We thank Dr. John Ohlfest and Dr. Stacey Decker13 for the generous gift of plasmids and for the training provided to master this method. We thank Marta Dzaman for help with standardizing the Hematoxylin-Eosin staining procedure of paraffin-embedded sections. We also thank Molly Dahlgren for perusing this manuscript and providing helpful suggestions. This work is supported by NIH/NINDS grants to MGC and PRL, Leah&#8217;s Happy Hearts Foundation grant to MCG and PRL. Alex&#8217;s Lemonade Foundation young Investigator Award and the St. Baldrick&#8217;s Foundation Fellowship to CK.

<ol>
	<li>Weller, M., Cloughesy, T., Perry, J. R., Wick, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standards+of+care+for+treatment+of+recurrent+glioblastoma--are+we+there+yet.">Standards of care for treatment of recurrent glioblastoma--are we there yet.</a> Neuro Oncol. 15 (1), 4-27 (2013).</li><li>Dai, C., Holland, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+models.">Glioma models.</a> Biochim Biophys Acta. 1551 (1), M19-M27 (2001).</li><li>Houchens, D. P., Ovejera, A. A., Riblet, S. M., Slagel, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+brain+tumor+xenografts+in+nude+mice+as+a+chemotherapy+model.">Human brain tumor xenografts in nude mice as a chemotherapy model.</a> Eur J Cancer Clin Oncol. 19 (6), 799-805 (1983).</li><li>Holland, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioblastoma+multiforme:+the+terminator.">Glioblastoma multiforme: the terminator.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (12), 6242-6244 (2000).</li><li>Candolfi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology:+neuropathological+characterization+and+tumor+progression.">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85 (2), 133-148 (2007).</li><li>Hambardzumyan, D., Parada, L. F., Holland, E. C., Charest, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+modeling+of+gliomas+in+mice:+new+tools+to+tackle+old+problems.">Genetic modeling of gliomas in mice: new tools to tackle old problems.</a> Glia. 59 (8), 1155-1168 (2011).</li><li>Rojiani, A. M., Dorovini-Zis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomeruloid+vascular+structures+in+glioblastoma+multiforme:+an+immunohistochemical+and+ultrastructural+study.">Glomeruloid vascular structures in glioblastoma multiforme: an immunohistochemical and ultrastructural study.</a> J Neurosurg. 85 (6), 1078-1084 (1996).</li><li>Hambardzumyan, D., Amankulor, N. M., Helmy, K. Y., Becher, O. J., Holland, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+Adult+Gliomas+Using+RCAS/t-va+Technology.">Modeling Adult Gliomas Using RCAS/t-va Technology.</a> Translational Oncology. 2 (2), 89-95 (2009).</li><li>Friedmann-Morvinski, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dedifferentiation+of+neurons+and+astrocytes+by+oncogenes+can+induce+gliomas+in+mice.">Dedifferentiation of neurons and astrocytes by oncogenes can induce gliomas in mice.</a> Science. 338 (6110), 1080-1084 (2012).</li><li>Lynes, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral-Induced+High-Grade+Gliomas+in+Rats:+The+Effects+of+PDGFB,+HRAS-G12V,+AKT,+and+IDH1-R132H.">Lentiviral-Induced High-Grade Gliomas in Rats: The Effects of PDGFB, HRAS-G12V, AKT, and IDH1-R132H.</a> Neurotherapeutics : the journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutic. , (2014).</li><li>Uhrbom, L., Hesselager, G., Nister, M., Westermark, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+brain+tumors+in+mice+using+a+recombinant+platelet-derived+growth+factor+B-chain+retrovirus.">Induction of brain tumors in mice using a recombinant platelet-derived growth factor B-chain retrovirus.</a> Cancer Res. 58 (23), 5275-5279 (1998).</li><li>Marumoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+novel+mouse+glioma+model+using+lentiviral+vectors.">Development of a novel mouse glioma model using lentiviral vectors.</a> Nat Med. 15 (1), 110-116 (2009).</li><li>Wiesner, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+novo+induction+of+genetically+engineered+brain+tumors+in+mice+using+plasmid+DNA.">De novo induction of genetically engineered brain tumors in mice using plasmid DNA.</a> Cancer Res. 69 (2), 431-439 (2009).</li><li>Bailey, O. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genesis+of+the+Percival+Bailey-Cushing+classification+of+gliomas.">Genesis of the Percival Bailey-Cushing classification of gliomas.</a> Pediatr Neurosci. 12 (4-5), 261-265 (1985).</li><li>Patel, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA-seq+highlights+intratumoral+heterogeneity+in+primary+glioblastoma.">Single-cell RNA-seq highlights intratumoral heterogeneity in primary glioblastoma.</a> Science. 344 (6190), 1396-1401 (2014).</li><li>Agnihotri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioblastoma,+a+brief+review+of+history,+molecular+genetics,+animal+models+and+novel+therapeutic+strategies.">Glioblastoma, a brief review of history, molecular genetics, animal models and novel therapeutic strategies.</a> Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 61 (1), 25-41 (2013).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+genomic+characterization+defines+human+glioblastoma+genes+and+core+pathways.">Comprehensive genomic characterization defines human glioblastoma genes and core pathways.</a> Nature. 455 (7216), 1061-1068 (2008).</li><li>Ivics, Z., Izsvak, Z., Minter, A., Hackett, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+functional+domains+and+evolution+of+Tc1-like+transposable+elements.">Identification of functional domains and evolution of Tc1-like transposable elements.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93 (10), 5008-5013 (1996).</li><li>Ivics, Z., Hackett, P. B., Plasterk, R. H., Izsvak, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+reconstruction+of+Sleeping+Beauty,+a+Tc1-like+transposon+from+fish,+and+its+transposition+in+human+cells.">Molecular reconstruction of Sleeping Beauty, a Tc1-like transposon from fish, and its transposition in human cells.</a> Cell. 91 (4), 501-510 (1997).</li><li>Hackett, P. B., Ekker, S. C., Largaespada, D. A., McIvor, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleeping+beauty+transposon-mediated+gene+therapy+for+prolonged+expression.">Sleeping beauty transposon-mediated gene therapy for prolonged expression.</a> Adv Genet. 54, 189-232 (2005).</li><li>Ammar, I., Izsvak, Z., Ivics, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sleeping+Beauty+transposon+toolbox.">The Sleeping Beauty transposon toolbox.</a> Methods Mol Biol. 859, 229-240 (2012).</li><li>Mates, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+evolution+of+a+novel+hyperactive+Sleeping+Beauty+transposase+enables+robust+stable+gene+transfer+in+vertebrates.">Molecular evolution of a novel hyperactive Sleeping Beauty transposase enables robust stable gene transfer in vertebrates.</a> Nat Genet. 41 (6), 753-761 (2009).</li><li>Koso, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transposon+mutagenesis+identifies+genes+that+transform+neural+stem+cells+into+glioma-initiating+cells.">Transposon mutagenesis identifies genes that transform neural stem cells into glioma-initiating cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (44), E2998-E3007 (2012).</li><li>Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=COX-2+blockade+suppresses+gliomagenesis+by+inhibiting+myeloid-derived+suppressor+cells.">COX-2 blockade suppresses gliomagenesis by inhibiting myeloid-derived suppressor cells.</a> Cancer Research. 71 (7), 2664-2674 (2011).</li><li>Geurts, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+into+genomes+of+human+cells+by+the+sleeping+beauty+transposon+system.">Gene transfer into genomes of human cells by the sleeping beauty transposon system.</a> Molecular Therapy: The Journal Of The American Society Of Gene Therapy. 8 (1), 108-117 (2003).</li><li>Dickins, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+tumor+phenotypes+using+stable+and+regulated+synthetic+microRNA+precursors.">Probing tumor phenotypes using stable and regulated synthetic microRNA precursors.</a> Nat Genet. 37 (11), 1289-1295 (2005).</li><li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+double+markers+reveals+tumor+cell+of+origin+in+glioma.">Mosaic analysis with double markers reveals tumor cell of origin in glioma.</a> Cell. 146 (2), 209-221 (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

この記事では、細部SBを使用したGBMの新たなモデルを生成するための汎用性と再現性のある方法は、新生児マウスの脳室下帯を周囲の細胞に発癌性プラスミドDNAの仲介統合をtransposase-。我々は、新たな注目遺伝子を有するトランスポゾンプラスミドを作製するためのプロトコルを提示し、生きた動物における腫瘍の進行を監視する方法、およびこれらの腫瘍の組織病理学的および免疫組織化?...

多形性膠芽腫（GBM）は、手術、放射線療法、および化学療法1で処理された15-21ヶ月の生存期間中央値で、成人における最も一般的な（60％）の原発性脳腫瘍である。 GBMのための新規治療法は不可欠である。実験的治療は十分にヒトの疾患の顕著な特徴を再現する動物モデルでのテストが必要。げっ歯類でGBMを誘導するための戦略は、神経膠腫細胞株2を用いた化学アルキル化剤誘発、生殖細胞または体細胞の遺伝的変化、または移植を含む。最も一般的に使用されるモデルは、脳内に、または皮下に同一の遺伝子型を有する動物における同系細胞を使用して、いずれかの同所、神経膠腫細胞株の注入を用いる。または異種細胞は、免疫に移植最も一般的ヒトGBM細胞株は、マウス3を損なわ。再現性の利便性、standa：異種移植片は、頭蓋内腫瘍の研究のための多くの利点を提供rdized成長率、死亡および腫瘍局在の時間。しかし、これらのモデルが原因注入し、正確に組織学的に再現する限られた能力のために使用される人工、侵襲的な外科的アプローチに限界がある人間のGBM（WHOグレードIV）の特性を備えています：擬似pallisading壊死、核atypias、びまん性浸潤、微小血管増殖とglomeruloid血管異常4-7の形成。ウイルスベクター8-12と、またはトランスポゾン媒介インテグレーション13のいずれかで、発癌性DNAでの体細胞のゲノムを変更することによってGBMの誘導は、より厳密にヒト疾患の病因を再現し、ヒトGBMの組織病 ​​理学的特徴を再現する。 歴史的には、CNSの腫瘍は生存14の予測因子となることが観察された起源の感知セルに基づいて分類されている。 GBMのは、プライマリとセカンダリに分類される。新たな証拠のTODAY主要神経膠芽15の非常に不均一な性質を指す。二次GBM（15％）、低悪性度星状細胞腫（WHOグレードI）およびanaplasic星状細胞腫（WHOグレードII）の悪性形質転換の結果は、疾患の初期発症、予後良好および遺伝子発現の「前神経」パターンに関連付けられている、原発性GBM（85％）のに対し、後期発症、予後不良とグリア（古典）、神経または間葉発現パターンを示している。遺伝子発現のこれらのパターンは、腫瘍の起源の実際のセルと相関するかどうかはまだ活発に研究されている。データを蓄積することのGBMに関連する遺伝子変異の組み合わせは生存のための予測であることを示しています。例えば、染色体1P / 19Qのヘテロ接合の消失（LOH）は、IDH1変異、PDGFRα増幅は、NFは、EGFRの過剰発現、Notchおよびソニックヘッジホッグ経路の活性化のに対し、二次性GBM、前神経発現パターンおよび良好な予後と関連している1およびPTEN損失およびp53の変異は、神経、古典的な、または間葉原発性GBMと悪い予後16,17と相関している。大規模な配列決定プロジェクトの出現とテストのために利用可能な多数の患者検体の蓄積は、GBMの病因および進行および治療法を具体的に合わせて調整することができる個別化医療の可能性に関与する遺伝子変異および経路に関して新しい情報を豊富にもたらし患者の遺伝的異常。最終的に、体系的な方法でこれらの突然変異および経路の予測値を評価するために、それぞれの場合において可能な治療を試験するために、予め決められた遺伝的変化でGBMの動物モデルを必要とする。ゲノムDNAのトランスポゾン仲介統合が実現可能なアプローチを提供しています。 眠れる森の美女トランスポゾンシステム、トランスポゾンのTc1が/ マリナークラスのメンバは、マルチステップproceで（構築）「覚醒」した休眠より10万年前に18,19となったサケトランスポザーゼ遺伝子、からサ ​​イト特異的変異のSS。本質的には、特定の配列（逆方向反復/ダイレクトリピート：IR / DR）に挟まれたDNAトランスポゾンは、眠れる森の美女トランスポザーゼの活動によって、「カット＆ペースト」の方法でゲノムに統合することができます。トランスポザーゼは、IRサイトの両端を認識しトランスポゾンを切除および塩基TとA、転置（ 図1a）の間にトランスポゾンの各末端に複製された塩基の間に別のDNA部位にランダムにそれを統合します。眠れる森の美女トランスポザーゼは、3つのドメイン、トランスポゾン結合ドメイン、核局在化配列および触媒ドメインから構成されている。四つトランスポザーゼ分子が一緒にトランスポゾンの両端をもたらし、転位を可能にするために必要とされるトランスポゼースのあまりに多くの分子が存在する場合、しかし、それらは二量体化を阻害するとtetramerizeでき転位反応20。効率的な転位反応は、トランスポゾンのトランスポザーゼの最適な比率を必要とする。トランスポザーゼをコードするDNAは、（シス）トランスポゾンと同じプラスミド上または（トランスで）別のプラスミド上に供給することができる。トランスポザーゼ及びトランスポゾンの間の最適な比率を確保するために、十分な活性を有するプロモーターは、（「シス」モデルの場合）トランスポザーゼの発現のために選択することができるか、注射液中のプラスミドの比は、のために（最適化することができる「トランス」モデル）。眠れる森の美女トランスポゾンシステムは、機能ゲノミクス、挿入突然変異、遺伝子導入および体細胞遺伝子治療の21のために成功裏に使用することができます。合成構築物は休眠サケバリアントから機能性分子に再設計され、眠れる森の美女トランスポザーゼは、ヒトまたは他の哺乳動物20内の他のトランスポゾンに結合しない。その発見以来、分子工学はenhancを持ってpT2をトランスポゾンで、その結果、IR配列及びトランスポゾンに隣接するTATAジヌクレオチドの追加の変化を通じてSBトランスポゾンシステムの転置有効性を編。これらのトランスポゾンは、IRサイトにSBの結合を最適化し、切除の有効性を増加している。 SBトランスポザーゼも大幅な改善を行った。本明細書に提示した実験で使用されるトランスポザーゼSB100X、哺乳動物細胞22の大規模遺伝子スクリーニングに続いてDNAシャッフリング戦略によって生成された機能亢進性トランスポザーゼである。 本報告書では、新生仔マウス23のサブ脳室帯の細胞へのプラスミドDNAの非ウイルス、トランスポゾン媒介統合を有するマウスにおいて本質的なGBMを誘導するために、迅速な汎用性と再現性のある方法を提示する。私たちは、眠れる森の美女のトランスポザーゼを用いてゲノム統合のための従順な新規遺伝子とトランスポゾンを作成し、プラスミドの取り込みを監視する方法を実証するための簡単​​な方法を提示し、生物発光を用いて、疾患の進行。我々はまた、このモデルで再現GBMの組織学的および免疫組織化学的な特徴を特徴づける。さらに、我々は、これらの腫瘍からの一次GBM細胞株を生成するために迅速な方法を提示する。腫瘍が動物に元の細胞から誘導されている眠れる森の美女モデルは、誘導及び腫瘍の進行中の候補GBM遺伝子の役割の機能的評価を可能にする。このシステムは、局所微小環境を変化させることができる侵襲性外科手術手順を必要とせず、免疫適格マウスにおける免疫療法を含めた新規GBM治療の試験のためにも適している。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="952">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:367px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:199px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:267px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:367px;">Stoelting&#39;s Lab Standard with Rat and Mouse Adaptors</td>
			<td style="width:199px;">Stoelting</td>
			<td style="width:119px;">51670</td>
			<td style="width:267px;">Other companies produce similar frames, any of them with small mouse adaptors are suitable&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:367px;">Quintessential Stereotaxic Injector (QSI)</td>
			<td style="width:199px;">Stoelting</td>
			<td style="width:119px;">53311</td>
			<td style="width:267px;">Injections can be made without it, ,but&#160;&#160;&#160; the automatic injector allows for increased reproducibility and convenience</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:367px;">10 &#956;L 700 series hand fitted MICROLITER syringe</td>
			<td style="width:199px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">Model 701</td>
			<td style="width:267px;">This syringe model will deliver from 0.5 to 500 ul of solution reliably. Other syrnges (fro example 5 ul, Model 75) may also be used</td>
		</tr>
		<tr height="120">
			<td height="120" style="height:120px;width:367px;">30 gauge gauge hypodermic needle 
			(1.25&#34;, 15o bevel)&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">S/O# 197462</td>
			<td style="width:267px;">This needle is ideal to pierce the skin and the skull of a neonatal mouse without the need of other invasive procedures. If it gets dull (doesn&#39;t easily enter the skin), it needs to be replaced.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:367px;">in vivo-jetPEI</td>
			<td style="width:199px;">Polyplus Transfection</td>
			<td style="width:119px;">201-10G</td>
			<td style="width:267px;">Aliquot in small volumes and keep at -20oC&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:367px;">D-Luciferin, Potassium Salt</td>
			<td style="width:199px;">Goldbio.com</td>
			<td style="width:119px;">LuckK-1g</td>
			<td style="width:267px;">Other sources of firefly lucifierase are just as adequate</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:367px;">Hematoxylin Solution, Harris Modified</td>
			<td style="width:199px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">HHS128-4L</td>
			<td style="width:267px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:367px;">Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td style="width:199px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:119px;">62550-01</td>
			<td style="width:267px;">for embedding brains for cryosectioning and immunohistovhemistry</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:367px;">Advanced DMEM/F-12, no glutamine</td>
			<td style="width:199px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">12634-010</td>
			<td style="width:267px;">for the culture of neurospheres</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:367px;">B-27&#168; Supplement (50X), serum free&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">17504-044</td>
			<td style="width:267px;">serum free supplement for the culture of neurospheres</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:367px;">N2 Supplement (100x)</td>
			<td style="width:199px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">17502-048</td>
			<td style="width:267px;">serum free supplement for the culture of neurospheres</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:367px;">Normocyn</td>
			<td style="width:199px;">InvivoGen</td>
			<td style="width:119px;">ant-nr-1</td>
			<td style="width:267px;">anti-mycoplasma agent for the culture of neurospheres</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:367px;">Recombinant Human EGF</td>
			<td style="width:199px;">PEPROTECH</td>
			<td style="width:119px;">AF-100-15</td>
			<td style="width:267px;">growth factor supplement for the culture of&#160; neurospheres</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:367px;">Recombinant Human FGF-basic</td>
			<td style="width:199px;">PEPROTECH</td>
			<td>100-18B</td>
			<td style="width:267px;">growth factor supplement for the culture of&#160; neurospheres</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:367px;">HyClone HyQTase&#160; Cell Detachment Reagent&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">SV3003001</td>
			<td style="width:267px;">for the dissociation of neurospheres</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Kimble-Chase Kontes Pellet Pestle</td>
			<td style="width:199px;">Fisher Scientific</td>
			<td>K749510-0590</td>
			<td style="width:267px;">for the dissociation of freshly dissected tumors</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;">Falcon Cell Strainers mesh size 70um</td>
			<td style="width:199px;">Fisher Scientific</td>
			<td>08-771-2</td>
			<td style="width:267px;">for generating single cell suspensions of dissociated neurospheres</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:367px;">Xylenes Histological grade</td>
			<td style="width:199px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">C8H10</td>
			<td style="width:267px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:367px;">Protocol Harris Hematoxylin Mercury free ( acidified)</td>
			<td style="width:199px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">245-678</td>
			<td style="width:267px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:367px;">Protocol Eosyn Y Solution ( intensified)</td>
			<td style="width:199px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">314-631</td>
			<td style="width:267px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transposon mediated integration of plasmid dna into the subventricular zone of neonatal mice to generate novel models of glioblastoma

An urgent need exists to test the contribution of new genes to the pathogenesis and progression of human glioblastomas (GBM), the most common primary brain tumor in adults with dismal prognosis. New potential therapies are rapidly emerging from the bench and require systematic testing in experimental models which closely reproduce the salient features of the human disease. Herein we describe in detail a method to induce new models of GBM with transposon-mediated integration of plasmid DNA into cells of the subventricular zone of neonatal mice. We present a simple way to clone new transposons amenable for genomic integration using the Sleeping Beauty transposon system and illustrate how to monitor plasmid uptake and disease progression using bioluminescence, histology and immuno-histochemistry. We also describe a method to create new primary GBM cell lines. Ideally, this report will allow further dissemination of the Sleeping Beauty transposon system among brain tumor researchers, leading to an in depth understanding of GBM pathogenesis and progression and to the timely design and testing of effective therapies for patients.

SB-誘発性神経膠芽の組織病 ​​理学的特徴を特徴づけるために、C57 / BL6新生児マウスは、発癌性DNAとトランスポゾンをコードするプラスミドと組み合わせてルシフェラーゼをコードするプラスミド（pT2を/ SB100xリュック）とP1で注入した、 すなわち 、NRAS（PT / CAGGS NRAS（ 図3d）との組み合わせで-NRASV12）およびSV40 LGT（PT / CMVSV40-LGT）（ 図3c）またはPDGFβと短い?...

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Transposon Mediated Integration of Plasmid DNA into the Subventricular Zone of Neonatal Mice to Generate Novel Models of Glioblastoma

Here we describe an efficient and versatile protocol to induce, monitor and analyze novel glioblastomas (GBM) using transposon DNA injected into the ventricles of neonatal mice. Cells of the subventricular zone, which take up the plasmid, transform, proliferate and generate tumors with histo-pathological characteristics of human GBM.

新生児マウスの脳室下帯へのプラスミドDNAのトランスポゾン媒介統合は、神経膠芽腫の新規モデルを生成する

An urgent need exists to test the contribution of new genes to the pathogenesis and progression of human glioblastomas (GBM), the most common primary ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

12.8K ビュー.  University of Michigan School of Medicine. Here we describe an efficient and versatile protocol to induce, monitor and analyze novel glioblastomas (GBM) using transposon DNA injected into the ventricles of neonatal mice. Cells of the subventricular zone, which take up the plasmid, transform, proliferate and generate tumors with histo-pathological characteristics of human GBM.