著者は、蚊の繁殖のためのミリアムエステルに感謝したいと思います。この作品は、研究センターBorstelから、社内の資金によってサポートされ、ライプニッツセンター感染によって資金調達に参加しました。

<ol>
	<li>Mueller, A. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+Transmission+of+Plasmodium+berghei+Exacerbates+Chronic+Tuberculosis+in+an+Experimental+Co-Infection+Model.">Natural Transmission of Plasmodium berghei Exacerbates Chronic Tuberculosis in an Experimental Co-Infection Model.</a> PLoS ONE. 7, e48110 (2012).</li><li>Korbel, D. S., Schneider, B. E., Schaible, U. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immunity+in+tuberculosis:+myths+and+truth.">Innate immunity in tuberculosis: myths and truth.</a> Microbes Infect. 10, 995-1004 (2008).</li><li>Aly, A. S., Vaughan, A. M., Kappe, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malaria+parasite+development+in+the+mosquito+and+infection+of+the+mammalian+host.">Malaria parasite development in the mosquito and infection of the mammalian host.</a> Annu. Rev. Microbiol. 63, 195-221 (2009).</li><li>Cirimotich, C. M., Dong, Y., Garver, L. S., Sim, S., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+immune+defenses+against+Plasmodium+infection.">Mosquito immune defenses against Plasmodium infection.</a> Dev. Compar. Immuno. 34, 387-395 (2010).</li><li>Page, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mycobacterium-induced+potentiation+of+type+1+immune+responses+and+protection+against+malaria+are+host+specific.">Mycobacterium-induced potentiation of type 1 immune responses and protection against malaria are host specific.</a> Infect. Immun. 73, 8369-8380 (2005).</li><li>Hawkes, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malaria+exacerbates+experimental+mycobacterial+infection+in+vitro+and+in+vivo.">Malaria exacerbates experimental mycobacterial infection in vitro and in vivo.</a> Microbes Infect. 12, 864-874 (2010).</li><li>Scott, C. P., Kumar, N., Bishai, W. R., Manabe, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+report:+modulation+of+Mycobacterium+tuberculosis+infection+by+Plasmodium+in+the+murine+model.">Short report: modulation of Mycobacterium tuberculosis infection by Plasmodium in the murine model.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 70, 144-148 (2004).</li><li>Hoffman, S. L., Doolan, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malaria+vaccines-targeting+infected+hepatocytes.">Malaria vaccines-targeting infected hepatocytes.</a> Nat. Med. 6, 1218-1219 (2000).</li><li>Mueller, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+attenuated+Plasmodium+berghei+liver+stages+persist+and+elicit+sterile+protection+primarily+via+CD8+T+cells.">Genetically attenuated Plasmodium berghei liver stages persist and elicit sterile protection primarily via CD8 T cells.</a> Am. J. Pathol. 171, 107-115 (2007).</li><li>Mueller, A. K., Labaied, M., Kappe, S. H., Matuschewski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+modified+Plasmodium+parasites+as+a+protective+experimental+malaria+vaccine.">Genetically modified Plasmodium parasites as a protective experimental malaria vaccine.</a> Nature. 433, 164-167 (2005).</li><li>Nussenzweig, R. S., Vanderberg, J., Most, H., Orton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+immunity+produced+by+the+injection+of+x-irradiated+sporozoites+of+plasmodium+berghei.">Protective immunity produced by the injection of x-irradiated sporozoites of plasmodium berghei.</a> Nature. 216, 160-162 (1967).</li><li>Vaughan, J. A., Scheller, L. F., Wirtz, R. A., Azad, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infectivity+of+Plasmodium+berghei+sporozoites+delivered+by+intravenous+inoculation+versus+mosquito+bite:+implications+for+sporozoite+vaccine+trials.">Infectivity of Plasmodium berghei sporozoites delivered by intravenous inoculation versus mosquito bite: implications for sporozoite vaccine trials.</a> Infect. Immun. 67, 4285-4289 (1999).</li><li>Coleman, J., Juhn, J., James, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+midgut+and+salivary+glands+from+Ae.+aegypti+mosquitoes.">Dissection of midgut and salivary glands from Ae. aegypti mosquitoes.</a> J. Vis. Exp. , e228 (2007).</li><li>Franke-Fayard, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Plasmodium+berghei+reference+line+that+constitutively+expresses+GFP+at+a+high+level+throughout+the+complete+life+cycle.">A Plasmodium berghei reference line that constitutively expresses GFP at a high level throughout the complete life cycle.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 137, 23-33 (2004).</li><li>Lin, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss-of-function+analyses+defines+vital+and+redundant+functions+of+the+Plasmodium+rhomboid+protease+family.">Loss-of-function analyses defines vital and redundant functions of the Plasmodium rhomboid protease family.</a> Mol. Microbiol. 88, 318-338 (2013).</li><li>Bancroft, J. D. G., M, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Theory and Practice of Histological Techniques. , (2007).</li><li>Schneider, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+IL-18+in+protective+immunity+against+Mycobacterium+tuberculosis.">A role for IL-18 in protective immunity against Mycobacterium tuberculosis.</a> Eur. J. Immunol. 40, 396-405 (2010).</li><li>Craig, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+animal+models+for+research+on+severe+malaria.">The role of animal models for research on severe malaria.</a> PLoS Pathog. 8, e1002401 (2012).</li><li>de Souza, J. B., Hafalla, J. C., Riley, E. M., Couper, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+malaria:+why+experimental+murine+models+are+required+to+understand+the+pathogenesis+of+disease.">Cerebral malaria: why experimental murine models are required to understand the pathogenesis of disease.</a> Parasitology. 137, 755-772 (2010).</li><li>Van den Steen, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunopathology+and+dexamethasone+therapy+in+a+new+model+for+malaria-associated+acute+respiratory+distress+syndrome.">Immunopathology and dexamethasone therapy in a new model for malaria-associated acute respiratory distress syndrome.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 181, 957-968 (2010).</li></ol>

著者らは、開示することは何もありません。

私たちは、マウスが生産的にマウンテンバイクやPで感染させることができる方法を説明しました感染の彼らの自然な経路を介してベルゲイ 。我々は実験的結核13やマラリア12を研究する感染プロトコルを確立し、最近ではマウスモデル1にマウンテンバイクとマラリア間の同時感染を研究するためにそれらを採用して適用します。 成功の感染症のための最も重要な工程は、所望の数字の両病原体の伝播である。彼らは時間をかけて生存能力を失うことになる、との株式もともと決定力価が最も可能性の高い、もはや正確でなくなるので、マイコバクテリア株は2歳以上であってはならない。その結果、感染用量は予想よりはるかに低いだろう。そのため、保存培養のCFU力価は数カ月ごとに決定されるべきである。同様に重要なのは最初の場所で標準化された栽培やマウンテンバイクの在庫の発生がある。このような培養条件媒体、補助剤、時間、容積がMtbの異なる株を用いた実験からのデータを比較できるようにするために標準化されるべきである。マイコバクテリアの培養中に凝集する傾向があり、従ってそれは同じ成長期に、標準化さ収穫細菌を培養条件を維持し、分注中に頻繁に再懸濁することが重要である。そうでなければ、CFU力価および感染の結果に大きなばらつきがある場合もあります。 均質に感染した蚊のバッチの生成は、別の重要なステップです。別の蚊は、個々のマウスを餌にするので、一つの感染実験に使用される蚊の全てが同じバッチから来て、蚊の90％以上が感染しているだけのバッチが使用されることが重要である。 現在のモデルは、単一の感染した宿主における免疫応答と比較することによって、重複感染宿主における免疫応答および免疫モジュレーションを分析するために使用することができる。我々はVAを適用することができますいろいろな読み取り方法は、よくこのような目的の組織または体液のサイトカインやケモカインを検出するための組織学、免疫組織化学、免疫細胞集団のフローサイトメトリー解析、またはPCRおよびELISAなどの方法論を確立しました。このようなマウスモデルは、特定の制限があることに留意すべきである。 マウンテンバイクに感染した人の大半は臨床症状の兆候の潜伏感染を開発する一方で、マウスは、進行性の肺の病理に慢性疾患を発症する。それでも、C57BL / 6マウスのMtb感染に対して比較的抵抗性であり、ヒト結核患者で観察されるような古典的な肉芽腫を発症しない。その結果、マウスでの免疫病理学的反応が適切でもない潜在も活性ヒト結核疾患を反映しない。ヒトおよびマウスでの潜伏と慢性疾患との間の不一致にもかかわらず、マウスは広範囲のMtb感染を制御し、調査する価値があり、必要不可欠なツールである宿主因子を同定し、研究するために使用されてきた感染症における免疫応答。重要なことに、Mtbの感染に対する感受性は、一般的に使用される近交系マウス系統間でかなり変動し、DBAまたはC3Hなどのより感受性系統共、単一の感染の研究に含めることができる。また、離れて本明細書に記載の病原体種から、関心のある任意の他のマイコバクテリウム種 （ 例えば、臨床分離株）を使用することができる。単一のマラリアモデルは、ヒトの疾患のあらゆる側面を複製しない間も同様に、様々なマウスモデルは密接に自然に獲得した人間のマラリア感染のさまざまな側面に似ているん。例えば、P.ベルゲイ ANKAとP.ヨエリ YM/17XLは広くPで、ヒト（ 熱帯熱マラリア原虫によって誘発される）重症マラリアのモデルを研究しているベルゲイ ANKAは、人間の脳malari S 14,15のための優れたモデルとみなされている。 P.ベルゲイ NK65はhyperparasitaemia急性マラリア、貧血のための優れたモデルであり、最近でてきたマラリア関連急性呼吸窮迫症候群（ARDS MA-16）のための実験モデルとして記述。記載され共感染モデルを用いて、我々は最近、同時P.ことを示すことができたベルグヘイ NK65感染は、慢性結核1を悪化させる。 離れて別のげっ歯類のマラリア原虫を使用してから、感染イベントの順序やタイミングは、基礎となる研究課題に応じて適用することができる。フィールドに、併用プラスモディウム感染症は、Mtbの感染または後発の時点で存在してもよい。いずれのシナリオでもマウンテンバイクやマラリアに対する免疫応答が異なる影響を受ける可能性があります。そのため、マウスはマウンテンバイクの感染の前または後のいずれか原虫スポロゾイトを感染させることができる。さらに、マウスは、異なる時間に挑戦することができる急性、慢性対上のマラリア誘発性免疫応答の影響を評価するためのMtb感染後結核。マラリア、結核の重複感染を研究するためのマラリア原虫を選択する際に重要なのは、一つは、いくつかの齧歯類マラリア原虫株は、特定のマウス系統の急性疾患を引き起こすとマウンテンバイクが免疫応答性の慢性および長期的な感染症を引き起こす間だけ数日から数週間以内に、感染に屈することに注意する必要がありますマウス。従って、重複感染のタイミングは、実験動物の早期死亡を回避するために重要である。 複数の病原体種との同時感染による宿主免疫の変調はよくわかっていないままです。重複感染宿主の免疫系との相互作用がマラリアと同時感染が病因、疾患の結果、ワクチン接種、免疫診断、および治療 ​​をどのように影響するかの理解に貢献していきます-我々の実験共感染モデルは、マイコバクテリウムを調査するための強力なツールが用意されています。

ヒト集団はほとんど唯一の病原体にさらされていない。特に、サハラ以南のアフリカなどの感染症の発生率が高いとの地域では、同時感染は、プライムが、非常に過小な公衆衛生上の問題を表している。結核、マラリア、それぞれ、ヒトにおいて最も一般的な細菌や寄生虫感染であり、熱帯の貧しい集団における罹患率および死亡率の主な原因であり続けている。結核、マラリアとの重複感染のリスクのある多数の個人間の広い地理的なオーバーラップにもかかわらず、非常に少ないが、様々な、多くの場合、同時に重複感染個体ではマラリア原虫と結核菌に対して惹起される免疫調節因子およびエフェクターを打ち消すの間の相互作用について知られている。 混合感染の齧歯類モデルは、このように相互インフルに光を流して、1ホスト内の異なる病原体に対する差分免疫反応を特徴づけることができまた、治療と予防のための新しい提案を識別するのに役立ちます変調病理及び個々の疾患の臨床結果を、ences。私たちは、同じホスト1内の結核菌（MTB）との同時感染によって引き起こされる波及効果やげっ歯類のマラリア原虫種を調査することを可能に実験用マウスモデルを確立している。重要なのは、可能な限り厳密に自然に獲得したヒトの感染をエミュレートするために、我々のモデルは、両方の病原体によって使用される感染の自然経路を実装しています。結核は、したがって、主に肺に現れる空気感染、です。それらは咳やくしゃみの間に感染性エアロゾル小滴を放出するとき原因物質は、Mtbのエアロゾル経路を介して活動性疾患を持つ人々によって送信される。従って、エアロゾル感染は自然感染を模倣するために選択される方法である。 マウンテンバイクを含有する浮遊粒子の発生を使用することによって達成することができる吸入暴露システムの。この全身曝露室は、感染が2開始され、肺の肺胞に吸入されるMTB-含む感染性エアロゾル液滴（ 図1）に実験動物を暴露できます。 一方、マラリア原虫は、自然に女性ハマダラカ蚊に刺さによって送信されたアピコンプレックス寄生原虫によって引き起こされる媒介疾患である。血粉中に、感染スポロゾイトは、ホストの皮膚の下に寄託され、その後、血流を通して肝臓に達する。肝細胞の中に彼らは開発し、急速に肝臓段階のシゾントに掛けます。最終的には、成熟したシゾントは破裂し、それらが赤血球侵入、複製、赤血球破裂、およびreinvasion 3の進行サイクルを開始する場合、血流への病原性の第一世代のメロゾイトの数千人を解放します。 マラリア原虫のライフサイクルコンチン一部のメロゾイトなどのUEは、性的寄生虫段階に血食事中に蚊によって撮影することができます男性と女性の生殖母細胞を、開発しています。蚊では、 マラリア原虫スポロゾイトは蚊の中腸内に存在するオーシスト以内に発症し、最終的に別のホスト3,4に前方送信のための唾液腺に移行する。 実験動物モデルにおいてエアロゾル、したがって、最も関連性の高い経路を介したMtbの送達は非常に一般的であるが、マラリア、結核重複感染5-7研究を含む多くの実験齧歯類マラリア感染の研究は生じさせ、寄生さ赤血球をマウスに感染させることによって実施されている臨床的にサイレント肝臓段階のフェーズを排除しながら血液段階のマラリア感染へ。しかし、肝臓期は、抗マラリア原虫の免疫8月11日のための感染症と関連する時に必須のステップです。我々は、肝のpHを含めるようにしてそれはそれゆえ重要と考えるそれぞれマラリアやマラリア、結核の同時感染は、両方の研究において、マラリア伝染とメンテナンスのASE。また、天然に送信されたスポロゾイトではなく、単離された唾液腺由来のスポロゾイトを注入するの蚊によってマラリア感染を確立することを促し、針感染12、を介して送信されるものよりも感染性であることが示されている。マラリア原虫の天然の送信のための感染性の蚊を得るための唯一の方法は、脊椎動物宿主（ここではマウス）および蚊ベクターの両方において寄生虫のライフサイクル全体を維持することである。従って、寄生虫メンテナンスのための昆虫館へのアクセスは、 咬合天然伝送を行うために不可欠である。 ここに記載さ我々のプロトコルは、 マラリアとの同時感染は、慢性結核1への影響をスポロゾイトか調査するために開発されました。そうするために、マウスをエアロゾルM.に感染している結核および40日後、ときM.結核感染は、慢性期に到達した、マウスマラリア感染蚊に曝される。重複感染動物におけるマラリア、結核の両方の結果はそれぞれ、組織中の血液寄生虫及び細菌負荷を監視することによって追跡することができる。我々のプロトコルでは、我々は彼らの自然感染ルートとどのように成功し、病原体の伝達を確認するために経由して、両方の病原体をマウスに感染させる方法を詳しく説明します。我々の手では、両方の実験的な感染のために一般的に達成感染率は100％である。これらのプロトコルは、最も挑戦的な人間の感染症の2間の重複感染をモデル化し、研究するために、我々がそうであるように、別々に感染または、両方の研究に適用することができます。このモデルは、このプロトコルに記載されているもの以外の他のマイコバクテリウムおよび齧歯類マラリア原虫種に適用可能である。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="650">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">Buraton</td>
			<td style="width:124px;">Sch&#252;lke</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:191px;">active ingredients: aldehyds (formaldehyde, glutaraldehyde, oxalaldehyde, ethyl hexanal)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Middlebrook 7H9&#160;</td>
			<td style="width:124px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M0178</td>
			<td style="width:191px;">For Mtb broth cultures</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Middlebrook 7H11&#160;</td>
			<td style="width:124px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">283810</td>
			<td style="width:191px;">Agar medium for Mtb culture</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Middlebrook OADC enrichment medium</td>
			<td style="width:124px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">212240</td>
			<td style="width:191px;">Add to 7H9 and 7H11 for Mtb culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Staining Dish</td>
			<td style="width:124px;">Science Services</td>
			<td style="width:119px;">E62542-12</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">24-Slide Holder w/Handle</td>
			<td style="width:124px;">Science Services</td>
			<td style="width:119px;">E62543-06</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Giemsas Azur-Eosin-Methylene blue solution</td>
			<td style="width:124px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">109204</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Wright&#180;s stain</td>
			<td style="width:124px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">W0625</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Inhalation Exposure System</td>
			<td style="width:124px;">Glas-Col</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nebulizer-Venturi</td>
			<td style="width:124px;">Glas-Col</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ice cream cups</td>
			<td style="width:124px;">H&#228;agen-Dazs</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:191px;">Used as mosquito cages</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Metal-frame mosquito cages</td>
			<td style="width:124px;">BioQuip Products</td>
			<td style="width:119px;">1450A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an experimental model to study tuberculosis-malaria coinfection upon natural transmission of mycobacterium tuberculosis and plasmodium berghei

同時感染は自然に病原性生物の別個のタイプの地理的なオーバーラップのために発生します。同時感染はほとんどの場合、各単一病原体に対するそれぞれの免疫応答を調節することにより、病因および疾患の転帰に影響を及ぼし得る。重複感染患者は、抗感染介入に示差的に応答することができる。サハラ以南のアフリカの多くの地域でcoendemicが、どちらもマイコバクテリア、マラリア原虫マラリア原虫によって引き起こされるように結核の間の同時感染は、詳細に研究されていない。マラリア結核の同時感染は宿主免疫し、各疾患の経過を調節する方法に挑戦が、科学的、臨床的に関連性の高い質問にアプローチするために、我々は、私たちは共感染宿主内で両方の病原体に対する誘発される免疫応答を分析することを可能にする実験的なマウスモデルを確立。注目すべきは、最も正確に模倣自然に獲得したヒト感染するために、我々は実験的な実行それぞれ感染の彼らの自然なルート、 すなわちエアロゾルおよび蚊に刺され、両方によって病原体によるマウスの感染。

マウンテンバイクとP.によるマウスの感染それぞれ自然な経路を介してベルゲイ 、 すなわちエアロゾルや蚊に刺され、すべての動物の一貫性と再現性の感染の結果（ 表1）1。我々は最初の発生（prepatency）及び血液中の寄生虫の数（P.ベルゲイ寄生虫 ）と異なる器官でのマウンテンバイクの負担を、決定することによって、成功した感染症やマラリア、結核の両方の経過をモニターすることができます。感染性の蚊に刺されによる成功したマラリア原虫の伝送の例を表1及び図3に示されている。 4-5日後（ 表1及び図3A）血液段階の寄生虫の存在によって確認されるように、各マウスに10スポロゾイト感染蚊の供給は100％の感染率となった。重要なのは、我々は同じ実験GRの個々のマウスの血液中に、同様の寄生虫番号を検索OUP、一貫した再現感染蚊に刺された結果によってそのスポロゾイト送信を示す。 MTB-重複感染した動物のそれとナイーブ対照マウスにおけるprepatencyを比較することで、我々はそのprepatency若干マウンテンバイク （ 表1、図3B）でpreinfectedされていたマウスでは遅延している見ることができます1。我々は以前に1を報告しているように、我々は、図3（b）に示すように、毎日ギムザ染色した血液塗抹標本に寄生虫を監視することにより、マラリアのコース上のMtb同時感染の影響を判断することができます。 個々のマウス（ 図4A）との間の比較的低い変動と肺の中の細菌の成功沈着吸入暴露システムの結果を利用してマウンテンバイクによるマウスの感染。我々は、肺およびCFU決定により経時的に関心のある他の臓器中のマイコバクテリアの負荷に追従することができる。の肺におけるマイコバクテリア負荷例マウンテンバイクは、P.の非存在下または存在下でC57BL / 6マウスを感染させベルゲイは、 図4Bに示されている。 表1。蚊に刺されによるスポロゾイト送信後Prepatency。すべてのマウスがPの自然送信後血液段階の感染症を開発蚊に刺さでスポロゾイトをベルゲイ 。 1 PLoSのONEの許可を得て7（10）、e48110から適応。 <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 実験マウス群（C57BL / 6） </td><td> 10感染蚊に刺されによる挑戦 </td><td> グループあたりの動物の血液段階陽性動物/番号の番号 </td><td> 平均prepatency [D] </td></tr><tr><td>ナイーブ</td><td> P.ベルゲイ </td><td> 7月7日</td><td> 4,4 </td></tr><tr><td> MTBは、感染した</td><td> P.ベルゲイ </td><td> 7月7日</td><td> 5,5 </t<html> D&gt; </tr></tbody></table><img alt="図1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50829/50829fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50829/50829fig1.jpg" /> 図1。実験手順の全体的なスキーム。C57BL / 6マウスを、グラス-コルエアロゾルチャンバ内のMtb含有エアロゾル液滴に晒されている。一日のエアロゾル感染後のMtbの取り込みは、肺のCFU分析によって検証する。 40日（結核感染マウスでは慢性的になっています） マウンテンバイクチャレンジ後、動物をPにさらされているベルゲイは蚊を感 ​​染させた。成功したスポロゾイトの送信を確認し、 マラリア原虫感染の経過をたどるために、寄生虫は蚊に刺された後の3日間を開始ギムザ染色した血液塗抹標本で毎日監視されている。 / files/ftp_upload/50829/50829fig2highres.jpg &quot;SRC =&quot; / files/ftp_upload/50829/50829fig2.jpg &quot;/&gt; 図2。蚊のケージのスケッチは、感染性の蚊は、ハーフパイントのアイスクリームのカートンとしてカートンの内部に収容されている。小さな開口部は、カートンの側面に切断し、蚊のための安全な入り口を作成するには、それぞれの作品に切ったスリットとラテックスの二重の層で覆われている。濾紙片を垂れを吸収するためにカートンの内底にテープで固定されている。アイスクリームのカップはテープとゴムバンドでカートンに固定されている（ナイロンメッシュ）ネッティングで閉鎖されています。 <img alt="図3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50829/50829fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50829/50829fig3.jpg" /> 図3。寄生された赤血球（スケールバー、20＆＃を示すライトの`sのステンド血液塗抹標本の血液寄生虫。a）実施例181;。マウス血液中のm）B）寄生虫を毎日ギムザ染色血液塗抹標本を分析することによってモニターした。重複感染マウスは、 マラリア原虫単独感染マウス（n = 10）に比べて減少寄生虫を持っています。結果は、平均±SDとして示されているが、*** P &lt;0.001。 1 PLoSのONEの許可を得て7（10）、e48110より転載。 <img alt="図4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50829/50829fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50829/50829fig4.jpg" /> 図4。肺内のマウンテンバイクの検出。C57BL / 6マウスを、エアロゾルマウンテンバイクの100 CFUでチャレンジし、40日後に、Pとの共感染された蚊に刺されによるベルゲイ 。A）ある日のエアロゾル感染後マウンテンバイク 、所望の数の取り込みは、CFU決定のために全肺ホモジネートをメッキすることにより確認した。B）細菌同時感染時のLの負荷は、CFU分析（d40/d0 のMtb）を介して3匹のマウスの肺溶解物において測定した。 12日の同時感染した後、肺溶解物を MTBコントロールのマラリアの重複感染の影響を判断するためにCFU分析に播種した。肺の中のMtb番号は、P.との同時感染の間に増加していることに注意してくださいベルグヘイ NK65。 X軸ラベル：同時感染後のMtb -infection/time後の時間。 1 PLoSのONEの許可を得て7（10）、e48110から適応。

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An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

結核、マラリア、人間と熱帯の貧しい集団における罹患率および死亡率の主要な原因の中で最も流行している感染症の2つです。我々は、感染の彼らの自然な経路を経て、両方の病原体攻撃後のマウスにおけるマラリア結核の重複感染の結果を研究するための実験的なモデルシステムを確立した。

自然送信時に結核マラリア重複感染を研究する実験モデル結核菌とマラリアベルゲイ</i

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Immunology and Infection

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

19.6K ビュー.  University Hospital Heidelberg. 結核、マラリア、人間と熱帯の貧しい集団における罹患率および死亡率の主要な原因の中で最も流行している感染症の2つです。我々は、感染の彼らの自然な経路を経て、両方の病原体攻撃後のマウスにおけるマラリア結核の重複感染の結果を研究するための実験的なモデルシステムを確立した。 