Bu çalışma, Pennsylvania Sağlık Bakanlığı bir hibe ile desteklenmiştir. Dr. Miguel Garcia Toscano Alfonso Martin Escudero Vakfı tarafından finanse edilen bu çalışma sırasında Temple Üniversitesi&#39;nde bir doktora sonrası Üyesi oldu. Biz Iliya Yordanov ve Kevin Kotredes video yapmak için teşekkür etmek istiyorum.

1. İnsan Sepsis Fare Modeli çekal ligasyon ve Delinme Bu yordamı C57BL / 6 farelerinde (eski 7-9 hafta) kullanılır. <ol><li> Intraperitoneal 01:01 ketamin (75mg/kg) ve ksilizin (15mg/kg) bir çözüm enjekte fare anestezisi. Bir referans olarak, 20 gram ağırlığında bir fare 1:1 çözüm 30 ul enjekte edilir. Alternatif olarak, fare, bir anestezik vaporizatör kullanılarak inhale izofluran ile anestezi olabilir. </li><li> Fare karın Tıraş ve% 70 alkol sürüntü (aşağıdaki resim dizisi 1 numara) ile silerek ilk uygulayarak betadin çözüm alanı dezenfekte. Klorheksidin alternatif bir antiseptik olarak kullanılabilir. İsteğe Bağlı: alanını temiz steril bir örtüyü korumak için kullanılıyor olabilir. </li><li> Aseptik koşullar altında, 1 ila 2 cm orta hat laparotomi uygulama ve bitişik bağırsak (2 ve 3) ile çekum maruz. </li><li> 6.0 ipek sütür (6-0 prolen, 8680G; Ethicon) ile çekum sıkıca bağlandı, bağırsak-çekal kapak altında baz ve aynı delikli bir veya iki kez bir 19-gauge iğne (4 ve 5) çekum tarafında. Çekum ligasyonu noktası distal ucu mesafe olarak tanımlanan bağlanan çekum uzunluğu şiddetinin derecesini belirlemek olacağını lütfen unutmayınız. &gt; 1cm mesafe yüksek dereceli sepsis ≤ 1 cm mesafe, orta-düşük dereceli sepsis üretir üretir. Ayrıca, burada gösterilen çekum perforasyonu yöntemi kullanarak ve ponksiyon tekniği ile (çekum bir iğne tanıtan) ile standart farklı olduğunu unutmayın. Her iki yöntem de aynı sepsis sonucu güvenilir bir şekilde üretirler. Ancak, bir dezavantajı yoluyla yoluyla tekniği çekum sıkılmış ekstrüde dışkı miktarı kontrol kolaylaştırmakla kalmaz ki. </li><li> Çekum perforasyonu siteleri (6), küçük bir miktarda dışkı a&#39;ya yavaşça sıkılmış. Çekum periton boşluğuna geri döndü ve periton 6.0 ipek dikişlerle kapatılır. (7). </li><li> Cilt Refleks 7mm klipleri (RS-9258, Roboz Cerrahi Aletler) ya da Michel yara klipleri (7 mm, RS-9270) (8) ile kapatılır. </li><li> Subkutan 1 ml 25G iğne kullanılarak, önceden ısıtılmış% 0.9 salin solüsyonu enjekte edilerek farelerin Resüsite. Bu sıvı resüsitasyon önlemi sepsis hiperdinamik aşaması neden olacaktır. Bu kritik adım daha fazla tartışma bölümünde açıklanmıştır. </li><li> İsteğe bağlı: subkutan enjekte buprenorfin (0.05mg / kg vücut ağırlığı) ya da ameliyat sonrası analjezi için tramadol (20mg/kg vücut ağırlığı). Bu opiatlar solunum ve hareket bastırmak için tavsiye edilebilir ve bu etkiler, sepsis belirtileri olarak yanlış yorumlanabilir. </li><li> Hayvanların geçici olarak yerleştirilen bir ısıtma yastığı veya anestezi kurtarmak kadar alternatif bir kızılötesi ısıtma 150W lamba pozlama ile bir kafes hemen döndü. Iyileşme süresi 1 saat 30 dk. </li><li> Kafesin altına yerleştirilen yiyecek ve su (hidrojel) ücretsiz erişim sağlayın. </li><li> Fare, 1-2 hafta boyunca hayatta kalmak için her 12 saat denetim altında tutulan ya da farklı zaman noktalarında farklı parametrelerin analizi için ötenazi vardır. </li></ol> Deneysel tasarım için kontrol olarak, sahte hayvanlar ligasyonu ve delinme olmadan laparotomi tekniği takip edecek. Altı ila 12 saat sonra cerrahi işlem fareler uyuşuk olmak ve ateş, piloerection, ishal huddling, ve halsizlik gelişir; sepsis belirtileri. Çok ağır sepsis Fare ancak ölüm öncesinde hareket ve vücut ısısı dramatik bir azalma gösterirler. Bu adım fareler uzun süreli ağrı ve acı önlemek için ötenazi olmalı. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig0.jpg" alt="Şekil 0" /> 2. En Yaygın Analiz Parametreleri Prosedürünün sonuçlarını değerlendirmek için farklı parametreler, organların, hücre özleri veya vücut sıvıları analiz edilebilir. Örnekleri cerrahi işlem bir hafta sonra 3 saat kadar farklı zaman noktalarında toplanabilir. <ol><li> Fareler hayatta kalma. </li><li> Serum, peritoneal kavite ve organ özleri Sitokinler ve kemokinler. <ol><li> İnterlökin-6: monositler, dendritik hücreler, makrofajlar, B hücreleri, T hücreleri, granülositler, mast hücreleri ve daha birçok hücre tipleri tarafından üretilen ve piyasaya. Bu akut faz reaksiyonu ve inflamasyon önemli bir rol oynar. </li><li> Tümör nekroz faktörü-α: pleiotrofik sitokin inflamasyon ve apoptosis merkezi bir rol oynar. , Monositler, makrofajlar, nötrofiller, dendritik hücreler ve fibroblastlar tarafından üretilir. </li><li> nterleukin-1β: monositler, NK hücreleri, dendritik hücreler, B hücreleri ve T hücreleri tarafından üretilir. Ateş ve akut faz protein sentezini indükler. </li><li> İnterlökin 10: fagositik alımı ve Th2 yanıtları teşvik ama antig bastırırtr sunum ve Th1 proinflamatuvar yanıtları. </li><li> İnterlökin 10: fagositik alımı ve Th2 yanıtları teşvik ama antijen sunumu ve Th1 proinflamatuvar yanıtları bastırır. </li><li> Monosit kemotaktik protein-1 (CCL2 olarak da bilinir): Acemi monositler, bellek T hücreleri ve doku hasarı ve enfeksiyon sitelerine dendritik hücreler . </li><li> KC (CXCL1): makrofaj ve endotel hücreleri tarafından üretilir. Fare KC güçlü bir nötrofil cezbedici ve aktivatör. </li><li> RANTES: monosit kemoatraktan. Unstimulated CD4 chemoattract + / CD45RO + bellek T hücreleri ve uyarılmış CD4 + ve na ve ve hafıza fenotipleri ile CD8 + T hücreleri. </li><li> İnterferon-γ: Th1 hücreleri, sitotoksik T hücreleri, dendritik hücreler ve doğal öldürücü (NK) hücreleri tarafından salgılanan. Antijen sunumu ve makrofajlarda litik aktivite artırır ve Th2 hücre aktivitesi bastırır. Yapışma ve bağlama lökosit göçü için gerekli teşvik ve NK hücre aktivitesini destekler. </li><li> Yüksek hareketliliği grubu B-1 proteininin: monositler bir nükleer faktör kappa B aktivatörü, sepsis geç fazda proinflamatuar mediatörlerin salınımını aktive, önceden glikasyon ürünleri (RAGE) hücresel reseptör bağlayıcı . </li></ol></li><li> Nötrofil infiltrasyonu bir önlem olarak organlarda miyeloperoksidaz belirlenmesi. Miyeloperoksidaz (MPO), peroksidaz enzim nötrofil granülositler en bol miktarda mevcut. Nötrofil azurophilic granül saklanan bir lizozomal protein. MPO, irin ve mukus bazı formları gibi nötrofillerin zengin salgıları, yeşil renk neden olan bir pigment, hem vardır. </li><li> Bakteri sayısı mililitrede koloni oluşturan birimler olarak, organ ve kan akışı ölçmek yük. </li></ol> 3. Temsilcisi Sonuçlar CLP prosedürü başlangıçta C57BL / 6 fare zorlanma yapıldı. Şekil 1 ve 2&#39;de gösterildiği gibi, iğne ligasyonu ve kalınlığı uzunluğu değiştirerek sepsis şiddetini modüle çeşitli parametrelere test etti . Ligasyonu uzunluğu, bu iki faktör arasında, yüzde hayatta değiştirmek için iğne kalınlığında daha etkili gibi görünmektedir. ≤ 1cm ligasyonu sahip fareler ile karşılaştırıldığında,% 100 mortalite fazla 1cm ligasyonu uzunluğu artan bir artış, Şekil 1&#39;de kışkırtır gösterilmiştir . Iğne kalınlığının arttırılması da iki delikler ile% 55 (19G iğne ile),% 100 (22G iğne kullanılarak) yüzde hayatta kalma azaldı. Ayrıca, farklı fare suşları CLP-kaynaklı sepsis, benzer veya farklı duyarlılık gösterilecek olup olmadığını belirlemek için C57BL / 6 ve 129SvJ fareler üzerinde CLP etkisi test edilmiştir. Şekil 3&#39;te görüldüğü aynı koşullar altında, yüzde bir artış ölüm ile gösterilir C57BL / 6, daha 129SvJ farelerin enfeksiyona karşı daha duyarlı olduğunu. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. C57BL / 6 farelerin iki farklı boyda çekal ligasyon kullanarak hayvanın hayatta kalma çekum ligasyonu uzunluğu etkisi CLP yapıldı. Bu tek parametre 1 cm yaklaşık bir ligasyonu alana sahip bir hayvan grubu ile kıyaslandığında en az 3 gün içinde öldü 1 cm&#39;den daha uzun bir ligasyonu alana sahip gruptaki hayvanların tüm bu yana dramatik bir hayvan hayatta kalma etkiler. (N = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2. C57BL / 6 fareler kullanarak iki farklı iğnelerin, 19G ve 22G iğne kalınlığında sağkalım üzerine etkisi. CLP yapıldı. 19G iğne ile perfore çekum Fareler sağkalımı% 55-60 gösterdi. Buna karşılık, ilk 3-4 gün boyunca inflamasyon tipik belirtileri deneyimli olmasına rağmen, 22G iğne ile perfore çekum ile farelerin% 100 hayatta kalma gösterdi; (n = 8) 4 gün sonra kayboldu. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3. Iki farklı fare suşları arasında sepsis duyarlılık karşılaştırılması. CLP modeli, aynı koşullar altında 129SvJ ve C57BL / 6 yapıldı . 129SvJ suşu değerlendirme süresi sonunda yüzde sağkalım polimikrobiyal enfeksiyon tarafından indüklenen inflamasyon daha yüksek bir duyarlılık gösteren C57BL / 6 zorlanma göre% 25 daha az idi. (N = 6).

<ol>
	<li>Angus, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+severe+sepsis+in+the+United+States:+analysis+of+incidence,+outcome,+and+associated+costs+of+care.">Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care.</a> Crit Care Med. 29, 1303-1310 (2001).</li><li>Riedemann, N. C., Guo, R. F., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+enigma+of+sepsis.">The enigma of sepsis.</a> J Clin Invest. 112, 460-467 (2003).</li><li>Eichacker, P. Q., Gerstenberger, E. P., Banks, S. M., Cui, X., Natanson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meta-analysis+of+acute+lung+injury+and+acute+respiratory+distress+syndrome+trials+testing+low+tidal+volumes.">Meta-analysis of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome trials testing low tidal volumes.</a> Am J Respir Crit Care Med. 166, 1510-1514 (2002).</li><li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis:+setting+the+stage.">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li><li>Doi, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, P. S., Star, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis+and+sepsis-induced+kidney+injury.">Animal models of sepsis and sepsis-induced kidney injury.</a> J Clin Invest. 119, 2868-2878 (2009).</li><li>Godshall, C. J., Scott, M. J., Peyton, J. C., Gardner, S. A., Cheadle, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+background+determines+susceptibility+during+murine+septic+peritonitis.">Genetic background determines susceptibility during murine septic peritonitis.</a> J Surg Res. 102, 45-49 (2002).</li><li>De Maio, A., Torres, M. B., Reeves, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+determinants+influencing+the+response+to+injury,+inflammation,+and+sepsis.">Genetic determinants influencing the response to injury, inflammation, and sepsis.</a> Shock. 23, 11-17 (2005).</li><li>Diodato, M. D., Knoferl, M. W., Schwacha, M. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+the+inflammatory+response+and+survival+following+haemorrhage+and+subsequent+sepsis.">Gender differences in the inflammatory response and survival following haemorrhage and subsequent sepsis.</a> Cytokine. 14, 162-169 (2001).</li><li>Turnbull, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+age+on+mortality+and+antibiotic+efficacy+in+cecal+ligation+and+puncture.">Effects of age on mortality and antibiotic efficacy in cecal ligation and puncture.</a> Shock. 19, 310-313 (2003).</li><li>Miyaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethyl+pyruvate+decreases+sepsis-induced+acute+renal+failure+and+multiple+organ+damage+in+aged+mice.">Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and multiple organ damage in aged mice.</a> Kidney Int. 64, 1620-1631 (2003).</li><li>Torres, M. B., De Maio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+exaggerated+inflammatory+response+after+CLP+correlates+with+a+negative+outcome.">An exaggerated inflammatory response after CLP correlates with a negative outcome.</a> J Surg Res. 125, 88-93 (2005).</li><li>Doi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AP214,+an+analogue+of+alpha-melanocyte-stimulating+hormone,+ameliorates+sepsis-induced+acute+kidney+injury+and+mortality.">AP214, an analogue of alpha-melanocyte-stimulating hormone, ameliorates sepsis-induced acute kidney injury and mortality.</a> Kidney Int. 73, 1266-1274 (2008).</li><li>Wilson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+resuscitation+attenuates+early+cytokine+mRNA+expression+after+peritonitis.">Fluid resuscitation attenuates early cytokine mRNA expression after peritonitis.</a> J Trauma. 41, 622-627 (1996).</li><li>Zanotti-Cavazzoni, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+resuscitation+influences+cardiovascular+performance+and+mortality+in+a+murine+model+of+sepsis.">Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis.</a> Intensive Care Med. 35, 748-754 (2009).</li><li>Hugunin, K. M., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+tramadol+and+buprenorphine+on+select+immunologic+factors+in+a+cecal+ligation+and+puncture+model.">Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model.</a> Shock. 34, 250-260 (2010).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.<br /&gt; Hayvan deneyleri Ulusal Enstitüsü Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Sağlık Rehberi uyarınca yapılır ve Temple Üniversitesi hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından kabul edildi.

Burada farelerde CLP modeli nasıl gerçekleştirmek için ayrıntılı göstermek ve şiddetinin derecesi modüle. Sepsis diğer hayvan modelleri ile karşılaştırıldığında, CLP, farklı yaş ve cinsiyet herhangi bir fare zorlanma yapılabilir. Bu nispeten kolay ve ucuz bir cerrahi işlemdir. Bu modelde, şiddet derecesi hayatta kalma oranı üzerinde doğrudan bir etkisi vardır. Ligasyonu uzunluğu, iğne kalınlığı ve delikler sayısı, şiddeti CLP mortalite / modüle kontrol e...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar </th></tr><tr><td> Ketamin </td><td> Ketaset </td><td> 0856-2013-01 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> AnaSed </td><td> ADA # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> İnsülin şırınga 29G </td><td> Exel </td><td> 26028 </td><td></td></tr><tr><td> İpek sütür, 6-0 prolen </td><td> Ethicon </td><td> 8680G </td><td></td></tr><tr><td> 19G ve 25G İğne </td><td> BD </td><td> 305186 </td><td></td></tr><tr><td> Tıraş makinesi </td><td> Genel kaynağı </td><td> Genel kaynağı </td><td></td></tr><tr><td> Kızılötesi Isıtma lamba </td><td> Genel kaynağı </td><td> Genel kaynağı </td><td></td></tr><tr><td> Michel klipleri 7mm yara </td><td> Roboz Cerrahi Instr </td><td> RS-9270 </td><td></td></tr><tr><td> Kulak Döngü Maske </td><td> Fisher Scientific </td><td> 19-130-4181 </td><td></td></tr><tr><td> Diseksiyon makası </td><td> Roboz Cerrahi Instr </td><td> RS-6702 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine çözüm </td><td> VWR </td><td> 63410-992 </td><td></td></tr><tr><td> Cerrahi forseps </td><td> Roboz Cerrahi Instr </td><td> RS-5135 </td><td></td></tr><tr><td> % 70 izopropil alkol pedi </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-031-350 </td><td></td></tr><tr><td> Buprenorfin </td><td> Bedford Labs </td><td> 55390-100-10 </td><td></td></tr><tr><td> Tramadol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 42965 </td><td></td></tr></tbody></table>

cecal ligation puncture procedure

İnsan sepsis, yanıt olarak, yerel ev sahibi tarafından yer olmak için başarısız yoğun ve şiddetli enfeksiyon sistemik reaksiyonlar bir dizi ile karakterizedir. Şu anda, ABD&#39;de yoğun bakım ünitelerinde 1 ilk on ölüm nedenleri arasında sepsis sırada yer alıyor. Sepsis sırasında çakışabilir iki kurulan hemodinamik evreleri vardır. İlk faz (hiperdinamik), makrofaj ve nötrofiller damar geçirgenliği (hipotansiyon), kalp fonksiyonu etkiler ve doku nekrozu ve organ yetmezliği ile sonuçlanan metabolik değişiklikler oluşturur proinflamatuvar sitokinler ve reaktif oksijen türlerinin büyük bir üretim olarak tanımlanır. Sonuç olarak, en yaygın ölüm nedeni akut böbrek hasarı. Ikinci aşaması (hypodynamic) değişmiş monosit antijen sunumu içeren bir anti-enflamatuar süreç, lenfosit proliferasyonu ve fonksiyon ve artan apoptozis azalmıştır. Immünosupresyon veya immün depresyon olarak bilinen bu devlet keskin nocosomial enfeksiyonları ve sonuçta, ölüm riskini artırır. Bu patofizyolojik süreçlerin mekanizmaları iyi karakterize değildir. Sepsis her aşamasında geri dönüşü olmayan ve telafisi mümkün olmayan hasara neden olabileceğinden, hastanın immünolojik ve fizyolojik durumunu belirlemek için esastır. Bu, pek çok tedavi edici ilaçların neden başarısız oldu ana sebebidir. Sepsis farklı aşamalarında verilen aynı ilaç tedavi ya da başka zararlı veya etkisi 2,3 hiçbir çeşitli düzeylerde sepsis anlamak için hastalığın klinik seyri üretir uygun ve kapsamlı hayvan modeli için çok önemlidir. Sepsis sırasında meydana gelen patofizyolojik mekanizmalar karakterize ve potansiyel terapötik ajanlar test etmek için model koşulları kontrol etmek için önemlidir. Insan sepsis araştırmacıların etiyolojisi araştırmak için farklı hayvan modelleri geliştirdik. En yaygın olarak kullanılan klinik modeli çekal ligasyon ve ponksiyon (CLP). CLP modeli periton boşluğuna fekal madde salınımını polimikrobiyal enfeksiyon tarafından uyarılan bir şiddetlenir bağışıklık yanıtı oluşturmak için izin çekum perforasyonu oluşur. Bu model, klinik olarak anlamlı olan insan bir koşulu yerine getirmektedir. İnsanlarda olduğu gibi, sıvı resüsitasyon CLP geçiren fareler zaman içinde ikinci (geç) hypodynamic aşaması ilerledikçe ilk (erken) hiperdinamik faz göstermektedir. Buna ek olarak, sitokin profili insan sepsis lenfosit apoptozis (gözden 4,5) artmış olduğu görülen benzer. Sepsis dahil birden fazla ve üst üste mekanizmaları nedeniyle, araştırmacılar, tutarlı ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için kontrollü şiddeti uygun bir sepsis modeli gerekir.

Watch this Scientific Journal Video about Cecal Ligation Puncture Procedure at JoVE.com

Cecal Ligation Puncture Procedure

Çekal ligasyon ve ponksiyon insan sepsis çalışma için değerli bir araç olarak fare modeli.

Çekal ligasyon Delinme Prosedürü

Human sepsis is characterized by a set of systemic reactions in response to intensive and massive infection that failed to be locally contained by the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

54.5K Görüntüleme.  Temple University. Çekal ligasyon ve ponksiyon insan sepsis çalışma için değerli bir araç olarak fare modeli.

Video: Cecal Ligation Puncture Procedure

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo. With the advent of genetic modifications to the whole organism or the myocardium and an array of biological and/or synthetic materials, there is great potential for any combination of these to assuage the extent of acute ischemic injury and impede the onset of heart failure pursuant to myocardial remodeling. 
Here we present the methods and materials used to reliably perform this microsurgery and the modifications involved for temporary (with reperfusion) or permanent coronary artery occlusion studies as well as intramyocardial injections. The effects on the heart that can be seen during the procedure and at the termination of the experiment in addition to histological evaluation will verify efficacy. 
Briefly, surgical preparation involves anesthetizing the mice, removing the fur on the chest, and then disinfecting the surgical area. Intratracheal intubation is achieved by transesophageal illumination using a fiber optic light. The tubing is then connected to a ventilator. An incision made on the chest exposes the pectoral muscles which will be cut to view the ribs. For ischemia/reperfusion studies, a 1 cm piece of PE tubing placed over the heart is used to tie the ligature to so that occlusion/reperfusion can be customized. For intramyocardial injections, a Hamilton syringe with sterile 30gauge beveled needle is used. When the myocardial manipulations are complete, the rib cage, the pectoral muscles, and the skin are closed sequentially. Line block analgesia is effected by 0.25% marcaine in sterile saline which is applied to muscle layer prior to closure of the skin. The mice are given a subcutaneous injection of saline and placed in a warming chamber until they are sternally recumbent. They are then returned to the vivarium and housed under standard conditions until the time of tissue collection. At the time of sacrifice, the mice are anesthetized, the heart is arrested in diastole with KCl or BDM, rinsed with saline, and immersed in fixative. Subsequently, routine procedures for processing, embedding, sectioning, and histological staining are performed. 
Nonsurgical intubation of a mouse and the microsurgical manipulations described make this a technically challenging model to learn and achieve reproducibility. These procedures, combined with the difficulty in performing consistent manipulations of the ligature for timed occlusion(s) and reperfusion or intramyocardial injections, can also affect the survival rate so optimization and consistency are critical.

Numerous genetic manipulations and/or intramyocardial injections of genes, proteins, cells, and/or biomaterials are superimposed upon the dimension of time in studies of acute ischemia/ reperfusion injury and chronic remodeling in mice. This video illustrates the microsurgical procedures for ischemia/reperfusion, permanent coronary artery ligation, and intramyocardial injection studies.

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Tıp

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI we need better knowledge about pathophysiology of myocardial ischemia. This knowledge may be valuable to define new therapeutic targets for innovative cardiovascular therapies4. Experimental MI model in mice is an increasingly popular small-animal model in preclinical research in which MI is induced by means of permanent or temporary ligation of left coronary artery (LCA)5. In this video, we describe the step-by-step method of how to induce experimental MI in mice.
The animal is first anesthetized with 2% isoflurane. The unconscious mouse is then intubated and connected to a ventilator for artificial ventilation. The left chest is shaved and 1.5 cm incision along mid-axillary line is made in the skin. The left pectoralis major muscle is bluntly dissociated until the ribs are exposed. The muscle layers are pulled aside and fixed with an eyelid-retractor. After these preparations, left thoracotomy is performed between the third and fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The proximal segment of LCA artery is then ligated with a 7-0 ethilon suture which typically induces an infarct size ~40% of left ventricle. At the end, the chest is closed and the animals receive postoperative analgesia (Temgesic, 0.3 mg/50 ml, ip). The animals are kept in a warm cage until spontaneous recovery.

The surgical procedure used to induce experimental myocardial infarction in mice begins with left thoracotomy between the third and the fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The left coronary artery is ligated, the chest is closed and the mouse is allowed to recover spontaneously.

Fare Koroner Arter Ligasyonu için Modifiye Tekniği

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

Farelerde Safra Kanalı ligasyonu: Obstrüktif Kolestaz tarafından İnflamatuar Karaciğer Hasarı ve Fibrozis indüksiyonu

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver metastases, the amount of liver tissue left behind after liver resection has become the main limiting factor of resectability of large or multiple liver tumors. A minimal amount of functional tissue is required to avoid the severe complication of post-hepatectomy liver failure, which has high morbidity and mortality. Inducing liver growth of the prospective remnant prior to resection has become more established in liver surgery, either in the form of portal vein embolization by interventional radiologists or in the form of portal vein ligation several weeks prior to resection. Recently, it was shown that liver regeneration is more extensive and rapid, when the parenchymal transection is added to portal vein ligation in a first stage and then, after only one week of waiting, resection performed in a second stage (Associating Liver Partition and Portal vein ligation for Staged hepatectomy = ALPPS). ALPPS has rapidly become popular across the world, but has been criticized for its high perioperative mortality. The mechanism of accelerated and extensive growth induced by this procedure has not been well understood. Animal models have been developed to explore both the physiological and molecular mechanisms of accelerated liver regeneration in ALPPS. This protocol presents a rat model that allows mechanistic exploration of accelerated regeneration.

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

Inducing rapid liver hypertrophy using Associating Liver Partition and Portal vein ligation for a Staged hepatectomy (ALPPS) has been proposed for resection of borderline resectable liver tumors. This model may elucidate mechanisms involved in rapid hypertrophy and allows testing of drugs that promote or block the acceleration of regeneration.

Karaciğer bölümü ilişkilendirme ve Portal ven ligasyonu hazırlanmış Hepatectomy (ALPPS) yordamı için fare modeli

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

Delici cisim kaynaklı Iris neovaskülarizasyon Rubeosis Iridis bir fare modeli olarak

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Subklaviyan ven ponksiyon kan örnek fareleri koleksiyonunda alternatif bir yöntem olarak

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in research work. Tail blood collection is a popular method when a small amount of blood sample is needed. Orbital artery could be considered if a large amount of blood is needed but this blood collection method has ethical issues. Formerly, we demonstrated the feasibility and safety of blood sample collection through subclavian vein puncture in rats, and here we investigate whether this method could be used in mice. We report that this method is safe and practical for blood collection in mice. Blood collection through the subclavian vein puncture in mice can be a convenient method in daily research works.

Here, we present a protocol to take blood samples from the subclavian vein of mice.

Farelerde subclavian ven delinme yoluyla kan toplama

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Left Coronary Artery Ligation: A Surgical Murine Model of Myocardial Infarction

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In order to explore the pathophysiological changes after myocardial infarction and design future treatments, research models of MI are required. Permanent ligation of the left coronary artery (LCA) in mice is a popular model to investigate cardiac function and ventricular remodeling post MI. Here we describe a less invasive, reliable, and reproducible surgical murine MI model by permanent ligation of the LCA. Our surgical model comprises of an easily reversible general anesthesia, endotracheal intubation that does not require a tracheotomy, and a thoracotomy. Electrocardiography and troponin measurement should be performed to ensure MI. Echocardiography at day 28 after MI will discern heart function and heart failure parameters. The degree of cardiac fibrosis can be evaluated by Masson's trichrome staining and cardiac MRI. This MI model is useful for studying the pathophysiological and immunological alterations after MI.

Presented here is a surgical procedure for permanent ligation of the left coronary artery in mice. This model can be used to investigate the pathophysiology and associated inflammatory response after myocardial infarction.

Sol Koroner Arter Ligasyonu: Miyokard Enfarktüsünün Cerrahi Murin Modeli

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In ...

<meta charset="utf8"></head><body>Aşamalı Hepatektomi için Hayvan Modellerinde ALLPS'nin Karaciğer Rejenerasyonunun İncelenmesi

A Mouse Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy Procedure Aided by Microscopy

Hepatectomy is widely regarded as the primary treatment for hepatic malignancies; yet, postoperative liver failure remains a major cause of perioperative mortality, severely impacting patient outcomes. In a robust hepatic environment, the future liver remnant (FLR) must exceed 25%, and in cases of cirrhosis, this requirement increases to over 40%. The inadequacy of FLR is currently a major obstacle in the progression of hepatic surgery.
Traditional methods to enhance FLR hypertrophy mainly focus on portal vein embolization (PVE), but its effectiveness is considerably limited. In recent years, there have been numerous reports on a novel biphasic hepatectomy method involving hepatic partitioning and portal vein ligation, known as associating liver partition and portal vein ligation for staged hepatectomy (ALPPS). ALPPS surpasses PVE in efficiently and considerably inducing FLR hypertrophy. However, the detailed mechanisms driving ALPPS-facilitated hepatic regeneration are not fully understood. Thus, replicating ALPPS in animal models is crucial to thoroughly investigate the molecular mechanisms of hepatic regeneration, offering valuable theoretical and practical insights.

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Spotlight: ALPPS Fare Modeli ile Karaciğer Rejenerasyon Araştırmasını İlerletmek

Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) has been shown to result in remarkable liver regeneration after several weeks post first-stage surgery. Animal models that have undergone ALPPS have been developed to explore potential liver regeneration ability and achieve favorable clinical outcomes.

Mikroskopi Destekli Aşamalı Hepatektomi Prosedürü için İlişkilendirici Karaciğer Bölünmesi ve Portal Ven Ligasyonunun Bir Fare Modeli

Hepatectomy is widely regarded as the primary treatment for hepatic malignancies; yet, postoperative liver failure remains a major cause of perioperative ...

Methods Article

Çekal ligasyon Delinme Prosedürü