この研究は、n 602699（DIREKTを）°グラント契約の下、スウェーデンの研究評議会（90293501、A0290401、A0290402）、欧州共同体の第7次フレームワークプログラムからの助成金によって支えられ、NovoNordisk財団、GurliとエドワードBrunnberg財団は、セラピー、Vleugel幹財団とオーケWiberg財団。

注：血液はウプサラの倫理審査委員会（許可番号264分の2008）と承認にオープンシステムの静脈穿刺により健常人から採取した。 1.播種細胞<ol><li> PBS pH7.4中1％ゼラチンでコーティングしたT75フラスコ中、5％、37℃で培養初代ヒト臍静脈内皮細胞（HUVEC）CO 2。 </li><li> T75のHUVECを含むフラスコ（または一次ヒト内皮細胞の他のタイプ）からの培養培地を除去し、PBSのpHは7.4で2.1 mMのEDTAを用いて細胞を洗浄する。 37℃で3分 - 1ミリリットル0.25％トリプシン-EDTAを追加し、2インキュベートすることによって細胞を剥離。 </li><li> PBS pH7.4中に9ミリリットルの10％FBSの入ったフラスコをすすぐことによって細胞を収集し、15mlチューブに細胞懸濁液を移す。 5分間735×gで細胞をスピンダウン。 </li><li>上清を除去し、内皮細胞増殖培地微小血管（EC GMMV）で慎重に細胞ペレットを再懸濁し、ビルケルチャンバー内の細胞を数える。シード21000 C1ウェル細胞培養スライド中のエル/ cm 2で、37℃でインキュベートする。培養2日 - HUVECを1の後にコンフルエントされます。光学顕微鏡下で毎日の細胞形態とフルエンシーを監視します。 </li></ol>全血の調製<ol><li>製造元の指示に従って固定化されたヘパリン（CHS）の二重層と血液と接触するすべての人工表面を準備する。ほこりから保護CHS材料がコーティングされた機能を喪失することなく6ヶ月まで室温で保存することができる。 </li><li>血液内皮室実験を開始する直前に健康なドナー（&lt;30分）から血液を描画するオープンシステム静脈穿刺を使用してください。慎重にCHSコーティングされた50ミリリットルチューブに血液を採取する前に：カップルは、皮下注射針CHS被覆されたシリコンチューブ（2ミリメートル内径）に（18 Gが50ミリメートルをX）。未分画ヘパリンと補足血液は0.75 IU / mlの最終濃度に到達する。 inveにより穏やかに血液を混ぜる3回 - チューブ2をrting。 </li></ol> 3.血液内皮商工モデル<ol><li> PMMAスライド（25×75ミリメートル）に接着されている2シリンダー（高さ8ミリメートルと半径9ミリメートル）から成るアクリルポリメチルメタクリレート（PMMA）で、血液室（トップビュー図1A）を製作する。培養内皮細胞（ 図1B）でガラススライドに対する血液チャンバをシールするゴム製のOリングで上向きシリンダの端部を取り付ける。その後垂直位置（ 図1C）中の内皮細胞と培養スライドに接続された血液チャンバーを回転させます。 </li><li>血液を活性化しないように注意しながら、各CHSコーティングされたチャンバー内に1.5ミリリットルの血液を転送するために、CHSコーティングされたピペットチップを使用してください。 </li><li>使用した初期血漿タンパク質濃度の決定のために、10mMのK 3 EDTAの最終濃度に達するように30μlの0.34 MK 3 EDTAを含む微小遠心管に転送1血液ml酵素免疫測定法（ELISA）を。慎重に血液を混ぜ、氷上にチューブを保つ。 </li><li>製造業者の指示に従って細胞培養スライドガラスのプラスチック壁を取り外し、慎重にPBS pH7.4中で細胞を洗浄する。その後スライドからできるだけ多くの液体を除去してください。細胞が完全に乾くせてはいけない。 </li><li>血液に直面して細胞を用いて、血液室の上にスライドを置きます。血液内皮細胞室の周りにクランプを置くことによって、スライドを固定します。クランプを配置するときに、細胞培養スライドガラスの破損を回避するために、追加のサポートのためのプラスチック製のスライドを使用する。 </li><li> 37℃の水浴中で回転するホイール​​上の血液内皮細胞チャンバを修正（40直径cm）の場所。 30分間の0.5×gでホイール上の各チャンバを回転させる。 </li><li>インキュベーション後、血液内皮細胞チャンバを解体。 PBS pH7.4中での細胞培養スライドを洗浄し、氷冷1％パラホルムアルデヒド（PFA）は、fで細胞を固定10分。 μlの0.34 MK 3 EDTAを30を含むマイクロ遠心チューブに各チャンバからの転送を1mlの血液を、10mM K 3 EDTAの最終濃度を達成し、穏やかにチューブを混合する。氷の上でチューブを保管してください。 </li><li> 4℃で10分間4560×gでチューブを遠心。さらなる分析まで-70℃で新しいマイクロ遠心チューブや店舗への血液の血漿を転送します。 </li></ol>血液内皮相互作用の解析4。 <ol><li>二次ヤギ抗マウスアレクサ488およびファロイジン - テキサスレッドに続くマウス抗ヒトCD16で免疫蛍光染色を行います。室温で1時間各染色工程を実行し、各ステップの間にPBS（pH7.4）中でスライドを洗浄する。室温で10分間、DAPIによる核の対比染色。このようCellProfilerのような適切な画像分析ソフトウェアを用いて画像解析と組み合わせて、蛍光顕微鏡により内皮細胞に結合した血液成分を分析する。 </li><li> QUANTIFY血漿サンプルの製造元の指示に従ってトロンビン - アンチトロンビン（TAT）をELISAで血液区画における反応。 </li><li> 例えば 、適切な統計ツールを使用してください。、不対t検定を、データを分析する。 </li></ol>

<ol>
	<li>Mestas, J., Hughes, C. C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+Mice+and+Not+Men:+Differences+between+Mouse+and+Human+Immunology.">Of Mice and Not Men: Differences between Mouse and Human Immunology.</a> J Immunol. 172 (2), 2731-2738 (2004).</li><li>Seok, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+responses+in+mouse+models+poorly+mimic+human+inflammatory+diseases.">Genomic responses in mouse models poorly mimic human inflammatory diseases.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (9), 3507-3512 (2013).</li><li>Hong, J., Ekdahl, K. N., Reynolds, H., Larsson, R., Nilsson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+in+vitro+model+to+study+interaction+between+whole+blood+and+biomaterials.+Studies+of+platelet+and+coagulation+activation+acid+the+effect+of+aspirin.">A new in vitro model to study interaction between whole blood and biomaterials. Studies of platelet and coagulation activation acid the effect of aspirin.</a> Biomaterials. 20 (7), 603-611 (1999).</li><li>Doctor, A., Spinella, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Processing+and+Storage+on+Red+Blood+Cell+Function+In.">Effect of Processing and Storage on Red Blood Cell Function In.</a> Vivo. Semin Perinatol. 36 (4), 248-259 (2012).</li><li>Andersson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+heparin+surface+concentration+and+antithrombin+binding+capacity+as+evaluated+with+human+non-anticoagulated+blood+in+vitro.">Optimal heparin surface concentration and antithrombin binding capacity as evaluated with human non-anticoagulated blood in vitro.</a> J Biomed Mater Res A. 67 (2), 458-466 (2003).</li><li>Ekdahl, K. N., Hong, J., Hamad, O. A., Larsson, R., Nilsson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+blood+compatibility+of+materials,+cells,+and+tissues:+basic+concepts,+test+models,+and+practical+guidelines.">Evaluation of the blood compatibility of materials, cells, and tissues: basic concepts, test models, and practical guidelines.</a> Adv Exp Med Biol. 735, 257-270 (2013).</li><li>Aird, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+temporal+dynamics+of+the+endothelium.">Spatial and temporal dynamics of the endothelium.</a> J Thromb Haemost. 3 (7), 1392-1406 (2005).</li><li>Cines, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+in+physiology+and+in+the+pathophysiology+of+vascular+disorders.">Endothelial cells in physiology and in the pathophysiology of vascular disorders.</a> Blood. 91 (10), 3527-3561 (1998).</li><li>Kirchhofer, D., Tschopp, T. B., Hadvary, P., Baumgartner, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+stimulated+with+tumor+necrosis+factor-alpha+express+varying+amounts+of+tissue+factor+resulting+in+inhomogenous+fibrin+deposition+in+a+native+blood+flow+system.+Effects+of+thrombin+inhibitors.">Endothelial cells stimulated with tumor necrosis factor-alpha express varying amounts of tissue factor resulting in inhomogenous fibrin deposition in a native blood flow system. Effects of thrombin inhibitors.</a> J Clin Invest. (5), 2073-2083 (1994).</li><li>Esmon, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+circuits+in+thrombosis+and+inflammation.">Molecular circuits in thrombosis and inflammation.</a> Thromb Haemost. 109 (3), 416-420 (2013).</li><li>Rosenberg, R. D., Aird, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular-Bed&#8211;Specific+Hemostasis+and+Hypercoagulable+States.">Vascular-Bed&#8211;Specific Hemostasis and Hypercoagulable States.</a> N Engl J Med. 340 (20), 1555-1564 (1999).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

<html>血液と血管壁との間の複数の相互作用は、通常による内皮の非粘着性および抗血栓性のために静止状態に維持される。7炎症を伴う病理学的状態の間、内皮は接着受容体の発現8で得られた増加と活性化され止血を阻害する能力が低下。今度は血液中のカスケードシステムの9の活性化は、さらに血栓症および白血球動員を引き起こす内皮の血栓形成を増幅する。10内皮細胞および全血の間のこの微妙な相互作用のより良い理解を得るために、我々は持っている培養された内皮細胞は、全血と接触して配置されているインビトロ方法における新規に開発した。我々の知る限りでは、私たちのセットアップは、より長い期間のために全く又はほとんどない抗凝固剤とのヒト全血とインキュベートした内皮細胞を示す最初のものである。 塩基 &quot;&gt;このシステムの感度は、血液と接触して配置されるすべての表面上に固定化されたヘパリンの保護層と組み合わせてオープン系静脈穿刺によってイネーブルされる。血液調達中に開放系の使用は、静脈​​穿刺時に、カスケードシステムの活性化を減少させる抗凝固剤の自己決定された量の使用を可能にしながら、市販の真空に血液チューブは、しかし、研究の意図されたエンドポイントに応じて使用することができる。ほとんどの市販のクローズドシステムのチューブに加え、抗凝固剤の最終濃度を敏感阻害することができる、そうでなければ、ハード設定で、相互作用を研究するために、図6を保護ヘパリン表面はさらに、内皮細胞以外の表面による面接触を通る血液の活性化を排除する5確かに、未分画ヘパリンの少量を補充した全血のインキュベーションCHSの保護なしチャンバは、血餅形成をもたらした。 <pクラス= &quot;jove_content&quot;&gt;チャンバー内部の気泡は、内皮細胞とのインキュベーションの間、血液の混合を可能にします。気泡サイズの影響を評価するために、我々は2つ​​の異なる血液容量を用いた。このモデルでは、我々は、HUVECとインキュベートしたチャンバ内にかかわらず、気泡の大きさの類似のTATレベルを測定した。 TATは、しかし、完全にCHS室治療に小さな気泡サイズが増加した。これは、前述した内皮細胞の特性11によれば、不活性CHSチャンバ内で不足している内皮細胞によって提供される凝固の増大した活性化の際に調節効果を示す。システム内の気泡は、チャンバの回転時の流れを生成する。バブルのサイズは、この回転システム内の力に影響を与えます。これは、より小さな気泡が血液すなわち時に減少した力を表す高いTAT値、血液の動きを作成した図2Dにおける我々の結果で示されているチャンバ内に低く、それによってカスケード系の活性化は、より高い程度で起こる。それは、このシステムでは、我々は壁や中央で最低に沿って最高速度で室内全体にスピードでは異なるであろう回転流を作成していることに言及すべきである。これは明らかに内皮細胞に対して流動する点とせん断応力との最適な環境ではないが、それでも、我々は安定した再現性のある結果を生成するシステムを有する。より最適な条件は、乱流の非存在下で循環する層流を含むであろう。これは、ここに表示されるモデルでは、しかし、不可能であり、我々の知識にこのようなシステムは、現在まで利用できません。 、システムに追加の抗凝固剤なしまたは低レベルの全血を用いて組み合わせることが可能ではない、いくつかのマイクロ流体システム市販さがあるが、それによって血液および内皮細胞に存在するすべての成分間の相互作用を適切に敏感な評価を可能にすることができない。 さらに、TNFαは、独立して、血液量のTATの重形成と組み合わせてHUVEC活性化に向けて血液細胞の動員における2倍の増加があった。これは、モデル系の安定性を検証し、また、全血との組合せで活性化された内皮細胞を使用する可能性を示している。将来、血液内皮細胞チャンバは、活性化の様々な条件やステージの下の細胞上で発現されるマーカーの種々の活性化内皮細胞に対する白血球の動員を調査するために使用することができる。さらに、モデルは、炎症状態に対する効果を評価するために、薬理学的薬剤と組み合わせて使用​​することができる。 要約すると、我々は、血管疾患の関連性の調査を実行するためにインビトロ系で完全なヒトを作成するためにヒト血液と血管細胞とチャンバモデルを組み合わせて大きな利点を示す。

心血管疾患、血液血管の相互作用を分析するための方法は、一般に、動物研究実験を含む。実験的研究、動物モデルで作成された結果はこのように、しかし、ヒトの疾患のほとんど、または全く意味を有していてもよい1,2、血液区画と血管内皮細胞間の細胞間相互作用を調査するためのインビトロモデルにおいて良好で信頼性のための必要性がある人間のようなシステム。そこで我々は、血液内皮細胞チャンバーモデルを確立している。これは、生体材料とヒト全血との間の相互作用を調査するために使用前に説明したモデルに基づいている。通常、精製された成分の数を制限し、他のin vitroでのセットアップの3反しすなわち、血小板は、白血球または内皮細胞が利用可能で、現在のモデルは、すべて組み込まれて血管中に存在する成分。 血液内皮cの設定エル室モデルはほとんど、または全く追加の抗凝固剤との新たに採取したヒト血液の使用を可能にするように設計されている。より長い期間の間保存された血液は、赤血球の破壊は、血液および内皮細胞との間の微妙な相互作用を妨害し得る、いわゆる記憶病変を取得する。4 ex vivoでの全血の取り扱い中に血餅形成を回避するために抗凝固剤または血液と接触するすべての材料が非活性である必要は、高用量のいずれかを必要とする。非活性化表面のような材料は、代替的に固定化されたヘパリンの保護層を備えていてもよい、実験室環境ではまれである。血液接触は、凝固カスケードの活性化を引き起こすことなく、発生する可能性表面を形成する大部分の材料に適用することができる固定化されたヘパリンの保護層（以下、Corlineヘパリン表面（CHS）と呼ばれる）。5したがって、とチャンバ家具によってCHS、血液内皮CEllの室モデルは、血液中の抗凝固剤の非常に低い濃度の使用を可能にする。血液内皮室モデルにおける抗凝固剤の高濃度の添加を回避する他の方法でマスクされる可能性があり、血管内の敏感な相互作用を研究することを可能にする。6 プラスチック製顕微鏡スライドに：;（9ミリメートル、半径8ミリメートル、高さ）の血液内皮細胞室モデルは、プラスチック製のシリンダーを取り付けることにより形成された二つの室から構成されています。シリンダーに上向きに縁が細胞培養スライドに対してチャンバーを密封するため使用されるゴムのOリングが付いていた溝が付いています。チャンバは部分的にしかチャンバは、その後、垂直位置（ 図1）に回転すると、チャンバ内に残された空気が移動中の血液を保持するように、血液で満たされている。 モデルの機能性を評価するために、我々は完全に被覆されたCHSのいずれかで実験を行ったチャンバまたはヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）。二つの別々の血液量をアッセイし、トロンビンアンチトロンビン（TAT）複合体（凝集の間接的マーカー）の形成は、酵素結合免疫吸着検定法（ELISA）で測定した。次に、血液量の影響を評価し、腫瘍壊死因子（TNFα）は、画像解析により、白血球動員に内皮細胞を刺激した。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/52112/52112fig1highres.jpg" /> 血液内皮細胞室モデルの1.セットアップ図。 （A）上部PMMAで作ら血液チャンバの概略図を表示する。（B）一次ヒト内皮細胞を、1ウェルチャンバースライド上で培養される。新鮮ヒト全血を、顕微鏡スライド上の2つのチャンバに添加される。チャンバおよび血液を処理するために使用されるすべての材料は、保護HSコーティングで処理される。 CEの壁を除去した後llの培養スライドは、細胞は血液に面して配置され、システムがシャットダウンをクランプする。（C）血液内皮細胞チャンバを37°Cで回転させながらインキュベートする。その後、血液区画における反応は、ELISAによって分析され、内皮細胞は、顕微鏡検査によって分析することができる。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="698">
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:91px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:272px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Human Umbilican Vein Endothelial Cells (HUVEC)</td>
			<td style="width:91px;">PromoCell</td>
			<td style="width:119px;">C-12200</td>
			<td style="width:272px;">Any other type of primary human endothelial cell may be used.</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Endothelial Cell Growth Medium MV (ECGM MV)</td>
			<td style="width:91px;">PromoCell</td>
			<td style="width:119px;">C-22120</td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Gelatin</td>
			<td style="width:91px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G-2500</td>
			<td style="width:272px;">Prepare 1% gelatin in PBS, incubate 5 ml in a T75 for 15 min and remove before culturing cells.</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">TAT ELISA</td>
			<td style="width:91px;">Enzyme Research Lab.</td>
			<td style="width:119px;">TAT-EIA-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Mouse anti-human CD16</td>
			<td style="width:91px;">DAKO</td>
			<td style="width:119px;">F7011</td>
			<td>Dilution 1:100</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Goat anti-mouse Alexa 488</td>
			<td style="width:91px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:119px;">A11001</td>
			<td>Dilution 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Phalloidin-Texas Red</td>
			<td style="width:91px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:119px;">A22287</td>
			<td>Dilution 1:200</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">DAPI</td>
			<td style="width:91px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:119px;">D1306</td>
			<td>Dilution 10 &#956;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">EDTA</td>
			<td style="width:91px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">E-6758</td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">0.25% Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:91px;">Gibco Life Tecnologies</td>
			<td style="width:119px;">25200-056</td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:91px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">10437</td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">1 well cell culture slides</td>
			<td style="width:91px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">354101</td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Blood Chambers</td>
			<td style="width:91px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td style="width:272px;">Blood Chamber may be manufactured in PMMA or any other plastic able to bind CHS</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Clamps</td>
			<td style="width:91px;">Office Depot</td>
			<td style="width:119px;">2052204</td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Corline Heparin Surface (CHS)</td>
			<td style="width:91px;">Corline Systems AB</td>
			<td style="width:119px;">945-00</td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Hypodermic needle</td>
			<td style="width:91px;">Terumo</td>
			<td style="width:119px;">NN-1850R</td>
			<td style="width:272px;">Size: 18 G x 5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Unfractionated Heparin (UFH)</td>
			<td style="width:91px;">Leo Pharma</td>
			<td style="width:119px;">585679</td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:216px;">K3EDTA</td>
			<td style="width:91px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:119px;">1709958</td>
			<td style="width:272px;">Prepare a 0.34 M stock solution in milliQ H20</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">PFA</td>
			<td style="width:91px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P-6148</td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Fluorescence microscope</td>
			<td style="width:91px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">80i</td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Light microscope</td>
			<td style="width:91px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">TS100</td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Image analysis software</td>
			<td style="width:91px;">Broad Institute</td>
			<td style="width:119px;">CellProfiler</td>
			<td style="width:272px;">Available for free at www.cellprofiler.org</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a novel in vitro model for studying the interactions between human whole blood and endothelium

すべての既知の疾患の大部分は、心血管系の障害を伴う。心血管病態中に活性化相互作用する経路の複雑さへの研究は、しかし、堅牢かつ生理学的に関連する方法の欠如によって制限されている。病理学的な血管イベントをモデル化するために、我々は、内皮および全血の間の相互作用を研究するためのインビトロアッセイを開発した。アッセイは、ヒト全血と接触して配置されている一次ヒト内皮細胞から構成されている。この方法は、血管内に存在する分子と細胞成分との間の微妙な相互作用の研究を可能にする、全くないか非常に少ない抗凝固剤とのネイティブな血液を利用しています。 我々は、またはヒト臍静脈内皮細胞（HUVEC）なしでインキュベートし、異なる血液容量によって凝固の活性を比較することによって、アッセイの機能性を調べた。大きな血液量はに貢献したのに対し、トロンビンはアンチトロンビン（TAT）複合体の形成の増加は、HUVECの存在は、凝固の減少活性化をもたらした。さらに、本 ​​発明者らは、腫瘍壊死因子（TNFα）で刺激し、CD16 +細胞の存在は、TNFαに有意に高いことが見出さHUVECへの白血球の付着の画像解析を適用し、血液接触後の非刺激細胞と比較して、細胞を刺激した。結論として、アッセイは、内皮および血液区画との間の相互作用が乱されている血管の病理を研究するために適用することができる。

CHSコーティングの必要性内皮細胞によって誘発されるものと、特定の全血での反応を測定するために、血液内皮細胞チャンバに使用されるすべての材料は、使用前にCHSコーティングを提出しなければならない。 図2A（左）の30分後、コーティングされていないチャンバを示しているはっきりと見えるクロット存在と血液接触。一方、CHSとの室（ 図2A、右）を治療することは結果が内皮細胞の血液の相互作用によるものであることを確認して、制御不能な活性化からの血液を保護します。 チャンバー内の血液量の影響活性化された凝固因子の間の相互作用の確率が増加するにつれて、凝固の活性化は、停滞血液中の可能性が高い。血液内皮細胞室モデルでは、血液に起因チャンバ内の気泡の循環に運動状態に維持される。 O中血液量の変化、ひいては気泡サイズの効果を決定するRDER、CHSコーティングされたチャンバーを1.5 mlまたは1.75ミリリットル、30分間、全血を用いて試験したCHSコーティングされたガラススライドに接続した。血液1.75mlの血液を1.5mlの（ 図2B）を用いた場合と比較して、チャンバーに添加されたときに気泡による任意の動きなしでの血液の体積が2.5倍大きい。測定されたTAT-値が増加した血液量（ 図2D）と増加したTAT-形成を示唆した。 HUVEC（ 図2C）は 、全血の1.5または1.75ミリリットルのいずれかとインキュベートした場合、差異は内皮細胞が凝固の活性化（ 図2D）を調節し得ることを示唆し、両群間で認められなかった。 血液細胞動員に対するTNFαの効果と凝固の活性化白血球動員に対するTNFαの効果を研究するために、HUVECを治療するた20ng / mlの前に血液接触へのTNFα4時間とエド。血液接触- 2.4 mlまたは1.75ミリリットルの血液のいずれかでは、 -培養スライドを画像化し、CD16 +細胞の数を定量した、CD16（ 図2F）について染色した後、30分間継続した。 CD16 +細胞の動員を、1.5mlの血液を100〜256 CD16 +細胞/ mm 2（p &lt;0.0001）からのTNFα処理（ 図2E）で有意に増加し、172から1.75ミリリットルの血液と378（P &lt;0.0001）である。 TAT複合体の形成は、TNFα処理又は未処理細胞のいずれか（ 図2G）とインキュベートした血液の対応する血漿サンプル中で測定した。未処理の細胞と比較して、TNFα刺激細胞は、TAT複合体の約2倍を誘導した。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/52112/52112fig2.jpg" width="600" /> イチジクURE 2：血液内皮細胞室モデルの機能性。 CHSの有無にかかわらず、（A）チャンバーは、全血とともにインキュベートした。 CHSことなく、血餅を30分後に形成された。 CHSなしでインキュベートした血液中のトロンビン-アンチトロンビン（TAT）複合体は、凝固の間接的なマーカーの測定は、&gt; 6000 / mlであった。（B）血液の量は、異なる血液量に応じて変化する回転気泡により移動維持されない。コンフルエント単層の位相差顕微鏡ショー典型的な内皮細胞形態で画像化し、それが1.75ミリリットルを加えて0.74ミリリットルに増加するのに対し、血液1.5mlを追加すると、このボリュームは、0.3ミリリットルになります。（C）HUVECの前に異なる血液ボリュームが追加されたときに完全にコーティングされたCHS室用の血液接触。（D）のTAT値はわずかな違いを示しています。 1.5ミリリットルの血液を添加すると、85が得られた1.75ミリリットルに±11μg/ mlのた（n = 7）と比較して35を生じた77。 70 / mlのTATた（n = 8）。 HUVECは、同じ血液量と共にインキュベートされた場合、この差は、もはや存在しない。 1.5ミリリットルのための66±55μgの/ mlである（n = 5）で66±29 1.75ミリリットル（nは7 =）非刺激またはTNFαのいずれかでCD16 +細胞の数の（E）定量存在した後にHUVECを刺激するためのμg/ mlの血液接触。 CD16 +細胞の数が有意にTNFαと共に増加されるか、1.5ミリリットル（基礎：100±40細胞/ mm;TNFα：256±121細胞/ mm）とインキュベートした細胞刺激1.75ミリリットル（基礎：172±67細胞/ mmと、 TNFα：全血の378±185細胞/ mm）（F）HUVECはファロイジン（赤色について染色刺激され、刺激されていないとTNFαの代表的な画像）、CD16（緑色）及びDAPI（青色）。スケールバー=250μmの血液（1.5 mlをインキュベート未処理細胞と比較してTAT複合体の形成はほぼTNFαによって倍増される（G）の細胞を刺激した：2。1±0.1倍のTAT、n = 3である。 1.75ミリリットル：1.7±1.0倍のTATはn = 4）。すべての値は平均±標準偏差として提示されている。 p値は、不対t検定によって計算した。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52112/52112fig2highres.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a>

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A Novel In vitro Model for Studying the Interactions Between Human Whole Blood and Endothelium

The accessibility of reliable models to investigate vascular blood interactions in humans is lacking. We present an in vitro model of cultured primary human endothelial cells combined with human whole blood to investigate cellular interactions both in the blood (ELISA) and the vascular compartment (microscopy).

小説<em&gt;インビトロ</em&gt;ヒト全血と内皮の間の相互作用を研究するためのモデル

The majority of all known diseases are accompanied by disorders of the cardiovascular system. Studies into the complexity of the interacting pathways ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Novel In vitro Model for Studying the Interactions Between Human Whole Blood and Endothelium

9.3K ビュー.  Uppsala University. The accessibility of reliable models to investigate vascular blood interactions in humans is lacking. We present an in vitro model of cultured primary human endothelial cells combined with human whole blood to investigate cellular interactions both in the blood (ELISA) and the vascular compartment (microscopy).

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Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the initial and determining step of the pathogenesis. Although experimentally adhesion is mostly studied in static conditions adhesion actually takes place in the presence of flowing liquid. First encounters between bacteria and their host often occur at the mucosal level, mouth, lung, gut, eye, etc. where mucus flows along the surface of epithelial cells. Later in infection, pathogens occasionally access the blood circulation causing life-threatening illnesses such as septicemia, sepsis and meningitis. A defining feature of these infections is the ability of these pathogens to interact with endothelial cells in presence of circulating blood. The presence of flowing liquid, mucus or blood for instance, determines adhesion because it generates a mechanical force on the pathogen. To characterize the effect of flowing liquid one usually refers to the notion of shear stress, which is the tangential force exerted per unit area by a fluid moving near a stationary wall, expressed in dynes/cm2. Intensities of shear stress vary widely according to the different vessels type, size, organ, location etc. (0-100 dynes/cm2). Circulation in capillaries can reach very low shear stress values and even temporarily stop during periods ranging between a few seconds to several minutes 1. On the other end of the spectrum shear stress in arterioles can reach 100 dynes/cm2 2. The impact of shear stress on different biological processes has been clearly demonstrated as for instance during the interaction of leukocytes with the endothelium 3. To take into account this mechanical parameter in the process of bacterial adhesion we took advantage of an experimental procedure based on the use of a disposable flow chamber 4. Host cells are grown in the flow chamber and fluorescent bacteria are introduced in the flow controlled by a syringe pump. We initially focused our investigations on the bacterial pathogen Neisseria meningitidis, a Gram-negative bacterium responsible for septicemia and meningitis. The procedure described here allowed us to study the impact of shear stress on the ability of the bacteria to: adhere to cells 1, to proliferate on the cell surface 5and to detach to colonize new sites 6 (Figure 1). Complementary technical information can be found in reference 7. Shear stress values presented here were chosen based on our previous experience1 and to represent values found in the literature. The protocol should be applicable to a wide range of pathogens with specific adjustments depending on the objectives of the study.

During the infection process, a key step is the adhesion of pathogens with host cells. In most instances this adhesion step occurs in the presence of mechanical stress generated by flowing liquid. We describe a technique that introduces shear stress as an important parameter in the study of bacterial adhesion.

細菌付着の研究ではせん断応力を導入する

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

免疫・感染学

Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK

Herpetic eye disease, termed herpetic stromal keratitis (HSK), is a potentially blinding infection of the cornea that results in over 300,000 clinical visits each year for treatment. Between 1 and 2 percent of those patients with clinical disease will experience loss of vision of the infected cornea. The vast majority of these cases are the result of reactivation of a latent infection by herpes simplex type I virus and not due to acute disease. Interestingly, the acute infection is the model most often used to study this disease. However, it was felt that a recurrent model of HSK would be more reflective of what occurs during clinical disease. The recurrent animal models for HSK have employed both rabbits and mice. The advantage of rabbits is that they experience reactivation from latency absent any known stimulus. That said, it is difficult to explore the role that many immunological factors play in recurrent HSK because the rabbit model does not have the immunological and genetic resources that the mouse has. We chose to use the mouse model for recurrent HSK because it has the advantage of there being many resources available and also we know when reactivation will occur because reactivation is induced by exposure to UV-B light. Thus far, this model has allowed those laboratories using it to define several immunological factors that are important to this disease. It has also allowed us to test both therapeutic and vaccine efficacy.

Most studies of herpetic corneal disease use a primary infection model. However, primary infection with HSV-1 does not typically lead to human disease. Here we describe a recurrent model of herpetic corneal disease, which more closely mimics human disease.

マウスにおける再発性ヘルペス性間質性角膜炎、人間のHSKを研究するためのモデル

Herpetic eye disease, termed herpetic stromal keratitis (HSK), is a potentially blinding infection of the cornea that results in over 300,000 clinical ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging from mild infections to life-threatening bronchiolitis. An important part of the pathogenesis of severe disease is an enhanced immune response leading to immunopathology.	Here, we describe a protocol used to investigate the immune response of human immune cells to an HRSV infection. First, we describe methods used for culturing, purification and quantification of HRSV. Subsequently, we describe a human in vitro model in which peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are stimulated with live HRSV. This model system can be used to study multiple parameters that may contribute to disease severity, including the innate and adaptive immune response. These responses can be measured at the transcriptional and translational level. Moreover, viral infection of cells can easily be measured using flow cytometry. Taken together, stimulation of PBMC with live HRSV provides a fast and reproducible model system to examine mechanisms involved in HRSV-induced disease.

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial virus (HRSV) can cause severe bronchiolitis in young infants. Part of the pathogenesis of severe HRSV disease is caused by the host immune response. Stimulation of primary human immune cells with HRSV provides a fast and reproducible model system to study activation of inflammatory pathways and infection.

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of the host depends on the involvement of an adapted immune response against the pathogen1. Immune response is complex and results from interaction of the pathogens and several immune or non-immune cellular types2. In vitro studies cannot characterise these interactions and focus on cell-pathogen interactions. Moreover, in the airway3, particularly in patients with suppurative chronic lung disease or in mechanically ventilated patients, polymicrobial communities are present and complicate host-pathogen interaction. Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans are both problem pathogens4, frequently isolated from tracheobronchial samples, and associated to severe infections, especially in intensive care unit5. Microbial interactions have been reported between these pathogens in vitro but the clinical impact of these interactions remains unclear6. To study the interactions between C. albicans and P. aeruginosa, a murine model of C. albicans airways colonization, followed by a P. aeruginosa-mediated acute lung infection was performed.

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

While in vitro study of host-pathogen interactions allow the characterization of specific immune responses, in vivo models are required to observe the effects of complex responses. Using Candida albicans exposure followed by Pseudomonas aeruginosa-mediated lung infection, we established a murine model of microbial interactions involved in ventilator-associated pneumonia pathogenicity.

微生物群集を学びます<em&gt;インビボ</em&gt;：ホスト間の媒介の相互作用のモデル<em&gt;カンジダ</em&gt;と<em&gt;緑膿菌</em&gt;航空で

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and reproducibility of this assay can be considered unstable, either because of user&#39;s errors or because of the sensitivity of NK cells to experimental manipulation. To eliminate these issues, a workflow that reduces them to a minimum was established and is presented here. To illustrate, we obtained blood samples, at various time points, from runners (n = 4) that were submitted to an intense bout of exercise. First, NK cells are simultaneously identified and isolated through CD56 tagging and magnetic-based sorting, directly from whole blood and from as little as one milliliter. The sorted NK cells are removed of any reagent or capping antibodies. They can be counted in order to establish an accurate NK cell count per milliliter of blood. Secondly, the sorted NK cells (effectors cells or E) can be mixed with 3,3&#39;-Diotadecyloxacarbocyanine Perchlorate (DiO) tagged K562 cells (target cells or T) at an assay-optimal 1:5 T:E ratio, and analyzed using an imaging flow-cytometer that allows for the visualization of each event and the elimination of any false positive or false negatives (such as doublets or effector cells). This workflow can be completed in about 4 h, and allows for very stable results even when working with human samples. When available, research teams can test several experimental interventions in human subjects, and compare measurements across several time points without compromising the data&#39;s integrity.

This work describes an advanced workflow for the accurate and fast determination of NK (Natural Killer) cell count and NK cell cytotoxicity in human blood samples.

ヒト全血中のナチュラルキラー細胞溶解活性のフローサイトメトリー分析

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Development and Identification of a Novel Subpopulation of Human Neutrophil-derived Giant Phagocytes In Vitro

Neutrophils (PMN) are best known for their phagocytic functions against invading pathogens and microorganisms. They have the shortest half-life amongst leukocytes and in their non-activated state are constitutively committed to apoptosis. When recruited to inflammatory sites to resolve inflammation, they produce an array of cytotoxic molecules with potent antimicrobial killing. Yet, when these powerful cytotoxic molecules are released in an uncontrolled manner they can damage surrounding tissues. In recent years however, neutrophil versatility is increasingly evidenced, by demonstrating plasticity and immunoregulatory functions. We have recently identified a new neutrophil-derived subpopulation, which develops spontaneously in standard culture conditions without the addition of cytokines/growth factors such as granulocyte colony-stimulating factor (GM-CSF)/interleukin (IL)-4. Their phagocytic abilities of neutrophil remnants largely contribute to increase their size immensely; therefore they were termed giant phagocytes (G&#981;). Unlike neutrophils, G&#981; are long lived in culture. They express the cluster of differentiation (CD) neutrophil markers CD66b/CD63/CD15/CD11b/myeloperoxidase (MPO)/neutrophil elastase (NE), and are devoid of the monocytic lineage markers CD14/CD16/CD163 and the dendritic CD1c/CD141 markers. They also take-up latex and zymosan, and respond by oxidative burst to stimulation with opsonized-zymosan and PMA. G&#981; also express the scavenger receptors CD68/CD36, and unlike neutrophils, internalize oxidized-low density lipoprotein (oxLDL). Moreover, unlike fresh neutrophils, or cultured monocytes, they respond to oxLDL uptake by increased reactive oxygen species (ROS) production. Additionally, these phagocytes contain microtubule-associated protein-1 light chain 3B (LC3B) coated vacuoles, indicating the activation of autophagy. Using specific inhibitors it is evident that both phagocytosis and autophagy are prerequisites for their development and likely NADPH oxidase dependent ROS. We describe here a method for the preparation of this new subpopulation of long-lived, neutrophil-derived phagocytic cells in culture, their identification and their currently known characteristics. This protocol is essential for obtaining and characterizing G&#981; in order to further investigate their significance and functions.

Development and Identification of a Novel Subpopulation of Human Neutrophil-derived Giant Phagocytes In Vitro

We describe here a method for obtaining and identifying a newly characterized subpopulation of neutrophil-derived giant phagocytes. These cells develop in culture from fresh human blood neutrophils, and are characterized by phagocytosis, autophagy, immensely large size, and extended lifespan. This method is essential to further investigate this unique neutrophil-derived subpopulation.

ヒト好中球由来の巨大食細胞の新規亜集団の開発および同定<em&gt;インビトロ</em

Neutrophils (PMN) are best known for their phagocytic functions against invading pathogens and microorganisms. They have the shortest half-life amongst ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining the role of the gene of interest in the development, differentiation, and function of NK cells. Recent advances related to chimeric antigen receptors (CARs) in cancer immunotherapy accentuate the need for an efficient method to deliver exogenous genes to effector lymphocytes. The efficiencies of lentiviral-mediated gene transductions into primary human or mouse NK cells remain significantly low, which is a major limiting factor. Recent advances using cationic polymers, such as polybrene, show an improved gene transduction efficiency in T cells. However, these products failed to improve the transduction efficiencies of NK cells. This work shows that dextran, a branched glucan polysaccharide, significantly improves the transduction efficiency of human and mouse primary NK cells. This highly reproducible transduction methodology provides a competent tool for transducing human primary NK cells, which can vastly improve clinical gene delivery applications and thus NK cell-based cancer immunotherapy.

The goal of this study was to formulate technologies that allow for successful gene transduction in primary natural killer (NK) cells. The dextran-mediated lentiviral transduction of human or mouse primary NK cells results in higher gene expression efficiencies. This method of gene transduction will vastly improve NK cell genetic manipulation.

デキストランは、マウスとヒト NK 細胞のレンチ ウイルスの伝達効率を向上します。

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte extravasation might result in pathophysiological changes in the CNS. Thus, investigation of lymphocyte migration into the CNS is important to understand inflammatory CNS diseases and to develop new therapy approaches. Here we present an in vitro model of the human blood-brain barrier to study lymphocyte extravasation. Human brain microvascular endothelial cells (HBMEC) are confluently grown on a porous polyethylene terephthalate transwell insert to mimic the endothelium of the blood-brain barrier. Barrier function is validated by zonula occludens immunohistochemistry, transendothelial electrical resistance (TEER) measurements as well as analysis of evans blue permeation. This model allows investigation of the diapedesis of rare lymphocyte subsets such as CD56brightCD16dim/- NK cells. Furthermore, the effects of other cells, cytokines and chemokines, disease-related alterations, and distinct treatment regimens on the migratory capacity of lymphocytes can be studied. Finally, the impact of inflammatory stimuli as well as different treatment regimens on the endothelial barrier can be analyzed.

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Here, we describe a human blood-brain barrier model enabling to investigate lymphocyte transmigration into the central nervous system in vitro.

使用してリンパ球血管外漏出の分析<em&gt;インビトロ</em&gt;ヒト血液脳関門のモデル

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

Natural killer (NK) cells belong to the innate immune system and are a first-line anti-cancer immune defense; however, they are suppressed in the tumor microenvironment and the underlying mechanism is still largely unknown. The lack of a consistent and reliable source of NK cells limits the research progress of NK cell immunity. Here, we report an in vitro system that can provide high quality and quantity of bone marrow-derived murine NK cells under a feeder-free condition. More importantly, we also demonstrate that siRNA-mediated gene silencing successfully inhibits the E4bp4-dependent NK cell maturation by using this system. Thus, this novel in vitro NK cell differentiating system is a biomaterial solution for immunity research.

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

Here, we present a protocol to mass-produce gene-silencing murine NK cells by using a feeder-free differentiation system for mechanistic study in vitro and in vivo.

生体外でマウスのナチュラル キラー細胞の大量生産のため新規無料の送り装置システム

Natural killer (NK) cells belong to the innate immune system and are a first-line anti-cancer immune defense; however, they are suppressed in the tumor ...

Characterization of Human Monocyte Subsets by Whole Blood Flow Cytometry Analysis

Monocytes are key contributors in various inflammatory disorders and alterations to these cells, including their subset proportions and functions, can have pathological significance. An ideal method for examining alterations to monocytes is whole blood flow cytometry as the minimal handling of samples by this method limits artifactual cell activation. However, many different approaches are taken to gate the monocyte subsets leading to inconsistent identification of the subsets between studies. Here we demonstrate a method using whole blood flow cytometry to identify and characterize human monocyte subsets (classical, intermediate, and non-classical). We outline how to prepare the blood samples for flow cytometry, gate the subsets (ensure contaminating cells have been removed), and determine monocyte subset expression of surface markers &#8212; in this example M1 and M2 markers. This protocol can be extended to other studies that require a standard gating method for assessing monocyte subset proportions and monocyte subset expression of other functional markers.

Here we present a protocol for characterizing monocyte subsets by whole blood flow cytometry. This includes outlining how to gate the subsets and assess their expression of surface markers and giving an example of the assessment of the expression of M1 (inflammatory) and M2 markers (anti-inflammatory).

全血によって人間の Monocyte のサブセットの解析フローのフローサイトメトリー解析

Monocytes are key contributors in various inflammatory disorders and alterations to these cells, including their subset proportions and functions, can ...