この作品は、NCTR / FDAによって賄われていた。

ビデオには示されていないが、ラットは最初3分以内で麻酔で、その結果、ペントバルビタールの300 mg / kgの過剰摂取を与えられ、その後断頭により殺された。自分の脳は急速にその後あったが、慎重に頭蓋骨から削除し、5分間氷冷生理食塩水で冷却。前MAVが皮質（層の上部I）の表面から分離することができるようにMAVを解剖するのにこの時間のために、脳は冷ましておくことが重要です。脳は、その後、氷冷生理食塩水または0.1 Mナトリウムリン酸緩衝化生理食塩水のpH = 7.4の（1 cm深い）でいっぱいでした氷の上で休んでいるガラスシャーレの底に置かれた。すべての解剖は、生理食塩水に浸漬し、ほとんどの部分は脳内で行われます。 1。松果体の除去<ol><li>脳背側を上（ペトリ皿の底からの相対位置）に置きます。松果腺は、tにちょうど吻側両半球間の最も尾側の腹側領域に位置しています彼は小脳（松凹部）と、ちょうど下またはcolliculusの複数形の上髄膜の表面である。二つの小さな曲がった先端の鉗子を使用して、最初の松果腺を削除します。それは、皮質のような色のピンクですが、多くの場合、血液や脳の除去からの残留血管系の残骸に囲まれています。 </li></ol> 2。 MAVの除去<ol><li> &quot;逆さま&quot;の上に脳を裏返し、椎骨動脈、前脳の髄膜と血管から橋をカバー小さい動脈および髄膜を分離します。前脳MAVの除去が開始されます。 これは、解剖の過程で腹開始することが重要です。ウィリス動脈輪の大きな主要な動脈、中大脳動脈（MCA）と前方動脈最強であり、それによって&quot;足場&quot;として機能軟膜の小さい浅動脈および細動脈次いで、膜を髄膜の残りと皮質から削除することができます。 mのScremin 7によるレビューを見る脳の表面の血管系の鉱石を視覚的に表現し、詳細を表示します。 </li><li>どちらの半球で始まる、内頸動脈付け根までちょうど後部後交通動脈を切断するために、小さな曲がった先端の鉗子を使用しています。したがって、前脳の多くの前部と後部動脈木を分離する。対側半球の同じプロセスを繰り返します。 </li><li> MCAとピンセットで前方動脈握る、腹前部皮質（梨、嗅結）をカバーMAVが嗅索上と周囲に持ち上げられるように、前方 - 背側方向に慎重に引き抜いてください。これは、はるかにMAVの前部皮質（帯状と軌道）をカバーを取り除きます。 </li><li>ペトリ皿に45から90°の角度で脳を回します。横方向の皮質領域（粒状島国、二次体性感覚と聴覚野）周辺のMAVの横、より前方の領域は、MCAおよび関連arterを把持することにより皮質から解放することができますIEは、ゆっくりと皮質に沿って背側に引っ張る。必要な場合は、鉗子の端部は、解剖時に大脳皮質からの主要な動脈を持ち上げ、解放するために使用することができます。 </li><li>今すぐMAVのより後部側方領域を削除します。 （注、これはMAVが寒さと水和したままであることを確認するために、この収穫プロセスの間にもう一方の半球から切り替えるのが最善の方法です。また、皮質からMAVを解放するの抵抗が一時的に反対側の半球に一方の半球スイッチ上で検出された場合し、その後、元の半球に戻ってください。） </li><li>一次体性感覚を取り巻くMAVの最も背側領域を削除して、運動皮質は脳背側を上（ペトリ皿の底からの相対位置）に回します。ついに脳からMAVを解放するには、矢状静脈洞に沿って鉗子の先端を使用しています。 収穫MAVのこの部分は、どちらのテストおよび分析まで氷冷生理食塩水で一時的に保持されるか、または後で処理するために凍結することができる。しばしば皮質のほとんど後部/尾側領域（、嗅内視覚と最も尾側の聴覚野）をカバーするMAVは皮質に接続されたままである。その除去はretrosplenial皮質とcolliculusの複数形を覆う間にMAVを解剖しているビデオの後半で示されています。 </li></ol> 3。脈絡叢の除去<ol><li>アップポジション脳背側と半球の間の正中線を通って小さな鉗子を押し下げ、その後の頂部に皮質と脳梁（ブレグマから≈-3.3ミリメートル）を通して穿刺に端を使う大きなピンセットで所定の位置に保持する海馬の正中線。 </li><li>側脳室の大部分を露出させ、背側海馬および中隔から梁と皮質を引っ張るためにピンセットを使用しています。脈絡叢が位置し、その長さを実行して主要な動脈を画定赤い波線によって識別することができます。第三VENの横方向の壁をこじ開け鉗子の両端を使うtricle、最も尾側（ブレグマ8から≈-4.3ミリメートル）で拡大します。 </li><li>小さなピンセットを使用して、脈絡叢無料のこの端を引き出します。次にセプタムおよび尾状​​核/被殻の間には非常に前歯部（最も吻側程度、ブレグマから≈1.6ミリメートル）に移動し、鉗子は、心室のこのセクションを拡大し、脈絡叢フリーを引っ張ると。第二残りの脈絡叢を得るために反対側の半球に同じ手順を実行します。 もう一度、この組織はどちらのテストおよび分析まで氷冷生理食塩水で一時的に保持されるか、または後で処理するために凍結することができる。 </li></ol> 4。 Retrosplenial、聴覚と視覚野を含む皮質のより尾地域でだけでなく、その視床とcolliculusの複数形の上を覆う第3脳室に残っているMAVの除去<ol><li>視床とcolliculusの複数形の上MAVをさらす両半球から海馬全体を削除します。の除去MAVのこの部分は皮質上にMAVの除去よりもはるかに少ないことは困難である。 </li><li>視床の前方部分を覆う大きな血管を把持し、静かに尾側に引いて、MAV無料のこの部分を引き出します。この血管系は、前掲のcollicularネットワークに接続され、背側海馬と背側視床網に血液を供給しています。尾動脈輪の血管系の最後の部分に到達するまで尾と徐々にフリーsupracollicularネットワークを引き離します。 この時点で、それ以上のケアが粒状retrosplenial、一次聴覚と視覚野の表面に残っている後部腹MAVを除去するために注意しなければなりません。皮質のより前方の部分を覆うMAVの他のセクションと同様に、この組織はどちらのテストおよび分析まで氷冷生理食塩水で一時的に保つことができるか、後で処理するために凍結した。この第二のMAVのセクションで集め、残りの後部腹MAVを削除する必要があります彼らは別々に分析される場合は、dは、皮質を覆う第解剖MAVセクションに追加。 </li></ol> 5。代表的な結果解剖が正しく実行されると、結果として、MAVの組織は、45〜約35mgの総重量2無傷のエンティティである必要があります。皮質の大部分を取り囲む最初に解剖したMAVが約25mgと視床をカバーMAVを比較検討する必要があり、colliculusの複数形と後頭葉皮質は、約15 mgを比較検討する必要があります。これは、血管系内の残留血液から色で少しピンクがかったでなければなりません。二国間の脈絡叢収穫は各重量1から2 mgの2無傷の組織サンプルでなければなりません。余分な水は、組織の損失を回避するために、このようなレンズのクリーニングで使用されるのとティッシュペーパーを使用して、ストレージや処理に先立って、MAVから削除することができますが、それは解剖脈絡叢から余分な水分を除去するのは良いアイデアではありません。 図1のために生成されました表現にprofil比較<html>で存在しているGSE23093とGSE29733、NCBI GEOのアクセッション＃GPL7294;アジレント-014879全ラットゲノム4x44K 60merのオリゴヌクレオチドアレイ（G4131F、アジレント·テクノロジー、パロアルト、CAを使用して制御条件下での3地域でES（線条体、頭頂皮質およびMAV） NCBI GEOのリポジトリ）。 1）線条体は、頭頂葉皮質に比べ、2）MAVが頭頂葉皮質に比べで、図中の2つのプロットは、絵を用いて発現を示す。それは、線条体と頭頂葉皮質がはるかに密接にMAVよりお互いに関連していることは明らかである。 MAVと脈絡叢を比較したデータは、将来の刊行物に発表される予定です。しかし、それは、MAVと脈絡叢における発現プロファイルがより密接に彼らは線条体と頭頂葉皮質にあるより、相互に関連している可能性があります。 図2は、差動遺伝子発現温熱療法への応答（EIH）対AMPH MAVで比較コントロールとお互いに。 内容は &quot;&gt;対照動物のMAVの公式NCBIの遺伝子記号と11,000人以上の遺伝子の遺伝子発現が線条体と頭頂葉皮質に記録されたものと比較した。これらの遺伝子の2000以上のMAVで2.5倍以上異なる表情を持っていた2神経が豊富な組織と比較して、550遺伝子は発現が10倍以上の差があった。これらのわずか40％以上（253）は、MAVで10倍以上の発現が減少している遺伝子であったとに関連していた神経機能。と343遺伝子は、頭頂葉皮質と線条体に比べMAVで10倍以上の過剰発現がありました。遺伝子のこのリストは、MAVで非常に高い濃縮度を持つ遺伝子を決定することを起点として使用した。 表1リストMAVで15倍式より大きいと遺伝子頭頂皮質および線条体と比較すると機能に関して、それらを分類しています、これらの遺伝子の多くは、血管系および/ ​​または免疫系に関連していた。これらトン遺伝子のypesは約5豊かにされるべきである - 10 - に増えたため、血管系自体とその内に存在する血液の倍。しかし、既知の一般的な血管機能を持つ遺伝子について、15​​倍を超える増加は、MAVで濃縮を示しています。遺伝子の数はそれぞれ非常に大きな倍率変化でもあった、1）細胞外マトリックスタンパク質（特に血管系に関連していない）、2）溶質トランスポーター3）脂質とレチノイン酸代謝。同様に、いくつかの増殖と分化の遺伝子または転写因子が発見された。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig1.jpg" /> 図1。頭頂皮質および線条体とMAVにおける遺伝子発現の比較。頭頂皮質および線条体（上のプロット）と頭頂皮質およびMAV（下のプロット）の遺伝子発現レベルを比較火山プロット。赤いシンボルは大きく異なるbetweある遺伝子を示すp &lt;0.05で専用地域と地域の間に1.5倍以上の発現差を持っています。黒シンボルは有意（p&gt; 0.05）の領域の間に違いはありません遺伝子を表しており、1.5倍の発現が異なる未満です。ピンクの記号はp &lt;0.05で式の中で1.5倍の差よりも小さいが、統計的に有意に異なる遺伝子を持つことを示す。黄色のシンボルが1.5倍以上の発現を持っていますが、この変更はp &lt;0.05で統計的に有意ではない遺伝子を同定する。 略語 AMPHアンフェタミン EIH環境誘発性高体温 MAVの髄膜および関連する脳血管系 ノーム体温コントロール<img alt="図2" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig2.jpg" /> 図2。比較温熱療法とMAVにおける遺伝子発現に対するアンフェタミンの効果。火山プロット3時間の時点で生理食塩水、EIHまたはAMPH後にMAVでの遺伝子発現レベル。赤いシンボルは黒ドット/円は大幅に領域間で異ならない遺伝子を表して有意差があるとみなされている遺伝子を示す。追加の統計解析は、制御および治療法の違いは統計的に有意で、実際にはそのうちの発現を確認するために使用されていました。 <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="1in"> MAV式脳式 </td><td fo:width="4.5in"> NCBIの遺伝子記号 </td><td fo:width="1.5in"> 組織特異性または報告された機能（複数可） </td></tr><tr><td> &gt; 50倍</td><td> Anxa2、Col8a1、DES、Esm1、Glycam1、KL A、Lect1、Lepr、ラム、Myh11、OGN、Tagln、THBS2、Tnnt2 </td><td>血管系＆ハート</td></tr><tr><td> &gt; 50倍</td><td> CCL19、CD74、Defb1、Lrrc21、Mgl1、MRC1、Msln、PLa2g5、PRG4、RT1-BB、RT1〜ダ</td><td>免疫システム</td></tr><tr><td> &gt; 50倍</td><td> ADH1、Aebp1、Aldh1a2、Gstm2 </td><td>レチノイン酸＆脂質処理</td></tr><tr><td> &gt; 50倍</td><td> CDH1、COL3A1、COL1A2、Colec12、Cpxm2、CPZ、DCN、Emp3、GPC3、Nupr1、OMD、Pcolce Slamf9、Tmem27、Tspan8 </td><td>細胞外マトリックスと細胞間結合</td></tr><tr><td> &gt; 50倍</td><td> AQP1、Asgr1、Kcnj13、Slc5a5、Slc6a13、Slc6a20、Slc22a6、Sned1、TTR </td><td>イオン＆溶質ホメオスタシス</td></tr><tr><td> &gt; 50倍</td><td> Alx3、Cdkn1c、Foxc2、IGFBP2、Ifitm1、Ifitm2、Nkx6-1、OSR1、Prrx2、Sfrp1、Tbx15。 Upk1b、Wisp2、Wnt6 </td><td>開発＆転写調節</td></tr><tr><td> &gt; 50倍</td><td> Gpha2、Mfap5、Mpzl2 Plac8、Scgb1c1、Sostdc1、Steap1 </td><td>不明＆その他</td></tr><tr><td> 30から50倍</TD&gt; <td> Anxa1、Angpt2、C6 A、GJB2、Ptgis、Thbd、TIMP1 </td><td>血管系＆ハート</td></tr><tr><td> 30から50倍</td><td> Casp12、CCL2、CCR1、CD14、CXCL10、Ifitm3、Klra5、Lgals1、Lgals3、Ms4a4a、Ms4a7、Plscr1、SPP1、XCL1 </td><td>免疫システム</td></tr><tr><td> 30から50倍</td><td> Col6a3、Cpxm1、Efemp1、FMOD、MGP、Nid2 </td><td>細胞外マトリックスと細胞間結合</td></tr><tr><td> 30から50倍</td><td> Cpは、Cubn、Gcgr、S100a6、Scn7a、SCT、Slc4a5、Slc16a11、Slco1a5 </td><td>イオン＆溶質ホメオスタシス</td></tr><tr><td> 30から50倍</td><td> CFD、Ch25h、Crabp2、Rarres2 </td><td>レチノイン酸＆脂質処理</td></tr><tr><td> 30から50倍</td><td> Bmp6、Casp12、DAB2、Folr1、IGF2、MSX1、Tbx18、Twist1、Wnt5b </td><td>開発＆転写調節</td></tr><tr><td> 30から50倍</td><td> Cela3b、Cln6、C1qtnf7、Copz2、Dhrs7c、Gng11、Prss23、Srpxは、Vim </td><td>不明＆その他</td></tr><tr><td> 15から30倍</td><td> ADM、ANGPT1、Angptl2、BGN、Cklf A、Cnn1、Cox8h、Ctsk、F13a1、Gja5、Klf4の、LOX、LYZ、Myl9、PROCR、Pros1、RT1-BA、Serpinb10、Serping1、Serpinf1、Tgm2、Tnmd、Trim63、Txnip 、Vamp5、VTN </td><td>血管系＆ハート</td></tr><tr><td> 15から30倍</td><td> エイダA、BST2、Ccl6、CD40、CD68、CTSC、DAP、Faim3、Fkbp9、Fxyd5、FMO1、Glipr1、Ier3、Ifi47、Igsf6、MSC、Nfatc4、RT1-DB1、Serpinb1a、Tir4、Tubb6 </td><td>免疫システム</td></tr><tr><td> 15から30倍</td><td> Adamtsl4、COL1A1、CRB3、DPT、Egfl3、FBN1、Fbln1、Fbln5、FN1、Itgb4、Lama2、Lgals3bp、LOXL1、Mfap4、MMP14、Mmp23、PPIC、Serpinh1、Timp3 </td><td>細胞外マトリックスと細胞間結合</td></tr><tr><td> 15から30倍</td><td> Cybrd1、Selenbp1、Slc2a4、Slc9A2、Slc13a3、Slc16a4、Slc22a8、Slc22a18 </td><td>イオン＆溶質ホメオスタシス</td></tr><tr><td> 15から30倍</td><td> Agpat2、Bdh2、Cyp26b1、Lpar3、Ltb4dh、Olr1、Pon3、Rbp1、RBP4 </td><td>レチノイン酸＆脂質処理</td></tr><tr><td> 15から30倍</td><td> ATF3、Dkk4、Eya2、Ifitm7、Ltbp1、Mustn1、Nr2f2、Ptrf、Sphk1、TGFBI、Tcea3 Tcfap2b、Wnt2b、Wnt5a、Zic1 </td><td>開発＆転写調節</td></tr><tr><td> 15から30倍</td><td> Adamts12、Adamtsl3、C1R、Crispld2、Crygn、CYP1B1、DSE、Enpep、Enpp2、Epn3、FLNA、FMO3、GNMT、Gprc5c、Hspb1、Klc3、Krt18、Krt19、MDK、Mesp1、Ms4a6a、Ms4a6b、Ms4a11、NET1、Pdlim2、 Phactr2、PLP2、Ppp1r3b、Pqlc3、RIN3、Spag11、Sult1a1、Tmem106a、Wfikkn2 </td><td>不明＆その他</td></tr></tbody></table> *表には含まれて遺伝子は線条体とパリエットの両方で、15以上の倍上記の式でなければなりませんアル皮質およびバックグラウンドレベル上記の5倍​​。各遺伝子の二つの比率（MAV /線条体またはMAV /頭頂葉皮質）の下、グループ化のために使用された。 遺伝子は内皮細胞で見つけたが、また、おそらく免疫応答を媒介する主要な役割を果たしています。 表1 15倍*以上を有する遺伝子線条体と頭頂葉皮質に比べMAVで発現増加。

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E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflicted+traumatic+brain+injury+in+infants+and+young+children.">Inflicted traumatic brain injury in infants and young children.</a> Brain Pathol. 18, 571-582 (2008).</li><li>Maas, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+value+of+computerized+tomography+scan+characteristics+in+traumatic+brain+injury:+results+from+the+IMPACT+study.">Prognostic value of computerized tomography scan characteristics in traumatic brain injury: results from the IMPACT study.</a> J. Neurotrauma. 24, 303-314 (2007).</li></ol>

我々は、開示することは何もない。ここに提示された仕事は、必ずしも食品医薬品局（FDA）の見解を示すものではないかもしれません。

テクニカルMAVの側面および脈絡叢郭清それは、脳が生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水または水酸化ナトリウムでほとんどの時間を &quot;水没&quot;を持っているMAVの解剖時に重要です。 MAVと皮質は解剖中に脱水できるようにすると、これはMAVおよび/または皮質からこれらの付着MAVのセクションを削除することができないことの結果で収穫皮質組織の量が増加します皮質層Iにしっかり付着し、MAVになります。また、忍耐は解剖時に必要です。一つは解剖中に1つの半球の皮質からMAVを除去する際にいくつかの抵抗に遭遇した場合、もう一度、他の半球に切り替えて抵抗が発生した側に後で戻ってください。この方法は完璧にいくつかの練習時間がかかりますかとMAV組織の一貫して均一な収穫が達成される前に、約5〜15 &quot;実践&quot;解剖を必要とします。解剖とレモの起動方法脳の基底部における動脈輪でMAVのvalは、サポートとして大きな血管系を使用することによって髄膜の除去を容易にする &quot;足場&quot;を多くの血のもともとMA​​V血管系の犠牲の後には、解剖時に排出されるべきである、とMAVから収穫されたRNAの5％未満では、血液由来のものである必要があります。断頭し、脳を除去する前の組織学的技術を用いて、生理食塩水50〜70mlで動物を灌流することで、ほとんどすべての血液を除去することが可能です。しかし、その後、解剖時にMAV組織を視覚化することがはるかに困難です。 MAV組織の &quot;汚染&quot;の3つの最も可能性が高いソースは松果体、皮質層I組織と残留嗅球組織であるが、それは準備のために下垂体組織を取得することも可能です。 MAVで松果体汚染が濃い赤色であるラウンド1〜2mmの直径の球体を含むMAVによって検出されます。主要機能松果体は、通常、MAVとは全く異なるものと見なされます。その主な機能は、概日リズム9の側面を調節し、脂質前駆体のlipoxygenation 10でメラトニンを生成することです。リポキシゲナーゼ活性を制御する遺伝子のLOXが 、主に松果体10の大人に存在すると考えられていたが、我々の結果は、それはまた、MAVの大幅なレベルで一貫して存在することを示す。ずっとそれで囲まれた色の淡いアール一部の1〜2mmの緻密な組織を持つピンクがかったクモの巣のようなMAV組織中の残留皮質や嗅球汚染の結果。これは、バッファの表面にMAVを &quot;浮遊&quot;してから、2解剖鉗子を使用して重い皮質または電球組織を除去することによって発見することができます。 皮質層私は組織、視床下部組織または松果腺からMAVの汚染が存在しているなら、いくつかの遺伝子が有意になります&quot;クリーン&quot;解剖で通常存在するものよりも大幅大きい式。松果腺とMAVの汚染は、メラトニンの合成に必要であるアリルアルキルアミンN-アセチルトランスフェラーゼ（Aanat）のより高い発現をもたらすでしょう。松果体の汚染は、MAVの解剖中に発生した場合、残念ながら、MAVでLOXのレベルが正確に判定することができません。皮質組織とMAVの汚染は、このようなhippocalcin（HPCA）、パルブアルブミン（Pvalb）および/ ​​または神経ペントラキシン受容体（Nptxr）などのニューロン特異的遺伝子の高発現をもたらすでしょう。視床下部組織とMAVの汚染は成長ホルモン1（GH1）、プロオピオメラノコルチン（POMC）のより高い発現をもたらすでしょう。収穫された組織内の一部の汚染が存在しない場合においては、これらの遺伝子のほとんどが同定され、遺伝子発現解析で使用されていないことができます。これは循環BLOに存在する遺伝子のために特に重要であるまだMAVや脈絡叢に存在してもよいOD。 収穫MAVと脈絡叢からの遺伝子発現データを解釈する関連付けられている髄膜（MAV）と脈絡叢と一緒に脳表面（表層）血管系は脳血流と脳脊髄液（CSF）ホメオスタシス4,11、12、13、14、15、16、17のために必要である。組織の収穫は生化学的および生理学的解析に適している、とMAVは、遺伝子発現解析によるアンフェタミンおよび温熱1,2によって生成される損傷に対して敏感であることが示されている。また、これらの結果は、重度の温熱療法と一般18,19,20における脳血管系へのアンフェタミンへの暴露について知られているものに見合っています。ヒトでの臨床データは硬膜下血管系はアンフェタミンとメタンフェタミン21,22による損傷に対して敏感であるという信念をサポートしています。同様に、メジャーとマイナーの脳血管系は含め頭部外傷23,24 25の震とうの種類を調査する際に潜在的に高い関心があるMAVに収穫さ軟膜髄膜の層でそれらをING。 MAVから得られた現在の遺伝子発現プロファイルは、軟膜とくも膜おそらく髄膜は脳脊髄液の組成を調節するのに予想以上に大きな役割を果たしている可能性があることを示しています。将来的には、解剖顕微鏡の技術の使用によって、それは軟膜とクモ膜が存在し、おそらく互いに大きな動脈の血管系から分離することができ、さらに、MAVを含む組織を分離することが可能することができるようにします。これは、収穫したMAVのこれらの3つのコンポーネントの各々の機能の良い解釈を可能にするでしょう。

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/機器の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント（オプション） </td></tr><tr><td>生理食塩水（生理食塩水9グラム/ 1リットルのH 2 O） </td><td>社内</td><td></td><td>解剖バッファ</td></tr><tr><td> 0.1Mリン酸ナトリウムpH7.4の</td><td>社内</td><td></td><td>解剖バッファ</td></tr><tr><td>骨Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8300 </td><td>頭蓋骨除去</td></tr><tr><td>鉗子曲がった先端部（4 &quot;ロング＆0.8ミリメートル広いチップ） </td><td> Roboz </td><td> 、RS-5135またはRS-5137 </td><td>解剖用ピンセット</td></tr><tr><td>鉗子ストレートチップ（5.5 &quot;長さ） </td><td> Roboz </td><td> 、RS-8124またはRS-8104 </td><td>親指ドレッシング鉗子</td></tr></tbody></table>

a visual description of the dissection of the cerebral surface vasculature and associated meninges and the choroid plexus from rat brain

このビデオプレゼンテーションをサポートしている前脳機能は、適切な脳内に存在しない、最も重要な2つの高度に血管構造を収穫する方法を示すために作成されました。彼らは、関連付けられている髄膜（MAV）と脳血流と脳脊髄液（CSF）の恒常性に必要である脈絡叢と一緒に脳表面（表層）血管系である。採取された組織は、生化学的および生理学的解析に適しており、MAVはアンフェタミンおよび温熱1,2によって生成される損傷に対して敏感であることが示されている。頭部外傷の震とうの種類を調査する際にも、MAVで収穫されたメジャーとマイナーの脳血管系は、潜在的に高い関心が持たれている。このプレゼンテーションで解剖しMAVは髄膜とメジャーとマイナーの脳表面血管系の軟膜とクモ膜の一部（少なく硬膜）から構成されます。叢は解剖脈絡膜は、lに常駐する構造ですオールドフィールドとマッキンリー3,4,5,6に記載されているようateralは、心室。これらの二つの組織を採取するために使用される方法はまた、髄膜および大きい脳の表面の血管系を欠いた地域の皮質組織の採取を容易にし、等かかる二つの組織の解剖などの線条体、視床下部、海馬、などの他の脳組織を採取すると互換性があります5から10分の合計から。図に示すように、このプレゼンテーションに記載されて解剖し、MAVと脈絡叢の遺伝子発現レベルは、NCBI GEOのリポジトリでGSE23093（MAV）とGSE29733（脈絡叢）で見つけることができます。このデータにはなっている、とは、MAVと脈絡叢の機能を理解し、それらの機能に悪影響を及ぼすような重篤な神経毒性方法温熱療法とAMPHなどのイベントをさらに支援するために使用されています。

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A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

このビデオプレゼンテーションは、前脳機能をサポートする2つの最も重要性の高い血管構造を収穫する方法を示しています。彼らは、関連付けられている髄膜（MAV）と脳血流と脳脊髄液（CSF）の恒常性に必要である脈絡叢と一緒に脳表面（表層）血管系である。

ラットの脳から脳表面血管系および関連髄膜の解剖と脈絡叢のビジュアル解説

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain ...

a-visual-description-dissection-cerebral-surface-vasculature

Research

JoVE Journal

Neuroscience

47.9K ビュー.  National Center for Toxicological Research. このビデオプレゼンテーションは、前脳機能をサポートする2つの最も重要性の高い血管構造を収穫する方法を示しています。彼らは、関連付けられている髄膜（MAV）と脳血流と脳脊髄液（CSF）の恒常性に必要である脈絡叢と一緒に脳表面（表層）血管系である。

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Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable clinical state; in the development of animal models of focal ischemia, however, achieving reproducibility of experimentally induced infarct volume is essential. The rat is a widely used animal model for stroke due to its relatively low animal husbandry costs and to the similarity of its cranial circulation to that of humans2,3. In humans, the middle cerebral artery (MCA) is most commonly affected in stroke syndromes and multiple methods of MCA occlusion (MCAO) have been described to mimic this clinical syndrome in animal models. Because recanalization commonly occurs following an acute stroke in the human, reperfusion after a period of occlusion has been included in many of these models. In this video, we demonstrate the transient endovascular suture MCAO model in the spontaneously hypertensive rat (SHR). A filament with a silicon tip coating is placed intraluminally at the MCA origin for 60 minutes, followed by reperfusion. Note that the optimal occlusion period may vary in other rat strains, such as Wistar or Sprague-Dawley. Several behavioral indicators of stroke in the rat are shown. Focal ischemia is confirmed using T2-weighted magnetic resonance images and by staining brain sections with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) 24 hours after MCAO.

Surgical induction of ischemic brain damage in the rat is a widely used model for stroke research. Here we demonstrate the induction of focal cerebral ischemia by occlusion of the middle cerebral artery. Visualization of the resulting infarct by histological staining and magnetic resonance imaging is also shown.

ラット中大脳動脈の血管縫合閉塞による局所脳虚血モデル

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

神経科学

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to monitor the disease course in the follow-up period. Changes in the VEP parameters closely correlate with pathological damage in the optic nerve. This protocol provides a detailed description about the rodent model of optic nerve microinjection, in which a partial demyelination lesion is produced in the optic nerve. VEP recording techniques are also discussed. Using skull implanted electrodes, we are able to acquire reproducible intra-session and between-session VEP traces. VEPs can be recorded on individual animals over a period of time to assess the functional changes in the optic nerve longitudinally. The optic nerve demyelination model, in conjunction with the VEP recording protocol, provides a tool to investigate the disease processes associated with demyelination and remyelination, and can potentially be employed to evaluate the effects of new remyelinating drugs or neuroprotective therapies.

Focal demyelination is induced in the optic nerve using lysolecithin microinjection. Visual evoked potentials are recorded via skull electrodes implanted over the visual cortex to examine the signal conduction along the visual pathway in vivo. This protocol details the surgical procedures underlying electrode implantation and optic nerve microinjection.

実験視神経の脱髄のラットモデルにおける視覚誘発電位の記録

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. Choroid plexus epithelial cells (CPECs) covering the surface of choroid plexus tissue harbor multiple unique cilia, but most of the functions of these cilia remain to be investigated. To uncover the function of CPEC cilia with particular reference to their motility, an ex vivo observation system was developed to monitor ciliary motility during embryonic, perinatal and postnatal periods. The choroid plexus was dissected out of the brain ventricle and observed under a video-enhanced contrast microscope equipped with differential interference contrast optics. Under this condition, a simple and quantitative method was developed to analyze the motile profiles of CPEC cilia for several hours ex vivo. Next, the morphological changes of cilia during development were observed by scanning electron microscopy to elucidate the relationship between the morphological maturity of cilia and motility. Interestingly, this method could delineate changes in the number and length of cilia, which peaked at postnatal day (P) 2, while the beating frequency reached a maximum at P10, followed by abrupt cessation at P14. These techniques will enable elucidation of the functions of cilia in various tissues. While related techniques have been published in a previous report1, the current study focuses on detailed techniques to observe the motility and morphology of CPEC cilia ex vivo.

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

In this study, a detailed light microscopic technique was optimized for real-time observation and analysis of the motion of CPEC cilia ex vivo together with an electron microscopic method for ultrastructural analysis.

脈絡叢上皮細胞の繊毛運動の観測<em&gt;エクスビボ</em

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful analysis of synaptic transmission modulation when performing field potential or intracellular recordings. This manuscript describes methodological aspects that might be helpful in improving experimental conditions for the maintenance of acute brain slices and for recording field excitatory postsynaptic potentials in a commercially available submersion chamber with an outflow-carbogenation unit. The outflow-carbogenation helps to stabilize the oxygen level in experiments that rely on the recycling of a small buffer reservoir to enhance the cost-efficiency of drug experiments. In addition, the manuscript presents representative experiments that examine the effects of different carbogenation modes and stimulation paradigms on the activity-dependent synaptic plasticity of synaptic transmission.

This protocol describes the stabilization of the oxygen level in a small volume of recycled buffer and methodological aspects of recording activity-dependent synaptic plasticity in submerged acute hippocampal slices.

少量循環、血流 - と水没型チャンバー システムで管理急性海馬スライスにおけるシナプス可塑性を記録

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Live Imaging of Primary Cerebral Cortex Cells Using a 2D Culture System

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or postmitotic neurons. Later, some progenitors switch to a gliogenic fate, adding to the astrocyte and oligodendrocyte populations. Using time-lapse video-microscopy of primary cerebral cortex cell cultures, it is possible to study the cellular and molecular mechanisms controlling the mode of cell division and cell cycle parameters of progenitor cells. Similarly, the fate of postmitotic cells can be examined using cell-specific fluorescent reporter proteins or post-imaging immunocytochemistry. More importantly, all these features can be analyzed at the single-cell level, allowing the identification of progenitors committed to the generation of specific cell types. Manipulation of gene expression can also be performed using viral-mediated transfection, allowing the study of cell-autonomous and non-cell-autonomous phenomena. Finally, the use of fusion fluorescent proteins allows the study of symmetric and asymmetric distribution of selected proteins during division and the correlation with daughter cells fate. Here, we describe the time-lapse video-microscopy method to image primary cerebral cortex murine cells for up to several days and analyze the mode of cell division, cell cycle length and fate of newly generated cells. We also describe a simple method to transfect progenitor cells, which can be applied to manipulate genes of interest or simply label cells with reporter proteins.

Live imaging is a powerful tool to study cellular behaviors in real time. Here, we describe a protocol for time-lapse video-microscopy of primary cerebral cortex cells that allows a detailed examination of the phases enacted during the lineage progression from primary neural stem cells to differentiated neurons and glia.

2次元培養系を用いた主な大脳皮質細胞のイメージングをライブします。

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor determining patient outcome and is therefore frequently taken as a study endpoint. However, in small animal studies on SAH, quantification of cerebral vasospasm is a major challenge. Here, an ex vivo method is presented that allows quantification of volumes of entire vessel segments, which can be used as an objective measure to quantify cerebral vasospasm. In a first step, endovascular casting of the cerebral vasculature is performed using a radiopaque casting agent. Then, cross-sectional imaging data are acquired by micro computed tomography. The final step involves 3-dimensional reconstruction of the virtual vascular tree, followed by an algorithm to calculate center lines and volumes of the selected vessel segments. The method resulted in a highly accurate virtual reconstruction of the cerebrovascular tree shown by a diameter-based comparison of anatomical samples with their virtual reconstructions. Compared with vessel diameters alone, the vessel volumes highlight the differences between vasospastic and non-vasospastic vessels shown in a series of SAH and sham-operated mice.

The goal of this article is to present a method that allows a 3-dimensional reconstruction of the cerebrovascular tree in mice after micro computed tomography and determination of volumes of entire vessel segments that can be used to quantify cerebral vasospasm in murine models of subarachnoid hemorrhage.

くも膜下出血のマウスモデルにおける脳血管攣縮の定量化法の体積

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral vascular effects. Impact (i.e., non-blast) traumatic brain injury (TBI) is known to decrease pressure autoregulation in the cerebral vasculature in both humans and experimental animals. The hypothesis that blast-induced traumatic brain injury (bTBI), like impact TBI, results in impaired cerebral vascular reactivity was tested by measuring myogenic dilatory responses to reduced intravascular pressure in rodent middle cerebral arterial (MCA) segments from rats subjected to mild bTBI using an Advanced Blast Simulator (ABS) shock tube. Adult, male Sprague-Dawley rats were anesthetized, intubated, ventilated and prepared for Sham bTBI (identical manipulation and anesthesia except for blast injury) or mild bTBI. Rats were randomly assigned to receive Sham bTBI or mild bTBI followed by sacrifice 30 or 60 min post-injury. Immediately after bTBI, righting reflex (RR) suppression times were assessed, euthanasia at the time points post-injury was completed, the brain was harvested and the individual MCA segments were collected, mounted and pressurized. As the intraluminal pressure perfused through the arterial segments was reduced in 20 mmHg increments from 100 to 20 mmHg, MCA diameters were measured and recorded. With decreasing intraluminal pressure, MCA diameters steadily increased significantly above baseline in the Sham bTBI groups while MCA dilator responses were significantly reduced (p &#60; 0.05) in both bTBI groups as evidenced by the impaired, smaller MCA diameters recorded for the bTBI groups. In addition, RR suppression in the bTBI groups was significantly (p &#60; 0.05) higher than in the Sham bTBI groups. MCA&#39;s collected from the Sham bTBI groups exhibited typical vasodilatory properties to decreases in intraluminal pressure while MCA&#39;s collected following bTBI exhibited significantly impaired myogenic vasodilatory responses to reduced pressure that persisted for at least 60 min after bTBI.

Here, we present a protocol to describe methods for ex vivo vascular reactivity determination following a primary blast traumatic brain injury (bTBI) using isolated, pressurized, rodent middle cerebral arterial (MCA) segments. bTBI induction is accomplished using a shock tube, also known as an Advanced Blast Simulator (ABS) device.

加圧齧歯動物に及ぼす影響の爆発による頭部外傷の中間の大脳動脈

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to intracranial delivery, intra-arterial administration of NSCs is less invasive and produces a more diffuse distribution of NSCs within the brain parenchyma. Further, intra-arterial delivery allows the first-pass effect in the brain circulation, lessening the potential for trapping of cells in peripheral organs, such as liver and spleen, a complication associated with peripheral injections. Here, we detail the methodology, in both mice and rats, for delivery of NSCs through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) to the ipsilateral hemisphere after an ischemic stroke. Using GFP-labeled NSCs, we illustrate the widespread distribution achieved throughout the rodent ipsilateral hemisphere at 1 d, 1 week and 4 weeks after postischemic delivery, with a higher density in or near the ischemic injury site. In addition to long-term survival, we show evidence of differentiation of GFP-labeled cells at 4 weeks. The intra-arterial delivery approach described here for NSCs can also be used for administration of therapeutic compounds, and thus has broad applicability to varied CNS injury and disease models across multiple species.

A method for delivering neural stem cells, adaptable for injecting solutions or suspensions, through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) after ischemic stroke is reported. Injected cells are distributed broadly throughout the brain parenchyma and can be detected up to 30 d after delivery.

ラットおよびマウス脳への神経幹細胞の動脈内デリバリー:脳虚血への応用

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke involves middle cerebral artery occlusion (MCAO). Infarct zone, brain edema and blood-brain barrier (BBB) breakdown are measured as parameters that reflect the extent of brain injury after MCAO. A significant limitation to this method is that these measurements are normally obtained in different rat brain samples, leading to ethical and financial burdens due to the large number of rats that need to be euthanized for an appropriate sample size. Here we present a method to accurately assess brain injury following MCAO by measuring infarct zone, brain edema and BBB permeability in the same set of rat brains. This novel technique provides a more efficient way to evaluate the pathophysiology of stroke.

This protocol describes a novel technique of measuring the three most important parameters of ischemic brain injury on the same set of rodent brain samples. Using only one brain sample is highly advantageous in terms of ethical and economic costs.

げっ歯類の脳サンプルの単一のセットで脳卒中後脳浮腫、梗塞ゾーンおよび血液脳関門破壊を測定する

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular systems, gastrointestinal systems, and nutrition, and the pig is increasingly being used as a large animal model in neuroscience. Furthermore, the pig is an accepted model to study neurodevelopment as it displays brain growth and development patterns similar to what occurs in humans. As a less common animal model in neuroscience, surgical and dissection procedures on pigs may not be as familiar or well-practiced among researchers. Therefore, a standardized visual protocol detailing consistent extraction and dissection methods may prove valuable for researchers working with the pig. The following video showcases a technique to remove the pig brain while keeping the cortex and brainstem intact and reviews methods to dissect several commonly investigated brain regions including the brainstem, cerebellum, midbrain, hippocampus, striatum, thalamus, and medial prefrontal cortex. The purpose of this video is to provide researchers with the tools and knowledge necessary to consistently perform a brain extraction and dissection on the four-week-old pig.

This protocol details the technique for removal of the pig brain in its entirety and dissection of several brain regions commonly studied in neuroscience.

家畜豚脳の抽出と解剖

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...