私たちは、原稿の重要な読書のために博士ダイアンBaronas-ローウェルに感謝します。この作品は、FAUチャールズ·E.シュミット大学科学のシード·グラントとKJのエリソン医学財団からエージング奨学金によってサポートされていました

1。XLD（キシロースリジンデソキシコール）寒天プレート XLD寒天はXLD寒天プレート上で黒色コロニーとして現れるサルモネラ、のための選択的成長培地である。汚染の心配がない場合は、正規のLBプレートは、置換されていてもよい。 <ol><li> 5ミリリットルの脱イオン水に5.5グラムのXLD寒天再懸濁を量る。 </li><li>すべての寒天が濡れてまでよく混ぜる。すべての塊がなくなっているとメディアが完全に再懸濁されるまで脱イオン水を95ミリリットルを追加します。 </li><li> （オートクレーブしないでください）​​、完全に溶解する媒体が沸騰。 </li><li> 50℃の室温で培地を冷却</li><li>各95×15ミリメートル（直径×高さ）プレート（パラフィルムでシールしたプレートを1ヶ月まで4℃で保存することができる）中の25mlの寒天を注ぐ。 </li></ol> 2。線虫増殖培地（NGM）RNAiは、プレートの餌付け Cの準備エレガンス NGMプレートは、以前に記載されている19ここでの手順を簡単にするRNAi送り板を作るためにNGM培地に抗生物質アンピシリンおよびRNAi化学誘導物質イソプロピルβ-D-1-チオガラクトピラノシド（IPTG）を添加することが記載されている。 <ol><li> 3グラムのNaClおよび1 Lの脱イオン水に2.5グラムバクトペプトンを溶かす。 </li><li>メディアへの17グラムバクト寒天を追加します。 </li><li> 45分間オートクレーブし、メディアを水浴中で50℃に媒体を冷却する。 </li><li>を1mlのコレステロール（95％エタノール中5 mg / ml）を1 mlの1 MのCaCl 2、1 mlの1 MのMgSO 4、および25 mlの1 Mリン酸カリウム緩衝液（pH6.0）：以下の溶液を加える。よく混ぜる。 </li><li> 1ミリリットルの1M IPTGおよび500μlのアンピシリン（滅菌水に100ミリグラム/ ml）を追加します。 </li><li>よく溶液を混合し、滅菌手順に従ってピペットで援助と25ミリリットルの血清学的ピペットを用いて60×15ミリメートル（直径×高さ）ペトリ皿に注ぐ。 12ミリリットル寒天で各プレートを埋める。プレートを、1ヶ月まで4℃で保存することができる。 </li></ol> ベック-1オートファジー必須遺伝子はサルモネラ感染に対する防御における宿主遺伝子の機能を調べるために例として使用される。実験手順は、 図1および表1に示されている。感染についてのRNAi処理動物を調製するためのプロトコルは、括弧内に与えられた各実験手順の日に、続く。 <ol><li> BEC-1のRNAi摂食に接種し、100 mg / mlのアンピシリン（1日目 ）を補足した2ミリリットルのLB培地には-80℃で凍結した細菌フレークを配置することによって、空のベクターL4440のRNAi摂食細菌を制御します。新鮮なRNAiの細菌を持っている全体の実験中に週一回、この手順を繰り返します。使用しない場合は4℃の冷蔵庫に文化を保存してください。 </li><li> RNAiのプレート上で一晩のRNAi細菌培養の100ミリリットルをシード。 3 BEC-1 RNAiおよび3コントロールの空のVを準備RNAiのプレートをエクター。 37℃で一晩（2日目 ）でプレートをインキュベートする。 </li><li> 37℃のインキュベーターからのRNAiプレートを取り外し、それらをベンチに室温まで冷却する。よく葉L4野生型N2雌雄同体をピックアップし、RNAiを1にBECと空ベクターのRNAiプレートを制御するためにそれらを転送します。三連のプレートに、プレート当たり3ワームを配置します。ステップ3.2（3日目 ）に記載したのと同じ日に、RNAiのプレートを準備します。 </li><li> 36〜40時間、20℃のインキュベーター内のワームとのRNAiプレートをインキュベートし、ステップ3.3で作成新鮮対応のRNAiプレートにワームを転送します。ワームが転送された後、64時間（4日目 ）、20℃のインキュベーター中でプレートをインキュベートする。 </li></ol> 4。感染のサルモネラを準備<ol><li>ストリークサルモネラ -80℃で凍結した1 XLD寒天プレート上の在庫と一晩（5日目 、37℃でプレートをインキュベート</st栄&gt;）。 </li><li>よく孤立黒サルモネラコロニーを採取し、（6日目 ）で一晩振とうしながら37℃で2 mlのLB培地中で、それを接種。 </li><li> 1 Cの種子80ミリリットルサルモネラ一晩培養虫 60×15ミリメートル（直径×高さ）NGM寒天プレート、計6枚を準備。 6時間室温で培養する。細菌培養プレート（7日目 ）に芝生を乾燥させ、形成すべきである。 </li></ol> 5。 サルモネラとのRNAi治療ワームに感染<ol><li> BEC-1のRNAi処理を移し、 サルモネラプレートに空のベクターのRNAi治療L4のN2雌雄同体（ステップ3で設定したワームの子孫）を制御する。各グループの3プレートにプレート当たり40ワームを配置します。 48時（7日目 ）、20℃でワームのプレートをインキュベートする。 </li><li>ステップ3.1および3.2（7日目で説明したように、新鮮なRNAiプレートの1セットを準備し、 <stroNG&gt; 8日目）。 </li><li> 48時間の感染後、ステップ5.2で作成、対応するRNAiプレートにサルモネラ菌に感染したワームを転送し、20℃（9日目 ）でインキュベートする。 </li></ol> 6。生存アッセイ<ol><li>日々のワームの生存をスコアと産卵期間中に新鮮な対応のRNAiプレートにワームを転送します。ステップ3.1および3.2で説明したように前に各ワーム転送に新鮮なRNAiプレートのセットを準備します。エンド平坦化白金線で軽くワーム本体（頭部、中間部と尾）をタッチします。ワームの体の動きが全く観察されない場合にワームが死んだとして採点される。 </li><li>日々のワームの生存または一日おきのスコア、およびワームが産卵を停止した後に週二回、新鮮対応するRNAiプレートにワームを転送します。 </li><li>すべてのワームが死んだ後、1​​データセットとして三重プレートからの生存データをプールする。例えば、グラフパッドPなどの適切な統計ソフトウェアへの入力の各群の生存データを生存曲線を生成し、Kaplan-Meier生存分析を実行するRISM。全実験は結論を確認するために、少なくとも1回繰り返される。 </li></ol>

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	<li>Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> C. elegans II. , (1997).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The Genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li><li>Aballay, A., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+as+a+host+for+the+study+of+host-pathogen+interactions.">Caenorhabditis elegans as a host for the study of host-pathogen interactions.</a> Curr Opin Microbiol. 5, 97-101 (2002).</li><li>Kurz, C. L., Ewbank, J. 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G., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+specific+RNA-mediated+interference+through+ingested+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Effectiveness of specific RNA-mediated interference through ingested double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Genome Biol. 2, 1-10 (2001).</li><li>Liang, J., Xiong, S., Savage-Dunn, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+RNA-mediated+interference+feeding+strategy+to+screen+for+genes+involved+in+body+size+regulation+in+the+nematode+C+elegans.">Using RNA-mediated interference feeding strategy to screen for genes involved in body size regulation in the nematode C elegans.</a> J. Vis. Exp. (72), (2013).</li><li>Fraser, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genomic+analysis+of+C.+elegans+chromosome+I+by+systematic+RNA+interference.">Functional genomic analysis of C. elegans chromosome I by systematic RNA interference.</a> Nature. 408, 325-330 (2000).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook: the online review of C elegans biology. , 1-11 (2006).</li><li>Aballay, A., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+cell+death+mediated+by+ced-3+and+ced-4+protects+Caenorhabditis+elegans+from+Salmonella+typhimurium-mediated+killing.">Programmed cell death mediated by ced-3 and ced-4 protects Caenorhabditis elegans from Salmonella typhimurium-mediated killing.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 2735-2739 (2001).</li><li>Melendez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+genes+are+essential+for+dauer+development+and+lifespan+extension+in+C.+elegans.">Autophagy genes are essential for dauer development and lifespan extension in C. elegans.</a> Science. 301, 1387-1391 (2003).</li></ol>

著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言します。

線虫は、栄養源としてバクテリアを食べて、単純な遺伝的モデル生物である。従って、C.間の相互作用を調査するために、腸病原体にその正常細菌食品を代用することは容易である虫および選択した病原体。本明細書プロトコルは、 サルモネラ感染およびC.を組み合わせることが記載されているRNAiは、 サルモネラ感染に対する防御における宿?...

自由生活土壌線虫線虫（Caenorhabditis elegans）は、多くの生物学的な質問を研究するために使用されるシンプルかつ遺伝的に扱いやすいモデル生物である。C.虫が支配的自己施肥雌雄同体として存在する。雄配偶子形成を自発的に1,2の間にX染色体の非論理和によって生成される。豊富な食べ物、Cの存在下で虫は継続的に、成人に4幼虫の段階を経て発達する。温度も影響を与えるC.虫の開発;迅速な開発は、より高い温度で観察される。研究室では、C.エレガンスは、食品1,2播種し、細菌大腸菌 （菌株OP50）を含む寒天プレート上で20℃の標準温度で培養する。 過去10年間で、C.虫は宿主-病原体相互作用3-5を研究する無脊椎生物として浮上している。自然界では、C.虫は nutrienなどの細菌を食べるトン源1,2。その通常の細菌の実験室フード、OP50は、容易C.間の相互作用を調べるために他の病原体で置換することができる虫や任意の選択された病原体。これらの条件下で、腸の感染の主要部位である。実際に、細菌性病原体の広い範囲が致死的にC.に感染することが示されている虫 3-5。 グラム陰性菌のサルモネラは、世界中の6,7人の食中毒の原因となる胃腸病原体である。C.この細菌は、複製し、持続的な腸の感染症8月10日を示すもの虫はネズミチフス菌のための優れたモデルホストです。 でエレガンスは、新規の両方を識別するために使用されていると以前から知られているサルモネラ病原性は、11因子 。興味深いことに、C.虫の免疫系は正常にサルモネラの複製が制限されます。それはそのInhibが以前に報告されているオートファジー遺伝子のitionはCで増加サルモネラの複製をレンダリング虫 、感染したワーム10の早い死に至る。マクロオートファジーは、（本明細書オートファジーと呼ばれる）12分解のためにリソソームへの送達のための細胞質および細胞小器官を隔離する細胞内膜の転位を伴う動的プロセスである。オートファジーは、C.においてサルモネラの複製を制限することが報告されている虫や哺乳類10,13中。 C.虫のゲノムを配列決定し最初の多細胞真核生物ゲノムた。それは、RNAi治療14〜16に応答する。また、RNAiは、RNAiが16,17に供給として知られている標的遺伝子の二本鎖RNAを含む細菌を摂取するワームを施すことにより効果的に投与することができる。全ゲノムのRNAi送りライブラリは、ゲノムワイドなRNAiは16,18をスクリーニングするために生成されている。ここでは、 サルモネラ感染症のプロトコールは、RNAiがC.をテストできるように、給紙に結合されているサルモネラ感染に対して防御する能力について、目的の遺伝子エレガンス 。

<table><tbody><tr><td>LB Broth</td><td>Fisher</td><td>BP9723-500</td><td></td></tr><tr><td>XLD agar</td><td>EMD Chemicals</td><td>1.05287.0500</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Agar</td><td>Fisher</td><td>DF0140-01-0</td><td></td></tr><tr><td>Peptone</td><td>Fisher</td><td>BP1420-500</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>Fisher</td><td>S671-500</td><td></td></tr><tr><td>Calcium Chloride</td><td>Fisher</td><td>C69-500</td><td></td></tr><tr><td>Magnesium Sulfate</td><td>Fisher</td><td>M65-500</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>Gold Biotechnology</td><td>12481C50</td><td></td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Sigma</td><td>C8667-25G</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Fisher</td><td>BP1760-25</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Salmonella typhimurium&lt;/em&gt;</td><td>ATCC</td><td>ATCC14028</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dish 95 x 15 mm</td><td>Fisher</td><td>FB0875714G</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dish 60 x 15 mm&amp;nbsp;</td><td>Fisher</td><td>08-757-13A</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Serological pipet</td><td>Fisher</td><td>13-668-2</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Express Pipet-Aid</td><td>Fisher</td><td>13-675-42</td><td></td></tr><tr><td>MaxQ6000 shaking incubator&amp;nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>SHKE6000-7</td><td></td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Percival</td><td>I-36DL</td><td></td></tr></tbody></table>

a protocol to infect caenorhabditis elegans with salmonella typhimurium

過去10年間で、C.虫は、グラム陰性菌、ネズミチフス菌に対する宿主防御を含め、ホストと病原体との相互作用を研究する無脊椎生物として浮上している。サルモネラはCの腸内で持続感染を確立虫や感染した動物の早期死亡をもたらす。免疫機構の数はCで同定されているサルモネラ感染に対して防御する虫 。オートファジー、進化的に保存されたリソソーム分解経路は、C.におけるサルモネラの複製を制限することが示されている虫と哺乳類における。ここで、プロトコルは、C.に感染することが記載されているヒトにおけるサルモネラ感染と同様のワームが、限られた時間のサルモネラに暴露されたネズミチフス菌 、 線虫と、 サルモネラ感染が著しくC.の寿命を短くする虫&lt;/ EM&gt;。一例として、必須の自食作用遺伝子ベック-1を使用して、我々はC.、この感染法を組み合わせたRNAiは、 線虫のアプローチを供給し、このプロトコルはC.の機能を調べるために使用することができる示しサルモネラ感染に対する防御において宿主遺伝子エレガンス 。 C.以来虫全ゲノムのRNAiライブラリが利用可能であり、このプロトコルは、包括的で物をスクリーニングすることが可能になるサルモネラおよびゲノムワイドのRNAiライブラリを使用して、他の腸内の病原体から守る遺伝子エレガンス 。

20℃では、野生型N2ワームの中央値は寿命が17日間（ 図2Aおよび表2）である。 サルモネラ感染が有意に10.5日（P = 0.0002、log-rank検定）にN2ワームの中央値の寿命を低下させる（ 図2（a） ）。 C.もし線虫遺伝子はサルモネラ感染に対する防御において重要な役割を果たし、それはその阻害はサルモネラ?...

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A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

線虫は、宿主-病原体相互作用を研究するための新しい遺伝モデルとして登場しました。ここでは、 温度を感染させるためのプロトコルを記述サルモネラ感染に対する防御における宿主遺伝子の役割を調べるために二重鎖のRNAi干渉法と結合ネズミチフス菌とエレガンス 。

感染するためのプロトコル<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em&gt;と<em&gt;ネズミチフス菌</em

In the last decade, C. elegans has emerged as an invertebrate organism to study interactions between hosts and pathogens, including the host defense ...

a-protocol-to-infect-caenorhabditis-elegans-with-salmonella

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

11.5K ビュー.  Florida Atlantic University.  線虫は、宿主-病原体相互作用を研究するための新しい遺伝モデルとして登場しました。ここでは、 温度を感染させるためのプロトコルを記述サルモネラ感染に対する防御における宿主遺伝子の役割を調べるために二重鎖のRNAi干渉法と結合ネズミチフス菌とエレガンス 。 

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The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the intestine the primary location for disease. The nematode intestine structurally and functionally mimics mammalian intestines and is transparent making it amenable to microscopic study of colonization. Here we show that pathogens can cause disease and death. We are able to identify microbial mutants that show altered virulence. Its conserved innate response to biotic stresses makes C. elegans an excellent system to probe facets of host innate immune interactions. We show that hosts with mutations in the dual oxidase gene cannot produce reactive oxygen species and are unable to resist microbial insult. We further demonstrate the versatility of the presented survival assay by showing that it can be used to study the effects of inhibitors of microbial growth. This assay may also be used to discover fungal virulence factors as targets for the development of novel antifungal agents, as well as provide an opportunity to further uncover host-microbe interactions. The design of this assay lends itself well to high throughput whole-genome screens, while the ability to cryo-preserve worms for future use makes it a cost-effective and attractive whole animal model to study.

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

Here, we present the nematode Caenorhabditis elegans as a versatile host model to study microbial interaction.

線虫の宿主微生物間相互作用を研究する多彩なIn Vivoモデル

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the ...

遺伝学

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

The wormsorter is an instrument analogous to a FACS machine that is used in studies of Caenorhabditis elegans, typically to sort worms based on expression of a fluorescent reporter. Here, we highlight an alternative usage of this instrument, for sorting worms according to their degree of colonization by a GFP-expressing pathogen. This new usage allowed us to address the relationship between colonization of the worm intestine and induction of immune responses. While C. elegans immune responses to different pathogens have been documented, it is still unknown what initiates them. The two main possibilities (which are not mutually exclusive) are recognition of pathogen-associated molecular patterns, and detection of damage caused by infection. To differentiate between the two possibilities, exposure to the pathogen must be dissociated from the damage it causes. The wormsorter enabled separation of worms that were extensively-colonized by the Gram-negative pathogen Pseudomonas aeruginosa, with the damage likely caused by pathogen load, from worms that were similarly exposed, but not, or marginally, colonized. These distinct populations were used to assess the relationship between pathogen load and the induction of transcriptional immune responses. The results suggest that the two are dissociated, supporting the possibility of pathogen recognition.

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

The wormsorter facilitates genetic screens in Caenorhabditis elegans by sorting worms according to expression of fluorescent reporters. Here, we describe a new usage:&#160;sorting according to colonization by a GFP-expressing pathogen, and we employ it to examine the poorly understood role of pathogen recognition in initiating immune responses.

の自動分離<em&gt; C.虫</em&gt;可変細菌性病原体の植民地

The wormsorter is an instrument analogous to a FACS machine that is used in studies of Caenorhabditis elegans, typically to sort worms based on expression ...

免疫・感染学

High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages

Salmonella species are zoonotic pathogens and leading causes of food borne illnesses in humans and livestock1. Understanding the mechanisms underlying Salmonella-host interactions are&#160;important to elucidate the molecular pathogenesis of Salmonella infection. The Gentamicin protection assay to phenotype Salmonella association, invasion and replication in phagocytic cells was adapted to allow high-throughput screening to define the roles of deletion mutants of Salmonella enterica serotype Typhimurium in host interactions using RAW 264.7 murine macrophages. Under this protocol, the variance in measurements is significantly reduced compared to the standard protocol, because wild-type and multiple mutant strains can be tested in the same culture dish and at the same time. The use of multichannel pipettes increases the throughput and enhances precision. Furthermore, concerns related to using less host cells per well in 96-well culture dish were addressed. Here, the protocol of the modified in vitro Salmonella invasion assay using phagocytic cells was successfully employed to phenotype 38 individual Salmonella deletion mutants for association, invasion and intracellular replication. The in vitro phenotypes are presented, some of which were subsequently confirmed to have in vivo phenotypes in an animal model. Thus, the modified, standardized assay to phenotype Salmonella association, invasion and replication in macrophages with high-throughput capacity could be utilized more broadly to study bacterial-host interactions.

High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages

A high-throughput assay to in vitro phenotype Salmonella or other bacterial association, invasion, and replication in phagocytic cells with high-throughput capacity was developed. The method was employed to evaluate Salmonella gene knockout mutant strains for their involvements in host-pathogen interactions.

表現型のハイスループットアッセイ<em&gt;サルモネラ菌</em&gt;ネズミチフス菌協会、侵略、およびマクロファージにおける複製

Salmonella species are zoonotic pathogens and leading causes of food borne illnesses in humans and livestock1. Understanding the mechanisms underlying ...

線虫の食物摂取量と寿命を測定するためのハイスループットアッセイ

Quantifying Food Intake in Caenorhabditis elegans by Measuring Bacterial Clearance

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of Caenorhabditis elegans&#160;(C. elegans), an important parameter when studying the genetics of aging or metabolism. In most species, feeding is determined by measuring the difference between the amount of food provided and the amount left after a given time interval. The method presented here uses the same strategy to determine the feeding of C. elegans. It measures the amount of bacteria, the food source of C. elegans, cleared within 72 h. This method uses 96-well microtiter plates and has allowed the screening of hundreds of drugs for their ability to modulate food intake at a speed and depth not possible in other animal models. The strength of this assay is that it allows to measure feeding and lifespan simultaneously and directly measures the disappearance of food and, thus, is based on the same principles used for other organisms, facilitating species-to-species comparison.

著者スポットライト:脂肪毒性とHFpEFの関係を探る 

This protocol describes an assay to quantify Caenorhabditis elegans feeding rate based on measuring the clearance of bacteria in liquid culture.

細菌クリアランスの測定による 線虫 の食物摂取量の定量化

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of ...

行動学

Using the Protozoan Paramecium caudatum as a Vehicle for Food-borne Infections in Zebrafish Larvae

Due to their transparency, genetic tractability, and ease of maintenance, zebrafish (Danio rerio) have become a widely-used vertebrate model for infectious diseases. Larval zebrafish naturally prey on the unicellular protozoan Paramecium caudatum. This protocol describes the use of P. caudatum as a vehicle for food-borne infection in larval zebrafish. P. caudatum internalize a wide range of bacteria and bacterial cells remain viable for several hours. Zebrafish then prey on P. caudatum, the bacterial load is released in the foregut upon digestion of the paramecium&#160;vehicle, and the bacteria colonize the intestinal tract. The protocol includes a detailed description of paramecia maintenance, loading with bacteria, determination of bacterial degradation and dose, as well as infection of zebrafish by feeding with paramecia. The advantage of using this method of food-borne infection is that it closely mimics the mode of infection observed in human disease, leads to more robust colonization compared to immersion protocols, and allows the study of a wide range of pathogens. Food-borne infection in the zebrafish model can be used to investigate bacterial gene expression within the host, host-pathogen interactions, and hallmarks of pathogenicity including bacterial burden, localization, dissemination and morbidity.

Using the Protozoan Paramecium caudatum as a Vehicle for Food-borne Infections in Zebrafish Larvae

Zebrafish (Danio rerio) are becoming a widely-used vertebrate animal model for microbial colonization and pathogenesis. This protocol describes the use of the protozoan Paramecium caudatum as a vehicle for food-borne infection in zebrafish larvae. P. caudatum readily internalizes bacteria and get taken up by larval zebrafish through natural preying behavior.

ゼブラフィッシュ幼虫における食品媒介感染症のための車両として原虫ゾウリムシを使用してください。

Due to their transparency, genetic tractability, and ease of maintenance, zebrafish (Danio rerio) have become a widely-used vertebrate model for ...

Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis

Tissue fibrosis characterized by the pathological accumulation of extracellular matrix such as collagen is the outcome of persistent inflammation and dysregulated repair. In inflammatory bowel disease (IBD), fibrosis leads to recurrent stricture formations for which there is no effective therapy other than surgical resection. Due to its late onset, the processes that drive fibrosis is less studied and largely unknown. Therefore, fibrotic complications represent a major challenge in IBD. In this protocol, a robust in vivo model of intestinal fibrosis is described where streptomycin pre-treatment of C57Bl/6 mice followed by oral gavage with vaccine grade Salmonella Typhimurium &#916;AroA mutant leads to persistent pathogen colonization and fibrosis of the cecum. Methodologies for preparing S. Typhimurium &#916;AroA for inoculation, quantifying pathogen loads in the cecum and spleen, and evaluating collagen deposition in intestinal tissues are explained. This experimental disease model is useful for examining host factors that either enhance or exacerbate CD-like intestinal fibrosis.

This protocol describes a mouse model of Salmonella driven intestinal fibrosis that resembles key pathological hallmarks of Crohn&#8217;s disease including transmural inflammation and fibrosis. This method can be used to evaluate host factors that alter fibrotic outcomes using mutant mice maintained on a C57Bl/6 genetic background.

慢性サルモネラ感染誘発性腸線維症

Tissue fibrosis characterized by the pathological accumulation of extracellular matrix such as collagen is the outcome of persistent inflammation and ...

Studying Inherited Immunity in a Caenorhabditis elegans Model of Microsporidia Infection

Inherited immunity describes how some animals can pass on the "memory" of a previous infection to their offspring. This can boost pathogen resistance in their progeny and promote survival. While inherited immunity has been reported in many invertebrates, the mechanisms underlying this epigenetic phenomenon are largely unknown. The infection of Caenorhabditis elegans by the natural microsporidian pathogen Nematocida parisii results in the worms producing offspring that are robustly resistant to microsporidia. The present protocol describes the study of intergenerational immunity in the simple and genetically tractable N. parisii -C. elegans infection model. The current article describes methods for infecting C. elegans and generating immune-primed offspring. Methods are also given for assaying resistance to microsporidia infection by staining for microsporidia and visualizing infection by microscopy. In particular, inherited immunity prevents host cell invasion by microsporidia, and fluorescence in situ hybridization (FISH) can be used to quantify invasion events. The relative amount of microsporidia spores produced in the immune-primed offspring can be quantified by staining the spores with a chitin-binding dye. To date, these methods have shed light on the kinetics and pathogen specificity of inherited immunity, as well as the molecular mechanisms underlying it. These techniques, alongside the extensive tools available for C. elegans research, will enable important discoveries in the field of inherited immunity.

Studying Inherited Immunity in a Caenorhabditis elegans Model of Microsporidia Infection

The infection of Caenorhabditis elegans by the microsporidian parasite Nematocida parisii enables the worms to produce offspring that are highly resistant to the same pathogen. This is an example of inherited immunity, a poorly understood epigenetic phenomenon. The present protocol describes the study of inherited immunity in a genetically tractable worm&#160;model.

微胞子虫感染症の カエノラブディティス・エレガンス モデルにおける遺伝性免疫の研究

Inherited immunity describes how some animals can pass on the "memory" of a previous infection to their offspring. This can boost pathogen resistance in ...

Characterizing Salmonella Typhimurium-induced Septic Peritonitis in Mice

Sepsis is a dysregulated host immune response to microbial invasion or tissue damage, leading to organ injury at a site distant from that of the infection or damage. Currently, the widely used mice models of sepsis include lipopolysaccharide (LPS)-induced endotoxemia, cecal ligation and puncture (CLP), and monobacterial infection model systems. This protocol describes a method to study the host responses during Salmonella Typhimurium infection-induced septic peritonitis in mice. S. Typhimurium, a Gram-negative intracellular pathogen, causes typhoid-like disease in mice.
This protocol elaborates the culture preparation, induction of septic peritonitis in mice through intraperitoneal injection, and methods to study systemic host responses. Furthermore, the assessment of bacterial burden in different organs and the flow cytometric analysis of increased neutrophil numbers in the peritoneal lavage is presented. Salmonella Typhimurium-induced sepsis in mice leads to an increase in proinflammatory cytokines and rapid infiltration of neutrophils in the peritoneal cavity, leading to lower survival.
Every step in this protocol has been optimized, resulting in high reproducibility of the pathogenesis of septic peritonitis. This model is useful for studying immunological responses during bacterial sepsis, the roles of different genes in disease progression, and the effects of drugs to attenuate sepsis.

Characterizing Salmonella Typhimurium-induced Septic Peritonitis in Mice

This protocol describes the induction of Gram-negative monobacterial sepsis in a mouse model system. The model is useful in investigating the inflammatory and lethal host responses during sepsis.

マウスにおける サルモネラ ・チフス菌誘発性敗血症性腹膜炎の特性評価

Sepsis is a dysregulated host immune response to microbial invasion or tissue damage, leading to organ injury at a site distant from that of the infection ...

感染するためのプロトコル

要約

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線虫の宿主微生物間相互作用を研究する多彩なIn Vivoモデル

の自動分離

表現型のハイスループットアッセイ

細菌クリアランスの測定による線虫の食物摂取量の定量化

細菌クリアランスの測定による線虫の食物摂取量の定量化

細菌クリアランスの測定による線虫の食物摂取量の定量化

ゼブラフィッシュ幼虫における食品媒介感染症のための車両として原虫ゾウリムシを使用してください。

慢性サルモネラ感染誘発性腸線維症

微胞子虫感染症のカエノラブディティス・エレガンスモデルにおける遺伝性免疫の研究

マウスにおけるサルモネラ・チフス菌誘発性敗血症性腹膜炎の特性評価

感染するためのプロトコル

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線虫の宿主微生物間相互作用を研究する多彩なIn Vivoモデル

の自動分離

表現型のハイスループットアッセイ

細菌クリアランスの測定による 線虫 の食物摂取量の定量化

細菌クリアランスの測定による 線虫 の食物摂取量の定量化

細菌クリアランスの測定による 線虫 の食物摂取量の定量化

ゼブラフィッシュ幼虫における食品媒介感染症のための車両として原虫ゾウリムシを使用してください。

慢性サルモネラ感染誘発性腸線維症

微胞子虫感染症の カエノラブディティス・エレガンス モデルにおける遺伝性免疫の研究

マウスにおける サルモネラ ・チフス菌誘発性敗血症性腹膜炎の特性評価

細菌クリアランスの測定による線虫の食物摂取量の定量化

細菌クリアランスの測定による線虫の食物摂取量の定量化

細菌クリアランスの測定による線虫の食物摂取量の定量化

微胞子虫感染症のカエノラブディティス・エレガンスモデルにおける遺伝性免疫の研究

マウスにおけるサルモネラ・チフス菌誘発性敗血症性腹膜炎の特性評価