著者らは、ハエの株式の寛大な共有のためのブルーミントンストックセンター、Liqun羅、チャールズZuker、とリリーとユウ農月に感謝し、資金調達のために、以下の希望：（JDとSW）はSOMAの-URM、学士フォード学部夏フェローシップを、レニーとアンソニー・M・マーロン、MD &#39;63夏の研究フェローシップ（CLおよびDLに）（SW）は、BD社サマー研究員を経て（TO）ジェームズ・C. &#39;75とジェーンColihan夏の研究フェローシップ（DLに） （TO）にホーリークロス、ストランスキー財団サマー研究員の大学の卒業生/親サマー研究基金。ラボですべての作業をサポートするためのホーリークロスカレッジで生物学科と学部長のオフィスに感謝します。

1.十字MARCMのハエを生成するには<ol><li> 22℃で、または標準のショウジョウバエメディアコーンミール糖蜜培地（0.13％Tegosept; 23.5グラム/ Lの酵母; 60グラム/ Lのコーンミール、60ミリリットル/ Lの糖蜜; 4ミリリットル/ Lの酸ミックス6.5グラム/ Lの寒天）上のハエを維持12時間の明/暗サイクルです。 注：標準温度よりも低い、健康MARCM-株を維持するために使用されます。これは14日に卵と成人期の間の発達の時間を延長します。 </li><li>上流活性化配列（UAS-GFP）、GAL80リプレッサータンパク質、GAL4転写因子の制御下（GFPを必要な遺伝的要素を含むMARCM対応在庫から - （8日齢約1）処女雌を使用してくださいリコンビナーゼ、およびFRT組換え部位を駆動する熱ショック）。 注：私たちのMARCMすぐ銘柄は以下の遺伝子型含まれていますelavGal4、UAS-CD8-GFP、HS-flipaseを。 FRT40A、tubGal80 / CYO。 tubGal4 / TM3Sb。 注：特定のFRT部位は、突然変異の位置に依存しますゲノムインチ例えば、FRT40Aは、NOMPC（MARCMプロトコルの詳細については10を参照のこと）などの第2染色体の左腕、上の変異をテストするために使用されます。 </li><li>目的の変異とそれに対応するFRT部位含ま男性にクロスMARCM対応の処女雌（; NOMPC3、FRT40A / CYO;例えば、W-を+ / +）。効果的なMARCM誘導に制御するために、同じFRT部位を含む男性のハエを使用して第2のクロスを設定したが、突然変異のありません。十字架で1男性：女性5のおおよその比率を使用してください。 </li></ol> 2.時限産卵<ol><li>ハエは、少なくとも一晩交配させた後、新鮮な培地で新しいバイアルに大人を移動します。ハエが再び新しいバイアルに十字架を転送する前に、約4時間、暗い環境で卵を産むようにします。産卵期間の開始時間と終了時間に注意してください。 注意：4時間のintervaの終了前に、メディア上の卵の数が多いがあるように表示されたときに短い間隔が許容されますリットル。 <ol><li>熱が後で衝撃を与えたことを摂氏22度で12時間の明/暗サイクルで十分な卵の数（約20以上）とストアでバイアルを保管してください。 注：メディア上の卵の数が少ないバイアル（約20未満）は行動試験のために飛ぶと効率の利益のためにそれは彼らがさらなる試験のために保持されないことをお勧めします大人の十分な数が得られることはほとんどありません。 注意：私たちのハエは、午前8時から午後8時までにライトで発生します。午後8時と午後8時 - 午前零時 - したがって、我々は、通常4〜時限交配を行い、夕方の時間点が高い卵密度につながる発見しました。ハエが暗いキャビネット内に室温で産卵した後、インキュベーター中で、通常の明暗サイクルを乱さないように、次の日にインキュベーターに戻します。 </li></ol></li></ol> 3.有糸分裂組換えを誘導するために熱ショックを実行します<ol><li>約85 - 産卵後100時間、場所のV1時間37℃で水浴にIALS。水位がバイアル内のメディアの高さの上に達したが、完全に溺れてから幼虫を防ぐためにバイアルを水没しないことを確認してください。 </li><li>水浴からバイアルを取り出し、室温で1時間の回復期間を可能にします。 </li><li>バック1時間、摂氏37度の水浴中にバイアルを置きます。 </li><li>羽化するまで22℃で12時間の明/暗サイクルでインキュベーターで水浴とストアからバイアルを取り外します。 </li></ol>行動試験のための準備4。 <ol><li>羽化後、氷上でハエを麻酔。 MARCMのためのすべての遺伝的要素を含み、GFP発現マーキングされたクローンは、おそらく親銘柄で使用観察可能な表現型マーカーに基づいて観察される示す遺伝子型を有するハエを選択します。虹彩切除術ハサミでハエを斬ります。 注：例えば、私たちは遺伝子マーカーなしでハエのためCYO（カーリー翼）及びSb（無精ひげ毛）同定するために、選択されまし​​たモザイク領域を作成するために必要なすべての遺伝的要素を含むことになる年度ハエは、GFPでマークされました。 注意：斬首が刺激されると飛んから大人を防止する必要があります。 </li><li>閉じられた、湿った環境でのヘッドレスハエを置き、約10可能に - 回復の20時間を。右自身さらなる試験のため乱さハエをのみを使​​用します。テストは断頭の30時間以内に飛びます。 </li></ol> 5.行動試験<ol><li>蛍光解剖顕微鏡下で断頭ハエを観察することによって、毛外部感覚器官のGFPでマークされたホモ接合クローンを同定します。剛毛名および左側または右側を記録します。任意の潜在的なバイアスを排除するために、毛刺激を行うラボメンバーは毛、野生型または変異体の遺伝子型に盲目でなければなりません。 </li><li>硬い髪や細かい鉗子でフライ本体に向かって毛と脚の再を観察マークされたGFPを偏向させることによりグルーミング反射を引き出しますsponse。彼らの足を移動しないハエに刺激し、ゼロのスコアを毛に応じて自分の足を持ち上げハエに1のスコアを与えます。 注：以前の研究6,7は、特定の毛を刺激することによって誘発された足の応答を特徴としています。これは、各剛毛に応答足とその特定の毛の刺激に反応するハエの割合が含まれています。私たちは私たちがVandervorstの分類6に基づいて対応することが期待足の動きを記録しました。 </li><li>離れて2分間隔の5件の試験を実施します。 </li></ol>

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S., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+(MARCM)+in+Drosophila.">A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila.</a> Nature Protocols. 1, 2583-2589 (2006).</li><li>Eberl, D. F., Hardy, R. W., Kernan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+similar+transduction+mechanisms+for+touch+and+hearing+in+Drosophila.">Genetically similar transduction mechanisms for touch and hearing in Drosophila.</a> J Neurosci. 20, 5981-5988 (2000).</li><li>Walker, R. G., Willingham, A. T., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+mechanosensory+transduction+channel.">A Drosophila mechanosensory transduction channel.</a> Science. 287, 2229-2234 (2000).</li><li>Yan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+NOMPC+is+a+mechanotransduction+channel+subunit+for+gentle-touch+sensation.">Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation.</a> Nature. 493, 221-225 (2013).</li><li>Arnadottir, J., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eukaryotic+Mechanosensitive+Channels.">Eukaryotic Mechanosensitive Channels.</a> Annual Review of Biophysics. 39, 111-137 (2010).</li><li>Christensen, A. P., Corey, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRP+channels+in+mechanosensation:+direct+or+indirect+activation?.">TRP channels in mechanosensation: direct or indirect activation?.</a> Nature Reviews Neuroscience. 8, 510-521 (2007).</li><li>Cheng, L. E., Song, W., Looger, L. L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+the+TRP+Channel+NompC+in+Drosophila+Larval+and+Adult+Locomotion.">The Role of the TRP Channel NompC in Drosophila Larval and Adult Locomotion.</a> Neuron. 67, 373-380 (2010).</li><li>Lee, J., Moon, S., Cha, Y., Chung, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+TRPN(=NOMPC)+channel+localizes+to+the+distal+end+of+mechanosensory+cilia.">Drosophila TRPN(=NOMPC) channel localizes to the distal end of mechanosensory cilia.</a> PLoS One. 5, e11012 (2010).</li><li>Liang, X., Madrid, J., Saleh, H. S., Howard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOMPC,+a+Member+of+the+TRP+Channel+Family,+Localizes+to+the+Tubular+Body+and+Distal+Cilium+of+Drosophila+Campaniform+and+Chordotonal+Receptor+Cells.">NOMPC, a Member of the TRP Channel Family, Localizes to the Tubular Body and Distal Cilium of Drosophila Campaniform and Chordotonal Receptor Cells.</a> Cytoskeleton. 68, 1-7 (2011).</li><li>de Vries, S. E., Clandinin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loom-sensitive+neurons+link+computation+to+action+in+the+Drosophila+visual+system.">Loom-sensitive neurons link computation to action in the Drosophila visual system.</a> Curr Biol. 22, 353-362 (2012).</li><li>Jarman, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+mechanosensation+using+the+fly.">Studies of mechanosensation using the fly.</a> Hum Mol Genet. 11, 1215-1218 (2002).</li></ol>

著者は全く競合する金融利害関係はありません。

このプロトコルは 、ショウジョウバエでmechanosensationに影響を与える変異をスクリーニングするために、大人の行動アッセイを利用しています。突然変異体のコレクションは、成人としてのスクリーニング不可能に致死P因子の変異が含まれているため、このプロトコルは最初のリーと羅によって記述複雑な遺伝的手法を利用しています、（1999）、成人の致死性を回避するための...

Humans rely on the ability to convert mechanical stimuli from their environment, such as touch, pressure, vibration, or sound waves, into sensory information that can be processed by the nervous system, in a process termed mechanotransduction. Many of the overall mechanistic features of mechanotransduction between humans and invertebrates are the same1, making Drosophila a useful model to study the molecular mechanisms of mechanotransduction. Drosophila melanogaster contain two sets of specialized sensory organs (Type I and II) that are capable of converting mechanical stimuli into action potentials. Type I mechanoreceptors have a neuron with a single dendrite or sensory process, surrounded by three support cells2. The Type I mechanoreceptors include bristle mechanoreceptors, hearing sensitive chordotonal organs (the Johnston's organ), and campaniform sensilla that convey information about wing beats3. The bristles that cover the dorsal side of the fly are the most abundant and easily accessible of the Type I organs. Similar to the extracellular environment of hair cells associated with hearing and balance in vertebrates, the support cells surrounding fly mechanosensitive neurons secrete a high potassium endolymph that creates an unusual concentration gradient for potassium1. Mechanosensitive neurons, of both the mammalian and fly systems, utilize this high extracellular potassium to depolarize the cell. In response to mechanical stimulation of the macrochaete bristles towards the body wall, the sensory neurons respond with a burst of action potentials driven by this potassium depolarization of the cell membrane4. The Drosophila sensory neurons that innervate bristles resemble the mechanosensitive cells of other organisms, including vertebrate hair cells, in both structure and function1,5. The accessibility of Drosophila external sense organs to experimental manipulation and the abundance of genetic techniques available to researchers make Drosophila an excellent model system to investigate the molecular underpinnings of mechanosensation. 
In the fly, stimulation of a single sensory neuron that innervates a bristle leads to an observable behavioral response. Stimulation of different bristles evokes specific, reproducible behavioral responses, depending on the bristle that is stimulated. Upon tactile stimulation, decapitated wild-type flies exhibit a complex grooming reflex wherein they clean the area near the stimulated bristle with a patterned set of leg movements5-7. When homozygous for known single-gene mutations that interfere with learning7 or coordination and locomotor activity5, flies respond abnormally to mechanical stimulation. This grooming reflex is therefore a useful tool to study the effects of single-gene mutations on a specific, replicable behavior.
The robust behavioral response to stimulation of a single macrochaete bristle holds the potential to assist in identifying new genes involved in mechanotransduction. This protocol being used to test a collection of mutant flies for the absence of a behavioral response to indicate that the mutation interferes with mechanosensation. In the mutant collection selected for screening, the mutations cause lethality before adulthood, and therefore would be impossible to test using traditional adult behavior screens. Originally, this collection of lethal p-elements was combined with FRT recombination sites to test cell growth defects in clones. The clones were made specifically in the eye because adult flies can survive in the lab setting without functional vision8. However, removal of all mechanosensation can cause adults to be severely uncoordinated or die before eclosion5. This protocol uses a mosaic approach to circumvent the lethality of the mutations and allow for adult stage testing. A genetic technique called Mosaic Analysis with a Repressible Cell Marker (MARCM)9 is used to generate homozygous mutant cells in a limited number of adult fly sensory organs, while the rest of the organism remains heterozygous. These MARCM flies readily survive until adulthood, yet the bristles are homozygous for the lethal genes of interest.
MARCM allows for regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP), while the rest of the organism remains heterozygous at that particular locus and unmarked9. MARCM combines individual p-element mutations with five common genetic elements: GFP under the control of an upstream-activating sequence (UAS-GFP), Gal80 repressor protein under control of a general promoter (tub-Gal80), Gal4 transcription factor under control of a general promoter (tub-Gal4), the FRT recombinase enzyme expressed through a heat-shock controlled promoter, and a FRT recombination site10. By driving mitotic recombination through a heat-shock activated recombinase, a limited number of cells are made homozygous for the mutation and marked with GFP. GFP expression is repressed in heterozygous cells by the presence of Gal80 on the wild-type copy of the chromosome. 
A heat-shock protocol for MARCM was optimized to induce recombination in the fly bristle external sense organs, while much of the organism remains heterozygous, and thus unmarked with GFP. Mosaic flies generated using this protocol contained homozygous mutations most frequently in the post alar or dorsal central bristles on the surface of the notum. 
We have tested the utility of this combination of MARCM and the grooming behavior screen with a known mechanosensitive mutant, NOMPC. The ion channel, no mechanoreceptor potential C (NOMPC), is an essential component of the mechanotransduction pathway in Drosophila5,11-13. NOMPC belongs to the transient receptor potential (TRP) superfamily of cation channels5 and satisfies all of the criteria to qualify as a mechanosensitive channel in Drosophila14,15: 1) NOMPC is expressed in the ciliate tips of type 1 sensory neurons of Drosophila 13,16-18, 2) NOMPC null larvae do not have an electrical response to tactile stimulation13, 3) Ectopic expression of NOMPC in touch insensitive cells can induce sensitivity to mechanical stimulation13, 4) heterologous expression of NOMPC in Schneider 2 cells yields a mechanosensitive channel13, and 5) NOMPC adult mutants display defects in their response to mechanical stimulation5. Given this evidence, we predicted that NOMPC mutant clones would show an altered or inhibited grooming response in response to mechanical stimulation of bristles.
A MARCM-stock containing the NOMPC mutation was developed for use in a proof of principle experiment of the grooming assay. Mosaic flies were stimulated at macrochaete bristles containing homozygous NOMPC mutant cells. We expected an inhibition of the grooming response following stimulation of the macrochaete bristle. We found that only 2 of 14 mutant bristle flies tested gave a single response to repeated stimulation; most did not respond to stimulation of the homozygous mutant bristle. Having confirmed that this MARCM-based behavioral assay produces an abnormal grooming reflex in a known mechanosensitive mosaic mutant, this technique can be used in a screen for additional mechanosensitive mutations.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="648">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Brewers Yeast (25 lb)</td>
			<td style="width:163px;">MP Biomedicals&#160;</td>
			<td style="width:163px;">ICN90331225&#160;</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Corn (25lb)</td>
			<td style="width:163px;">MP Biomedicals&#160;</td>
			<td style="width:163px;">ICN90141125&#160;</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Agar (1lb)</td>
			<td style="width:163px;">MoorAgar Inc.</td>
			<td style="width:163px;">41004</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Tegosept (5kg)</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">20-259</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:163px;">Molasses (1Gallon)</td>
			<td style="width:163px;">Sugarmill Brand - Thomsen Food Service</td>
			<td style="width:163px;">0 2625</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Propionic Acid</td>
			<td style="width:163px;">Fisher</td>
			<td style="width:163px;">A258-500</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Phosphoric acid</td>
			<td style="width:163px;">Fisher</td>
			<td style="width:163px;">A260-500</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:163px;">Drosophila Vials, Narrow (PS)</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">32-109</td>
			<td style="width:163px;">Fly Cultures</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:163px;">6oz Square Bottom Bottle (PP)</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">32-130</td>
			<td style="width:163px;">Fly Cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Flugs - Plastic Fly Bottles</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">49-100</td>
			<td style="width:163px;">Fly Cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Rayon Balls, Large</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">51-100</td>
			<td style="width:163px;">Fly Cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Droso-Filler, Narrow</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">59-168</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food Preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Droso-Filler, Bottles</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">59-170</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food Preparation</td>
		</tr>
		<tr height="95">
			<td height="95" style="height:95px;width:163px;">8A-C / gear driven lab stirrer with c-clamp mount&#160; 1/15HP, 700RPM variable speed, 115V, 50/60Hz</td>
			<td style="width:163px;">Cleveland Mixer</td>
			<td style="width:163px;">8A-C</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food Preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Water jacketed Kettle</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;">Fly Food Preparation</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:163px;">Diurnal Growth Chamber</td>
			<td style="width:163px;">Forma Scientific</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;">Temperature and light/dark cycle controlled</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Water bath</td>
			<td style="width:163px;">VWR</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;">For heat shock</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">MicroScissors&#160;</td>
			<td style="width:163px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:163px;">&#160;15000-08</td>
			<td style="width:163px;">For removing heads</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:163px;">Fluroscence Dissecting Microscope</td>
			<td style="width:163px;">Zeiss</td>
			<td style="width:163px;">SteREO Discovery V8&#160;</td>
			<td style="width:163px;">With GFP cube (KSC295-814D) band pass filter</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:163px;">Fluroscence Light Source</td>
			<td style="width:163px;">Zeiss</td>
			<td style="width:163px;">X-Cite 120</td>
			<td style="width:163px;">Fiber optic light pipe makes this easy to configure&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Camera for Scope</td>
			<td style="width:163px;">Zeiss</td>
			<td style="width:163px;">AxioCam ICc1</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:163px;">Image acquistion software</td>
			<td style="width:163px;">Zeiss</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Ice bucket</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;">for cold anthesia</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:163px;">Homemade cold anthesia tray</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;">for cold anthesia decapitation</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:163px;">Plastic boxes</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;">for recovery of decaptitated flies in humid environment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a behavioral assay for mechanosensation of marcm-based clones in drosophila melanogaster

そのため哺乳類の内耳の有毛細胞への構造的および機能的相同性のため、 ショウジョウバエの外部感覚器官を神経支配するニューロンはmechanosensationの研究のための優れたモデルシステムを提供します。このプロトコルは、mechanosensationを妨害する変異を同定するために使用することができショウジョウバエでシンプルなタッチの動作について説明します。 macrochaeteの触覚刺激は、ハエの胸郭に毛のいずれかの第1または第3の脚からグルーミング反射を誘発します。 （例えばNOMPCなど）メカノと、または反射弓の他の側面に干渉する突然変異は、グルーミング応答を阻害することができます。大人の行動の伝統的な画面は開発中の重要な役割を持っている変異体を逃したであろう。代わりに、このプロトコルは、exprで生成され、マークされたホモ接合変異体の細胞の限られた領域を可能にするために、抑制性細胞マーカー（MARCM）でモザイク解析でタッチスクリーンを組み合わせました緑色蛍光タンパク質（GFP）のession。異常行動応答についてMARCMクローンを試験することにより、より伝統的な方法では見逃されたであろうmechanosensationに関与する新しい遺伝子を検索するために致死P因子突然変異のコレクションをスクリーニングすることが可能です。

このプロトコルの成功は、主にテスト可能なハエの全収率に依存して、熱ショックの効果は、有糸分裂組換え、2分間隔で刺激されたハエにおける強固な行動反応を得る能力を誘導します。胚の推定12.5％が必要MARCM要素およびG​​FP発現の可能性を有する孵化する成人の推定16.67％を含有することを考えると、それは時限中の卵の高い数を得ることが重要である産みま?...

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A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

でMARCMベースのクローンのMechanosensationための行動アッセイ<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

10.1K ビュー.  College of the Holy Cross. In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.