Les auteurs souhaitent remercier le centre Bloomington boursier, Liqun Luo, Charles Zuker, et Lily et Yuh Nung Jan pour le partage généreux des stocks de mouches et de la suivante pour un financement: SOMAS-URM (JD et SW), baccalauréat Ford Faculté été Fellowship (SW), BD Corporation de bourses de recherche d&#39;été (à CL et DL), Renée et Anthony M. Marlon, MD &#39;63 bourses de recherche d&#39;été (DL) James C. &#39;75 et Jane Colihan bourses de recherche d&#39;été (TO) par Alumni / Fonds de recherche Summer Parent du Collège de la Sainte Croix et la Fondation Stransky Summer Research Fellowship (TO). Un merci spécial au Département de biologie et le bureau du doyen au Collège de la Sainte Croix pour le soutien de tout le travail dans le laboratoire.

1. Croix pour générer Flies marcm <ol><li> Maintenir des mouches sur les médias semoule de maïs de la mélasse (6,5 g / L d&#39;agar; 23,5 g / L de levure; 60 g / L de farine de maïs, 60 ml / l mélasse; 4 ml / L mix d&#39;acide; 0,13% Tegosept) ou des médias Drosophila standard à 22 degrés Celsius dans un cycle de lumière de 12 h / sombre. REMARQUE: Un inférieure à la température standard est utilisé pour garder marcm-stocks en bonne santé. Ceci augmente le temps de développement entre l&#39;œuf et l&#39;âge adulte à 14 jours. </li><li> Utilisez des femelles vierges (environ 1 - âgées de 8 jours) à partir d&#39;un stock marcm prêt contenant les éléments génétiques nécessaires (GFP sous le contrôle d&#39;une séquence en amont d&#39;activation (UAS-GFP), la protéine répresseur GAL80, le facteur de transcription Gal4, un choc thermique de recombinase entraîné, et un site de recombinaison FRT). Note: Notre marcm ready-titres contiennent les génotypes suivants: elavGal4, UAS-CD8-GFP, hs-flipase; FRT40A, tubGal80 / CYO; tubGal4 / TM3Sb. Remarque: Le site FRT spécifique dépendra de la localisation de la mutationdans le génome. Par exemple, FRT40A est utilisé pour tester des mutations sur le bras gauche du chromosome 2, comme NOMPC (voir 10 pour plus de détails sur les protocoles de marcm). </li><li> Cross femelles vierges marcm prête aux hommes qui contiennent une mutation d&#39;intérêt et de son site correspondant FRT (par exemple, W; NOMPC3, FRT40A / CYO; + / +). Pour contrôler pour l&#39;induction de marcm efficace, mettre une deuxième croix utilisant mouches mâles contenant le même site FRT, mais sans une mutation. Utilisez un rapport approximatif de 5 femelles: 1 mâle dans les croisements. </li></ol> 2. Timed ponte <ol><li> Après avoir laissé les mouches à accoupler pour au moins une nuit, déplacer adultes dans de nouveaux flacons de milieux frais. Autoriser les mouches pondent leurs œufs dans un environnement sombre pendant environ 4 heures avant de le transférer à nouveau les croix dans de nouveaux flacons. Notez les heures de début et de fin de la période de ponte. Remarque: Des intervalles plus courts sont acceptables quand il semble y avoir un nombre élevé d&#39;œufs sur les médias avant la fin de la InterVA 4 heuresl. <ol><li> Gardez les flacons avec un nombre suffisant d&#39;oeufs (environ plus de 20) et de stocker dans un cycle de lumière de 12 h / obscurité à 22 degrés Celsius pour être un choc thermique plus tard. Remarque: les flacons avec un faible nombre d&#39;œufs sur le support (inférieure à environ 20) sont peu susceptibles de rapporter un nombre suffisant de mouches adultes pour les tests de comportement et dans l&#39;intérêt de l&#39;efficacité, il est recommandé qu&#39;ils ne peuvent être conservés pour des tests supplémentaires. Note: Nos mouches sont élevés avec les lumières sur 8 heures-20 heures. Nous avons trouvé le temps du soir points d&#39;avance à la densité des œufs plus élevés, donc généralement effectuer des croisements entre chronométrés de 4 - 8 heures et 20 heures-minuit. Les mouches pondent leurs œufs à la température ambiante dans un cabinet noir, puis sont retournés à l&#39;incubateur de la journée suivante, afin de ne pas perturber le cycle lumière-obscurité régulière dans l&#39;incubateur. </li></ol></li></ol> 3. Effectuer Heat Shock pour Provoquer recombinaison mitotique <ol><li> Environ 85 à 100 heures après la ponte, place vEIAA dans un bain d&#39;eau à 37 degrés Celsius pendant 1 heure. Assurez-vous que le niveau de l&#39;eau atteint dessus de la hauteur des médias dans les flacons, mais ne submergent pas pleinement les flacons pour empêcher les larves de la noyade. </li><li> Retirer les flacons du bain d&#39;eau et de permettre une période de récupération de 1 heure à température ambiante. </li><li> Placer les flacons dos en 37 degrés Celsius bain-marie pendant 1 h. </li><li> Retirer les flacons du bain d&#39;eau et de stocker dans un incubateur sur la lumière cycle de 12 h / obscurité à 22 degrés Celsius jusqu&#39;à l&#39;éclosion. </li></ol> 4. Préparation pour la vérification comportementale <ol><li> Après l&#39;éclosion, anesthésier les mouches sur de la glace. Sélectionnez les mouches avec des génotypes qui contiennent tous les éléments génétiques pour marcm et indiquent GFP clones d&#39;expression marquée seront probablement observées sur la base des marqueurs phénotypiques observables utilisées dans les stocks de parents. Décapitez mouches avec iridectomie ciseaux. Note: Par exemple, nous avons sélectionné pour les mouches sans les marqueurs génétiques CYO (Les ailes arrondies) et Sb (poils de barbe) pour identimouches fy qui contiennent tous les éléments génétiques nécessaires pour créer des régions mosaïque marquées à la GFP. Remarque: Décapitation est nécessaire pour empêcher les adultes de se envoler quand ils sont stimulés. </li><li> Placez les mouches sans tête dans un environnement clos et humide et laisser environ 10 - 20 h de récupération. Seule l&#39;utilisation vole ce droit eux-mêmes quand perturbée pour des tests supplémentaires. Essai vole dans les 30 heures de la décapitation. </li></ol> 5. tests comportementaux <ol><li> En observant vol décapités sous un microscope de dissection fluorescence, identifier des clones GFP marquées d&#39;homozygotes chez les poils des organes sensoriels externes. Enregistrez le nom de poils et à gauche ou à droite. Pour éliminer tout risque de biais, le membre du laboratoire d&#39;effectuer la stimulation de poils doit être aveugle au génotype de la soie, de type sauvage ou mutant. </li><li> Susciter un réflexe de toilettage en déviant la GFP marqué poils vers le corps de la mouche avec un poil raide ou une pince fine et observer la répétition de la jamberéponse. Donnez une note de un à mouches qui lève la patte en réponse à la stimulation et à poils un score de zéro à mouches qui ne se déplacent pas leurs jambes. Remarque: Des études antérieures 6,7 ont caractérisé la réponse de la jambe qui est provoquée par la stimulation d&#39;un poil particulier. Cela comprend la jambe qui répond à chaque poil et la proportion de vol qui répondent à une stimulation de poils qui particulier. Nous seulement marqué pour les mouvements de la jambe qui nous nous attendions à répondre basé sur la classification de Vandervorst 6. </li><li> Mener cinq essais espacés 2 minutes d&#39;intervalle. </li></ol>

<ol>
	<li>Gr&#252;nert, U., Gnatzy, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=K++and+Ca+++in+the+receptor+lymph+of+arthropod+cuticular+mechanoreceptors.">K+ and Ca++ in the receptor lymph of arthropod cuticular mechanoreceptors.</a> J Comp Physiol A. 161, 329-333 (1987).</li><li>Kernan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanotransduction+and+auditory+transduction+in+Drosophila.">Mechanotransduction and auditory transduction in Drosophila.</a> Pflugers Arch. 454, 703-720 (2007).</li><li>Gillespie, P. G., Walker, R. 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D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+TRPN(=NOMPC)+channel+localizes+to+the+distal+end+of+mechanosensory+cilia.">Drosophila TRPN(=NOMPC) channel localizes to the distal end of mechanosensory cilia.</a> PLoS One. 5, e11012 (2010).</li><li>Liang, X., Madrid, J., Saleh, H. S., Howard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOMPC,+a+Member+of+the+TRP+Channel+Family,+Localizes+to+the+Tubular+Body+and+Distal+Cilium+of+Drosophila+Campaniform+and+Chordotonal+Receptor+Cells.">NOMPC, a Member of the TRP Channel Family, Localizes to the Tubular Body and Distal Cilium of Drosophila Campaniform and Chordotonal Receptor Cells.</a> Cytoskeleton. 68, 1-7 (2011).</li><li>de Vries, S. E., Clandinin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loom-sensitive+neurons+link+computation+to+action+in+the+Drosophila+visual+system.">Loom-sensitive neurons link computation to action in the Drosophila visual system.</a> Curr Biol. 22, 353-362 (2012).</li><li>Jarman, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+mechanosensation+using+the+fly.">Studies of mechanosensation using the fly.</a> Hum Mol Genet. 11, 1215-1218 (2002).</li></ol>

Les auteurs ont aucun intérêt financier concurrentes.

Ce protocole utilise un test de comportement des adultes à l&#39;écran pour les mutations qui affectent mécanosensibilité chez la drosophile. Parce que la collection de mutants contient létales mutations élément P qui empêcherait de dépistage que les adultes, ce protocole permet l&#39;utilisation d&#39;une technique génétique complexe d&#39;abord décrit par Lee et Luo , (1999) et détaillée en tant que protocole par Wu et Luo, (2006) pour contourner la létalité adulte. Marcm induit recom...

Humans rely on the ability to convert mechanical stimuli from their environment, such as touch, pressure, vibration, or sound waves, into sensory information that can be processed by the nervous system, in a process termed mechanotransduction. Many of the overall mechanistic features of mechanotransduction between humans and invertebrates are the same1, making Drosophila a useful model to study the molecular mechanisms of mechanotransduction. Drosophila melanogaster contain two sets of specialized sensory organs (Type I and II) that are capable of converting mechanical stimuli into action potentials. Type I mechanoreceptors have a neuron with a single dendrite or sensory process, surrounded by three support cells2. The Type I mechanoreceptors include bristle mechanoreceptors, hearing sensitive chordotonal organs (the Johnston's organ), and campaniform sensilla that convey information about wing beats3. The bristles that cover the dorsal side of the fly are the most abundant and easily accessible of the Type I organs. Similar to the extracellular environment of hair cells associated with hearing and balance in vertebrates, the support cells surrounding fly mechanosensitive neurons secrete a high potassium endolymph that creates an unusual concentration gradient for potassium1. Mechanosensitive neurons, of both the mammalian and fly systems, utilize this high extracellular potassium to depolarize the cell. In response to mechanical stimulation of the macrochaete bristles towards the body wall, the sensory neurons respond with a burst of action potentials driven by this potassium depolarization of the cell membrane4. The Drosophila sensory neurons that innervate bristles resemble the mechanosensitive cells of other organisms, including vertebrate hair cells, in both structure and function1,5. The accessibility of Drosophila external sense organs to experimental manipulation and the abundance of genetic techniques available to researchers make Drosophila an excellent model system to investigate the molecular underpinnings of mechanosensation. 
In the fly, stimulation of a single sensory neuron that innervates a bristle leads to an observable behavioral response. Stimulation of different bristles evokes specific, reproducible behavioral responses, depending on the bristle that is stimulated. Upon tactile stimulation, decapitated wild-type flies exhibit a complex grooming reflex wherein they clean the area near the stimulated bristle with a patterned set of leg movements5-7. When homozygous for known single-gene mutations that interfere with learning7 or coordination and locomotor activity5, flies respond abnormally to mechanical stimulation. This grooming reflex is therefore a useful tool to study the effects of single-gene mutations on a specific, replicable behavior.
The robust behavioral response to stimulation of a single macrochaete bristle holds the potential to assist in identifying new genes involved in mechanotransduction. This protocol being used to test a collection of mutant flies for the absence of a behavioral response to indicate that the mutation interferes with mechanosensation. In the mutant collection selected for screening, the mutations cause lethality before adulthood, and therefore would be impossible to test using traditional adult behavior screens. Originally, this collection of lethal p-elements was combined with FRT recombination sites to test cell growth defects in clones. The clones were made specifically in the eye because adult flies can survive in the lab setting without functional vision8. However, removal of all mechanosensation can cause adults to be severely uncoordinated or die before eclosion5. This protocol uses a mosaic approach to circumvent the lethality of the mutations and allow for adult stage testing. A genetic technique called Mosaic Analysis with a Repressible Cell Marker (MARCM)9 is used to generate homozygous mutant cells in a limited number of adult fly sensory organs, while the rest of the organism remains heterozygous. These MARCM flies readily survive until adulthood, yet the bristles are homozygous for the lethal genes of interest.
MARCM allows for regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP), while the rest of the organism remains heterozygous at that particular locus and unmarked9. MARCM combines individual p-element mutations with five common genetic elements: GFP under the control of an upstream-activating sequence (UAS-GFP), Gal80 repressor protein under control of a general promoter (tub-Gal80), Gal4 transcription factor under control of a general promoter (tub-Gal4), the FRT recombinase enzyme expressed through a heat-shock controlled promoter, and a FRT recombination site10. By driving mitotic recombination through a heat-shock activated recombinase, a limited number of cells are made homozygous for the mutation and marked with GFP. GFP expression is repressed in heterozygous cells by the presence of Gal80 on the wild-type copy of the chromosome. 
A heat-shock protocol for MARCM was optimized to induce recombination in the fly bristle external sense organs, while much of the organism remains heterozygous, and thus unmarked with GFP. Mosaic flies generated using this protocol contained homozygous mutations most frequently in the post alar or dorsal central bristles on the surface of the notum. 
We have tested the utility of this combination of MARCM and the grooming behavior screen with a known mechanosensitive mutant, NOMPC. The ion channel, no mechanoreceptor potential C (NOMPC), is an essential component of the mechanotransduction pathway in Drosophila5,11-13. NOMPC belongs to the transient receptor potential (TRP) superfamily of cation channels5 and satisfies all of the criteria to qualify as a mechanosensitive channel in Drosophila14,15: 1) NOMPC is expressed in the ciliate tips of type 1 sensory neurons of Drosophila 13,16-18, 2) NOMPC null larvae do not have an electrical response to tactile stimulation13, 3) Ectopic expression of NOMPC in touch insensitive cells can induce sensitivity to mechanical stimulation13, 4) heterologous expression of NOMPC in Schneider 2 cells yields a mechanosensitive channel13, and 5) NOMPC adult mutants display defects in their response to mechanical stimulation5. Given this evidence, we predicted that NOMPC mutant clones would show an altered or inhibited grooming response in response to mechanical stimulation of bristles.
A MARCM-stock containing the NOMPC mutation was developed for use in a proof of principle experiment of the grooming assay. Mosaic flies were stimulated at macrochaete bristles containing homozygous NOMPC mutant cells. We expected an inhibition of the grooming response following stimulation of the macrochaete bristle. We found that only 2 of 14 mutant bristle flies tested gave a single response to repeated stimulation; most did not respond to stimulation of the homozygous mutant bristle. Having confirmed that this MARCM-based behavioral assay produces an abnormal grooming reflex in a known mechanosensitive mosaic mutant, this technique can be used in a screen for additional mechanosensitive mutations.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="648">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Brewers Yeast (25 lb)</td>
			<td style="width:163px;">MP Biomedicals&#160;</td>
			<td style="width:163px;">ICN90331225&#160;</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Corn (25lb)</td>
			<td style="width:163px;">MP Biomedicals&#160;</td>
			<td style="width:163px;">ICN90141125&#160;</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Agar (1lb)</td>
			<td style="width:163px;">MoorAgar Inc.</td>
			<td style="width:163px;">41004</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Tegosept (5kg)</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">20-259</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:163px;">Molasses (1Gallon)</td>
			<td style="width:163px;">Sugarmill Brand - Thomsen Food Service</td>
			<td style="width:163px;">0 2625</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Propionic Acid</td>
			<td style="width:163px;">Fisher</td>
			<td style="width:163px;">A258-500</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Phosphoric acid</td>
			<td style="width:163px;">Fisher</td>
			<td style="width:163px;">A260-500</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:163px;">Drosophila Vials, Narrow (PS)</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">32-109</td>
			<td style="width:163px;">Fly Cultures</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:163px;">6oz Square Bottom Bottle (PP)</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">32-130</td>
			<td style="width:163px;">Fly Cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Flugs - Plastic Fly Bottles</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">49-100</td>
			<td style="width:163px;">Fly Cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Rayon Balls, Large</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">51-100</td>
			<td style="width:163px;">Fly Cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Droso-Filler, Narrow</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">59-168</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food Preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Droso-Filler, Bottles</td>
			<td style="width:163px;">Genesee</td>
			<td style="width:163px;">59-170</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food Preparation</td>
		</tr>
		<tr height="95">
			<td height="95" style="height:95px;width:163px;">8A-C / gear driven lab stirrer with c-clamp mount&#160; 1/15HP, 700RPM variable speed, 115V, 50/60Hz</td>
			<td style="width:163px;">Cleveland Mixer</td>
			<td style="width:163px;">8A-C</td>
			<td style="width:163px;">Fly Food Preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Water jacketed Kettle</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;">Fly Food Preparation</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:163px;">Diurnal Growth Chamber</td>
			<td style="width:163px;">Forma Scientific</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;">Temperature and light/dark cycle controlled</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Water bath</td>
			<td style="width:163px;">VWR</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;">For heat shock</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">MicroScissors&#160;</td>
			<td style="width:163px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:163px;">&#160;15000-08</td>
			<td style="width:163px;">For removing heads</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:163px;">Fluroscence Dissecting Microscope</td>
			<td style="width:163px;">Zeiss</td>
			<td style="width:163px;">SteREO Discovery V8&#160;</td>
			<td style="width:163px;">With GFP cube (KSC295-814D) band pass filter</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:163px;">Fluroscence Light Source</td>
			<td style="width:163px;">Zeiss</td>
			<td style="width:163px;">X-Cite 120</td>
			<td style="width:163px;">Fiber optic light pipe makes this easy to configure&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Camera for Scope</td>
			<td style="width:163px;">Zeiss</td>
			<td style="width:163px;">AxioCam ICc1</td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:163px;">Image acquistion software</td>
			<td style="width:163px;">Zeiss</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:163px;">Ice bucket</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;">for cold anthesia</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:163px;">Homemade cold anthesia tray</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;">for cold anthesia decapitation</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:163px;">Plastic boxes</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:163px;">for recovery of decaptitated flies in humid environment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a behavioral assay for mechanosensation of marcm-based clones in drosophila melanogaster

En raison de l&#39;homologie structurelle et fonctionnelle des cellules ciliées de l&#39;oreille interne chez les mammifères, les neurones qui innervent les organes sensoriels externes Drosophila constituent un excellent système modèle pour l&#39;étude de mécanosensibilité. Ce protocole décrit un comportement simple tactile dans les mouches des fruits qui peuvent être utilisés pour identifier les mutations qui interfèrent avec mécanosensibilité. La stimulation tactile d&#39;un macrochaete poils sur le thorax de mouches déclenche un réflexe de damage de la première ou la troisième branche. Les mutations qui interfèrent avec la mécanotransduction (comme NOMPC), ou avec d&#39;autres aspects de l&#39;arc réflexe, peuvent inhiber la réponse de toilettage. Un écran traditionnel de comportements adultes aurait manqué mutants qui ont des rôles essentiels au cours du développement. Au lieu de cela, ce protocole combine l&#39;écran tactile avec l&#39;analyse de la mosaïque avec un marqueur de cellule répressible (marcm) pour permettre seules régions limitées de cellules mutantes homozygotes pour être généré et marqué par l&#39;expression de la protéine fluorescente verte (GFP). En testant clones marcm des réponses comportementales anormales, il est possible de cribler une collection de mutations létales p-éléments à chercher de nouveaux gènes impliqués dans mécanosensibilité qui auraient été manqués par des méthodes plus traditionnelles.

Le succès de ce protocole dépend en grande partie sur le rendement global de mouches vérifiables, l&#39;efficacité du choc thermique pour induire la recombinaison mitotique, et la capacité d&#39;obtenir une réponse comportementale robuste dans les mouches stimulées à intervalles de 2 min. Étant donné qu&#39;environ 12,5% des embryons contient les éléments nécessaires marcm et environ 16,67% des adultes qui ont le potentiel Eclose pour l&#39;expression de la GFP, il est essen...

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A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

A Behavioral Essai pour mécanosensibilité de marcm-fondé clones dans<em&gt; Drosophila melanogaster</em

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

10.1K vues.  College of the Holy Cross. In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.