This project was funded by the Government of Canada through Genome Canada and the Ontario Genomics Institute (OGI-046), and Ontario Research Fund&#8211;Global Leadership in Genomics and Life Sciences GL2-01-035 (to M.G. and V.G.). T.V.L. is a postdoctoral fellow of the Fund for Scientific Research Flanders (FWO).

ハダニ人口の1。メンテナンス注：ハダニは、カリフォルニア赤インゲン豆（ インゲンマメ ）で飼育されています。 <ol><li>前侵入に2〜3週間種子からマメ植物を育てる。 </li><li>侵入された植物との混在は、これらの植物;大人のダニが急速に新鮮な植物材料を植民地化します。 </li><li>新鮮な植物に置き換え、7〜10日ごとに古い寄生さマメ植物を除去します。 </li></ol> 2。成人女性ダニの収集<ol><li>洗濯方法を使用してコレクションをダニ<ol><li>ダニを収集するには、1から2日前までに、実験に寄生した植物と接触して、新鮮な豆の植物を置く。 </li><li> 1000〜2000の大人の女性のダニを収集するために20から30の新鮮な豆の植物を使用してください。 </li><li> RTで水道水を使用して0.001％でのTween 20の溶液を調製する。 </li><li>一度に2から3の植物を使用して、トゥイーン20溶液中に出没マメ植物を洗う。 </li><li&gt;各植物は葉からのすべてのダニを収集するために2〜3倍洗浄する。 </li><li>ダニの死亡を回避するために10分以内に完了するステップ2.1.4。 </li></ol></li><li>定義されたメッシュサイズ篩ダニ懸濁液の濾過により成人女性ダニの分離<ol><li> （破片を除去するために）500ミクロンと300ミクロン（成人女性のダニを収集する）（ 図1A）：以下のメッシュサイズのモレキュラーシーブを準備します。 </li><li> 500ミクロンのふるいを通して懸濁物をろ過する。 </li><li> 300ミクロンのふるいを通して懸濁物を濾過し直して。大人の女性のダニは保持されます。 </li><li>トゥイーン20を除去して清潔な水道水における成人女性のダニを300ミクロンのふるいを浸します。 </li><li>ふるいの底に単層でダニを広げた。 </li><li>ふるいのメッシュと側面から余分な水を除去するために紙タオルを使用してください。 NOTE：ダニを回復するために迅速に乾燥する必要があるため、これが行われる。 </li><li> 図1に示すように、組立体を調製B;これは、ダニが自由に移動できるようになりますが、それらは逃げるのを防ぎます。 </li><li>支持体として使用されているふるいの上にダニの篩を配置します。 </li><li>飛散ダニを防ぐために水で底のふるいを囲む。注：ダニは約5分後に回復を開始します。約30分後、移動ダニの数は、収集（ 図1D）を開始するのに十分である。彼らは、コレクションを妨害する絹を生産するようにダニは、1時間以内に収集する必要があります。 </li></ol></li></ol>ダニと3。プラント寄生 NOTE：成体雌ダニを回収した後、それらは植物の侵入のために使用することができる。 A）細いブラシ（プロトコルセクション3.1）を使用して、aとb）ポンプまたは真空ライン（プロトコルセクション3.2）を使用して：成人女性のダニによる実験植物をはびこるために使用する2つの方法があります。 <ol><li>ブラシを使ってダニ寄生 注：ハダニの侵入ブラシで植物当たり最大30ダニの適用のために使用される。 <ol><li>サイズ00や細かい柔らかい毛ラウンドアートブラシを使用してください。 </li><li> RTの水道水でブラシを濡らす。 </li><li>そっとブラシの先端を使用してふるいからダニをピックアップし、工場に転送。 </li></ol></li><li>ポンプを使用して侵入をダニ NOTE：30以上のダニが適用されるときに、ポンプ/真空ラインにより集めダニによる植物の侵襲が使用される。この方法では、マイクロエレクト​​ロニクス部品のピックアップや真空ライン用の真空ポンプを用いることができる。これは、空気の流れを一定にし、十分な強度（2-4 PSI）を維持することが重要である。 <ol><li>ポンプ/真空管とチップの間のアダプタとして下部に1.5ミリリットルの遠心管のカットを使用してポンプや真空ラインに接続しているチューブに1ミリリットルピペットチップを取り付けます。 </li><li>ピペットチップおよびアダプタ（1.5ミリリットル遠心管）との間に紙タオル一枚を置きます。注：この目的は、Tの内部トラップダニにある彼は、吸引プロセス中にチップをピペットし、また空気の流れ（ 図1C）を低減する。 </li><li>ピペットチップを用いてふるいから直接ダニを集める。 </li><li>または、ステレオスコープを使用して寄生した葉からダニを一つずつ集める。 </li><li>ダニの必要数は、収集された際に、ピペットチップの背面に紙タオルの一部が乱さであることを確認して、チューブからピペットチップを取り外します。 </li><li>ピペットチップをタップし、一緒にダニに凝集によってダニを集める。その後、葉の上に置きます。秒以内に、ダニは葉の上に分散させるために開始されます。 </li></ol></li></ol> 4。記録との評価植物被害<ol><li>記録植物被害 注：Aのシロイヌナズナは 、植物の損傷はダニ摂食の4日後に評価される。損傷が退緑斑点の総表面積として記録されている。損傷の測定のために、全体のロゼットを切断し、走査される。記載されスキャンパラメータは、エプソンV30スキャナ用ですが、任意の同様のフラットベッドスキャナのための良い出発点として機能します。個々の実験の実行との間の比較を可能にすべての実験のための一定のスキャンパラメータを保持します。 <ol><li>植物材料を汚染するスキャナ表面を防止するために、透明シートでスキャナベッドをカバーしています。 </li><li>その葉の向軸（上）側は、スキャナの光源と撮像素子に直面しているスキャナベッド上の全ロゼットと場所をカットします。ロゼットが重複することなく、個々の葉を取り込むには余りにも密であれば別の方法として、スキャナベッドに置く前に細かいハサミで重複しない葉の個々の葉やグループにロゼットを解剖。複数のロゼットを同時にスキャンすることができます。 </li><li>の遵守やスキャナカバーの汚染を防止するために、白い紙とロゼットや葉をカバーしています。 </li><li>閉じるスキャナカバーし、次のパラメータを指定してスキャンを実行します。解像度：1,200 DPI;カラーモード：Adobe RGBの;明るさ：25;ファイルタイプ：最大品質のJPEG。 </li><li>その後の被害の分析のための画像ファイルを保存します。 </li></ol></li><li>植物被害の定量化 NOTE：損傷の領域を手動でフォトショップを用いて計算される。原因ダニ供給の結果、葉の形や症状の色の強さに大きな差には、自動の方法は信頼性に欠けるた。従って、格子法は、植物の損傷を評価するために使用される。 <ol><li>フォトショップと植物の画像を開きます。 </li><li> 0.25ミリメートル×0.25ミリメートルの部門（ - ショー - グリッド、キーボードショートカットのCtrl + &#39;を表示またはディスプレイ）のグリッドでスキャンした画像をオーバーレイして、新しいレイヤーを作成します。 </li><li>重ねられた層の上に、ドット（「鉛筆ツール」、キーボードショートカットBを使用）を使用して、損傷を受けた葉の面積をマーク。グリッド単位の半分以上をカバーする損傷があるそれより下のグリッドの各正方形のために1つのドットを使用してください。ドットの大きさ、 すなわち （ピクセル単位で定義され、 </eM&gt;ドットあたり52ピクセル）。 </li><li>グリッド部の少なくとも半分を覆う植物の損傷を示すグリッドのすべての正方形ドットでマークされたときに、ヒストグラムツール（ウィンドウ - ヒストグラム）を使用して層上の画素の総数を決定する。ヒストグラムツールは、画素数を計測できるようにするものである。各ドットは、画素の一定および既知の数で表されるので、ヒストグラムツールは、拡張によって、顕著な正方形の総数を総ドット数を表す画素の総数を測定します。 </li><li>数式を使用してマークされた「ドット」の数を計算する。 ドット数=ドット当たりの画素の画素/数の合計数。 </li><li> 1ドットのグリッドの1マスに対応するように、グリッドの1平方の面積で画像上にマークされたドット数を乗じて損傷の総面積を計算する。 </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Jeppson, L. R., Keifer, H. H., Baker, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mites injurious to economic plants. , (1975).</li><li>Migeon, A., Dorkeld, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spider+Mites+Web:+a+comprehensive+database+for+the+Tetranychidae.">Spider Mites Web: a comprehensive database for the Tetranychidae.</a> http://www.montpellier.inra.fr/CBGP/spmweb. , (2013).</li><li>Croft, B. A., Vandebaan, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecological+and+Genetic-Factors+Influencing+Evolution+of+Pesticide+Resistance+in+Tetranychid+and+Phytoseiid+Mites.">Ecological and Genetic-Factors Influencing Evolution of Pesticide Resistance in Tetranychid and Phytoseiid Mites.</a> Exp Appl Acarol. 4, 277-300 (1988).</li><li>Van Leeuwen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+heteroplasmy+and+the+evolution+of+insecticide+resistance:+Non-Mendelian+inheritance+in+action.">Mitochondrial heteroplasmy and the evolution of insecticide resistance: Non-Mendelian inheritance in action.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 5980-5985 (2008).</li><li>Van Leeuwen, T., Vontas, J., Tsagkarakou, A., Dermauw, W., Tirry, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acaricide+resistance+mechanisms+in+the+two-spotted+spider+mite+Tetranychus+urticae+and+other+important+Acari:+A+review.">Acaricide resistance mechanisms in the two-spotted spider mite Tetranychus urticae and other important Acari: A review.</a> Insect Biochem Molec. 40, 563-572 (2010).</li><li>Dermauw, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cys-loop+ligand-gated+ion+channel+gene+family+of+Tetranychus+urticae:+Implications+for+acaricide+toxicology+and+a+novel+mutation+associated+with+abamectin+resistance.">The cys-loop ligand-gated ion channel gene family of Tetranychus urticae: Implications for acaricide toxicology and a novel mutation associated with abamectin resistance.</a> Insect Biochem Molec. 42, 455-465 (2012).</li><li>Van Leeuwen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population+bulk+segregant+mapping+uncovers+resistance+mutations+and+the+mode+of+action+of+a+chitin+synthesis+inhibitor+in+arthropods.">Population bulk segregant mapping uncovers resistance mutations and the mode of action of a chitin synthesis inhibitor in arthropods.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 109, 4407-4412 (2012).</li><li>Dearden, P. K., Donly, C., Grbic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+pair-rule+gene+homologues+in+a+chelicerate:+early+patterning+of+the+two-spotted+spider+mite+Tetranychus+urticae.">Expression of pair-rule gene homologues in a chelicerate: early patterning of the two-spotted spider mite Tetranychus urticae.</a> Development. 129, 5461-5472 (2002).</li><li>Khila, A., Grbic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+silencing+in+the+spider+mite+Tetranychus+urticae:+dsRNA+and+siRNA+parental+silencing+of+the+Distal-less+gene.">Gene silencing in the spider mite Tetranychus urticae: dsRNA and siRNA parental silencing of the Distal-less gene.</a> Development genes and evolution. 217, 241-251 (2007).</li><li>Grbic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mity+model:+Tetranychus+urticae,+a+candidate+for+chelicerate+model+organism.">Mity model: Tetranychus urticae, a candidate for chelicerate model organism.</a> BioEssays : news and reviews in molecular, cellular and developmental biology. 29, 489-496 (2007).</li><li>Grbic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genome+of+Tetranychus+urticae+reveals+herbivorous+pest+adaptations.">The genome of Tetranychus urticae reveals herbivorous pest adaptations.</a> Nature. 479, 487-492 (2011).</li><li>Kliebenstein, D., Pedersen, D., Barker, B., Mitchell-Olds, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+quantitative+trait+loci+controlling+glucosinolates,+myrosinase+and+insect+resistance+in+Arabidopsis+thaliana.">Comparative analysis of quantitative trait loci controlling glucosinolates, myrosinase and insect resistance in Arabidopsis thaliana.</a> Genetics. 161, 325-332 (2002).</li><li>Abe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+of+jasmonate+in+response+and+tolerance+of+Arabidopsis+to+thrip+feeding.">Function of jasmonate in response and tolerance of Arabidopsis to thrip feeding.</a> Plant &amp; cell physiology. 49, 68-80 (2008).</li><li>Whiteman, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mining+the+plant-herbivore+interface+with+a+leafmining+Drosophila+of+Arabidopsis.">Mining the plant-herbivore interface with a leafmining Drosophila of Arabidopsis.</a> Molecular ecology. 20, 995-1014 (2011).</li><li>Goodspeed, D., Chehab, E. W., Min-Venditti, A., Braam, J., Covington, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+synchronizes+jasmonate-mediated+defense+with+insect+circadian+behavior.">Arabidopsis synchronizes jasmonate-mediated defense with insect circadian behavior.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 4674-4677 (2012).</li><li>Kim, J. H., Lee, B. W., Schroeder, F. C., Jander, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+indole+glucosinolate+breakdown+products+with+antifeedant+effects+on+Myzus+persicae+(green+peach+aphid).">Identification of indole glucosinolate breakdown products with antifeedant effects on Myzus persicae (green peach aphid).</a> The Plant journal : for cell and molecular biology. 54, 1015-1026 (2008).</li><li>Adio, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biosynthesis+and+defensive+function+of+Ndelta-acetylornithine,+a+jasmonate-induced+Arabidopsis+metabolite.">Biosynthesis and defensive function of Ndelta-acetylornithine, a jasmonate-induced Arabidopsis metabolite.</a> Plant Cell. 23, 3303-3318 (2011).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tomato+homolog+of+CORONATINE-INSENSITIVE1+is+required+for+the+maternal+control+of+seed+maturation,+jasmonate-signaled+defense+responses,+and+glandular+trichome+development.">The tomato homolog of CORONATINE-INSENSITIVE1 is required for the maternal control of seed maturation, jasmonate-signaled defense responses, and glandular trichome development.</a> Plant Cell. 16, 126-143 (2004).</li><li>Kant, M. R., Ament, K., Sabelis, M. W., Haring, M. A., Schuurink, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+timing+of+spider+mite-induced+direct+and+indirect+defenses+in+tomato+plants.">Differential timing of spider mite-induced direct and indirect defenses in tomato plants.</a> Plant Physiol. 135, 483-495 (2004).</li><li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NIH+Image+to+ImageJ:+25+years+of+image+analysis.">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9, 671-675 (2012).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

このビデオでは、分離することと、大人の女性のダニ数の多い植物をはびこるために使用されるプロトコルを示しています。我々はAを使用して、このプロトコルを提示したがシロイヌナズナには、任意の植物ハダニインタラクションシステムのために使用することができるし、現在正常にトマト、ブドウ（ ビニフェラ種 ）植物にも適用されている。収集されたダニが同?...

植物の害虫の相互作用は非常に科学的、経済的に重要なトピックである。それは、歴史的に（例えばトマトなど）の両方作物植物とモデル工場、Aを用いて検討したシロイヌナズナ 。両方の場合において、草食動物に対する植物の感受性は、草食動物の攻撃の後にまたは間接的に害虫の性能の評価を介して直接植物表現型の​​評価のいずれかを介して測定することができる。 植物の感受性の直接測定は、方法の範囲を使用して害虫種の数のために、以前に使用した。例えば、鱗翅目の幼虫の食害は、グリッド12の助けを借りて、肉眼でコナガ （コナガ）またはトリコプルシア （キャベツルーパー）のいずれかで消費される植物組織の一部の推定として測定される。また、その後の定量的画像解析による葉の損傷のデジタル画像を利用する方法があります。このような方法はに使用したAの研究アザミウマ （ミカンキイロアザミウマ）13、Scaptomyzaフラバ （リーフマイニングショウジョウバエ）14、およびTとシロイヌナズナの対話NI 15。 植物の感受性の間接的な測定は、広く植物害虫の相互作用の研究に使用される。 A.の例については、感受性シロイヌナズナアブラムシモモアカアブラムシの食害を桃には、一般的に害虫の繁殖力との相互作用16,17の後の植物の全体の形態の記述の分析を通じて評価される。 Aの別の典型的な間接的な指標害虫へのシロイヌナズナの感受性は、草食動物の乾燥や湿潤重量の評価である。このパラメータは、一般に、 モンシロチョウ （小白）、Pとして、lepidoteransの草食性を特徴付けるために使用されているコナガ 、またはTその幼虫や蛹の段階15,17のNI。 ハダニは、セルの内容FEですeders。ダニによる損傷は、緑の淡い白から色の範囲退緑斑点の集合体として認識されている。ハダニの食害に植物宿主の感受性は、以前にハダニのパフォーマンス日数の分析を通じて間接的に評価した後に侵入18,19、または直接植物週間後蔓延18の全体の形態を使用したり、公開される葉のデジタル画像を使用してその後の自動画像解析19日間ダニへ。これらのメソッドを開発し、トマト植物とTとの相互作用の研究のために使用されていたナミハダニ、典型的には、混合ダニ集団から集めた後、柔らかい毛ブラシを用いて、葉の表面上に配置したハダニの数が少ない（処置あたり5-15）を使用した。しかし、これらの方法は、ダニの大きい番号が適用される必要の研究には適していない。また、画像解析ソフトにおける枚葉画像の直接処理しながらアドビフォトショップ（サンノゼ、CA）又はImageJの20トマト損傷の分析のために使用することができるよう、これらのプロトコルは、表面のより大きな反射率を有するか、または軽く（着色及び視認性の高い毛状突起を有している、葉に適用するために変更が必要例えば 、 シロイヌナズナ ）植物の損傷をマーク退緑斑点の自動選択を妨害する。さらに、容易に以前の方法で利用することができハダニの発育段階が最も普及していると容易に識別成人女性に限定し、他の発達段階の利用を妨げるされています。 植物ハダニ相互作用のハイスループット分析に向けた最初の重要なステップは、ハダニを植物に挑戦し、確実な相互作用の成果を評価するために、再現性のあるシンプルで堅牢なプロトコルを確立することである。 このビデオ、大型のテンキーを迅速かつ簡単に収集するための効率的な方法では成人女性のダニのBER、実験プラントホスト上の応用、およびハダニ供給による植物被害の評価が記載されている。提示されたプロトコルは、その後の実験の用途に用いることができる任意の発達段階（卵、幼虫、若虫、成人男性、女性）で個人の何百もの高速で効率的な収集を可能にします。さらに、これらのプロトコルには、任意のダニ宿主植物に適用することができるが、特にA.例において実証されているシロイヌナズナ 。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1157">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td colspan="4" height="21" style="height:21px;width:231px;">Plant material:</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">California red kidney bean</td>
			<td style="width:275px;">Stokes, Thorold, ON, Canada</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">Two week old, well infested with spider mites two or three days before use. Other cultivars of Phaseolus vulgaris can be used.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="4" height="21" style="height:21px;width:231px;">Chemicals:</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">P9416</td>
			<td style="width:527px;">1% stock solution is prepared to simplify aliquoting</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Tap water</td>
			<td>Any supplier</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">At room temperature, heat- and cold-shock affect mite survival rate and peformance</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="4" height="21" style="height:21px;width:231px;">Other materials and equipment:</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Plastic tray</td>
			<td>Any supplier</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Set of scissors</td>
			<td>Any supplier</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">2 L beakers</td>
			<td>Any supplier</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Paper towels</td>
			<td>Any supplier</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Sets of sieves</td>
			<td style="width:275px;">Manufactured in house</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">Detailed instructions are available</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Thin brush</td>
			<td>Any supplier</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Pipettes</td>
			<td>Any supplier</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Pipette tips</td>
			<td>Any supplier</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">0.2 and 1 mL</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">1.5 mL centrifuge tubes</td>
			<td>Any supplier</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Air pump</td>
			<td>Any supplier</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">Aquarium type pump with inverted air flow. Vacuum line can be used. Required pressure drop is approx. 2-4 psi</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Stereoscope</td>
			<td>Any supplier</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Scanner</td>
			<td>Epson</td>
			<td style="width:125px;">V30</td>
			<td style="width:527px;">Any flatbed scanner allowing necessary degree of control over scan quality. We use Epson V30 for our experiments.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Computer</td>
			<td>Any supplier</td>
			<td style="width:125px;">NA</td>
			<td style="width:527px;">Windows or OS X PC which is compatible with scanner hardware and Adobe Photoshop software.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Adobe Photoshop software</td>
			<td style="width:275px;">Adobe Systems Inc., San Jose, CA, USA</td>
			<td style="width:125px;">various</td>
			<td style="width:527px;">Any version with Histogram tool included.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of two-spotted spider mite tetranychus urticae for plant-pest interaction studies

ナミハダニ、 ナミハダニは 、経済的価値の150以上を有する種の著しく幅広い、上フィードユビキタス多食節足動物草食動物である。それは、特にナス科およびウリ科トウモロコシ、綿など（ 例えば 、トマト、ナス、ピーマン、キュウリ、ズッキーニ）、温室効果観賞植物（ 例えば 、バラ、キク、カーネーション）、毎年恒例の畑作物（内、温室作物の主要害虫である大豆、テンサイ）、および多年生の文化（アルファルファ、イチゴ、ブドウ、柑橘類、およびプラム）の1,2。それが重要な農業害虫になり、極端な過食に加えて、T.ナミハダニ 3-7 は、その制御のために使用される殺虫剤および殺ダニ剤の広い配列に耐性を発現する傾向を有する。 ナミハダニは、（27℃で7日間）迅速なライフサイクルを有するように、優れた実験的な生物であるかつ容易に実験室での高密度に維持することができる。 （ インサイチュハイブリダイゼーションおよび抗体染色を含む）の遺伝子発現をアッセイし、RNA干渉を用いたハダニ内因性遺伝子の発現を不活性化するための方法が8-10開発されている。最近では、Tの全ゲノムシーケンスナミハダニはすでにその宿主植物（ シロイヌナズナやトマトナス·リコペルシカム ）11の一部に存在する同等のゲノムリソースを持つモデル生物として、この害虫草食動物を開発する機会を作成し、報告されている。一緒に、これらのモデル生物は、植物害虫の相互作用の分子基盤への洞察を提供することができます。 ここでは、大規模な成人女性のダニの数、実験プラントホスト上の応用、およびハダニ供給による植物被害の評価を迅速かつ簡単に収集するための効率的な方法が記載されている。提示されたプロトコルエンその後の実験の用途に用いることができる任意の発達段階（卵、幼虫、若虫、成人男性、女性）で個人の何百もの高速で効率的な収集をディセーブルさ。

20から30はびこっマメ植物を使用して、1は、篩を用いて約2,000の大人の女性のダニを収集することができます。ダニを転送するためにブラシを使用している場合、プラントごとに20ダニで10工場をはびこるするのに必要な時間は約15分である。収集およびアプリケーションの方法の組み合わせを図2に示す。 このプロトコルは、収集したダニは、同様の生理状態...

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Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

植物害虫の相互作用の研究のために必要とされる効率的なハダニの均質な試料の調製、実験的な植物の侵入、および植物の損傷の評価のためのプロトコルが、開発された。

ナミハダニダニの適用<em&gt;ナミハダニ</em&gt;植物の害虫相互作用研究のための

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with ...

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Research

JoVE Journal

Environment

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

17.6K ビュー.  The University of Western Ontario. 植物害虫の相互作用の研究のために必要とされる効率的なハダニの均質な試料の調製、実験的な植物の侵入、および植物の損傷の評価のためのプロトコルが、開発された。 

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Physical, Chemical and Biological Characterization of Six Biochars Produced for the Remediation of Contaminated Sites

The physical and chemical properties of biochar vary based on feedstock sources and production conditions, making it possible to engineer biochars with specific functions (e.g. carbon sequestration, soil quality improvements, or contaminant sorption). In 2013, the International Biochar Initiative (IBI) made publically available their Standardized Product Definition and Product Testing Guidelines (Version 1.1) which set standards for physical and chemical characteristics for biochar. Six biochars made from three different feedstocks and at two temperatures were analyzed for characteristics related to their use as a soil amendment. The protocol describes analyses of the feedstocks and biochars and includes: cation exchange capacity (CEC), specific surface area (SSA), organic carbon (OC) and moisture percentage, pH, particle size distribution, and proximate and ultimate analysis. Also described in the protocol are the analyses of the feedstocks and biochars for contaminants including polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), polychlorinated biphenyls (PCBs), metals and mercury as well as nutrients (phosphorous, nitrite and nitrate and ammonium as nitrogen). The protocol also includes the biological testing procedures, earthworm avoidance and germination assays. Based on the quality assurance / quality control (QA/QC) results of blanks, duplicates, standards and reference materials, all methods were determined adequate for use with biochar and feedstock materials. All biochars and feedstocks were well within the criterion set by the IBI and there were little differences among biochars, except in the case of the biochar produced from construction waste materials. This biochar (referred to as Old biochar) was determined to have elevated levels of arsenic, chromium, copper, and lead, and failed the earthworm avoidance and germination assays. Based on these results, Old biochar would not be appropriate for use as a soil amendment for carbon sequestration, substrate quality improvements or remediation.

Biochar is a carbon-rich material used as a soil amendment with the ability to sustainably sequester carbon, improve substrate quality and sorb contaminants. This protocol describes the 17 analytical methods used for the characterization of biochar, which is required prior to large scale implementation of these amendments in the environment.

汚染サイトの修復のために製造シックスBiocharsの物理的、化学的および生物学的特性評価

The physical and chemical properties of biochar vary based on feedstock sources and production conditions, making it possible to engineer biochars with ...

環境学

Characterization and Application of Passive Samplers for Monitoring of Pesticides in Water

Five different water passive samplers were calibrated under laboratory conditions for measurement of 124 legacy and current used pesticides. This study provides a protocol for the passive sampler preparation, calibration, extraction method and instrumental analysis. Sampling rates (RS) and passive sampler-water partition coefficients (KPW) were calculated for silicone rubber, polar organic chemical integrative sampler POCIS-A, POCIS-B, SDB-RPS and C18 disk. The uptake of the selected compounds depended on their physicochemical properties, i.e., silicone rubber showed a better uptake for more hydrophobic compounds (log octanol-water partition coefficient (KOW) &#62; 5.3), whereas POCIS-A, POCIS-B and SDB-RPS disk were more suitable for hydrophilic compounds (log KOW &#60; 0.70).

A protocol about the characterization and application of five different passive sampling devices is presented.

水中の農薬のモニタリングのための特性とパッシブサンプラーの応用

Five different water passive samplers were calibrated under laboratory conditions for measurement of 124 legacy and current used pesticides. This study ...

Remote Sensing Evaluation of Two-spotted Spider Mite Damage on Greenhouse Cotton

The objective of this study was to evaluate a ground-based multispectral optical sensor as a remote sensing tool to assess foliar damage caused by the two-spotted spider mite (TSSM), Tetranychus urticae Koch, on greenhouse grown cotton. TSSM is a polyphagous pest which occurs on a variety of field and horticultural crops. It often becomes an early season pest of cotton in damaging proportions as opposed to being a late season innocuous pest in the mid-southern United States. Evaluation of acaricides is important for maintaining the efficacy of and preventing resistance to the currently available arsenal of chemicals and newly developed control agents. Enumeration of spider mites for efficacy evaluations is laborious and time consuming. Therefore, subjective visual damage rating is commonly used to assess density of spider mites. The NDVI (Normalized Difference Vegetation Index) is the most widely used statistic to describe the spectral reflectance characteristics of vegetation canopy to assess plant stress and health consequent to spider mite infestations. Results demonstrated that a multispectral optical sensor is an effective tool in distinguishing varying levels of infestation caused by T. urticae on early season cotton. This remote sensing technique may be used in lieu of a visual rating to evaluate insecticide treatments.

This manuscript describes a multispectral optical sensor that effectively detected damage to early season cotton artificially infested with varying densities of the two-spotted spider mite populations.

温室効果コットンの二斑点スパイダーダニの被害のリモートセンシング評価

The objective of this study was to evaluate a ground-based multispectral optical sensor as a remote sensing tool to assess foliar damage caused by the ...

Modification and Application of a Leaf Blower-vac for Field Sampling of Arthropods

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropod populations in rice. When used in combination with an enclosure, application of this sampling device provides absolute estimates of the populations of arthropods as numbers per standardized sampling area. The sampling efficiency depends critically on the sampling duration. In a mature rice crop, a two-minute sampling in an enclosure of 0.13 m2 yields more than 90% of the arthropod population. The device also allows sampling of arthropods dwelling on the water surface or the soil in rice paddies, but it is not suitable for sampling fast flying insects, such as predatory Odonata or larger hymenopterous parasitoids. The modified blower-vac is simple to construct, and cheaper and easier to handle than traditional suction sampling devices, such as D-vac. The low cost makes the modified blower-vac also accessible to researchers in developing countries.

Assessment of arthropod abundance in crops is critical for investigating population dynamics and species interactions. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropods in rice.

節足動物のフィールドサンプリングのためのリーフブロワー-VACの変更と応用

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the ...

Use of a Filter Cartridge for Filtration of Water Samples and Extraction of Environmental DNA

Recent studies demonstrated the use of environmental DNA (eDNA) from fishes to be appropriate as a non-invasive monitoring tool. Most of these studies employed disk fiber filters to collect eDNA from water samples, although a number of microbial studies in aquatic environments have employed filter cartridges, because the cartridge has the advantage of accommodating large water volumes and of overall ease of use. Here we provide a protocol for filtration of water samples using the filter cartridge and extraction of eDNA from the filter without having to cut open the housing. The main portions of this protocol consists of 1) filtration of water samples (water volumes &#8804;4 L or &gt;4 L); (2) extraction of DNA on the filter using a roller shaker placed in a preheated incubator; and (3) purification of DNA using a commercial kit. With the use of this and previously-used protocols, we perform metabarcoding analysis of eDNA taken from a huge aquarium tank (7,500 m3) with known species composition, and show the number of detected species per library from the two protocols as the representative results. This protocol has been developed for metabarcoding eDNA from fishes, but is also applicable to eDNA from other organisms.

We describe a protocol for filtration of water samples with a filter cartridge and extraction of environmental DNA (eDNA) without having to cut open the housing to remove the filter. This protocol is developed for metabarcoding eDNA from fishes, but is also applicable to eDNA from other organisms.

ろ過水のサンプルおよび環境DNAの抽出のためのフィルターカートリッジの使用

Recent studies demonstrated the use of environmental DNA (eDNA) from fishes to be appropriate as a non-invasive monitoring tool. Most of these studies ...

Vegetated Treatment Systems for Removing Contaminants Associated with Surface Water Toxicity in Agriculture and Urban Runoff

Urban stormwater and agriculture irrigation runoff contain a complex mixture of contaminants that are often toxic to adjacent receiving waters. Runoff may be treated with simple systems designed to promote sorption of contaminants to vegetation and soils and promote infiltration. Two example systems are described: a bioswale treatment system for urban stormwater treatment, and a vegetated drainage ditch for treating agriculture irrigation runoff. Both have similar attributes that reduce contaminant loading in runoff: vegetation that results in sorption of the contaminants to the soil and plant surfaces, and water infiltration. These systems may also include the integration of granulated activated carbon as a polishing step to remove residual contaminants. Implementation of these systems in agriculture and urban watersheds requires system monitoring to verify treatment efficacy. This includes chemical monitoring for specific contaminants responsible for toxicity. The current paper emphasizes monitoring of current use pesticides since these are responsible for surface water toxicity to aquatic invertebrates.

This article summarizes the design attributes and the effectiveness of treatment systems that treat urban stormwater and agriculture irrigation runoff to remove pesticides and other contaminants associated with aquatic toxicity.

農業および都市流出における地表水毒性に伴う汚染物質除去のための植物処理システム

Urban stormwater and agriculture irrigation runoff contain a complex mixture of contaminants that are often toxic to adjacent receiving waters. Runoff may ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current measures to combat such pathogens have proved too conservative and, thus, not sufficiently effective, and they can potentially pose environmental risks. Therefore, it is extremely necessary to identify host-resistance factors to assist in controlling plant diseases naturally through the identification of resistant germplasm, the isolation and characterization of resistance genes, and the molecular breeding of resistant cultivars. In this regard, there is need to establish an accurate, rapid, and large-scale inoculation method to breed and develop plant resistance genes. The rice blast fungal pathogen Magnaporthe grisea causes severe disease symptoms and yield losses. Recently, M. grisea has emerged as a model organism for studying the mechanisms of plant-fungal pathogen interactions. Hence, we report the development of a plant virulence test method that is specific for M. grisea. This method provides for both spray inoculation with a conidial suspension and wounding inoculation with mycelium cubes or droplets of conidial suspension. The key step of the wounding inoculation method for detached rice leaves is to make wounds on plant leaves, which avoids any interference caused by host penetration resistance. This spray/wounding protocol contributes to the rapid, accurate, and large-scale screening of the pathotypes of M. grisea isolates. This integrated and systematic plant infection method will serve as an excellent starting point for gaining a broad perspective of issues in plant pathology.

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Here, we present a protocol to test plant virulence with the plant pathogen Magnaporthe grisea. This report will contribute to the large-scale screening of the pathotypes of fungi isolates and serve as an excellent starting point for understanding the resistant mechanisms of plants during molecular breeding.

植物感染試験: スプレーと傷を介した植物病原体イネいもち病菌接種

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

With an estimated 6000 species worldwide, hoverflies are ecologically important as alternative pollinators to domesticated honeybees. However, they are also a useful scientific model to study motion vision and flight dynamics in a controlled laboratory setting. As the larvae develop in organically polluted water, they are useful models for investigating investment in microbial immunity. While large scale commercial breeding for agriculture already occurs, there are no standardized protocols for maintaining captive populations for scientific studies. This is important as commercial captive breeding programs focusing on mass output during peak pollination periods may fail to provide a population that is consistent, stable and robust throughout the year, as is often needed for other research purposes. Therefore, a method to establish, maintain and refresh a captive research population is required. Here, we describe the utilization of an artificial hibernation cycle, in addition to the nutritional and housing requirements, for long term maintenance of Eristalis tenax. Using these methods, we have significantly increased the health and longevity of captive populations of E. tenax compared to previous reports. We furthermore discuss small scale rearing methods and options for optimizing yields and manipulating population demographics.

Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

The overall goal of these procedures is to establish, maintain and refresh a captive population of Eristalis tenax in a research setting.

子育てと研究のEristalis テナックスハナアブの長期メンテナンス

With an estimated 6000 species worldwide, hoverflies are ecologically important as alternative pollinators to domesticated honeybees. However, they are ...

Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant Caffeine

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and toxicological studies. Using automated digital tracking platforms, recent efforts in neuropharmacology are leveraging larval fish locomotor behaviors to identify potential therapeutic targets for novel small molecules. Similar to these efforts, research in the environmental sciences and comparative pharmacology and toxicology is examining various behaviors of fish models as diagnostic tools in tiered evaluation of contaminants and real-time monitoring of surface waters for contaminant threats. Whereas the zebrafish is a popular larval fish model in the biomedical sciences, the fathead minnow is a common larval fish model in ecotoxicology. Unfortunately, fathead minnow larvae have received considerably less attention in behavioral studies. Here, we develop and demonstrate a behavioral profile protocol using caffeine as a model neurostimulant. Though photomotor responses of fathead minnows were occasionally affected by caffeine, zebrafish&#160;were markedly more sensitive for photomotor and locomotor endpoints, which responded at environmentally relevant levels. Future studies are needed to understand comparative behavioral sensitivity differences among fish with age and time of day, and to determine whether similar behavioral effects would occur in nature and be indicative of adverse outcomes at the individual or population levels of biological organization.

Here, we present a protocol to examine larval zebrafish and fathead minnow locomotor activities and photomotor responses (PMR) using an automated tracking software. When incorporated in common toxicology bioassays, analyses of these behaviors provide a diagnostic tool to examine chemical bioactivity. This protocol is described using caffeine, a model neurostimulant.

稚魚の行動応答プロファイルを調べるための実験プロトコル: 神経興奮剤カフェインへの応用

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and ...

Generating Homo- and Heterografts Between Watermelon and Bottle Gourd for the Study of Cold-responsive MicroRNAs

MicroRNAs (miRNAs) are endogenous small non-coding RNAs of about 20 - 24 nt, known to play important roles in plant development and adaptation. There is an accumulating evidence showing that the expressions of certain miRNAs are altered when grafting, an agricultural practice commonly used by farmers to improve crop tolerance to biotic and abiotic stresses. Bottle gourd is an inherently climate-resilient crop compared to many other major cucurbits, including watermelon, rendering it one of the most widely used rootstocks for the latter. The recent advancement of high-throughput sequencing technologies has provided great opportunities to investigate cold-responsive miRNAs and their contributions to heterograft advantages; yet, adequate experimental procedures are a prerequisite for this purpose. Here, we present a detailed protocol for efficiently generating homo- and heterografts between the cold-susceptible watermelon and the cold-tolerant bottle gourd, in addition to methods of tissue sampling, data generation, and data analysis. The presented methods are also useful for other plant-grafting systems, to interrogate miRNA regulations under various environmental stresses, such as heat, drought, and salinity.

Here we present a detailed protocol for efficiently making homo- and heterografts between watermelon and bottle gourd, in addition to methods of tissue sampling, data generation, and data analysis, for the investigation of cold-responsive microRNAs.

ホモとスイカとひょうたんの同種および異種接ぎ木を生成する応答性マイクロ Rna の研究のため

MicroRNAs (miRNAs) are endogenous small non-coding RNAs of about 20 - 24 nt, known to play important roles in plant development and adaptation. There is ...