著者は、バイオフィルムの成長プロトコルとジョン·バッティスタ（流動、サンフランシスコ、カリフォルニア州）Biofluxシステムに関連する技術的な問題についてのアドバイスを処方するのに助けをウィリアムナンス（ミシガン大学）を感謝。 AHRへとミシガン大学の起動資金：この作品は、国立衛生研究所（AHRにR21DE018820 NIH）によってサポートされていました

明細書に記載の唾液収集プロトコルは、人体実験のためにミシガン大学倫理委員会で検討した。 注：このタイプのヒト対象作業のための制度的レビューに関しては、事前に手配と許可がホスト機関から獲得する必要があります。具体的には、金融機関によっては、IRBまたは倫理の承認は、ヒトボランティアから唾液収集を進める前に求め、承認が必要になることがあります。アプリケーションの準備の助けとして、便利NIHアルゴリズム/チャートはここで見つけることができます： <a href="http://grants1.nih.gov/grants/policy/hs/PrivateInfoOrBioSpecimensDecisionChart.pdf">http://grants1.nih.gov/grants/policy/hs/PrivateInfoOrBioSpecimensDecisionChart.pdf</a> 環境ゲルマン成長培地として使用するためにプールされた唾液の調製<ol><li>唾液の寄付のために&gt; 5個人を募集。何individuのないことを確認、すべての識別情報を服用しないでください彼らは病気である、または過去3ヶ月で経口抗生物質をとっている、または食べ物や液体を消費した場合、ALSは、寄付前に、前の2時間で、水を除いて、唾液を寄付します。 </li><li> 50ミリリットルのプラスチックチューブに唾液を収集します。氷上で維持し、プラスチックビーカーに集めた唾液​​をプールする。唾液中のポリマーは、内部のガラス表面に付着するようにガラスを使用しないでください。 </li><li> 100×ストックからの2.5mMの最終濃度までジチオスレイトール（DTT）を加える。 （ストックは-20℃で、単回使用のアリコートで凍結されている °C）。氷上のプラスチック製ビーカー中で10分間攪拌する。 </li><li>粒子状物質を除去するために、遠心17500×gで30分間、プールされた唾液。 </li><li>四分の一に濃縮唾液を与えることのdH 2 Oの3倍量の唾液を希釈します。 </li><li>フィルター滅菌し、0.22μmのポリエーテルスルホン（PES）、低タンパク質結合フィルターを使用して唾液。大きな表面積のフィルタを使用するか、いくつかの小さな領域フィルタを使用。に唾液を保つフィルタリングしばらく氷上のプラスチック容器。 </li><li> -80プールされた唾液をフリーズ&#160; 50ミリリットルのプラスチック管で°C、細菌を成長させるために必要になるまで。各プラスチック製のチューブは一つだけの使用のためであり、各マイクロ流体ウェルが1.2ミリリットルの最大（1.2ミリリットル×24井戸= 28.8ミリリットル）を保持し、唾液が凍結中拡大するようにスペースが各チューブに必要とされるようにせいぜい35ミリリットルを含めるべきではない。 </li><li>使用のために、室温で、プールされた唾液を解凍。一度解凍した、（すべての沈殿物を除去するために0.22μmのポリエーテルスルホン、低タンパク質結合フィルター）もう一度フィルター滅菌する。 </li></ol>接種物として使用するためにプール唾液の調製<ol><li>唾液の寄付のために&gt; 5個人を募集。寄付する前に、前の2時間で、水を除いて、過去3ヶ月で経口抗生物質をとっている、または食べ物や液体を消費している、すべての識別情報を取る彼らが病気であれば全く個人が唾液を寄付しませんを確認しないでください。 SAを収集30分かけてmples。 </li><li>室温で50ミリリットルのプラスチック管で唾液を収集し、室温でプラスチックビーカーに集めた唾液​​をプール。 </li><li> 25％グリセロール、75％の細胞含有唾液[CCS]の最終比率で株式を得オートクレーブ一般的な試薬級グリセロールでプールされた唾液を希釈する。 </li><li>必要になるまで3ミリリットル使い捨てのアリコートで-80℃で唾液をフリーズします。 </li><li>マイクロ流体システムに接種するために必要に応じて、アリコートを以下のプロトコルのステップ3で説明したようにマイクロ流体システム中にピペットされる前に室温で解凍し、5秒間ボルテックス上で穏やかに撹拌さ​​れている。 </li></ol>オーラル多種バイオフィルムの3成長<ol><li> CFS前処理 <ol><li>まずコートCFSとBiofluxマイクロ流体チャネル。各ウェルコンセントにCFSの100μlのを追加します。 Bioflux制御ソフトウェアを使用して、チャンネルから「手動」と設定フローを選択「B1-B24」THAtが使用される。 </li><li>次に、1.0ダイン/ cm 2の剪断力に設定し、チャネルを通じてCFSの均一な分布を確実にするために室温で2分間フローを開始する。 CFSが均等にすべてのチャネルを通って流れていることを確認するために、各入口チャネル内の流体があることを確認します。 </li><li> 20分間室温でプレートをインキュベートする。 </li><li>出口ウェル中に残っているCFS /前処理液を除去し、入口ウェルに移す。 100μlのこの総量はよく口から接種物に適用されている圧力に抗してバランスを取るのに役立つでしょう。 </li></ol></li><li> 接種 <ol><li>各ウェルコンセントに、CCS接種の100μlを添加する。正確に6秒間1.0ダイン/ cm 2の入口ウェル（ すなわち 、逆方向）へのマイクロ流体熱板上のプレート（温度37℃に設定）、制御ソフトウェア内の[手動]を選択し、出口ウェルからの設定の流れを置きます。 </li><li>可能にするために40分間37℃でマイクロ流体プレートをインキュベート初期付着および接種物中の細菌の成長のため。 </li></ol></li><li> 一晩増殖 <ol><li>接種したチャネルが使用されるために、出口の各ウェルからの廃接種材料を吸引する。 （既存のCFSの上に行うことができる）の入口の各ウェルに1mlにCFSの全量を加える。 </li><li> 37℃でのマイクロ流体プレートをインキュベート、手動選択して、20時間0.2ダイン/ cm 2の時に実行するプログラムを設定する。 </li></ol></li><li> ステイン予備洗浄 <ol><li>すべての入口と出口のウェルからの流体入口を各ウェルにPBS（pH7.4）中の100μlを添加吸引する。 0.2ダイン/ cm 2で20分間のフロー。 </li></ol></li><li> 染色混合物の添加 <ol><li>細胞生存性染色のために染色される各チャネルの染色混合物100μlを作る。具体的には、LIVE / DEADなどの商用細胞生存性染色キットを使用して3 SYTO 9μlの3のPBS 1ml当たりのヨウ化プロピジウムのμlを添加する。これは生成し10μMSYTO 9および60μMのヨウ化プロピジウムを含む染色用混合物。 </li><li>入口ウェルから残りのPBSを吸引した後、各ウェル入口に細胞生存性染色混合物100μlを添加する。 0.2ダイン/ cm 2の流れと、室温で45分間入口から出口にソリューションを実行するように設定。 </li></ol></li><li> ポスト染色ウォッシュ <ol><li>入口ウェルの各々の残りの汚れを吸引除去し、各ウェル入口に100μlのPBSを追加。 0.2ダイン/ cm 2の時に流れ、余分な汚れを除去するために室温で20分間、入口から出口にPBS溶液を実行するように設定。 </li></ol></li></ol> 4.画像コレクション、3Dレンダリング、画像解析<ol><li>微小流体システムからのバイオフィルムの画像データを収集するために反転され、共焦点レーザー走査顕微鏡（CLSM）を使用する。 CLSMは150グラムに達することができるBiofluxプレートの重量に耐えることができることを確認してください。 注：ダイムを考えるマイクロ流体チャネルのnsions、バイオフィルム構造を識別するための感度の必要性、および変化する強度の蛍光シグナルを検出するための要件は、40X 1.25 NA対物レンズ又は同様の光学的品質、倍率、開口数を有するものとCLSMに合う。 </li><li>ゲインと発光キャプチャゲートを標準化し、オフセット測定が一定に保たれている。これは、光退色をもたらすことができるように、レーザパワーが25％を超えないことを確認してください。 </li><li> 私はFのイルタイプOMEへ（LIF）（OペンのM icroscopy のE nvironment）ファイルタイプMAGE Lの EICAからCLSMファイルを変換する。これは、ソフトウェア·プログラムとの間のアクセスとの互換性をより容易に可能にする。この型にファイルを変換するようなIMARIS、などの市販のソフトウェアを使用してください。 </li></ol> 画像/フィギュア用の3Dレンダリング <ol start="4"><li>一度画像をレンダリングするようIMARISとして市販のソフトウェアを使用して、OME形式に変換3Dで。 「Easy3D」と「突破」オプションを組み合わせて使用してこれを実行します。 注：バックグラウンド信号と閾値化に注意がなされるべきである。 IMARISヒストグラム関数は、収集範囲を得るために使用することができ、これは、分析される画像間で一定に保たれるべきである。 </li><li> 「 スナップショット 」機能を使用して画像を保存し、ファイルの種類を保存する前に画像の解像度を十分考慮してください。 </li><li>そのようなCorelDrawのやAdobe Illustratorなどの画像編集ソフトを使用して図形に画像を組み立てます。 </li></ol> グラフや表のための3D画像解析 <ol start="7"><li>画像解析のために自由に利用できるImageJの23とCOMSTAT / COMSTAT2 38を使用してください。それぞれ、http://rsb.info.nih.gov/ij/とhttp://comstat.dk/からパッケージをダウンロードしてください。最新のJavaのアップデートがインストールされている。 注：JavaはPRIOをインストールする必要がありますソフトウェアプラットフォーム画像解析ソフトウエアを使用することrは。 <ol><li> 「 スプリットチャネル 」と「hyperstack」モードとビューの各バイオフィルムの画像のためOMEファイルをインポートするCOMSTAT2プラグインでImageJソフトウェアを使用してください。 </li><li>個別のImageJの「 ヒストグラム」機能を使用して（チャンネル1は緑/ SYTO-9 / LIVE、チャネル0は赤/ヨウヨウ/死んだ）つのチャンネルを分析。この関数は、無信号（バックグラウンド）と0である画素、255人間と、（「値」として示す）は、0〜255の各色の強度で（「カウント」として示される）8ビットOMEファイルの総画素数を示し完全な信号飽和を有するピクセル。 </li><li>表計算プログラムにデータをエクスポートして、対応する信号強度によって各画素を重み付けすることによって、すべての信号値を標準化する。これは、信号強度の数値8ビット値（0〜255）によって与えられた信号強度で総数を乗じることによって行われる。 </li><li>キャプチャされた各バイオフィルム画像の両方のチャネルについて、すべての重み付けされた値、0〜255を合計。いずれかのチャネルからのパーセント全信号を決定するために、両方のチャネルの重み付けされた値の合計を取る。赤とパーセント緑信号（パーセント「死んだ」とパーセントそれぞれの治療のための「LIVE」IE）相対比またはパーセントを決定するためにこれを行います。 </li><li>不等分散のために修正された両側スチューデントt検定を使用して、たとえば、統計分析を実行します。 p &lt;0.05の値を有意であると見なしているとp &lt;0.01これらの値は、非常に有意であると考えている。 </li></ol></li></ol>文化·独立した分析5.収穫バイオフィルム細胞<ol start="1"><li>入口と出口の井戸からすべての過ごし、未使用の唾液を削除します。 1ミリリットル滅菌蒸留水で3回、ウェルを洗浄。 </li><li>入口ウェルに滅菌蒸留水100μLを加え、ソフトウェア制御インターフェースを使用して、合格少なくとも5分間、8.0ダイン/ cm 2の（流量&gt; 745μlの/時間、800秒の剪断-1）&gt;におけるチャネルを介して前方に滅菌蒸留水。少なくとも5分間逆方向に繰り返し、その後前進を繰り返して、洗浄工程プロセスを逆転。 </li><li>徹底したバイオフィルム除去（ 図2）のために（細胞が染色された場合は、/ラベル）光によって、または落射蛍光顕微鏡によって確認してください。文化·独立した分析のために-80℃で100μlの細胞懸濁液とストアを収集します。コミュニティ組成物の費用対効果の分析は、ナンスらのアプローチを用いて細菌タグエンコードさFLXアンプリコンのパイロシーケンシング（bTEFAP）を使用してを介して達成することができる。20 </li></ol>

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Total microscopic and viable counts and counts of specific organisms.</a> Archives of oral biology. 8, 275-280 (1963).</li><li>Heydorn, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+biofilm+structures+by+the+novel+computer+program+COMSTAT.">Quantification of biofilm structures by the novel computer program COMSTAT.</a> Microbiology. 146 (10), 2395-2407 (2000).</li><li>Nobbs, A. H., Lamont, R. J., Jenkinson, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptococcus+adherence+and+colonization.+Microbiology+and+molecular+biology+reviews).">Streptococcus adherence and colonization. Microbiology and molecular biology reviews).</a> MMBR. 73 (3), 407-450 (2009).</li><li>Hope, C. K., Clements, D., Wilson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+the+spatial+distribution+of+viable+and+nonviable+bacteria+in+hydrated+microcosm+dental+plaques+by+viability+profiling.">Determining the spatial distribution of viable and nonviable bacteria in hydrated microcosm dental plaques by viability profiling.</a> Journal of applied microbiology. 93 (3), 448-455 (2002).</li><li>Adams, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+laboratory+model+to+assess+the+removal+of+biofilm+from+interproximal+spaces+by+powered+tooth+brushing.">Development of a laboratory model to assess the removal of biofilm from interproximal spaces by powered tooth brushing.</a> American journal of dentistry Spec No 12B-17B. 15, 12-17 (2002).</li><li>Ledder, R. G., McBain, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+comparison+of+dentifrice+formulations+in+three+distinct+oral+microbiotas.">An in vitro comparison of dentifrice formulations in three distinct oral microbiotas.</a> Archives of oral biology. 57 (2), 139-147 (2012).</li></ol>

A. H. R. and N.S.J. have received research awards from a variety of sources such as the National Institutes of Health (NIDCR), Colgate-Palmolive (Piscataway, NJ) and the Society for Applied Microbiology to fund research studies in their lab over the past five years. All other authors: none to declare.

この方法は紙はセットアップに必要な基本的な手順を強調し、プールしたヒト唾液由来し、フィルター滅菌25％のプールされたヒトの唾液中で成長経口マルチ種のバイオフィルムの開発を可能にするような方法でマイクロ流体システムを実行します。バイオフィルムを特徴付けるためのアプローチが示されているが、これらの記載されるアプローチは、例えば、汚れやラベルを導入すること?...

<html>バイオフィルムは、アーキテクチャ面 1,2に集約された細菌の複雑な社会である。これらのコミュニティは、一般的にバイオフィルム2内の互いに対話多数の種が含まれている。オーラルバイオフィルム、最も視覚的に目立たなく歯垢は、ヒトでの永続的な問題と分類学的に多様なマルチ種コミュニティ3の世代での制御されていない開発の成果である。これらの多様なコミュニティの構成要素細菌は彼らのフリーフローティング（プランクトン）の対応4-6より抗菌剤に対する耐性が1,000倍までとすることができる。虫歯や歯周病を引き起こす可能性がこれらの経口バイオフィルムのコミュニティを、治療の失敗は、重大な公衆衛生上の負担な結果になっています。5億以上の米国における年間歯科医のオフィスを訪問し、約1080億ドルを歯周の治療または予防のために、病気や虫歯7。 8 -Smithコンテンツ&quot;&gt;&quot; 多くの微生物学者は、自然条件の下での微生物の挙動を研究提唱しているが、それらのいくつかがそう。困難を克服するための彼らの士気は常に実験室の培養での作業の魅力的な容易さによって搾り取っているためです 。」。 現在、口腔バイオフィルムの研究はインビボおよびインビトロのアプローチの多様性を用いて行われる、独自の長所と、それぞれが9,10不利。 インビトロでは 、多くの場合、セットアップするのが比較的容易であるが、臨床欠いてモデルバイオシステムを使用近づく/現実世界の関連10,11。 インビボで 、典型的にはヒト口腔環境の特定の局面を再現するが、やはりにより動物とヒトの間で12解剖学、生理学、微生物学および免疫学の違いに制限を受けることができる動物モデル系に依存して接近する13。それは、口腔バイオフィルムに留意すべきであるまた、ヒトのボランティアの口の中にステントに保持されているエナメル質表面上に現像され、このアプローチは、現在、比較的高価であり、労働集約14,15であることができる。最終的には、新規薬剤または口腔ヘルスケアを改善するための技術は、制御された臨床試験の条件の下で11ヒトで試験されている。現在では、新しい経口の医療薬剤を同定し、評価するためのよく使用する手口は、まず潜在的有効性を識別するために実験室での研究を行うことで、その後の動物研究と技術9の成功を評価するために臨床医を採用する「実地試験」を実行、 16,17。残念ながら、実験室での研究は、大面積を占めるモデル系に依存する傾向が使用する技術的に挑戦的であり、しばしば10,18を意味する可能性のある現実世界を導出するために、1つのまたはほとんどの少数の種で簡略化コミュニティを含む。歯垢バイオフィルムはCOMPLに複数の種とフォームが含まれていることを考えると唾液環境を流れるexは、人工培地でつを含むバイオフィルムまたは数種の開発は実際のシナリオ10,19のものと同様に挙動するコミュニティを生成する可能性は低い。時間、コスト、訓練要件、及び実際の環境と比較して、実験室モデルバイオフィルムシステムの貧弱な代表的な性質に対処するために、我々は最近、ハイスループットかつ環境ゲルマンバイオシステム20（ 図1）を開発した。接種材料として培地および未処理のプールされたヒトの細菌細胞を含有する唾液（CCS）などの無細胞のプールされたヒト唾液（CFS）の使用によるシステムの利点。独自に、システムはまた、マイクロ流体技術、共焦点レーザー走査顕微鏡、および文化に依存しない細菌多様性の解析技術を組み合わせた。このように、モデル系は37で、多種のバイオフィルムを成長させるために接種物として唾液を使用して（環境的に密接​​な関係である 濾過滅菌流れる中で°C唾液）と口腔バイオフィルムは初期の歯肉縁上プラーク20に見られるものの存在量を代表に連鎖球菌 、 ナイセリア 、 ベイヨネラ 、及びポルフィロモナス種を含む種を（）が含まれています。 この作品は、新たに開発したモデルシステムの使用が記載されていることを考慮すると、特に注意は、共焦点レーザー走査顕微鏡（CLSM）マイクロフルイディクス、および文化に依存しない多様性解析技術の融合を考慮しなければならない。私たちの研究グループによるこれらの技術の労働組合は、意図的だったとだけでなく、新たに開発されたモデル系に高スループットの機能を追加するだけでなく、質問は簡単に他のシステムとの前に対処しなかったことを尋ねられることを可能にする。それはバイオフィルムの三次元解析が可能になるように、まず、CLSMは、従来の顕微鏡検査に比べて明らかな利点を有する。バイオフィルムは異質ウィットあるように頻繁に正しく評価されていない、これは非常に重要です。時間種組成と空間位置に対してだけでなく、生理的な条件は、バイオフィルム6,21内の異なる空間的位置に課されている。 3次元レンダリングソフトウェア、画像分析ソフトウェアと協調して、バイオフィルムのアーキテクチャコンポーネント種間の空間的関係、および抗菌死滅の程度は、22〜24を分析することができる。このような能力は、標準的な透過光またはエピ蛍光顕微鏡を使用して可能ではありません。それは慎重に制御された条件（流量、温度、pH値、 など ）の下でバイオフィルムの研究を可能にし、液体のみ25-27の小さなボリュームを必要とする次に、マイクロフルイディクスは、微生物学の分野で特に注目を集めています。達成されたものと同様の流速及びせん断で20時間フローセルモデル系（ほぼ間違いなく、多くの口腔バイオフィルムの研究のための主力モデルと考えられているシステム）内のヒト唾液の経口バイオフィルムの成長の比較点としてマイクロ流体デバイス28〜31に800μlのとは対照的に、マイクロ流体システムにおいて、少なくとも200ミリリットルが必要である。このように、マイクロ流体モデルバイオフィルムシステムは、規定された条件下で数量限定の材料の研究を可能にします。最後に、パイロシーケンシング技術は、社会の分析を実行するために材料を少量しか必要とする過去10年間に最適化され、さらに希少バイオ種の同一性を得るために、配列決定の深さを制御するのに十分な汎用性がありされている。そのような細菌のタグエンコードされたFLXアンプリコンのパイロシーケンシング（bTEFAP）としてこの技術の使用は、32,33の対処すべきバイオフィルムの生態に関する適切な質問を可能にした。このような質問は、ピロシーケンスが原因で、プラスミドライブラリやデータ33,34を引き出すために必要な複雑な技術や分析の手順を作成するために必要な時間とコストのため利用できませんでした、過去の困難を吹き込ま。もちろん、文化に依存しないAPとの大きな利点従来の実験用培地（ すなわち 、生存するが、非耕作種）内で分離して成長させることができない細菌種が成長し、識別されたモデルシステム内で、コミュニティ内での相対的な存在量は35、36を定量することができるようにパイロシーケンシングなどproachesを、ある。視点を追加するには、早くも1963年のように、後半ジークムントSocranskyはヒト口腔歯肉裂け目から単離された物質中の細菌の約50％が実験室の成長条件37を用いて培養することができなかったと推定。 その種組成と豊かさと人間の口腔の（I）の条件の代表と、（ii）：このメソッド紙の目的は、下に市販のマイクロ流体（Bioflux）システムの経口マルチ種のバイオフィルムを開発するためのアプローチを説明することである歯肉縁上プラークに匹敵する。さらに、両方のフリーウェアや商用ソフトウェアを使用して、私たちはどのように基本的なバイオフィルムを強調アーキテクチャ対策がバイオフィルムのバイオマス、粗さ、および生存を定量化するためのアプローチに焦点を当て、CLSMデータから導出することができる（ライブ/デッド染色に基づく）。最後に、bTEFAPによって多様性解析のためのバイオ材料を収穫するために必要な手順が記載されている。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="951">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:525px;">SUPPLIES AND EQUIPMENT</td>
			<td style="width:224px;">AVAILABLE FROM COMPANY</td>
			<td style="width:203px;">CATALOG NUMBER</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Falcon 50mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-432-22</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Falcon 15mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-49D</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dithiothreitol (White Crystals or Powder/Electrophoresis), Fisher BioReagents</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP172-5</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sorval ultracentrifuge&#160; (SS-34 compatible)</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>Unit-dependent</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific SS-34 Rotor&#160;</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>28-020</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Thermo Scientific Type 1 Reagent Grade Deionized Water</td>
			<td>Thermo&#160; Scientific Inc</td>
			<td>23-290-065</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Nalgene Rapid-Flow Filter Units and Bottle Top Filters, PES Membrane, Sterile.</td>
			<td>VWR</td>
			<td>73520-986&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glycerol</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc</td>
			<td>NC0542269</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">BioFlux microfluidic system</td>
			<td>Fluxion</td>
			<td>Bioflux 200 system</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bioflux 24-channel plate</td>
			<td>Fluxion</td>
			<td>910-0004</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PBS (Gibco)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc</td>
			<td>10010023</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">LIVE/DEAD stain (Invitrogen)&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L7012</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Confocal Laser Scanning Microscope</td>
			<td>Lecia</td>
			<td>SPE or eqivalent system</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Epifluorescence Microscope</td>
			<td>Multiple choices</td>
			<td>Multiple choices</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pyrosequencing facilities</td>
			<td>Multiple choices</td>
			<td>Multiple choices</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Decon SaniHol 70 Ethanol Solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>04-355-122</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">&#160;Ultra Low Temperature Freezer -80&#176;C</td>
			<td>Multiple choices</td>
			<td>Multiple choices</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tips (20, 200, and 1000uL)</td>
			<td>Multiple choices</td>
			<td>Multiple choices</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Single Channel Variable Volume Pipettors (20, 200, 1000uL)</td>
			<td>Multiple choices</td>
			<td>Multiple choices</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">SOFTWARE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bioflux dedicated software</td>
			<td>Bioflux</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Imaris</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Leica SPE</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ImageJ</td>
			<td>Freeware (http://imagej.nih.gov/ij/)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">COMSTAT/COMSTAT 2</td>
			<td colspan="2">Freeware (http://www.comstat.dk/)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of a high-throughput in vitro microfluidic system to develop oral multi-species biofilms

いくつかのハイスループットは、一般に、インビボでの経口バイオフィルム内で検出された多数の種を含む多種バイオフィルムの発達を促進するインビトロ系である。また、代わりに人工のメディアの、栄養源として天然のヒト唾液を使用するシステムは、 インビボでのコミュニティを模倣する細胞およびバイオ固有のプロパティの表現をサポートするために特に望ましい。我々は、ヒト口腔と同様の条件下で、歯垢、歯肉縁上ために、種の組成物に関して、同等である多種の口腔バイオフィルムの開発のための方法を記載する。具体的には、この方法の記事は、市販のマイクロ流体システムは、から誘導される多種の口腔バイオフィルムの発達を促進するように適合され、そしてプール唾液内で成長させることができる方法を説明する。さらに、どのようにシステムの説明はconfocaと組み合わせて使用​​することができる建築および生存分析のために3-Dバイオフィルム再構成を生成するためのLのレーザ走査型顕微鏡が提示される。 （ 連鎖球菌 、 ナイセリア 、 ベイヨネラ 、 双子菌属 、及びポルフィロモナス含む）マイクロ流体システムにおけるバイオフィルム内で成長する微生物の幅広い多様性を考えると、プロトコルは、さらにサブカルチャーやDNA抽出および分析のためにバイオフィルム細胞を採取する方法を説明した表示されます。微小流体バイオシステムと現在の最先端のデータ分析の両方の限界に対処する。最終的には、この物品は、口腔バイオフィルムの研究を向上させ、マイクロ流体プラットフォームに統合することができる付加的な技術の開発に助けとなるベースライン技術を提供することが想定される。

バイオフィルムの3Dレンダリング 代表的な結果を図3に示す。IMARISソフトウェアの有用なツールを収集バイオフィルムスタックの各スライスを検討すると、三次元再構成を作成するためにそれらを結合するためのオプションである。また、人工的なシャドウイング効果は、視覚的に三次元構造の解釈を助けるために添加することができる。...

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Use of a High-throughput In Vitro Microfluidic System to Develop Oral Multi-species Biofilms

この方法の論文の目的は、典型的にはヒト歯肉縁上の歯垢内で識別種を含む多種バイオフィルムの開発のための微小流体システムの使用を説明することである。バイオフィルムのアーキテクチャ、バイオフィルムの生存率、および文化に依存またはカルチャに依存しない解析が強調表示されるための収穫バイオフィルムへのアプローチを記述するための方法。

ハイスループットの使用<em&gt;インビトロ</emオーラル多種バイオフィルムを開発するために&gt;マイクロ流体システム

There are few high-throughput in vitro systems which facilitate the development of multi-species biofilms that contain numerous species commonly detected ...

use-high-throughput-vitro-microfluidic-system-to-develop-oral-multi

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Use of a High-throughput In Vitro Microfluidic System to Develop Oral Multi-species Biofilms

13.4K ビュー.  The University of Michigan. この方法の論文の目的は、典型的にはヒト歯肉縁上の歯垢内で識別種を含む多種バイオフィルムの開発のための微小流体システムの使用を説明することである。バイオフィルムのアーキテクチャ、バイオフィルムの生存率、および文化に依存またはカルチャに依存しない解析が強調表示されるための収穫バイオフィルムへのアプローチを記述するための?...

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Microfluidic Device for Recreating a Tumor Microenvironment in Vitro

We have developed a microfluidic device that mimics the delivery and systemic clearance of drugs to heterogeneous three-dimensional tumor tissues in vitro. Nutrients delivered by vasculature fail to reach all parts of tumors, giving rise to heterogeneous microenvironments consisting of viable, quiescent and necrotic cell types. Many cancer drugs fail to effectively penetrate and treat all types of cells because of this heterogeneity. Monolayers of cancer cells do not mimic this heterogeneity, making it difficult to test cancer drugs with a suitable in vitro model. Our microfluidic devices were fabricated out of PDMS using soft lithography. Multicellular tumor spheroids, formed by the hanging drop method, were inserted and constrained into rectangular chambers on the device and maintained with continuous medium perfusion on one side. The rectangular shape of chambers on the device created linear gradients within tissue. Fluorescent stains were used to quantify the variability in apoptosis within tissue. Tumors on the device were treated with the fluorescent chemotherapeutic drug doxorubicin, time-lapse microscopy was used to monitor its diffusion into tissue, and the effective diffusion coefficient was estimated. The hanging drop method allowed quick formation of uniform spheroids from several cancer cell lines. The device enabled growth of spheroids for up to 3 days. Cells in proximity of flowing medium were minimally apoptotic and those far from the channel were more apoptotic, thereby accurately mimicking regions in tumors adjacent to blood vessels. The estimated value of the doxorubicin diffusion coefficient agreed with a previously reported value in human breast cancer. Because the penetration and retention of drugs in solid tumors affects their efficacy, we believe that this device is an important tool in understanding the behavior of drugs, and developing new cancer therapeutics.

Microfluidic Device for Recreating a Tumor Microenvironment in Vitro

We present the procedure for fabrication and operation of a microfluidic device that recreates heterogeneous tumor microenvironments in vitro. The variability in apoptosis within tumor tissue was quantified using fluorescent stains and the effective diffusion coefficient of the chemotherapeutic drug doxorubicin into tumor tissue was evaluated.

腫瘍微小環境を再作成するためのマイクロ流体デバイス<em&gt;体外で</em

We have developed a microfluidic device that mimics the delivery and systemic clearance of drugs to heterogeneous three-dimensional tumor tissues in ...

生物工学

High-throughput Protein Expression Generator Using a Microfluidic Platform

Rapidly increasing fields, such as systems biology, require the development and implementation of new technologies, enabling high-throughput and high-fidelity measurements of large systems. Microfluidics promises to fulfill many of these requirements, such as performing high-throughput screening experiments on-chip, encompassing biochemical, biophysical, and cell-based assays1. Since the early days of microfluidics devices, this field has drastically evolved, leading to the development of microfluidic large-scale integration2,3. This technology allows for the integration of thousands of micromechanical valves on a single device with a postage-sized footprint (Figure 1). We have developed a high-throughput microfluidic platform for generating in vitro expression of protein arrays (Figure 2) named PING (Protein Interaction Network Generator). These arrays can serve as a template for many experiments such as protein-protein 4, protein-RNA5 or protein-DNA6 interactions.
The device consist of thousands of reaction chambers, which are individually programmed using a microarrayer. Aligning of these printed microarrays to microfluidics devices programs each chamber with a single spot eliminating potential contamination or cross-reactivity Moreover, generating microarrays using standard microarray spotting techniques is also very modular, allowing for the arraying of proteins7, DNA8, small molecules, and even colloidal suspensions. The potential impact of microfluidics on biological sciences is significant. A number of microfluidics based assays have already provided novel insights into the structure and function of biological systems, and the field of microfluidics will continue to impact biology.

We present a microfluidic approach for the expression of protein arrays. The device consists of thousands of reaction chambers controlled by micro-mechanical valves. The microfluidic device is mated to a microarray-printed gene library. These genes are then transcribed and translated on-chip, resulting in a protein array ready for experimental use.

マイクロ流体プラットフォームを使用した高スループットのタンパク質発現ジェネレータ

Rapidly increasing fields, such as systems biology, require the development and implementation of new technologies, enabling high-throughput and ...

High Throughput Microfluidic Rapid and Low Cost Prototyping Packaging Methods

In this work, 3 different packaging and assembly techniques are presented. They can be classified into two categories: one-time use and reusable packaging techniques.
The one-time use packaging technique employs UV-based and temperature curing epoxies to connect microtubes to access holes, wire-bonding for integrated circuit connections, and silver epoxy for electrical connections. This method is based on a robust assembly technique that can support relatively high pressure close to 1 psi and does not need any support to strengthen the microfluidic architecture.
Reusable packaging techniques consist of PDMS-based microtube interconnectors and anisotropic adhesive films for electrical connections. These devices are more sensitive and fragile. Consequently, Plexiglas support is added to the microfluidic structure to improve the electrical contact when anisotropic adhesive films are used, and also to strengthen the microfluidic architecture. In addition, a micromanipulator is needed to maintain tubes while using a thin PDMS layer to connect them to the access holes. Different PDMS layer thicknesses, ranging from 0.45-3 mm, are tested to compare the best adherence versus injection rates. Applied injection rates are varied from 50-300 &#956;l/hr for 0.45-3 mm PDMS layers, respectively. These techniques are mainly applicable for low-pressure applications. However, they can be extended for high-pressure ones through plasma-oxygen process to permanently seal the PDMS to glass substrates. The main advantage of this technique, besides the fact that it is reusable, consists of keeping the device observable when the microchannel length is very short (in the range of 3 mm or lower).

In this article we describe different techniques for microfluidic rapid prototyping platforms. The proposed techniques are based on ultraviolet (UV) sensitive and temperature curing epoxies, polydimethylsiloxane (PDMS) based tubing, wire-bonding, and anisotropic adhesive films. The assembling procedures presented are developed for both one-time use devices as well as reusable microfluidic systems.

ハイスループットマイクロ流体の迅速かつ低コストのプロトタイピング包装方法

In this work, 3 different packaging and assembly techniques are presented. They can be classified into two categories: one-time use and reusable packaging ...

Systematic Analysis of In Vitro Cell Rolling Using a Multi-well Plate Microfluidic System

A major challenge for cell-based therapy is the inability to systemically target a large quantity of viable cells with high efficiency to tissues of interest following intravenous or intraarterial infusion. Consequently, increasing cell homing is currently studied as a strategy to improve cell therapy. Cell rolling on the vascular endothelium is an important step in the process of cell homing and can be probed in-vitro using a parallel plate flow chamber (PPFC). However, this is an extremely tedious, low throughput assay, with poorly controlled flow conditions. Instead, we used a multi-well plate microfluidic system that enables study of cellular rolling properties in a higher throughput under precisely controlled, physiologically relevant shear flow1,2. In this paper, we show how the rolling properties of HL-60 (human promyelocytic leukemia) cells on P- and E-selectin-coated surfaces as well as on cell monolayer-coated surfaces can be readily examined. To better simulate inflammatory conditions, the microfluidic channel surface was coated with endothelial cells (ECs), which were then activated with tumor necrosis factor-&#945; (TNF-&#945;), significantly increasing interactions with HL-60 cells under dynamic conditions. The enhanced throughput and integrated multi-parameter software analysis platform, that permits rapid analysis of parameters such as rolling velocities and rolling path, are important advantages for assessing cell rolling properties in-vitro. Allowing rapid and accurate analysis of engineering approaches designed to impact cell rolling and homing, this platform may help advance exogenous cell-based therapy.

Systematic Analysis of In Vitro Cell Rolling Using a Multi-well Plate Microfluidic System

This study used a multi-well plate microfluidic system, significantly increasing throughput of cell rolling studies under physiologically relevant shear flow. Given the importance of cell rolling in the multi-step cell homing cascade and the importance of cell homing following systemic delivery of exogenous populations of cells in patients, this system offers potential as a screening platform to improve cell-based therapy.

の体系的な分析<em&gt;体外</emマルチウェルプレートマイクロ流体システムを使用して&gt;セルローリング

A major challenge for cell-based therapy is the inability to systemically target a large quantity of viable cells with high efficiency to tissues of ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and accurate assessment of ocular toxicity in man are needed. To address this need, we have developed an eye irritation test (EIT) which utilizes a three dimensional reconstructed human cornea-like epithelial (RhCE) tissue model that is based on normal human cells. The EIT is able to separate ocular&#160;irritants and corrosives (GHS Categories 1 and 2 combined) and those that do not require labeling (GHS No Category). The test utilizes two separate protocols, one designed for liquid chemicals and a second, similar protocol for solid test articles. The EIT prediction model uses a single exposure period (30 min for liquids, 6 hr for solids) and a single tissue viability cut-off (60.0% as determined by the MTT assay). Based on the results for 83 chemicals (44 liquids and 39 solids) EIT achieved 95.5/68.2/ and 81.8% sensitivity/specificity and accuracy (SS&#38;A) for liquids, 100.0/68.4/ and 84.6% SS&#38;A for solids, and 97.6/68.3/ and 83.1% for overall SS&#38;A. The EIT will contribute significantly to classifying the ocular irritation potential of a wide range of liquid and solid chemicals without the use of animals to meet regulatory testing requirements. The EpiOcular EIT method was implemented in 2015 into the OECD Test Guidelines as TG 492.

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

We have developed an eye irritation test which utilizes a three dimensional reconstructed human cornea-like epithelial (RhCE) tissue model. The test is able to discriminate between ocular irritant and corrosive materials (GHS Categories 1 and 2 combined) and those that do not require labeling (GHS No Category).

再構成ヒト角膜上皮様（RHCE）組織モデルを使用して眼刺激性化学物質の有害性の同定のための眼刺激性試験（EIT）

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

A Microfluidic Platform for High-throughput Single-cell Isolation and Culture

Studying the heterogeneity of single cells is crucial for many biological questions, but is technically difficult. Thus, there is a need for a simple, yet high-throughput, method to perform single-cell culture experiments. Here, we report a microfluidic chip-based strategy for high-efficiency single-cell isolation (~77%) and demonstrate its capability of performing long-term single-cell culture (up to 7 d) and cellular heterogeneity analysis using clonogenic assay. These applications were demonstrated with KT98 mouse neural stem cells, and A549 and MDA-MB-435 human cancer cells. High single-cell isolation efficiency and long-term culture capability are achieved by using different sizes of microwells on the top and bottom of the microfluidic channel. The small microwell array is designed for precisely isolating single-cells, and the large microwell array is used for single-cell clonal culture in the microfluidic chip. This microfluidic platform constitutes an attractive approach for single-cell culture applications, due to its flexibility of adjustable cell culture spaces for different culture strategies, without decreasing isolation efficiency.

Here, we present a protocol for isolating and culturing single cells with a microfluidic platform, which utilizes a new microwell design concept to allow for high-efficiency single cell isolation and long-term clonal culture.

ハイスループットシングルセルの単離および培養のためのマイクロ流体プラットフォーム

Studying the heterogeneity of single cells is crucial for many biological questions, but is technically difficult. Thus, there is a need for a simple, yet ...

Optimizing the Use of a Liquid Handling Robot to Conduct a High Throughput Forward Chemical Genetics Screen of Arabidopsis thaliana

Chemical genetics is increasingly being employed to decode traits in plants that may be recalcitrant to traditional genetics due to gene redundancy or lethality. However, the probability of a synthetic small molecule being bioactive is low; therefore, thousands of molecules must be tested in order to find those of interest. Liquid handling robotics systems are designed to handle large numbers of samples, increasing the speed with which a chemical library can be screened in addition to minimizing/standardizing error. To achieve a high-throughput forward chemical genetics screen of a library of 50,000 small molecules on Arabidopsis thaliana (Arabidopsis), protocols using a bench-top multichannel liquid handling robot were developed that require minimal technician involvement. With these protocols, 3,271 small molecules were discovered that caused visible phenotypic alterations. 1,563 compounds induced short roots, 1,148 compounds altered coloration, 383 compounds caused root hair and other, non-categorized, alterations, and 177 compounds inhibited germination.

Optimizing the Use of a Liquid Handling Robot to Conduct a High Throughput Forward Chemical Genetics Screen of Arabidopsis thaliana

A high throughput screen of synthetic small molecules was conducted on the model plant species, Arabidopsis thaliana. This protocol, developed for a liquid handling robot, increases the speed of forward chemical genetics screens, accelerating the discovery of novel small molecules affecting plant physiology.

高スループット転送化学遺伝学の画面シロイヌナズナを行う液体処理ロボットの使用を最適化します。

Chemical genetics is increasingly being employed to decode traits in plants that may be recalcitrant to traditional genetics due to gene redundancy or ...

Use of High-Throughput Automated Microbioreactor System for Production of Model IgG1 in CHO Cells

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of experimental conditions while minimizing potential process variability. Applications of this approach include: clone screening, temperature and pH shifts,&#160;media and supplement optimization. Furthermore, the small reactor volumes are conducive to large Design of Experiments that investigate a wide range of conditions. This allows upstream processes to be significantly optimized before scale-up where experimentation is more limited in scope due to time and economic constraints. Automated microscale bioreactor systems offer various advantages over traditional small scale cell culture units, such as shake flasks or spinner flasks. However, during pilot scale process development&#160;significant care must be taken to ensure that these advantages are realized. When run with care, the system can enable high level automation, can be programmed to run DOE&#39;s with a higher number of variables&#160;and can reduce sampling time when integrated with a nutrient analyzer or cell counter. Integration of the expert-derived heuristics presented here, with current automated microscale bioreactor experiments can minimize common pitfalls that hinder meaningful results. In the extreme, failure to adhere to the principles laid out here can lead to equipment damage that requires expensive repairs. Furthermore, the microbioreactor systems have small culture volumes&#160;making characterization of cell culture conditions difficult. The number and amount of samples taken in-process in batch mode culture is limited as operating volumes cannot fall below 10 mL. This method will discuss the benefits and drawbacks of microscale bioreactor systems.

A detailed protocol for the concurrent operation of 48 parallel cell cultures under varied conditions in a microbioreactor system is presented. Cell culture process, harvest and subsequent antibody titer analysis are described.

高スループットの自動モデル IgG1 CHO 細胞での生産のための Microbioreactor システム

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of ...

High-Throughput Identification of Resistance to Pseudomonas syringae pv. Tomato in Tomato using Seedling Flood Assay

Tomato is an agronomically important crop that can be infected by Pseudomonas syringae, a Gram-negative bacterium, resulting in bacterial speck disease. The tomato-P. syringae pv. tomato pathosystem is widely used to dissect the genetic basis of plant innate responses and disease resistance. While disease was successfully managed for many decades through the introduction of the Pto/Prf gene cluster from Solanum pimpinellifolium into cultivated tomato, race 1 strains of P. syringae have evolved to overcome resistance conferred by the Pto/Prf gene cluster and occur worldwide.
Wild tomato species are important reservoirs of natural diversity in pathogen recognition, because they evolved in diverse environments with different pathogen pressures. In typical screens for disease resistance in wild tomato, adult plants are used, which can limit the number of plants that can be screened due to their extended growth time and greater growth space requirements. We developed a method to screen 10-day-old tomato seedlings for resistance, which minimizes plant growth time and growth chamber space, allows a rapid turnover of plants, and allows large sample sizes to be tested. Seedling outcomes of survival or death can be treated as discrete phenotypes or on a resistance scale defined by amount of new growth in surviving seedlings after flooding. This method has been optimized to screen 10-day-old tomato seedlings for resistance to two P. syringae strains and can easily be adapted to other P. syringae strains.

High-Throughput Identification of Resistance to Pseudomonas syringae pv. Tomato in Tomato using Seedling Flood Assay

The seedling flood assay facilitates rapid screening of wild tomato accessions for the resistance to the Pseudomonas syringae bacterium. This assay, used in conjunction with the seedling bacterial growth assay, can assist in further characterizing the underlying resistance to the bacterium, and can be used to screen mapping populations to determine the genetic basis of resistance.

シュードモナスシリンゲpvに対する耐性のハイスループット同定苗フラッドアッセイを用いたトマトのトマト

Tomato is an agronomically important crop that can be infected by Pseudomonas syringae, a Gram-negative bacterium, resulting in bacterial speck disease. ...

Generation of Dynamical Environmental Conditions using a High-Throughput Microfluidic Device

Mimicking in vivo environmental conditions is crucial for in vitro studies on complex life machinery. However, current techniques targeting live cells and organs are either highly expensive, like robotics, or lack nanoliter volume and millisecond time accuracy in liquid manipulation. We herein present the design and fabrication of a microfluidic system, which consists of 1,500 culture units, an array of enhanced peristaltic pumps and an on-site mixing modulus. To demonstrate the capacities of the microfluidic device, neural stem cell (NSC) spheres are maintained in the proposed system. We observed that when the NSC sphere is exposed to CXCL in day 1 and EGF in day 2, the round-shaped conformation is well maintained. Variation in the input order of 6 drugs causes morphological changes to the NSC sphere and the expression level representative marker for NSC stemness (i.e., Hes5 and Dcx). These results indicate that dynamic and complex environmental conditions have great effects on NSC differentiation and self-renewal, and the proposed microfluidic device is a suitable platform for high throughput studies on the complex life machinery.

We present a microfluidic system for high throughput studies on complex life machinery, which consists of 1500 culture units, an array of enhanced peristaltic pumps and an on-site mixing modulus. The microfluidic chip allows for the analysis of the highly complex and dynamic micro-environmental conditions in vivo.

ハイスループットマイクロ流体装置を用いた動的環境条件の生成

Mimicking in vivo environmental conditions is crucial for in vitro studies on complex life machinery. However, current techniques targeting live cells and ...