We greatly acknowledge financial support by NIH R01 CA123495, U01 CA151815, R01 CA136841, grants from the Department of Neurosurgery at Cedars-Cedars Medical Center and Arrogene Technology Inc.

全ての実験は、生体内で行われ、動物実験委員会のプロトコルに完全に従っている外科的および非外科的手順を含む公式の動物の規制に準拠しています。 ポリリンゴ酸の1。バイオプロダクション<ol><li>寒天上の小球から種培養を成長させ、培養器、基礎培養液8,9を述べた熱は25℃を使用した100ミリリットルの培地にマラリア原虫を転送します。 </li><li>胞子形成を避けるために、光を排除したマイクロマラリア原虫重力満載の500ミリリットルの量を生産する。 </li><li> 10 Lバイオリアクター容器内に8リットルの基礎培地に懸濁し80グラムの炭酸カルシウムを準備します。マウントされた反応容器に500ミリリットルパックマイクロマラリア原虫を転送し、25℃で、濾過された空気とセグメントスターラーで150 rpmで攪拌​​を10リットル/分の流量で75時間にわたってバイオプロセスを可能にします。 </li><li>培養液をPMLAの生産の終了を示すpHが4.8である場合に終了とtによってPMLA含量を測定彼/鉄（III）アッセイをヒドロキ。 </li><li> 17℃に培養液を冷却し、細胞が重力によって沈降させる。 </li><li> ℃で4に冷却し、2MのNaOHを使用し、pH7.5に調整してください。 （5℃で20mMトリス塩酸（pH7.5）で平衡化した粗粒DEAEなど）を先頭に、方向底部にDEAE-セルロース1.5 Lを充填したカラムに上清を送り出す。 </li><li>上から下への方向を変更した後、0.3MのNaClを含む緩衝液3列で洗浄し、0.7 MのNaClの存在下でPMLAを溶出。 </li><li> 0.1Mの塩化カルシウムに調整し、80％の氷冷エタノールでPMLA -カルシウムを沈殿させる。 300 kDaの、50 - - 80のPMLA - カルシウムにデックスG25上分画80kDaの、そして10から50 kDaの、バッファー、塩がない状態で水を使用しています。 </li><li>アンバーライトIR 120H +カラムに各画分を渡し、すぐにフロースルーポリリンゴ酸、液体窒素中で凍結乾燥のために凍結する。 </li><li>乾燥アセトンに溶解する。濾過後、溶媒を除去マイナス20℃の乾燥空気流中、凍結乾燥および保存</li></ol> 2。ポリリンゴ酸ベースのナノ薬物の合成<ol><li>無水アセトン1ミリリットルと2ミリリットルのジメチルホルムアミド（DMF）中の1ミリモル、N-ヒドロキシスクシンと1ミリモルジシクロヘキシルカルボジイミド中のPMLA-Hの116（1ミリモルマリル単位）を混合することにより、PMLA（P）のカルボキシル基を活性化。 3時間20℃で撹拌する。 0.05ミリモルのトリエチルアミン（TEA）に続いて1ミリリットルのDMFにおけるMPEG 5000-NH 2（マリル単位0.05モル％）の0.05ミリモルを追加します。 </li><li> 、賢明DMF 0.4ミリモルロイシンエチルエステル（LOEt）（マリル単位の40モル％）、0.1ミリモルの2 - チオール-1 - エチルアミン（2-MEA）（マリル単位の10モル％）および0.5ミリモルTEAに溶解降下を追加するすべてのDMFに溶解した。各添加後、1時間を許可し、否定的なニンヒドリン反応（薄層クロマトグラフィー、TLC）により反応の完了を確認してください。 </li><li>リン酸緩衝生理食塩水（30分間、pH6.8）中で自発的な加水分解によって残りのNHS-エステルを除去しない。 PD上で脱塩-10列、凍結乾燥により白色粉末として「preconjugate」を得る。マイナス20℃で保存し、乾燥</li><li> 100 mMリン酸ナトリウム、150mMのNaCl、pH5.5で4.5mlの30 mgの抗体（mAbでのIgG2a-κ）を溶解する。 </li><li> 5mMのトリス（2 - カルボキシエチル）、20℃で30分間ホスフィン塩酸塩とジスルフィド結合を還元し、PD-10カラムで精製する。 </li><li>同緩衝液2mlにMAL-PEG 3400-MALを溶解し、10ミリリットルの最終容量で減少モノクローナル抗体を追加し、4℃で一晩撹拌するビバスピン20除外30 kDの上で2.5ミリリットルに濃縮し、セファデックスG75上浄化する。 SEC-HPLC上で製品を確認して、測光法280 nmの波長で量を測定する。 </li><li> MAL-PEG-MAL-モノクローナル抗体を接続するには「preconjugate「P / PEG 5000（5％）/ LOEt（40％）/モノクローナル抗体（0.2％）/ 2-MEA（10％）を得たチオール。上記緩衝液pH5.5中で（P / MPEG 5000 / LOEt/2-MEA）50 mgの200ナノモルモノクローナル抗体-PEG 3400-MALの5ミリリットルを混合することによってこれを行うsulfhyの濃度を調整2 mMまでDRYLと3時間（98％）を得、20℃でインキュベートする。 </li><li> DMF / PBS（pH7.2）中、3&#39;-H 2 N-AONを可溶化し、ニンヒドリン試験（（1:1 v / v）のDMF /メタノール中でN-スクシンイミジル-3 - （2 -ピリジルジチオ）プロピオネート（SPDP）と反応）、次いで水および凍結乾燥で、メタノール中のセファデックスLH20にわたってAON-PDPを精製する。 </li><li>ジスルフィド交換反応が終了するまで一晩上記で調製したMAL-PEG 3400-MAL-モノクローナル抗体-preconjugateで5.5 pH緩衝800ナノモルのアクティブ化のAONをインキュベートする。 </li><li> 680-マレイミドポリマー-2-MEA-SHとチオエーテル構成する蛍光アレクサフルーアが組み込まれています。 3 - ピリジルジチオ - プロピオネート（PDP）と過剰スルフヒドリルをブロックし、セファデックスG75上で浄化する。 4℃で保存するかは、使用するまで-80℃で凍結した。 </li></ol> 3。アッセイおよびプロパティ<ol><li> SEC-HPLC分析によって4℃、37℃、純度と安定性PBS中および血清中のテストを実行します。 molecとしてポリスチレンスルホン酸を使用して、ウラル量標準。ナノサイズ分布とゼータ電位を測定する。商用システムを使用してください。 </li><li> 320μlのサンプルに10％の160μlの（w / v）の塩化ヒドロキシルアンモニウムと10％の160μlのNaOH水溶液（w / vの）を追加する。 10-15分後、（w / v）の鉄（III）Clで3〜12％において5％の160μlの混合（v / v）のHClおよびヒドロキサ/ Feが540を読み取る（III）。 PMLAは1 mg / mlのPMLAは2.5 540に対応していると仮定して計算します。 </li><li> 110℃で2 M HCl中で一晩ナノ薬物を加水分解し、サンプルを参照して、逆相クロマトグラフィーでの分析リンゴ酸はリンゴ酸標準でスパイクした。 100 mMジチオスレイトールとナノ薬剤を切断し、モルホリノAON標準に対する定量的な逆相HPLCによるモルホリノAONを測定します。 </li><li>切断せずにナノ薬物を取り、タンパク質アッセイキットを用いて抗体を測定する。アンモニウムferrothiocyanateとの反応を可能にすることにより、ペグを定量化し、クロロホルムで抽出し、510 nmの波長の10の吸光度を読む</SUP&gt;。 </li><li>よく抗体活動とcolligationをテストごとのナノ薬物を5μL（1月10日100μgのモノクローナル抗体）を用いたELISAを実行します。プレートコーティングされた抗原およびペルオキシダーゼ結合二次抗体として、それぞれ、0.5μgの/ウェルトランスフェリン受容体とHER2を使用してください。 </li><li> （例を表1と表2を参照）、リンゴ酸（100％）に関してのAON、MPEGやモノクローナル抗体で達成％を計算し、設計者が意図％と比較します。 </li></ol> 4。in vitro試験 <ol><li> 3 [イエロー試薬を低減するために、それらの活性によって経時的に生存細胞培養癌細胞及びナノ尺度で薬物をインキュベートする - （4,5 - ジメチルチアゾール-2 - イル）-5 - （3 - カルボキシメトキシフェニル）-2 - （4 - スルホフェニル）-2H-テトラゾリウム、内塩]（MTS）の青色染料にし、光度計で相対吸光度を読む。キットの供給者が指示に従ってください。 </li><li>ウェスタンブロッティングのためのin vitroまたはex vivoでの細胞抽出物を準備します。氷のように冷たい抽出Bを使用SDSおよびプロテアーゼ阻害剤カクテルが含まれていuffer。 SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動を減少させることによって別々のタンパク質。 </li><li>サンプル抽出物中の目的のタンパク質のウェスタンブロッティングを行います。アルカリホスファターゼに結合させた二次抗体を使用してください。 </li><li>蛍光標識を用いて細胞取り込みおよびナノ薬剤ポリマープラットフォーム、AONおよびエンドソームの共局在を実証するために、共焦点顕微鏡を使用する。蛍光標識としてのAONはにナノ複合体プラットフォームにアレクサフルーア680を取り付け、リサミン。標識分子の分布を可視化するために顕微鏡5Xスペクトルスキャナ、生癌細胞を使用</li><li>染色エンドソームスチレッド蛍光色素を有する膜とは、エンドソームの共局在やリリースを示しています。 </li></ol> 5。in vivo試験 <ol><li>ヒトHER2陽性乳癌のマウスモデルを準備します（ヌードマウスタック：クロム：（MCR） - Foxnnm）。ペレットをリリース0.72 mgの17β-エストラジオールを挿入します（90日リリース）Subcutaneously各マウスの首の。 </li><li>その後、皮下に右脇腹に1×10 7のBT-474腫瘍細胞を注入し、腫瘍が成長してみましょう。 </li><li>腫瘍が尾静脈に2.5ミリグラムを含有する150μlのナノ複合体を注入することによってサイズ120 mm 3であるときに治療を開始/ AONおよび/ ​​または4.5mgの各抗体/ kgの範囲であり得る。治療のために、1週間に2回、完全に6回注入する。 </li><li>二度の弱いノギスで腫瘍の大きさを測定し、式（長さ×奥行×幅）×（π/ 6）を使用して、ボリュームを計算します。 2週間最後の注射後に頸椎脱臼に続いケタミンとデクスメデトミジンの溶液で鎮静した後に動物を安楽死させる。 </li><li>形態学的評価のために、H＆Eで腫瘍やシミ部分を分離します。 </li><li>動物のスケールでの薬剤の分布を評価するため、蛍光画像化システムを使用する。 24および48時間後にアレクサフルーア680ラベルナノ薬物および画像を注入する。 </li><li>動物を安楽死させるとフッ素を検出孤立して灌流した腫瘍や臓器にescence。 </li></ol>

<ol>
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Natl. Acad. Sci. USA. 107, 18143-18148 (2010).</li><li>Inoue, S., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanobioconjugate+inhibition+of+HER2/neu+signaling+and+synthesis+provides+efficient+mouse+breast+cancer+treatment.">Nanobioconjugate inhibition of HER2/neu signaling and synthesis provides efficient mouse breast cancer treatment.</a> Cancer Research. 71, 1454-1464 (2011).</li><li>Maeda, H., Sawa, T., Konno, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+tumor-targeted+delivery+of+macromolecular+drugs,+including+the+EPR+effect+in+solid+tumor+and+clinical+overview+of+the+prototype+polymeric+drug+SMANS.">Mechanism of tumor-targeted delivery of macromolecular drugs, including the EPR effect in solid tumor and clinical overview of the prototype polymeric drug SMANS.</a> J. Control. 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著者ジュリアY. Ljubimova、キース·L·ブラック、EggehardホラーはArrogeneテクノロジー株式会社の株主である

生分解性天然ポリマーからのナノ薬物の製造のための実験的経路は、個別化医療の合成に使用することが提示される。説明は、ナノ薬物を合成するための汎用的なプラットフォームですポリリンゴ酸の制御された生産および精製から始まります。再現可能な技術を用いて、ポリマーは、高分子量でおよび医薬の合成に適した極端な純度で得られる。合成は、効率的にHER2陽性乳癌を治療するために示されているナノ薬物に記載されている。説明は、癌の治療のための他のほとんどのナノ薬物の合成に変換することができる。標的化は、例えば、HER2タンパク質または効率的に内在化される任意の他の腫瘍マーカーとして腫瘍特異的抗原に結合する、例えばハーセプチンなどの抗体を含む。ナノ薬物を効率よくトレ下で癌の増殖を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび化学療法剤の選択を提供しatment。この例では、HER2-コーディングmRNAとHER2と特異的アンチセンスオリゴヌクレオチドのアニーリングに結合ハーセプチンは、HER2シグナル伝達とHER2陽性乳癌の深刻な減少の持続的阻止をもたらした。我々は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによる腫瘍標的化および遺伝子発現の阻害の基礎となる原理に基づいて最新のは、いくつかの他のナノ薬物および正常ヒト神経膠芽腫阻害し、前臨床およびトリプルネガティブ乳がん11,14-18を合成した。 合成作業はモジホコリカビ （「粘菌」科の種）の培養上清よりポリリンゴ酸、高度に精製されたナノ薬物プラットフォームの準備を開始します。調製物は、多数の抗体、ペプチド、オリゴヌクレオチドおよび活性薬物送達および腫瘍増殖阻害で機能する他の分子の結合を可能にする原則として、ポリマーの高い分子量を強調する。 Followi制御された培養および精製ngの、予測可能な収率でポリマーの再現性の品質が製造されている。ポリマーは、任意の時間のための便利な条件下で保存されている。 ポリマーのペンダントカルボキシレートの化学的活性始まるPMLAナノ複合体の合成は、いくつかの合成工程で行われる。ステップ間では、合成中間体は、必要に応じて任意の量の調製を可能にする保留にすることができるので、スケーリングをアップで使用することができる。合成の進行をTLCおよびsec​​-HPLCに続いて、ナノ薬剤の組成および活性の両方がグループ固有の定量的な化学的アッセイ、ELISA、および種々の物理的測定によって制御される。我々の経験は、これらの合成は、優れた収率と純度でスムーズかつ再現進行されてきたということです。 PEで必要に応じて、抗体およびアンチセンスオリゴヌクレオチドの特異性を選択することにより、ナノ薬剤の任意の変異体を良好に合成され、薬をrsonalized。 ヒトHER2陽性乳癌の治療成功の様式は、マウス癌モデルの製造、ナノ薬、イメージング、腫瘍増殖の分析の適用のための有効な代表例である。 インビトロでの生存試験の結果は、細胞株および動物実験で使用されるリーディング薬を選択する上で有用である。 インビボゼノジェンイメージングは、ナノ薬物が実際に腫瘍に送達されることを検証する。ウエスタンブロッティングの結果は、特定のタンパク質のレベルは、がん治療中の予測方法で答えたかどうかを明らかにする。腫瘍の大きさの測定が阻害、不況や回帰について、 すなわち 、治療の成功について通知します。上記の例では予測可能性、再現性と顕著な毒性がないの高い度合いを示す他のポリリンゴ酸系ナノ薬剤との我々の経験を反映している。複数のTの毒性と有効性に関する最近の結果トリプルネガティブ乳がん治療のためargetedポリリンゴ酸抱合体は、この概念18の強力なサポートである。腫瘍間質へ向かう血管外への浸潤による内皮バリアー、エンドソームの取り込みによる腫瘍細胞膜、およびロイシンエチルエステルまたはトリロイシングループの作用によりエンドソーム膜破壊：主な特徴は、私たちのナノ薬剤がバイオ障壁を浸透することができるということです。血管外漏出とエンドソームの取り込みを確実にナノ薬に​​添付特異的抗体によって達成される。抗マウストランスフェリン受容体抗体は、受容体は、ほとんどの腫瘍血管に過剰発現しているためか、トランスサイトーシスにより、腫瘍への効率的な流入を仲介する。異なる抗体は、レシピエントの腫瘍細胞にナノ薬物を導くのと同じナノコンジュゲート分子機能に取り付けられている。両方の抗体の存在は、トランスサイトーシス用とエンドソーム取り込みのための他の一方は、最適な機能に必須である。 Mの定量分析ALIC酸および抗体は、高度にナノ薬剤の最適な組成を制御するために推奨されます。最後に、オールインワンの共有結合ナノ薬物は、レシピエントの腫瘍細胞への宿主の血管系を通って途中で化学的に結合形で薬物を送達することに留意すべきである。これらは標的部位でのナノコンジュプラットフォームから切断により遊離の薬剤として再構成されるまで、化学結合は、非アクティブ最も薬（プロドラッグ）をレンダリングします。再活性化モダリティが配信と有害な副作用を呼び起こすために、最小限のチャンス時の安全性の高いを提供するので、これは重要です。汎用性、有効性と安全性が良いオーダーメイド医療に欠かせない属性です。

癌のゲノムは（ バイオテクノロジーとがんゲノムアトラスのためのナショナルセンターを ）解明されてきたポストゲノム時代では、がんの今後の治療は、多くの場合、同じ腫瘍1-4内の腫瘍の遺伝的多様性を占めることになる。バイオインフォマティクスと、高速ではない高価なDNA配列決定は、個人的なレベル2,4,5に悪性の遺伝子/変異の取得を可能にする。遺伝子が同定されたら、患者は、悪性の6遺伝子の発現を改変またはサイレンシングする個人化された薬で治療される。癌細胞を標的とし、これらの細胞に薬剤を送達する必要性は、多官能性送達システムを必要とする。明らかに、ナノ薬物は、この要件を満たすことができる7。 発見ナノ粒子のサージング波では、癌細胞に化学療法薬、タンパク質および/または遺伝子的に活性な物質のペイロードをもたらすために好適であることが分かっている。しかし、副作用が広告であることが残っている服を着て。生分解性の欠如に関連し、それらの一つは、疾患を誘発する可能性と健康な組織および器官における材料の堆積を引き起こすことがある。堆積を最小限にするために、我々は、非毒性であり、微生物起源とH 2 OとCO 2から8個 、生分解性であり、非免疫原性ポリリンゴ酸を導入した。私たちは、ナノ薬剤のオールインワンの共有結合の種類を合成するためにポリマーを使用しています。このようなテモゾロミド、ドキソルビシン、またはアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび溢出、組織ターゲティング、エンドソーム溶解配信サービスを提供する官能基として化学的に結合化学療法剤が含まれています。それらは、標的腫瘍細胞に到着したときの薬物は本質的に、それによってそれらの完全な薬学的活性を再生する、ナノプラットフォームから切断される。 我々は、ポリマーナノプラットフォームの微生物生産する方法であって、その精製、および癌のためのトラスツズマブ（ハーセプチン）を含むナノ薬物の化学合成を記載ターゲティングおよびHER2過剰産生を阻害するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド。ヌードマウスに異種ヒトのHer2陽性乳癌にナノ薬物を適用することにおいて、我々は、癌治療の高い有効性を示す。ポリリンゴ酸ナノ薬物のためにここに導入腫瘍標的化および遺伝子サイレンシングの原理は、他​​の癌症例の治療に適用することができる。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="935">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Name of Reagent/Material</td>
			<td style="width:263px;">Company</td>
			<td style="width:187px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:79px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-Mercapto-1-ethylamine (Cysteamine (2MEA)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">30078-25G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#8217;,6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td colspan="2">Vector Laboratories, Burlingame, CA</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">90-Day release 17&#946;-estradiol pellet&#160;</td>
			<td>Innovative Research of America</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 680 C2 maleimide</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:187px;">A20344</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amberlite IR 120H</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">6428</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Antifoam Y-30 Emulsion</td>
			<td style="width:263px;">Sigam-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">A5758</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-laminin-411 chain mAbs</td>
			<td style="width:263px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:187px;">SC-59980</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-pAkt mAb</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">9271S</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-PARB mAb</td>
			<td style="width:263px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:187px;">556494</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-von Willebrand Factor antibody&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td style="width:187px;">AB6994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Bacto Yeast Extract</td>
			<td style="width:263px;">Bacto, Dickinson/Sparks, MD</td>
			<td style="width:187px;">212720</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Beta-actin</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">3700</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BT-474&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ATCC</td>
			<td style="width:187px;">HTB-20</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Calcium Carbonate</td>
			<td style="width:263px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:187px;">36337</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Proliferation Assay kit</td>
			<td>Promega, Madison, WI, USA</td>
			<td>PR-G3580</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centriplus 100&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td style="width:187px;">4414</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dicyclohexylcarbodimide</td>
			<td style="width:263px;">Fluka</td>
			<td style="width:187px;">36650</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">D5796</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eosin</td>
			<td style="width:263px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:187px;">S7439-4</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Galardin (MMP-inhibitors)&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:187px;">SC-994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling&#160;</td>
			<td style="width:187px;">2118</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hematoxilin</td>
			<td style="width:263px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:187px;">S7439-3</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Hemin from porcine</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">51280</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herceptin</td>
			<td style="width:263px;">Genentech</td>
			<td style="width:187px;">15534</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herceptin (Western blotting)</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">2165S</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">IgG2a-kappa murine malignoma</td>
			<td style="width:263px;">Sigma</td>
			<td style="width:187px;">M77695X5m</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immun-Star AP Substrate Pack</td>
			<td style="width:263px;">Biorad</td>
			<td style="width:187px;">170-5012</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immun-StarTM AP Substrate Pack&#160;</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>170-5012</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">LAL Reagent water&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Lonza, MD</td>
			<td style="width:187px;">W50-1000</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminin-411 mAbs</td>
			<td style="width:263px;">Abcam</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leucine ethyl ester (LOEt)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">61850-10G-F</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Limulus Amebocyte Lysate (LAL) PYROGENT-5000 tests</td>
			<td style="width:263px;">Cambrex BioScience</td>
			<td style="width:187px;">N384</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Lissamin-Morpholino AON</td>
			<td style="width:263px;">Gene Tools</td>
			<td style="width:187px;">Custom made</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-malic acid&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">M6413</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Malate dehydrogenase&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">M2634</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mal-PEG-Mal</td>
			<td style="width:263px;">Laysan</td>
			<td style="width:187px;">mal-PEG-mal-3400</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td style="width:187px;">354248</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Milk, nonfat powdered&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Proteomics</td>
			<td>M203-10G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Morpholino oligonucleotides&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GeneTools</td>
			<td style="width:187px;">custom made</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">mPEG5000</td>
			<td style="width:263px;">Lysan</td>
			<td style="width:187px;">mPEG-NH2-5000</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-hydroxysuccinimde (NHS)&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ACROS Organics</td>
			<td style="width:187px;">15727100</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Ninhydrin</td>
			<td style="width:263px;">Merck</td>
			<td style="width:187px;">1.06762.0100</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitrocellulose Membrane Filter Paper Sandwich</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC2001</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitrocellulose Membrane Filter Paper Sandwich, 0.45 &#181;m&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:187px;">LC2001</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Novex &#174; Tris-Glycine Transfer Buffer (25X)&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC3675</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Nude Mice [Tac:Cr:(MCr)-Foxnnm]&#160;</td>
			<td>Taconic</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">PBS pH 7.2 10x</td>
			<td style="width:263px;">Gibco</td>
			<td style="width:187px;">10010-49</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">PBS pH 7.2 1x</td>
			<td style="width:263px;">Gibco</td>
			<td style="width:187px;">70013</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PD-10 desalting columns</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0851</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Physarum polycephalum M3CVII</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>204388</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pierce BCA protein assay&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:187px;">23225</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td style="width:263px;">Roche</td>
			<td style="width:187px;">1.18362E+11</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protein Detector ELISA Kit</td>
			<td style="width:263px;">KPL</td>
			<td style="width:187px;">54-62-18</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex G-25 superfine</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0031</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex G-75&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0050</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex-LH20&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0090</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SKBR-3&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ATCC</td>
			<td style="width:187px;">HTB-30</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SPDP</td>
			<td style="width:263px;">Proteochem&#160;</td>
			<td style="width:187px;">C1116</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Streamline-DEAE</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Styryl Red FM 1-43&#160;</td>
			<td>Life Technologies&#160;</td>
			<td style="width:187px;">T-3163</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TBS 10x</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>170-6435</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TCEP</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">C4706-2G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TLC, silica coated aluminia sheets</td>
			<td style="width:263px;">Merck, Darmstadt, DE</td>
			<td style="width:187px;">60F254</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trileucine (LLL)</td>
			<td style="width:263px;">Bachem</td>
			<td style="width:187px;">H-3915</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton X-114&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">X114</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween&#174;20&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vivaspin 20&#160;</td>
			<td style="width:263px;">VWR</td>
			<td style="width:187px;">14005-302</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:407px;">DAPI</td>
			<td style="width:263px;">Vector Laboratories, Burlingame, CA</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dexmedetomidine</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Atipamezole</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Carprofen</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine</td>
			<td style="width:263px;">Foster and Smith, Wisconsin</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

polymalic acid-based nano biopolymers for targeting of multiple tumor markers: an opportunity for personalized medicine?

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this diversity, personalized medicine is developed for silencing malignancy associated genes. Nano drugs fit these needs by targeting tumor and delivering antisense oligonucleotides for silencing of genes. As drugs for the treatment are often administered repeatedly, absence of toxicity and negligible immune response are desirable. In the example presented here, a nano medicine is synthesized from the biodegradable, non-toxic and non-immunogenic platform polymalic acid by controlled chemical ligation of antisense oligonucleotides and tumor targeting molecules. The synthesis and treatment is exemplified for human Her2-positive breast cancer using an experimental mouse model. The case can be translated towards synthesis and treatment of other tumors.

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Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine?

ポリリンゴ酸に基づくナノ薬剤の例は、がんに適用可能な個別化医療の合理的な設計に向けて提示されている。これは、ヌードマウスでのHer2陽性ヒト乳癌を治療するために、ナノ薬物の合成を記載する。

複数の腫瘍マーカーのターゲットとするためのポリリンゴ酸ベースのナノバイオポリマー：個別化医療の機会？

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this ...

polymalic-acid-based-nano-biopolymers-for-targeting-multiple-tumor

Research

JoVE Journal

Chemistry

16.5K ビュー.  Cedars-Sinai Medical Center. ポリリンゴ酸に基づくナノ薬剤の例は、がんに適用可能な個別化医療の合理的な設計に向けて提示されている。これは、ヌードマウスでのHer2陽性ヒト乳癌を治療するために、ナノ薬物の合成を記載する。 

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Glycan Node Analysis: A Bottom-up Approach to Glycomics

Synthesized in a non-template-driven process by enzymes called glycosyltransferases, glycans are key players in various significant intra- and extracellular events. Many pathological conditions, notably cancer, affect gene expression, which can in turn deregulate the relative abundance and activity levels of glycoside hydrolase and glycosyltransferase enzymes. Unique aberrant whole glycans resulting from deregulated glycosyltransferase(s) are often present in trace quantities within complex biofluids, making their detection difficult and sometimes stochastic. However, with proper sample preparation, one of the oldest forms of mass spectrometry (gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS) can routinely detect the collection of branch-point and linkage-specific monosaccharides ("glycan nodes") present in complex biofluids. Complementary to traditional top-down glycomics techniques, the approach discussed herein involves the collection and condensation of each constituent glycan node in a sample into a single independent analytical signal, which provides detailed structural and quantitative information about changes to the glycome as a whole and reveals potentially deregulated glycosyltransferases. Improvements to the permethylation and subsequent liquid/liquid extraction stages provided herein enhance reproducibility and overall yield by facilitating minimal exposure of permethylated glycans to alkaline aqueous conditions. Modifications to the acetylation stage further increase the extent of reaction and overall yield. Despite their reproducibility, the overall yields of N-acetylhexosamine (HexNAc) partially permethylated alditol acetates (PMAAs) are shown to be inherently lower than their expected theoretical value relative to hexose PMAAs. Calculating the ratio of the area under the extracted ion chromatogram (XIC) for each individual hexose PMAA (or HexNAc PMAA) to the sum of such XIC areas for all hexoses (or HexNAcs) provides a new normalization method that facilitates relative quantification of individual glycan nodes in a sample. Although presently constrained in terms of its absolute limits of detection, this method expedites the analysis of clinical biofluids and shows considerable promise as a complementary approach to traditional top-down glycomics.

This article presents an enhanced form of a novel bottom-up glycomics technique designed to analyze the pooled compositional profile of glycans in unfractionated biofluids through the chemical breakdown of glycans into their constituent linkage-specific monosaccharides for detection by GC-MS. Potential applications include early detection of cancer and other glycan-affective disorders.

糖鎖ノード分析：グライコミクスへのボトムアップアプローチ

Synthesized in a non-template-driven process by enzymes called glycosyltransferases, glycans are key players in various significant intra- and ...

化学

Highly Stable, Functional Hairy Nanoparticles and Biopolymers from Wood Fibers: Towards Sustainable Nanotechnology

Nanoparticles, as one of the key materials in nanotechnology and nanomedicine, have gained significant importance during the past decade. While metal-based nanoparticles are associated with synthetic and environmental hassles, cellulose introduces a green, sustainable alternative for nanoparticle synthesis. Here, we present the chemical synthesis and separation procedures to produce new classes of hairy nanoparticles (bearing both amorphous and crystalline regions) and biopolymers based on wood fibers. Through periodate oxidation of soft wood pulp, the glucose ring of cellulose is opened at the C2-C3 bond to form 2,3-dialdehyde groups. Further heating of the partially oxidized fibers (e.g., T = 80 &#176;C) results in three products, namely fibrous oxidized cellulose, sterically stabilized nanocrystalline cellulose (SNCC), and dissolved dialdehyde modified cellulose (DAMC), which are well separated by intermittent centrifugation and co-solvent addition. The partially oxidized fibers (without heating) were used as a highly reactive intermediate to react with chlorite for converting almost all aldehyde to carboxyl groups. Co-solvent precipitation and centrifugation resulted in electrosterically stabilized nanocrystalline cellulose (ENCC) and dicarboxylated cellulose (DCC). The aldehyde content of SNCC and consequently surface charge of ENCC (carboxyl content) were precisely controlled by controlling the periodate oxidation reaction time, resulting in highly stable nanoparticles bearing more than 7 mmol functional groups per gram of nanoparticles (e.g., as compared to conventional NCC bearing &#60;&#60; 1 mmol functional group/g). Atomic force microscopy (AFM), transmission electron microscopy (TEM), and scanning electron microscopy (SEM) attested to the rod-like morphology. Conductometric titration, Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), nuclear magnetic resonance (NMR), dynamic light scattering (DLS), electrokinetic-sonic-amplitude (ESA) and acoustic attenuation spectroscopy shed light on the superior properties of these nanomaterials.

Synthesis schemes to prepare highly stable wood fiber-based hairy nanoparticles and functional cellulose-based biopolymers have been detailed.

高安定、機能毛深いナノ粒子と木材繊維からバイオポリマー：持続可能なナノテクノロジーに向けて

Nanoparticles, as one of the key materials in nanotechnology and nanomedicine, have gained significant importance during the past decade. While ...

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

The chemical linking or bioconjugation of proteins to fluorescent dyes, drugs, polymers and other proteins has a broad range of applications, such as the development of antibody drug conjugates (ADCs) and nanomedicine, fluorescent microscopy and systems chemistry. For many of these applications, specificity of the bioconjugation method used is of prime concern. The Michael addition of maleimides with cysteine(s) on the target proteins is highly selective and proceeds rapidly under mild conditions, making it one of the most popular methods for protein bioconjugation.
We demonstrate here the modification of the only surface-accessible cysteine residue on yeast cytochrome c with a ruthenium(II) bisterpyridine maleimide. The protein bioconjugation is verified by gel electrophoresis and purified by aqueous-based fast protein liquid chromatography in 27% yield of isolated protein material. Structural characterization with MALDI-TOF MS and UV-Vis is then used to verify that the bioconjugation is successful. The protocol shown here is easily applicable to other cysteine - maleimide coupling of proteins to other proteins, dyes, drugs or polymers.

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

This protocol details the important steps required for the bioconjugation of a cysteine containing protein to a maleimide, including reagent purification, reaction conditions, bioconjugate purification and bioconjugate characterization.

タンパク質のバイオコンジュゲートの合成<em&gt;経由で</em&gt;システイン - マレイミドケミストリー

The chemical linking or bioconjugation of proteins to fluorescent dyes, drugs, polymers and other proteins has a broad range of applications, such as the ...

Low-energy Cathodoluminescence for (Oxy)Nitride Phosphors

Nitride and oxynitride (Sialon) phosphors are good candidates for the ultraviolet and visible emission applications. High performance, good stability and flexibility of their emission properties can be achieved by controlling their composition and dopants. However, a lot of work is still required to improve their properties and to reduce the production cost. A possible approach is to correlate the luminescence properties of the Sialon particles with their local structural and chemical environment in order to optimize their growth parameters and find novel phosphors. For such a purpose, the low-voltage cathodoluminescence (CL) microscopy is a powerful technique. The use of electron as an excitation source allows detecting most of the luminescence centers, revealing their luminescence distribution spatially and in depth, directly comparing CL results with the other electron-based techniques, and investigating the stability of their luminescence properties under stress. Such advantages for phosphors characterization will be highlighted through examples of investigation on several Sialon phosphors by low-energy CL.

Low-energy Cathodoluminescence for OxyNitride Phosphors

An excellent chemical and luminescence stabilities of (oxy)nitride phosphors present it as an promising alternative to currently used sulfide and oxide phosphors. In this paper, we present the way to investigate its local luminescence properties using low-energy cathodoluminescence (CL).

（オキシ）窒化物蛍光体のための低エネルギーのカソードルミネッセンス

Nitride and oxynitride (Sialon) phosphors are good candidates for the ultraviolet and visible emission applications. High performance, good stability and ...

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the inverse electron demand Diels-Alder (IEDDA) cycloaddition between a radiolabeled tetrazines and trans-cyclooctene (TCO) linked to a biomolecule has proven to be a highly effective bioorthogonal approach to imaging specific biological targets. Despite the fact that technetium-99m remains the most widely used isotope in diagnostic nuclear medicine, there is a scarcity of methods for preparing 99mTc-labeled tetrazines. Herein we report the preparation of a family of tridentate-chelate-tetrazine derivatives and their Tc(I) complexes. These hitherto unknown compounds were radiolabeled with 99mTc using a microwave-assisted method in 31% to 83% radiochemical yield. The products are stable in saline and PBS and react rapidly with TCO derivatives in vitro. Their in vivo pre-targeting abilities were demonstrated using a TCO-bisphosphonate (TCO-BP) derivative that localizes to regions of active bone metabolism or injury. In murine studies, the 99mTc-tetrazines showed high activity concentrations in knees and shoulder joints, which was not observed when experiments were performed in the absence of TCO-BP. The overall uptake in non-target organs and pharmacokinetics varied greatly depending on the nature of the linker and polarity of the chelate.

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Here, we describe a protocol for radiolabeling and in vivo testing of tridentate 99mTc(I) chelate-tetrazine derivatives for pre-targeting and bioorthogonal chemistry.

の調製と評価<sup&gt; 99メートル</sup&gt; Tc標識三座キレートバイオ直交化学反応を用いて事前ターゲティングするため

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the ...

An Aptamer-based Sensor for Unchelated Gadolinium(III)

A method for determining the presence of unchelated trivalent gadolinium ion (Gd3+) in aqueous solution is demonstrated. Gd3+ is often present in samples of gadolinium-based contrast agents as a result of incomplete reactions between the ligand and the ion, or as a dissociation product. Since the ion is toxic, its detection is of critical importance. Herein, the design and usage of an aptamer-based sensor (Gd-sensor) for Gd3+ are described. The sensor produces a fluorescence change in response to increasing concentrations of the ion, and has a limit of detection in the nanomolar range (~100 nM with a signal-to-noise ratio of 3). The assay may be run in an aqueous buffer at ambient pH (~7 - 7.4) in a 384-well microplate. The sensor is relatively unreactive toward other physiologically relevant metal ions such as sodium, potassium, and calcium ions, although it is not specific for Gd3+ over other trivalent lanthanides such as europium(III) and terbium(III). Nevertheless, the lanthanides are not commonly found in contrast agents or the biological systems, and the sensor may therefore be used to selectively determine unchelated Gd3+ in aqueous conditions.

An Aptamer-based Sensor for Unchelated GadoliniumIII

The use of polydeoxynucleotide (44-mer aptamer) molecules for sensing unchelated gadolinium(III) ion in an aqueous solution is described. The presence of the ion is detected via an increase in the fluorescence emission of the sensor.

非キレート化ガドリニウム（III）のためのアプタマーベースのセンサー

A method for determining the presence of unchelated trivalent gadolinium ion (Gd3+) in aqueous solution is demonstrated. Gd3+ is often present in samples ...

An Engineered Split-TET2 Enzyme for Chemical-inducible DNA Hydroxymethylation and Epigenetic Remodeling

DNA methylation is a stable and heritable epigenetic modification in the mammalian genome and is involved in regulating gene expression to control cellular functions. The reversal of DNA methylation, or DNA demethylation, is mediated by the ten-eleven translocation (TET) protein family of dioxygenases. Although it has been widely reported that aberrant DNA methylation and demethylation are associated with developmental defects and cancer, how these epigenetic changes directly contribute to the subsequent alteration in gene expression or disease progression remains unclear, largely owing to the lack of reliable tools to accurately add or remove DNA modifications in the genome at defined temporal and spatial resolution. To overcome this hurdle, we designed a split-TET2 enzyme to enable temporal control of 5-methylcytosine (5mC) oxidation and subsequent remodeling of epigenetic states in mammalian cells by simply adding chemicals. Here, we describe methods for introducing a chemical-inducible epigenome remodeling tool (CiDER), based on an engineered split-TET2 enzyme, into mammalian cells and quantifying the chemical inducible production of 5-hydroxymethylcytosine (5hmC) with immunostaining, flow cytometry or a dot-blot assay. This chemical-inducible epigenome remodeling tool will find broad use in interrogating cellular systems without altering the genetic code, as well as in probing the epigenotype&#8722;phenotype relations in various biological systems.

Detailed protocols for introducing an engineered split-TET2 enzyme (CiDER) into mammalian cells for chemical inducible DNA hydroxymethylation and epigenetic remodeling are presented.

化学誘導型 DNA Hydroxymethylation およびエピジェネティックな改造のために設計された分割型 TET2 酵素

DNA methylation is a stable and heritable epigenetic modification in the mammalian genome and is involved in regulating gene expression to control ...

Co-expression of Multiple Chimeric Fluorescent Fusion Proteins in an Efficient Way in Plants

Information about the spatiotemporal subcellular localization(s) of a protein is critical to understand its physiological functions in cells. Fluorescent proteins and generation of fluorescent fusion proteins have been wildly used as an effective tool to directly visualize the protein localization and dynamics in cells. It is especially useful to compare them with well-known organelle markers after co-expression with the protein of interest. Nevertheless, classical approaches for protein co-expression in plants usually involve multiple independent expression plasmids, and therefore have drawbacks that include low co-expression efficiency, expression-level variation, and high time expenditure in genetic crossing and screening. In this study, we describe a robust and novel method for co-expression of multiple chimeric fluorescent proteins in plants. It overcomes the limitations of the conventional methods by using a single expression vector that is composed of multiple semi-independent expressing cassettes. Each protein expression cassette contains its own functional protein expression elements, and therefore it can be flexibly adjusted to meet diverse expression demand. Also, it is easy and convenient to perform the assembly and manipulation of DNA fragments in the expression plasmid by using an optimized one-step reaction without additional digestion and ligation steps. Furthermore, it is fully compatible with current fluorescent protein derived bio-imaging technologies and applications, such as FRET and BiFC. As a validation of the method, we employed this new system to co-express fluorescently fused vacuolar sorting receptor and secretory carrier membrane proteins. The results show that their perspective subcellular localizations are the same as in previous studies by both transient expression and genetic transformation in plants.

We have developed a novel method for co-expressing multiple chimeric fluorescent fusion proteins in plants to overcome the difficulties of conventional methods. It takes advantage of using a single expression plasmid that contains multiple functionally independent protein expressing cassettes to achieve protein co-expression.

植物の効率的な方法で複数のキメラ蛍光融合タンパク質の共発現

Information about the spatiotemporal subcellular localization(s) of a protein is critical to understand its physiological functions in cells. Fluorescent ...

Iron Nanowire Fabrication by Nano-Porous Anodized Aluminum and its Characterization

Magnetic nanowires possess unique properties that have attracted the interest of different fields of research, including basic physics, biomedicine, and data storage. We demonstrate a fabrication method for iron (Fe) nanowires&#160;via electrochemical deposition into anodic&#160;alumina oxide (AAO) templates. The templates are fabricated by anodization of aluminum (Al) discs, and the pore length and diameter are controlled by changing the anodizing conditions. Pores with an average diameter of around 120 nm are created using oxalic acid as the electrolyte. Using this method, cylindrical nanowires are synthesized, which are released by dissolving the alumina using a selective chemical etchant.

In this work, we describe a&#160;protocol to fabricate iron nanowires, including the formation of the porous alumina membrane that is used as the template, electrodeposition into templates using electrolyte solution, and the release of the nanowires into the solution.

ナノ多孔質陽極酸化アルミニウムによる鉄ナノワイヤー製造とその特性

Magnetic nanowires possess unique properties that have attracted the interest of different fields of research, including basic physics, biomedicine, and ...

Organic Structure-directing Agent-free Synthesis for *BEA-type Zeolite Membrane

Membrane separation has drawn attention as a novel-energy saving separation process. Zeolite membranes have great potential for hydrocarbon separation in petroleum and petrochemical fields because of their high thermal, chemical, and mechanical strength. A *BEA-type zeolite is an interesting membrane material because of its large pore size and wide Si/Al range. This manuscript presents a protocol for *BEA membrane preparation by a secondary growth method that does not use an organic structure-directing agent (OSDA). The preparation protocol consists of four steps: pretreatment of support, seed preparation, dip-coating, and membrane crystallization. First, the *BEA seed crystal is prepared by conventional hydrothermal synthesis using OSDA. The synthesized seed crystal is loaded on the outer surface of a 3 cm long tubular &#945;-Al2O3 support by a dip-coating method. The loaded seed layer is prepared with the secondary growth method using a hydrothermal treatment at 393 K for 7 days without using OSDA. A *BEA membrane having very few defects is successfully obtained. The seed preparation and dip-coating steps strongly affect the membrane quality.

A *BEA seed crystal was loaded on a porous &#945;-Al2O3 support by the dip-coating method, and hydrothermally grown without using an organic structure-directing agent. A *BEA-type zeolite membrane having very few defects was successfully prepared by the secondary growth method.

*BEA型ゼオライト膜に対する有機構造誘導剤無合成

Membrane separation has drawn attention as a novel-energy saving separation process. Zeolite membranes have great potential for hydrocarbon separation in ...