この作品は、NIH P30オブライエンセンター（DK 079337）のコアリソースによって賄われていた。

1。術前準備<ol><li>外科的処置は、慎重に行う方法に関係なく、大きなストレスになりません。このようなストレスの影響を最小限に抑えるため、埋蔵量を最大化するために、動物を使用10,11前に少なくとも72時間ビバリウムで維持されるべきです。 </li><li>手術器具、ガーゼ、綿棒とは、無菌でなければならない。これは、楽器のタッチ縫合または術野の唯一のヒントを提供滅菌手袋を使用する必要はありません。 </li><li>止血のためには、クランプ圧力は必要最小限であることが不可欠です。過度の圧力や乱暴な取り扱いに起因する血管への損傷は後肢の麻痺、腸管虚血、および24時間以内の死亡で、その結果、血栓症の原因になります。我々はこれ以上より2グラム/ cm 2の圧力でクランプを使用することで問題を解消することを見出した。これらのクランプは、 表1に記載されています。クランプ圧は高品質外科instrumen製クランプの仕様に示されているトンメーカー。我々は安価なクランプや使い捨てのクランプが普遍的にあまりにも多くの圧力をかけることを見出した。 </li><li>側副血行路と同様に腹部大動脈の相対的な位置と下大静脈（IVC）の場所は、ひずみに依存しています。また、特に側副血行路の場所に、個々のマウスの間に小さな変化を見つけるでしょう。 </li></ol> 2。ドナー操作<ol><li>マウスは、イソフルランで麻酔（1.5から2.5パーセント誘導、空気中の1.0％メンテナンス）または（55から65 mg / kg）をペントバルビタールとすることができます。ペントバルビタールは、制限時間を設定します（1.5時間）が課されますが、必要であれば、より良いアクセスのために動物を回転させるというオプションを外科医に提供しています。麻酔時間が手術中に腸や肝臓に必要なときに麻酔薬を2,3滴を配置することにより、最大2時間まで延長することができる。ケタミン/キシラジン（ケタミンおよびキシラジン、ipの7 mg / kg投与では100 mg / kg体重）もよく訓練された外科医CAで使用することができますnは1から1.5時間以内に手続きを完了するが、それは狭い安全な用量範囲を持っています。米国では、ペントバルビタールの使用が短いため物資の近年では、より問題となっています。それは、麻酔の深さは、それが十分であることを確信しているように監視することが不可欠です。つま先のピンチ反射は十分な深さの最良の指標ですが、1つはまた、同様に呼吸速度と他の動きに注意する必要があります。 </li><li>麻酔導入後、腹側腹部の毛を除去するために、脱毛ゲルやシェーバーを使用しています。 </li><li>スプレッドeagled位置に保持するために実験室のテープを使用してオペレーティング·ボード上の動物をマウントします。金属製のオペレーティング·ボードには、手術中に温度のサポートを提供するために、その下に加熱パッドの使用を可能にします。我々は、手動で家庭用消費者グレード単位で加熱パッドの温度を制御します。温度は35から38℃の間に維持される。金属製のオペレーティング·ボードには、プロシージャ間で滅菌することは容易である。 </li><li>クロルヘキシジンのような消毒剤を使用して、領域を消毒、エタノール洗浄が続く。適切な消毒を確実にするために、この手順を3回繰り返します。存在しているなら、これはまた、髪の残留切断片を除去します。 </li><li>使用したはさみは腹部内臓を露出させるために体壁を通して切開を行います。 </li><li>腹部の大血管を露出する側に内臓をオフにプッシュ、綿棒を使用しています。内臓は、それが湿った保つために温かい生理食塩水で湿らせたガーゼの上に置いています。 </li><li>鈍的切開を使用して、非常に慎重に離れて周囲の組織から腹部大動脈を解剖。下大静脈から血管を解剖では、十分に注意してください。など慎重に持ち上げて、焼灼されている必要があり腰動脈のような1つ以上のブランチが存在するであろう。解離した大動脈のセクションでは、腎血管の下と大腿動脈に大動脈分岐以上にしてください。このセクションでは、できるだけ多くのためのドナー材料として機能することができる分岐血管が存在しており、ドナー動物の大きさに応じてどのように多くの2人の受信者、。 </li><li>ちょうど分岐上記の腎動脈と別の下に縫合糸を結ぶ。使用してハサミが大動脈を分断、完全に200 U / mlのヘパリンを含有する生理食塩水で移植をすすいでください。非常に慎重に容器の一方の端を保持し、それが重力によって血管を通って実行されるように生理食塩水を滴らせる。気泡が血管を介して実行させてはいけない。後で血栓が生じる内膜が損傷することがありますそうでなければはできるだけ容器の端を処理します。フィールドからそれを削除し、直ちに氷冷した生理食塩水の容器に入れてください。ドナー動物の血を抜くすることができます。 </li></ol> 3。受信者動作<ol><li>上記のように動物を麻酔し、脱毛ゲルを適用したり、腹部の毛を除去するためにシェーバーを使用しています。切開直前に我々は、鎮痛効果を確立するために0.1 mg / kgで皮下ブプレノルフィンの用量を投与する。 </li><li> Mount実験用テープを使用してオペレーティング·フィールド上の動物。動物は、動作中に体温を維持するのに役立ちます温かいオペレーティングステージにマウントする必要があります。 </li><li>乾燥からそれらを防ぐために目にゲンタマイシン眼軟膏を適用します。 </li><li>エタノール洗浄が続く腹部を消毒してください。適切な消毒を確実にするために、この手順を3回繰り返します。 </li><li>次のステップに進む前に、もう一度麻酔の妥当性をチェックします。 </li><li>下組織に衝突しないように注意して、2段階で肌や身体の壁を通って正中切開を行います。 </li><li>腹部切開が開いて保持するためにスプレッダを挿入します。道のクランプのバルクが入らないように後肢終わりに向かってスクリューアセンブリを指すようにします。 </li><li>生理食塩水を滅菌ガーゼの正方形を濡らし、腸の上に置きます。ガーゼでそっと指で、腸の下に綿棒を差し込んで、静かにsに腸を上に反映IDEには、そう、彼らはガーゼの上に座っている。ガーゼの別の部分を取り、腸の上に置きますと、生理食塩水でそれを濡らす。 </li><li>大動脈と下大静脈（IVC）を覆っている脂肪組織を削除します。穏やかなこと。 IVCは非常に壊れやすいです。 </li><li>優しくIVCから大動脈大動脈を切開する鉗子を使用しています。それらの間に十分な血管ように2つのクランプのための部屋を提供するのに十分な大きさの領域をクリアするには、分割されたときに、移植片を縫合することができるために十分な血管があるでしょう。解剖すると、血管枝を探します。必要であれば、低温cauterizerでそれらを焼灼する。 </li><li>ちょうど分岐上記の腎動脈と別の1以下に血管クランプを挿入します。 </li><li>大動脈を切った。大動脈の末端は、通常、約5mmのスペースを残して、後退します。止血を確認してください。クランプが正しく動作している場合は、血液の量が少なく、カットした後にエスケープする必要があります。出血が続く場合は、何も干渉されていないことを確認するために、クランプをチェック彼らとING。大動脈のどれが削除されていないことに注意してください。それは単に分割されています。 </li><li>ヘパリン加生理食塩水で切断端部（200 U / ml）を洗い流してから綿棒で余分な液を除去する。 </li><li>各端で3不連続縫合糸を用いて所定の位置にタックを移植。ちょうど各端に吻合部の片側を縫合した後、連続運転縫合以上の不連続縫合糸で残りを埋める。 7〜8不連続縫合糸で十分です。あなたが実行している縫合糸を使用した場合、血管壁は、リラックスしたままで、あなたは吻合で狭窄を起こさないことを確認してください。 </li><li>慎重に頭蓋端にクランプを取り外し、縫合線に漏れがないかを探します。湧水の少量はOK、それが約分以内に停止し提供しています。それ以上があるとすれば、それは出血を止めるためにシングルステッチを使用することが可能です。 </li><li>そっと濡れた綿棒で吻合部大動脈上に押し、次に2番目のクランプを外します。そっと押して、時代のカップルを解放し、大動脈が特許されることを確認します。移植片は、直ちに灌流され、パルスが見えるはずです。 </li><li>腸を覆っているガーゼを外し、代わりにそれらを戻します。腸のねじれを回避し、正常な解剖学的配向を維持する。 </li><li> 5から0 VICRYLを使用して筋層を閉じます。 </li><li> 5から0または6から0プロレンを用いて皮膚を閉じます。 </li><li>麻酔を終了する前に鎮痛効果を増強するために5 mg / kgでcarprophenを皮下マウスを扱う。 </li><li>マウスの皮下に生理食塩水0.5〜0.8ミリリットルを与える。 </li><li>回復するために加熱されたケージにマウスを置きます。それが正常に回復していることを確認するためにリカバリ時にそれを注意深く監視する。手術後2〜3時間は、マウスは、比較的正常に動作しなければなりません。 12時間後のオペアンプでは、鎮痛のために2 mg / kgで皮下ブプレノルフィンで動物を扱う。いつでも、動物が猫背された場合は、ノイズを作ったり、動きの制限された範囲を示す、問題を調査してください。場合決定的な原因が確立して固定することができず、動物は、制度のプロトコルごとに安楽死させなければならない。 24時間後に動物は、5 mg / kgで皮下carprophenの別の線量を受けるべきである。後肢麻痺が失敗した吻合または血栓を示します。この状況では、動物を安楽死させなければならない。 </li></ol>

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	<li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation.">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18, 368-371 (1998).</li><li>Dambrin, C., Calise, D., Pieraggi, M. T., Thiers, J. C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+aortic+transplantation+in+mice:+a+new+model+of+allograft+arteriosclerosis.">Orthotopic aortic transplantation in mice: a new model of allograft arteriosclerosis.</a> J. Heart Lung Transpl. 18, 946-951 (1999).</li><li>Calise, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+aortic+transplantation+in+rodents+by+the+sleeve+technique:+a+model+system+for+the+study+of+graft+vascular+disease.">Orthotopic aortic transplantation in rodents by the sleeve technique: a model system for the study of graft vascular disease.</a> Transpl. Proc. 33, 2369-2370 (2001).</li><li>Thomsen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+aortic+graft+mouse+model+to+study+the+immunopathology+of+chronic+vascular+rejection.">An orthotopic aortic graft mouse model to study the immunopathology of chronic vascular rejection.</a> Transpl. Proc. 34, 2833-2835 (2002).</li><li>Benza, R. L., George, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aortic+graft+transplantation+in+mice.">Aortic graft transplantation in mice.</a> J. Heart Lung Transpl. 21, 1319-1321 (2002).</li><li>Chereshnev, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+heterotopic+aortic+arch+transplantation.">Mouse model of heterotopic aortic arch transplantation.</a> The Journal of surgical research. 111, 171-176 (2003).</li><li>Cho, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+surgical+technique+for+heterotopic+aortic+transplantation+in+mice.">Improved surgical technique for heterotopic aortic transplantation in mice.</a> J. Korean Med. Sci. 22, 12-15 (2007).</li><li>Zhong, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+transplantation+in+mice:+current+status+and+future+prospects.">Organ transplantation in mice: current status and future prospects.</a> Microsurgery. 19, 52-55 (1999).</li><li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men:+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease.">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transpl. 24, 2003-2014 (2005).</li><li>Gorska, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+in+laboratory+animal+research+for+experimental+purposes.">Principles in laboratory animal research for experimental purposes.</a> Med Sci Monit. 6, 171-180 (2000).</li><li>Landi, M. S., Kreider, J. W., Lang, C. M., Bullock, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+shipping+on+the+immune+function+in+mice.">Effects of shipping on the immune function in mice.</a> Am. J. Vet. Res. 43, 1654-1657 (1982).</li><li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation.">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18, 368-371 (1998).</li><li>Chen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+monoxide+rescues+heme+oxygenase-1-deficient+mice+from+arterial+thrombosis+in+allogeneic+aortic+transplantation.">Carbon monoxide rescues heme oxygenase-1-deficient mice from arterial thrombosis in allogeneic aortic transplantation.</a> Am. J. Pathol. 175, 422-429 (2009).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.+Transpl.">Heart transplantation in congenic strains of mice. Transpl.</a> Proc. 5, 733-735 (1973).</li><li>Chang, E. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+anastomosis+using+controlled+phase+transitions+in+poloxamer+gels.">Vascular anastomosis using controlled phase transitions in poloxamer gels.</a> Nature medicine. 17, 1147-1152 (2011).</li></ol>

特別な利害関係は宣言されません。

マウスは非常によくimmunogenetically 9,12,13定義されており、必要に応じてそれらを簡単に、特定の遺伝子の発現を変化させるように操作することができるので、大動脈移植のマウスモデルは、多くの利点を提供します。冒頭で述べたように、マウスの血管手術が原因の血管のサイズのほとんどのモデルよりも困難である。このような大動脈としても偉大な動脈は、通常、内径100〜200ミク?...

<table border="1"><tbody><tr><td>アイテム</td><td>会社</td><td>カタログナンバー</td></tr><tr><td>血管クランプ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 00396から01（サイズB-1を参照） </td></tr><tr><td>デュモン鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11293から00 </td></tr><tr><td> 10から0はmicrosutureにニードル</td><td> AROSurgical </td><td> TK-107038 </td></tr><tr><td>ストレートはさみ</td><td> Roboz手術器具株式会社</td><td> RS-5620 </td></tr><tr><td>低温cauterizer </td><td>ビーバー-Visitec国際</td><td> 8441000 </td></tr><tr><td>自己保持トラクタ</td><td>ワールド·精密機器</td><td> 14240 </td></tr></tbody></table>

orthotopic aortic transplantation in mice for the study of vascular disease

マウスで吻合を伴う血管の手順は、一般的に困難であり、個々の外科医の技量に大きく依存すると考えられている。これは主に真であるが、これらの手続きの難しさを軽減し、再現性を高めることができる重要な原則がいくつかあります。同所性大動脈移植は、それが唯一の2つのエンド·ツー·エンドの吻合を伴うため、これらの原則を学ぶためにいる優秀な手順ですが、一貫性のある成功のための良好な縫合技術や船舶の取り扱いを必要とします。この手順では、レシピエントにおけるネイティブ大動脈の分裂が続くドナー動物から腹部大動脈の長さの調達から始まります。調達大動脈は、その後、受信者の大動脈の分割端部の間に配置され、エンドツーエンドの吻合を用いて、所定の位置に縫合する。この目的を達成するために首尾よく集中度の高い、優れたツール、着実に手、そしてどのように簡単に感謝の意を必要とするマウスの血管系は、血栓症で、その結果、破損することがあります。これらの重要な原則を学ぶことは、小型げっ歯類ではマイクロサージェリーを学習する際に最も初心者向けの時間を占めているものです。このプロトコルでは、私たちはこれらの重要なポイントを参照してください。このモデルは、1から8までの異なる実験系の様々な血管疾患を研究するために使用することができます。ここに示されている文脈では、それはほとんどの場合、移植後血管疾患、内膜肥厚は、同種移植片内で発生する固形臓器移植の共通の長期合併症の研究のために使用されます。モデルの主な利点は、それが定量的な形態学的解析を容易にし、移植された容器は、追加の制御9として役立つことができる内因性容器に隣接する位置していることです。ここに示されている技術は、ほとんどの場合18〜25グラムの重量を量るマウスに使用されます。我々は、C57BL/6J、BALB / CJ、とのC3H/HeJ株を用いて、我々の経験のほとんどを蓄積してきました。

図1は、大動脈移植片を示しています。白い矢印は、縫合線を示す。特許グラフトは、可視パルスが表示されます。 図2は、受信者の生存率は56日間にわたって続いている、典型的な実験であることを示します。一つのグループは、BALB / c大動脈を移植した野生型（C57BL / 6×FVB）レシピエントマウスから成っていた。 &quot;KO&quot;と称する他のグループは、24時間内グラフ...

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Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

我々は、マウスからの腹部大動脈の部分がちょうど同種もしくは同系レシピエントにおける腎動脈下に同所移植する技術が記載されている。この手法は、均一な大きさの大きな動脈の移植が有利と認められる研究に役立つことがあります。

血管疾患の研究のためのマウスにおける同所性大動脈移植

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

10.8K ビュー.  The University of Alabama at Birmingham. 我々は、マウスからの腹部大動脈の部分がちょうど同種もしくは同系レシピエントにおける腎動脈下に同所移植する技術が記載されている。この手法は、均一な大きさの大きな動脈の移植が有利と認められる研究に役立つことがあります。

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Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

同所性大動脈移植：慢性血管障害の発生研究のラットモデル

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

医学

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Small bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with short gut syndrome and failure of parenteral nutrition (irreversible intestinal failure). In specialized centers improved operative and managing strategies have led to excellent short- and intermediate term patient and graft survival while providing high quality of life 1,3. Unlike in the more common transplantation of other solid organs (i.e. heart, liver) many underlying mechanisms of graft function and immunologic alterations induced by intestinal transplantation are not entirely known6,7. Episodes of acute rejection, sepsis and chronic graft failure are the main obstacles still contributing to less favorable long term outcome and hindering a more widespread employment of the procedure despite a growing number of patients on home parenteral nutrition who would potentially benefit from such a transplant. The small intestine contains a large number of passenger leucocytes commonly referred to as part of the gut associated lymphoid system (GALT) this being part of the reason for the high immunogenity of the intestinal graft. The presence and close proximity of many commensals and pathogens in the gut explains the severity of sepsis episodes once graft mucosal integrity is compromised (for example by rejection). To advance the field of intestinal- and multiorgan transplantation more data generated from reliable and feasible animal models is needed. The model provided herein combines both reliability and feasibility once established in a standardized manner and can provide valuable insight in the underlying complex molecular, cellular and functional mechanisms that are triggered by intestinal transplantation. We have successfully used and refined the described procedure over more than 5 years in our laboratory 8-11. The JoVE video-based format is especially useful to demonstrate the complex procedure and avoid initial pitfalls for groups planning to establish an orthotopic rodent model investigating intestinal transplantation.

Small bowel transplantation has become an accepted treatment option for patients with irreversible intestinal failure. Our experimental model of orthotopic small bowel transplantation in rats serves as a reliable tool to address underlying immunologic and inflammatory processes that complicate intestinal transplantation.

ラット同所性小腸移植

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Orthotopic Liver Transplantation in Rats

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat liver transplantation in 1979 by Kamada et al.3, this model has remained the gold standard despite various proposed alternative techniques4. Nevertheless, its broader use is limited by its steep learning curve5.
In this video paper, we show a simple and easy-to-establish revision of Kamada's two-cuff technique. The suprahepatic vena cava anastomosis is performed manually with a running suture, and the vena porta and infrahepatic vena cava anastomoses are performed utilizing a quick-linker cuff system6. Manufacturing the quick-linker kit is shown in a separate video paper.

We present an easy-to-establish revision of the classical two-cuff technique for orthotopic liver transplantation in rat.

ラット同所性肝移植

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat ...

Ascending Aortic Constriction in Rats for Creation of Pressure Overload Cardiac Hypertrophy Model

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart failure. Here, we describe a detailed surgical procedure for creating pressure overload and cardiac hypertrophy in rats by constriction of the ascending aorta using a small metallic clip. After anesthesia, the trachea is intubated by inserting a cannula through a half way incision made between two cartilage rings of trachea. Then a skin incision is made at the level of the second intercostal space on the left chest wall and muscle layers are cleared to locate the ascending portion of aorta. The ascending aorta is constricted to 50&#8211;60% of its original diameter by application of a small sized titanium clip. Following aortic constriction, the second and third ribs are approximated with prolene sutures. The tracheal cannula is removed once spontaneous breathing was re-established. The animal is allowed to recover on the heating pad by gradually lowering anesthesia. The intensity of pressure overload created by constriction of the ascending aorta is determined by recording the pressure gradient using trans-thoracic two dimensional Doppler-echocardiography. Overall this protocol is useful to study the remodeling events and contractile properties of the heart during the gradual onset and progression from compensated cardiac hypertrophy to heart failure stage.

We describe a stepwise procedure for creating pressure overload and left ventricular hypertrophy in Wistar rats by constriction of the ascending aorta using a small metallic clip. This model is extensively used for studying remodeling changes during cardiac hypertrophy and for identifying and evaluating strategies for regression of such changes.

圧負荷心肥大モデルの作成のためのラットの大動脈狭窄昇順

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and translational research in the field of transplantation medicine. A vast array of reagents is available exclusively in this setting, including mono- and polyclonal antibodies for both diagnostic and interventional applications. In addition, a vast number of genotyped, inbred, transgenic, and knock out strains allow detailed investigation of the individual contributions of humoral and cellular components to the complex interplay of an immune response and make the mouse the gold standard for immunological research. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) delineates a novel field of transplantation using allografts to replace "like with like" in patients suffering traumatic or congenital tissue loss. This surgical methodological protocol shows the use of a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. The model specifically allows for comparison between established paradigms in solid organ transplantation with a novel form of transplants consisting of various different tissue components. Uniquely, this model allows for the transplantation of a viable vascularized bone marrow compartment and niche that have the potential to exert a beneficial effect on the balance of immune acceptance and rejection. This technique provides a tool to investigate alloantigen recognition and allograft rejection and acceptance, as well as enables the pursuit of functional nerve regeneration studies to further advance this novel field of transplantation.

This novel model for orthotopic hind limb transplantation in the mouse, applying a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis, provides a powerful tool for in&#160;vivo mechanistic immunological research related to vascularized composite allotransplantation (VCA).

マウスで同所後肢移植

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world. Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and calcification, develop in the coronary arteries, aortic valve, aorta, and peripheral conduit arteries and are the hallmark of cardiovascular disease. In humans, imaging with computed tomography allows for the quantification of vascular calcification; the presence of vascular calcification is a strong predictor of future cardiovascular events. Development of novel therapies in cardiovascular disease relies critically on improving our understanding of the underlying molecular mechanisms of atherosclerosis. Advancing our knowledge of atherosclerotic mechanisms relies on murine and cell-based models. Here, a method for imaging aortic calcification and macrophage infiltration using two spectrally distinct near-infrared fluorescent imaging probes is detailed. Near-infrared fluorescent imaging allows for the ex vivo quantification of calcification and macrophage accumulation in the entire aorta and can be used to further our understanding of the mechanistic relationship between inflammation and calcification in atherosclerosis. Additionally, a method for isolating and culturing animal aortic vascular smooth muscle cells and a protocol for inducing calcification in cultured smooth muscle cells from either murine aortas or from human coronary arteries is described. This in vitro method of modeling vascular calcification can be used to identify and characterize the signaling pathways likely important for the development of vascular disease, in the hopes of discovering novel targets for therapy.

Vascular calcification is an important predictor of and contributor to human cardiovascular disease. This protocol describes methods for inducing calcification of cultured primary vascular smooth muscle cells and for quantifying calcification and macrophage burden in animal aortas using near-infrared fluorescence imaging.

血管平滑筋細胞と大動脈石灰化と炎症のイメージングの石灰化

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world.  Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the aorta in mice using the sleeve method was short and easy averaging 20 min, permitting studies of iso/allo grafts. The following article describes the aortic transplantation procedure used in our laboratory. The mice were anesthetized with a mixture of 1.5% volume isoflurane and 100% oxygen through a face mask. At this point, the segment of the aorta between the renal arteries and its bifurcation was separated from the vena cava, freely prepared and clampedat the proximal and distal segments with a single silk suture. Prior to the removal of the aorta, a saline solution containing heparin was injected into the inferior vena cava. Then the aorta was cut between the clamps and a saline heparin solution was used to flush the lumen. The sleeve technique with monofilament sutures was used in order to transplant the abdominal aorta in the orthotopic position.

We present an orthotopic aortic transplantation model using the sleeve technique in mice. It is a very rapid anastomosis method, which can be employed in studies of vascular disease.

大動脈弁移植 - 教則ビデオのマウスモデルでスリーブを用いた

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard open-chest transverse aortic constriction (TAC). Although transverse aortic constriction is a highly functional method for the induction of high pressure in the left ventricle, it is a more difficult and lengthy procedure due to its use of artificial ventilation with tracheal intubation. TAC is oftentimes also less survivable, as the newer method, MTAC, neither requires the cutting of the ribs and intercostal muscles nor tracheal intubation with a ventilation setup. In MTAC, as opposed to a thoracotomy to access to the chest cavity, the aortic arch is reached through a midline incision in the anterior neck. The thyroid is pulled back to reveal the sternal notch. The sternum is subsequently cut down to the second rib level, and the aortic arch is reached simply by separating the connective tissues and thymus. From there, a suture can be wrapped around the arch and tied with a spacer, and then the sternal cut and skin can be closed. MTAC is a much faster and less invasive way to induce left ventricular hypertension and enables the possibility for high-throughput studies. The success of the constriction can be verified using high-frequency trans-thoracic echocardiography, particularly color Doppler and pulsed-wave Doppler, to determine the flow velocities of the aortic arch and left and right carotid arteries, the dimension of the blood vessels, and the left ventricular function and morphology. A successful constriction will also trigger significant histopathological changes, such as cardiac muscle cell hypertrophy with interstitial and perivascular fibrosis. Here, the procedure of MTAC is described, demonstrating how the resulting flow changes in the carotid arteries can be examined with echocardiography, gross morphology, and histopathological changes in the heart.

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) conserves the essentials of regular transverse aortic constriction (TAC) while eliminating the use of a ventilator with tracheal intubation. It proves to be a highly desirable method for high-throughput studies on left ventricular overload, particularly in translational studies.

マウスにおける低侵襲横大動脈狭窄

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

Induction of Nephrotic Syndrome in Mice by Retrobulbar Injection of Doxorubicin and Prevention of Volume Retention by Sustained Release Aprotinin

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due to sodium retention and hyperlipidemia. To study the pathophysiology of this syndrome, rodent models have been developed based on the injection of toxic substances such as doxorubicin causing podocyte damage. In mice, only few strains are susceptible to this model. In wildtype 129S1/SvImJ mice, the administration of doxorubicin by rapid intravenous injection to the retrobulbar sinus induces experimental nephrotic syndrome that features all the symptoms of human disease including sodium retention and edema. After the onset of proteinuria, mice exhibit increased urinary serine protease activity that leads to the activation of the epithelial sodium channel (ENaC) and sodium retention. Pharmacological inhibition of urinary serine proteases by the treatment with sustained release aprotinin abrogates ENaC activation and prevents sodium retention. This model is ideal to study the pathophysiology of proteasuria, i.e., the excretion of active serine proteases that cause ENaC activation by the proteolysis of its &#947;-subunit. This can be regarded as the primary mechanism of ENaC activation and sodium retention in proteinuric kidney disease.

Here, we describe the induction of experimental nephrotic syndrome in 129S1/SvImJ mice by rapid retrobulbar injection of doxorubicin. We also treat nephrotic mice with sustained release pellets containing aprotinin to inhibit urinary serine protease activity and prevent sodium retention.

ドキソルビシンの球後注射と徐放性アプロチニンによるボリューム保持の予防によるマウスのネフローゼ症候群の誘導

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due ...

A Model of Reverse Vascular Remodeling in Pulmonary Hypertension Due to Left Heart Disease by Aortic Debanding in Rats

Pulmonary hypertension due to left heart disease (PH-LHD) is the most common form of PH, yet its pathophysiology is poorly characterized than pulmonary arterial hypertension (PAH). As a result, approved therapeutic interventions for the treatment or prevention of PH-LHD are missing. Medications used to treat PH in PAH patients are not recommended for treatment of PH-LHD, as reduced pulmonary vascular resistance (PVR) and increased pulmonary blood flow in the presence of increased left-sided filling pressures may cause left heart decompensation and pulmonary edema. New strategies need to be developed to reverse PH in LHD patients. In contrast to PAH, PH-LHD develops due to increased mechanical load caused by congestion of blood into the lung circulation during left heart failure. Clinically, mechanical unloading of the left ventricle (LV) by aortic valve replacement in aortic stenosis patients or by implantation of LV assist devices in end-stage heart failure patients normalizes not only pulmonary arterial and right ventricular (RV) pressures but also PVR, thus providing indirect evidence for reverse remodeling in the pulmonary vasculature. Using an established rat model of PH-LHD due to left heart failure triggered by pressure overload with subsequent development of PH, a model is developed to study the molecular and cellular mechanisms of this physiological reverse remodeling process. Specifically, an aortic debanding surgery was performed, which resulted in reverse remodeling of the LV myocardium and its unloading. In parallel, complete normalization of RV systolic pressure and significant but incomplete reversal of RV hypertrophy was detectable. This model may present a valuable tool to study the mechanisms of physiological reverse remodeling in the pulmonary circulation and the RV, aiming to develop therapeutic strategies for treating PH-LHD and other forms of PH.

The present protocol describes a surgical procedure to remove ascending-aortic banding in a rat model of pulmonary hypertension due to left heart disease. This technique studies endogenous mechanisms of reverse remodeling in the pulmonary circulation and the right heart, thus informing strategies to reverse pulmonary hypertension and/or right ventricular dysfunction.

ラットの大動脈剥離による左心疾患による肺高血圧症における逆血管リモデリングのモデル

Pulmonary hypertension due to left heart disease (PH-LHD) is the most common form of PH, yet its pathophysiology is poorly characterized than pulmonary ...