ topi per determinare se differenti ceppi di topi presentano una sensibilità simile o distinti per CLP-indotta la sepsi. La Figura 3 mostra che nelle stesse condizioni, i topi 129SvJ erano più suscettibili alle infezioni rispetto C57BL / 6, indicato da un aumento della mortalità per cento. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Effetto della lunghezza legatura del cieco di sopravvivenza degli animali. CLP è stata eseguita in C57BL / 6 topi utilizzando due diverse lunghezze di legatura del cieco. Questo parametro influenza notevolmente la sopravvivenza degli animali in quanto tutti gli animali del gruppo con una superficie legatura più lunga di 1 cm morti in meno di 3 giorni rispetto a un gruppo di animali aventi una superficie legatura di 1 cm circa. (N = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Influenza dell&#39;ago spessore sulla sopravvivenza. CLP è stata eseguita in C57BL / 6 topi utilizzando due dimensioni ago diverso, 19G e 22G. I topi con il cieco forata con un ago 19G ha mostrato una sopravvivenza a 55-60%. Al contrario, i topi con il cieco forata con un ago 22G ha mostrato il 100% di sopravvivenza, anche se ha manifestato sintomi tipici dell&#39;infiammazione durante i primi 3-4 giorni; che scomparve dopo 4 giorni (n = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. Confronto di suscettibilità sepsi tra due diversi ceppi di topi. Il modello CLP è stata eseguita in 129SvJ e C57BL / 6 alle stesse condizioni. Al termine del periodo di valutazione della percentuale di sopravvivenza del ceppo 129SvJ era del 25% in meno rispetto al C57BL / 6 ceppo, indicando una maggiore suscettibilità ad infiammazione indotta da infezione polimicrobica. (N = 6).

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B., De Maio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+exaggerated+inflammatory+response+after+CLP+correlates+with+a+negative+outcome.">An exaggerated inflammatory response after CLP correlates with a negative outcome.</a> J Surg Res. 125, 88-93 (2005).</li><li>Doi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AP214,+an+analogue+of+alpha-melanocyte-stimulating+hormone,+ameliorates+sepsis-induced+acute+kidney+injury+and+mortality.">AP214, an analogue of alpha-melanocyte-stimulating hormone, ameliorates sepsis-induced acute kidney injury and mortality.</a> Kidney Int. 73, 1266-1274 (2008).</li><li>Wilson, M. 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Nessun conflitto di interessi dichiarati.<br /Gli esperimenti sugli animali&gt; sono stati eseguiti in conformità con il National Institute of Health Guide di cura e dell&#39;uso degli animali da laboratorio, e approvato dal comitato di cura degli animali e l&#39;uso alla Temple University.

Qui vi mostriamo nel dettaglio come eseguire il modello CLP nei topi e modulare il grado di gravità. Rispetto ad altri modelli animali di sepsi, CLP può essere eseguita in qualsiasi ceppo di topi di differenti età e sesso. Si tratta di una procedura relativamente semplice e poco costoso intervento chirurgico. In questo modello, il grado di gravità ha un impatto diretto sulla percentuale di sopravvivenza. La lunghezza della legatura, lo spessore dell&#39;ago e il numero di punture sono pa...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome del reagente </th><th> Azienda </th><th> Numero di catalogo </th><th> Commenti </th></tr><tr><td> Ketamina </td><td> Ketaset </td><td> 0856-2013-01 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazina </td><td> AnaSed </td><td> NADA # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> Siringa di insulina 29G </td><td> Exel </td><td> 26028 </td><td></td></tr><tr><td> Sutura di seta, 6-0 prolene </td><td> Ethicon </td><td> 8680G </td><td></td></tr><tr><td> Aghi 19G e 25G </td><td> BD </td><td> 305186 </td><td></td></tr><tr><td> Rasoio </td><td> Generale di alimentazione </td><td> Generale di alimentazione </td><td></td></tr><tr><td> Riscaldamento lampada a raggi infrarossi </td><td> Generale di alimentazione </td><td> Generale di alimentazione </td><td></td></tr><tr><td> Michel ferita clip 7 millimetri </td><td> Roboz chirurgica Instr </td><td> RS-9270 </td><td></td></tr><tr><td> Ear Loop Maschera </td><td> Fisher Scientific </td><td> 19-130-4181 </td><td></td></tr><tr><td> Dissezione forbici </td><td> Roboz chirurgica Instr </td><td> RS-6702 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine soluzione </td><td> VWR </td><td> 63410-992 </td><td></td></tr><tr><td> Pinze chirurgiche </td><td> Roboz chirurgica Instr </td><td> RS-5135 </td><td></td></tr><tr><td> 70% tampone imbevuto di alcool isopropilico </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-031-350 </td><td></td></tr><tr><td> Buprenorfina </td><td> Bedford Labs </td><td> 55390-100-10 </td><td></td></tr><tr><td> Tramadol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 42965 </td><td></td></tr></tbody></table>

cecal ligation puncture procedure

Sepsi umana è caratterizzata da una serie di reazioni sistemiche in risposta alle infezioni intensiva e massiccia che non è riuscito a essere contenuta a livello locale da parte dell&#39;ospite. Attualmente, si colloca sepsi tra le prime dieci cause di mortalità nelle unità di terapia intensiva Stati Uniti 1. Durante la sepsi ci sono due fasi stabilito emodinamico, che potrebbero sovrapporsi. La fase iniziale (iperdinamica) è definita come una massiccia produzione di citochine proinfiammatorie e le specie reattive dell&#39;ossigeno da parte dei macrofagi e neutrofili che colpisce la permeabilità vascolare (porta a ipotensione), la funzione cardiaca e induce cambiamenti metabolici si conclude con necrosi dei tessuti e insufficienza d&#39;organo. Di conseguenza, la causa più comune di mortalità è danno renale acuto. La seconda fase (hypodynamic) è un anti-infiammatorio processo che coinvolge alterato dei monociti presentazione dell&#39;antigene, diminuzione della proliferazione dei linfociti e la funzione e l&#39;apoptosi aumentata. Questo stato conosciuto come l&#39;immunosoppressione o la depressione immunitaria aumenta nettamente il rischio di infezioni nocosomial e, in definitiva, la morte. I meccanismi di questi processi fisiopatologici non sono ben caratterizzati. Poiché entrambe le fasi di sepsi può causare danni irreversibili e irreparabili, è essenziale per determinare lo stato immunologico e fisiologica del paziente. Questo è il motivo principale per cui molti farmaci terapeutici hanno fallito. Lo stesso farmaco dato a diversi stadi di sepsi può essere terapeutico o comunque nocivi o non hanno alcun effetto 2,3. Per capire sepsi a vari livelli è fondamentale avere un modello animale adeguato e completo che riproduce il decorso clinico della malattia. E &#39;importante per caratterizzare i meccanismi fisiopatologici che si verificano durante la sepsi e controllare le condizioni di modello per testare potenziali agenti terapeutici. Per studiare l&#39;eziologia della sepsi umana ricercatori hanno sviluppato diversi modelli animali. Il modello più diffuso clinica è la legatura del cieco e foratura (CLP). Il modello CLP consiste nella perforazione del cieco che permette il rilascio di materiale fecale nella cavità peritoneale di generare una risposta immunitaria indotta esacerbato da infezione polimicrobica. Questo modello soddisfa la condizione umana che è clinicamente rilevante. Come negli esseri umani, i topi sottoposti a CLP con fluidi mostrano il primo (inizio) di fase iperdinamico che nel tempo avanza al secondo (in ritardo) fase hypodynamic. Inoltre, il profilo delle citochine è simile a quello osservato nella sepsi umana, dove vi è una maggiore apoptosi dei linfociti (recensione a 4,5). Grazie ai meccanismi molteplici e sovrapposte coinvolti nella sepsi, i ricercatori hanno bisogno di un modello adatto sepsi di gravità controllati al fine di ottenere risultati coerenti e riproducibili.

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Cecal Ligation Puncture Procedure

Il modello murino di legatura del cieco e la puntura come un prezioso strumento per lo studio della sepsi umana.

Legatura del cieco procedura di puntura

Human sepsis is characterized by a set of systemic reactions in response to intensive and massive infection that failed to be locally contained by the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

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Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo. With the advent of genetic modifications to the whole organism or the myocardium and an array of biological and/or synthetic materials, there is great potential for any combination of these to assuage the extent of acute ischemic injury and impede the onset of heart failure pursuant to myocardial remodeling. 
Here we present the methods and materials used to reliably perform this microsurgery and the modifications involved for temporary (with reperfusion) or permanent coronary artery occlusion studies as well as intramyocardial injections. The effects on the heart that can be seen during the procedure and at the termination of the experiment in addition to histological evaluation will verify efficacy. 
Briefly, surgical preparation involves anesthetizing the mice, removing the fur on the chest, and then disinfecting the surgical area. Intratracheal intubation is achieved by transesophageal illumination using a fiber optic light. The tubing is then connected to a ventilator. An incision made on the chest exposes the pectoral muscles which will be cut to view the ribs. For ischemia/reperfusion studies, a 1 cm piece of PE tubing placed over the heart is used to tie the ligature to so that occlusion/reperfusion can be customized. For intramyocardial injections, a Hamilton syringe with sterile 30gauge beveled needle is used. When the myocardial manipulations are complete, the rib cage, the pectoral muscles, and the skin are closed sequentially. Line block analgesia is effected by 0.25% marcaine in sterile saline which is applied to muscle layer prior to closure of the skin. The mice are given a subcutaneous injection of saline and placed in a warming chamber until they are sternally recumbent. They are then returned to the vivarium and housed under standard conditions until the time of tissue collection. At the time of sacrifice, the mice are anesthetized, the heart is arrested in diastole with KCl or BDM, rinsed with saline, and immersed in fixative. Subsequently, routine procedures for processing, embedding, sectioning, and histological staining are performed. 
Nonsurgical intubation of a mouse and the microsurgical manipulations described make this a technically challenging model to learn and achieve reproducibility. These procedures, combined with the difficulty in performing consistent manipulations of the ligature for timed occlusion(s) and reperfusion or intramyocardial injections, can also affect the survival rate so optimization and consistency are critical.

Numerous genetic manipulations and/or intramyocardial injections of genes, proteins, cells, and/or biomaterials are superimposed upon the dimension of time in studies of acute ischemia/ reperfusion injury and chronic remodeling in mice. This video illustrates the microsurgical procedures for ischemia/reperfusion, permanent coronary artery ligation, and intramyocardial injection studies.

Legatura dell&#39;arteria coronarica e di iniezione intramiocardico in un modello murino di infarto

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

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Medicina

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI we need better knowledge about pathophysiology of myocardial ischemia. This knowledge may be valuable to define new therapeutic targets for innovative cardiovascular therapies4. Experimental MI model in mice is an increasingly popular small-animal model in preclinical research in which MI is induced by means of permanent or temporary ligation of left coronary artery (LCA)5. In this video, we describe the step-by-step method of how to induce experimental MI in mice.
The animal is first anesthetized with 2% isoflurane. The unconscious mouse is then intubated and connected to a ventilator for artificial ventilation. The left chest is shaved and 1.5 cm incision along mid-axillary line is made in the skin. The left pectoralis major muscle is bluntly dissociated until the ribs are exposed. The muscle layers are pulled aside and fixed with an eyelid-retractor. After these preparations, left thoracotomy is performed between the third and fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The proximal segment of LCA artery is then ligated with a 7-0 ethilon suture which typically induces an infarct size ~40% of left ventricle. At the end, the chest is closed and the animals receive postoperative analgesia (Temgesic, 0.3 mg/50 ml, ip). The animals are kept in a warm cage until spontaneous recovery.

The surgical procedure used to induce experimental myocardial infarction in mice begins with left thoracotomy between the third and the fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The left coronary artery is ligated, the chest is closed and the mouse is allowed to recover spontaneously.

Tecnica modificata di legatura dell&#39;arteria coronarica in Mouse

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

Bile Duct Ligation in topi: Induzione infiammatoria epatica Lesioni e fibrosi da colestasi ostruttiva

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by reduced blood supply to the heart, resulting in the loss of oxygen to and the ensuing necrosis of the heart muscle. The MI model has gained popularity for its use as a short-term ischemia-reperfusion model and a long-term permanent ligation model. Below, we describe a reliable method for the permanent ligation of the LAD. With mouse genetic engineering technology becoming more advanced, and with an increasing availability of quality murine surgical instruments, the mouse has become a popular model for MI surgeries. Our surgical model incorporates the use of an easily reversible anesthetic for the rapid recovery of the mouse; a minimally invasive endotracheal intubation without involving a tracheotomy; and a thoracentesis through the original thoracotomy site without creating an additional incision in the chest, as is done in some other methods, to effectively remove excess blood and air from the chest cavity. This method is comparatively less invasive than other methods, which dramatically reduces surgical and post-surgical complications and mortality and improves reproducibility.

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

We provide a reliable method for left anterior descending artery (LAD) ligation in a mouse model. This method is comparatively less invasive than other methods, involving endotracheal intubation, a left-sided thoracotomy approach, and thoracentesis. This method can be used as a model for both acute and chronic myocardial infarction (MI).

Murino discendente anteriore sinistra (LAD) Coronary legatura dell&#39;arteria: una migliore e semplificata del modello di infarto miocardico

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver metastases, the amount of liver tissue left behind after liver resection has become the main limiting factor of resectability of large or multiple liver tumors. A minimal amount of functional tissue is required to avoid the severe complication of post-hepatectomy liver failure, which has high morbidity and mortality. Inducing liver growth of the prospective remnant prior to resection has become more established in liver surgery, either in the form of portal vein embolization by interventional radiologists or in the form of portal vein ligation several weeks prior to resection. Recently, it was shown that liver regeneration is more extensive and rapid, when the parenchymal transection is added to portal vein ligation in a first stage and then, after only one week of waiting, resection performed in a second stage (Associating Liver Partition and Portal vein ligation for Staged hepatectomy = ALPPS). ALPPS has rapidly become popular across the world, but has been criticized for its high perioperative mortality. The mechanism of accelerated and extensive growth induced by this procedure has not been well understood. Animal models have been developed to explore both the physiological and molecular mechanisms of accelerated liver regeneration in ALPPS. This protocol presents a rat model that allows mechanistic exploration of accelerated regeneration.

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

Inducing rapid liver hypertrophy using Associating Liver Partition and Portal vein ligation for a Staged hepatectomy (ALPPS) has been proposed for resection of borderline resectable liver tumors. This model may elucidate mechanisms involved in rapid hypertrophy and allows testing of drugs that promote or block the acceleration of regeneration.

Modello del ratto della partizione del fegato associando i e legatura della vena portale per procedura di messa in scena epatectomia (ALPPS)

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

Puntura-indotta di Neovascularization dell'iride come un modello murino di Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Puntura della vena succlavia come metodo alternativo di raccolta del campione di sangue in ratti

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in research work. Tail blood collection is a popular method when a small amount of blood sample is needed. Orbital artery could be considered if a large amount of blood is needed but this blood collection method has ethical issues. Formerly, we demonstrated the feasibility and safety of blood sample collection through subclavian vein puncture in rats, and here we investigate whether this method could be used in mice. We report that this method is safe and practical for blood collection in mice. Blood collection through the subclavian vein puncture in mice can be a convenient method in daily research works.

Here, we present a protocol to take blood samples from the subclavian vein of mice.

Prelievo di sangue attraverso la puntura della vena subclavia nei topi

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Left Coronary Artery Ligation: A Surgical Murine Model of Myocardial Infarction

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In order to explore the pathophysiological changes after myocardial infarction and design future treatments, research models of MI are required. Permanent ligation of the left coronary artery (LCA) in mice is a popular model to investigate cardiac function and ventricular remodeling post MI. Here we describe a less invasive, reliable, and reproducible surgical murine MI model by permanent ligation of the LCA. Our surgical model comprises of an easily reversible general anesthesia, endotracheal intubation that does not require a tracheotomy, and a thoracotomy. Electrocardiography and troponin measurement should be performed to ensure MI. Echocardiography at day 28 after MI will discern heart function and heart failure parameters. The degree of cardiac fibrosis can be evaluated by Masson's trichrome staining and cardiac MRI. This MI model is useful for studying the pathophysiological and immunological alterations after MI.

Presented here is a surgical procedure for permanent ligation of the left coronary artery in mice. This model can be used to investigate the pathophysiology and associated inflammatory response after myocardial infarction.

Legatura coronaria sinistra: un modello chirurgico murino di infarto miocardico

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In ...

Tail Vein Puncture Without Anesthesia

To begin, secure the rat in a plastic restraining cone, enclose the large end of the cone around the base of the tail. Ensure that the animal is comfortable and breathing is unrestricted throughout the procedure. Dip the tail in warm water for about one minute to dilate the vein, and dry the tail with a paper towel.In the restrainer, position the animal facing down with the tail lying on a heating pad. To select the appropriate tail vein for sampling, rotate the entire animal to the right or left side. Use the terminal third of the tail for blood vessel puncturing since the vessels become more superficial in this zone.Wipe the tail with 70%ethanol wipes at the puncture site and place it on the edge of the heating pad, creating an angle in the terminal third of the tail. This brings the vein to the surface and creates more space for taking the sample. For blood sampling, move the plunger back and forth in the syringe several times to smoothen the withdrawal and then pull on the plunger to create negative pressure in the syringe.Secure the tail flat on the heating pad using the non-dominant index and middle finger. Place the middle finger proximally and the index finger distally with the puncture site between these two fingers. Slide the insulin syringe against the index finger with the eye of the needle pointing upward until it is inserted into the vein.This creates an angle of 35 degrees between the needle and the tail. Once the needle has entered the vein, blood will flow into the syringe. Slowly withdraw the plunger of the syringe at a steady rate to collect the desired volume.Remove the syringe from the tail and allow a blood drop to form on the puncture side of the tail. Aspirate this blood to collect a few more microliters of blood, in case of a non-sterile procedure. Apply pressure to the puncture site to stop the bleeding and wipe the area with a new alcohol wipe.After removing the rat from the cone, return it to its cage. The success rates with the tail vein puncture methods were compared with the success rate of the penile vein puncture method under anesthesia. Interestingly, under anesthesia, the tail vein became very unreliable and had a success rate of only 25%The success rates showed almost similar results for the tail vein puncture in conscious rats and the penile vein puncture under anesthesia.The blood sampling was performed in less than six minutes in the tail vein puncture without anesthesia, and the penile vein puncture method under anesthesia, whereas the tail vein puncture method under anesthesia took more than eight minutes due to multiple failures.