The University Paris 13 supported this work. ASPT was supported by a University Paris 13 fellowship and the "Association Fran&#231;aise pour le Syndrome d'Ondine". FJ was supported by a Laboratory of Excellence GR-Ex fellowship. The GR-Ex (ref ANR-11-LABX-0051) is funded by the program "Investissement d'avenir" of the French National Research agency (ref ANR-11-IDEX-0005-02).

注：C-FOSの検出は、いくつかのステップ（ 図1）を含む標準化された手順です。全ての実験は、ラットまたはマウスで行いました。実験プロトコルは、動物実験チャールズ・ダーウィン（CE5 / 2011/05）に倫理委員会によって承認された動物のケアのために9月22日の欧州共同体理事会、2010（63分の2010 / EU）に基づいて行われ、に従って行いました動物のケアのためのフランスの法律に。 ソリューションの調製<ol><li> 0.2 Mリン酸ナトリウム緩衝液を準備します。攪拌しながら、6.24グラムののNaH 2 PO 4・2H 2 Oおよび22.56グラムのNa 2 HPO 4 *のH 2 Oを1リットルの蒸留水を追加します。 </li><li> 4％パラホルムアルデヒド（PFA）を準備します。蒸留水150ミリリットルにPFAの20グラムを追加します。攪拌しながら80℃に溶液を加熱します。解決策をクリアするには、熱を削減し、パラホルムアルデヒドが溶解を助けるために1 NのNaOHの1または2滴を追加します。 250ミリリットルへの完全な蒸留水で0.2 Mリン酸バッファー（pH 7.4）250 mlで加えます。 4℃で保存。これらの試薬を使用する際に適切な注意を払ってください。化学ボンネットの下に手袋、白衣、および安全ゴーグルで取り扱ってください。 注：灌流前日に4％PFAを準備します。年齢、数や動物の種の関数として、4％PFAの体積を決定します。 </li><li>凍結保護溶液を調製する：0.2 Mリン酸緩衝生理食塩水250ml中で、ポリビニルピロリドンを5g、スクロース150gの塩化ナトリウム2.5gを混合します。完全に溶解した後、エチレングリコールの150ミリリットルを追加し、蒸留水で500ミリリットルに調整します。 4℃で凍結保護ソリューションを保存してください。 </li><li> 0.1 Mリン酸緩衝生理食塩水（PBS）を準備します。攪拌しながら1 Lの蒸留水にNaClを18グラムを追加します。完全に溶解した後、リン酸ナトリウム緩衝液1Lの0.2 Mを加えます。 </li><li> 0.3％トリトンX100を補ったリン酸緩衝生理食塩水（PBST）を準備：トリトンX10の3ミリリットルを追加します。PBSの997ミリリットルに0。 </li><li> 0.05 Mトリス緩衝液（pH 7.6）を準備します。攪拌しながら蒸留水500ミリリットルにトリス - 塩酸塩の3.03グラムおよび0.70グラムトリスベースを追加します。 </li><li>一方のプレートのために、溶液30mlを準備しますPBST中の2％ヤギ血清を準備します。 30ミリリットルPBSTにヤギ血清の600μLを加え、よく混ぜます。ウェル当たり2.5ミリリットルを追加します。 注意：使用する血清を二次抗体産生のために使用される種から来なければなりません</li><li>ウシ血清アルブミン（0.25％）とのPBST中：（4000、SC-52 1）のc-FOSタンパク質に対するウサギポリクローナル抗体を準備します。一方のプレートのために、溶液30mlを準備します。 30ミリリットルPBSTにウシ血清アルブミン75mgのを加え、よく混ぜます。そして、C-FOSタンパク質に対するウサギポリクローナル抗体の7.5μlを添加します。 </li><li>血清アルブミン、ウシ（0.25％）でPBST中：ビオチン化ヤギ抗ウサギ抗体（1：500）を準備します。一方のプレートのために、溶液30mlを準備します。 30ミリリットルPBSTにウシ血清アルブミン75mgのを加え、よく混ぜます。その後、追加ビオチン化ヤギ抗ウサギ抗体60μlの。 </li><li>準備アビジン - ビオチン - ペルオキシダーゼ（1：250）複雑なPBST（ABC溶液）インチ一方のプレートのために、溶液30mlを準備します。 30ミリリットルPBSTに試薬A120μlの試薬Bの120μLを加え、よく混ぜます。 注：ABC溶液は、使用前に少なくとも30分を準備する必要があります。 </li><li>基質溶液を準備します。使用直前に、（1プレート用）、次のように溶液を調製：硫酸ニッケルアンモニウム20mgの、50mlのトリス緩衝液に3.3ジアミノベンジジン四塩酸塩10mgを追加します。フィルタ、光から保護します。ウェル当たり2.0ミリリットルを追加します。残りの溶液（26 mL）中のHの17μlの2 O 2（H 2 O 2溶液をH 2 O中30％）を加えます。ウェル当たり2.0ミリリットルを追加します。 注：これらの試薬を使用する際は、適切な注意が必要です。手袋と白衣で取り扱ってください。 </li></ol> 2. のc-fosの寄り付きインビボでの ctionと組織処理注意：実験は、ラット（スプラーグドーリー）またはマウス（C57BL / 6）で行いました。 <ol><li>低酸素（O 2 8％のバランスのとれたN 2）または2時間（ 図2A）のための高炭酸ガス（CO 2 4％、O 2 21％バランスのとれたN 2）ガスの混合物で換気気密ボックスに動物を配置します。 </li><li>ペントバルビタール（100mg / kg）の腹腔内注射で動物をAnaesthetize。 4％PFA 20で経動物を灌流。注意して処理し、化学フードの下で手袋を使用しています。 </li><li>灌流後、脳20を解剖し、4℃で48時間、15ミリリットルチューブに4％PFAの7ミリリットルでそれを浸します。その後、PFAから脳を除去し、凍結保護溶液中に完全に浸します。 -18℃（ 図3）で保存。適切な廃棄物処理PAによって、動物の体の残りの部分を処分thway。 注：凍結保護は、PFA固定と凍結の間の段差です。これは、凍結アモルファス形態であろう溶液と細胞内の氷の結晶の形成を減少させます。固定したサンプルは、4℃で少なくとも24時間（ステップ1.3で調製した）凍結保護溶液に含浸されている必要があります。化学フードの下ケアと手袋をして取り扱ってください。 </li></ol> 3. C-fosの誘導および組織処理エクスビボ 注：実験のみ新生ラットまたはマウスで行いました。 <ol><li>鈴江19で説明したようにCNSを分離します。記録チャンバーにそれを置き、26℃で21（aCSFので7.5ミリリットル/分の速度で人工脳脊髄液で連続的にそれを表面かん流する：mMの中で：130.0のNaCl、5.4のKCl、0.8のCaCl 2、1.0のMgCl 2、26.0 NaHCO 3、30.0 D-グルコース、O 2で飽和させ、95％O 2と5とのガス発生によりpH7.4に調整％CO 2）（ 図2B）。 </li><li> 95％のO 2とを通気低酸素症または10.0 mmまで減少NaHCO 3で酸性化にaCSF（標準aCSFのことで脱酸素化にaCSF（95％N 2及び5％CO 2、pH7.4で泡立て同じ組成）、とaCSFのを交換してください高炭酸ガス血症、5％CO 2）。 30分（ 図2B）のための刺激を適用します。 </li><li> ex vivoでは 、誘導期間の後に、後で使用する（ 図3）のための凍結保護溶液に-18℃で48時間、店舗、2.5 mlチューブに2.5ミリリットルの4％PFAで新生児マウスまたはラットのCNS ​​を移します。 注：ex vivoで 、動物を灌流する必要はありません。以前の研究は、直径10mm未満の測定小さな試料を単純拡散22によって固定され得ることを示唆しています。アルデヒドのための浸透の引用された率（組織への固定液拡散のためのミリメートルでの距離は、）2または3ミリメートル/ hrです。 </l私&gt; </ol> 4.脳​​幹セクショニング注：このステップから最後まで、プロトコルは、厳密にin vivoでおよびex vivoで誘導についても同様です。 <ol><li>スライスする前に、一人の個人が、12ウェルプレートに挿入し、各ウェルにPBSの2.5ミリリットルを追加配置します。 </li><li>クライオスタットと脳幹の連続冠状切片（40μm）を作成し、12ウェルプレート中でそれらを収集。全体の成人脳幹の場合、約70スライス（ 図3）を作ります。 注：それは一枚の板に並行していくつかの動物からセクション組織化することが可能です。 </li></ol> 5.免疫組織学的手順（表1） 注：手順では、セクションでは、ウェルインサートに残っています。 <ol><li> 1日目-内因性ペルオキシダーゼ活性の破壊、非特異的結合部位を遮断し、一次抗体とのインキュベーション（図4） <ol><li>ウォッシュRTで0.1 M PBSで10分間、切片（ウェル当たり2.5 ml）で。 3回繰り返します。 </li><li> 、過酸化水素H 2 O 2で室温にて30分間の冠状切片をインキュベートすることによって内因性ペルオキシダーゼ活性を抑制し、0.1M PBS（ウェル当たり2.5 mL）中の3％。 </li><li> RTで0.1 M PBS（ウェル当たり2.5 ml）で10分間のセクションを洗ってください。 3回繰り返します。 </li><li> PBST中のヤギ血清（2％）を用いて室温で1時間の冠状切片をインキュベートすることによって非特異的結合部位をブロックします。 </li><li>ウシ血清アルブミン（0.25％）（ウェル当たり2.5 ml）をPBSTで（4000、SC-52、1）C-FOSタンパク質に対するウサギポリクローナル抗体と共に4℃で48時間の冠状切片をインキュベートします。 </li></ol></li><li> 3日目-二次抗体と呈色反応の開発とのインキュベーション（図4） <ol><li>室温でPBS 0.1 M（ウェル当たり2.5ミリリットル）で10分間のセクションを洗ってください。 3回繰り返します。 </li><li>インキュベートウシ血清アルブミン（0.25％）（ウェル当たり2.5 ml）でPBST中：ビオチン化ヤギ抗ウサギ抗体（1：500）とともに室温で1時間冠状断面。 注：研究者はまた、この段階で蛍光プローブに結合された二次抗体を使用することができます。この場合には、この段階でプロトコルを停止し、蛍光顕微鏡を用いて直接調べます。 </li><li> RT（ウェル当たり2.5ミリリットル）でPBSTで10分間のセクションを洗ってください。 3回繰り返します。 </li><li>で1時間の冠状切片をインキュベートし、アビジン - ビオチン - ペルオキシダーゼ（1：250）錯体（ウェル当たり2.5ミリリットル）PBSTインチ</li><li> RT（ウェル当たり2.5ミリリットル）でPBSTで10分間のセクションを洗ってください。 2回繰り返します。 </li><li> RTで0.05 Mトリスバッファー（ウェル当たり2.5ミリリットル）で10分間のセクションを洗ってください。 2回繰り返します。 </li><li> 0.05 Mトリス緩衝液中の0.02％3.3ジアミノベンジジン四塩酸塩、0.04％ニッケル硫酸アンモニウムおよび0.01％の過酸化水素で冠状切片をインキュベートし（pHは7.6）AトンRT（ウェル当たり2.0ミリリットル）。残りの溶液（25mL）に加える17μlのH 2 O 2（H 2 O 2溶液をH 2 O中30％）（ウェル当たり2.0ml）を加えました。 注：研究者は、光学顕微鏡下で開発時間を決定する必要があります。しかし、5〜10分が良い染色強度を提供します。 </li><li>染色強度（光学顕微鏡の下で制御され、 図5及び図6を参照）が最適であるときに、室温で0.1MのPBS（ウェル当たり2.5 ml）で10分間、切片を洗浄することにより反応を停止させます。 4回繰り返します。その後、蒸留水で切片を洗浄します。 </li></ol></li><li> サンプリング取付（化学フードの下ケアと手袋とハンドル） <ol><li>シリアルにスライドし、空気乾燥した上でマウントセクション。このために、慎重にスライド上のブラシで吻側 - 尾側の順序でセクションを広げました。明らかに、サンプルに応じてスライドにラベルを付けます。 </li><li>絶対アルで脱水cohol：無水アルコール浴中に室温で30秒間スライドを浸します。二回繰り返します。 </li><li>キシレンでクリア：RTで3分間、キシレン浴にスライドを浸します。二回繰り返します。 </li><li>マウンティング媒体とスライドをカバースリップ。このため、スライド上に封入剤の5滴を適用し、気泡を駆動することにより、カバーガラスを適用します。空気乾燥48時間。 </li></ol></li></ol> 6.データと統計解析<ol><li>光学顕微鏡下でセクションを調べます。視覚的に標準的なランドマーク23,24を用いて、高倍率（200倍）でFLIニューロンを数えます。 c-Fosの点状の染色は、神経細胞の核内に局在しています。 </li><li>各分析領域について、セクションごとのc-FOS陽性細胞の数をカウントし、コントロールと条件を刺激間の平均数を比較。データの正規性に応じて、 対応のないスチューデントt検定またはマンホイットニー検定を使用します。差はPであれば有意とみなしました0; 0.05。描画チューブ顕微鏡に取り付けられ、デジタルカメラで撮影した（ 図5）を使用して描画する（倍率100倍）へFLIニューロンの分布をプロットします。 </li></ol>

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B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mouse brain in stereotaxic coordinates. , (2001).</li><li>Berquin, P., Bodineau, L., Gros, F., Larnicol, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brainstem+and+hypothalamic+areas+involved+in+respiratory+chemoreflexes:+a+Fos+study+in+adult+rats.">Brainstem and hypothalamic areas involved in respiratory chemoreflexes: a Fos study in adult rats.</a> Brain Res. 857, 30-40 (2000).</li><li>Berquin, P., Cayetanot, F., Gros, F., Larnicol, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+changes+in+Fos-like+immunoreactivity+evoked+by+hypoxia+in+the+rat+brainstem+and+hypothalamus.">Postnatal changes in Fos-like immunoreactivity evoked by hypoxia in the rat brainstem and hypothalamus.</a> Brain Res. 877, 149-159 (2000).</li><li>Bodineau, L., Cayetanot, F., Frugiere, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fos+study+of+ponto-medullary+areas+involved+in+the+in+vitro+hypoxic+respiratory+depression.">Fos study of ponto-medullary areas involved in the in vitro hypoxic respiratory depression.</a> Neuroreport. 12, 3913-3916 (2001).</li><li>Takakura, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+chemoreceptor+inputs+to+retrotrapezoid+nucleus+(RTN)+CO2-sensitive+neurons+in+rats.">Peripheral chemoreceptor inputs to retrotrapezoid nucleus (RTN) CO2-sensitive neurons in rats.</a> J Physiol. 572, 503-523 (2006).</li><li>Mulkey, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+control+by+ventral+surface+chemoreceptor+neurons+in+rats.">Respiratory control by ventral surface chemoreceptor neurons in rats.</a> Nat Neurosci. 7, 1360-1369 (2004).</li><li>Finley, J. C., Katz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+central+organization+of+carotid+body+afferent+projections+to+the+brainstem+of+the+rat.">The central organization of carotid body afferent projections to the brainstem of the rat.</a> Brain Res. 572, 108-116 (1992).</li><li>Bodineau, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Data+supporting+a+new+physiological+role+for+brain+apelin+in+the+regulation+of+hypothalamic+oxytocin+neurons+in+lactating+rats.">Data supporting a new physiological role for brain apelin in the regulation of hypothalamic oxytocin neurons in lactating rats.</a> Endocrinology. 152, 3492-3503 (2011).</li><li>Okada, Y., Chen, Z., Jiang, W., Kuwana, S., Eldridge, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+arrangement+of+hypercapnia-activated+cells+in+the+superficial+ventral+medulla+of+rats.">Anatomical arrangement of hypercapnia-activated cells in the superficial ventral medulla of rats.</a> J Appl Physiol (1985). 93, 427-439 (2002).</li><li>Saadani-Makki, F., Frugiere, A., Gros, F., Gaytan, S., Bodineau, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+adenosinergic+A1+systems+in+the+occurrence+of+respiratory+perturbations+encountered+in+newborns+following+an+in+utero+caffeine+exposure.+a+study+on+brainstem-spinal+cord+preparations+isolated+from+newborn+rats.">Involvement of adenosinergic A1 systems in the occurrence of respiratory perturbations encountered in newborns following an in utero caffeine exposure. a study on brainstem-spinal cord preparations isolated from newborn rats.</a> Neuroscience. 127, 505-518 (2004).</li><li>Morgan, J. I., Cohen, D. R., Hempstead, J. L., Curran, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+patterns+of+c-fos+expression+in+the+central+nervous+system+after+seizure.">Mapping patterns of c-fos expression in the central nervous system after seizure.</a> Science. 237, 192-197 (1987).</li><li>Sagar, S. M., Sharp, F. R., Curran, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+c-fos+protein+in+brain:+metabolic+mapping+at+the+cellular+level.">Expression of c-fos protein in brain: metabolic mapping at the cellular level.</a> Science. 240, 1328-1331 (1988).</li><li>Herdegen, T., Kovary, K., Leah, J., Bravo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+temporal+and+spatial+distribution+of+JUN,+FOS,+and+KROX-24+proteins+in+spinal+neurons+following+noxious+transsynaptic+stimulation.">Specific temporal and spatial distribution of JUN, FOS, and KROX-24 proteins in spinal neurons following noxious transsynaptic stimulation.</a> J Comp Neurol. 313, 178-191 (1991).</li><li>Marina, N., Morales, T., Diaz, N., Mena, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suckling-induced+activation+of+neural+c-fos+expression+at+lower+thoracic+rat+spinal+cord+segments.">Suckling-induced activation of neural c-fos expression at lower thoracic rat spinal cord segments.</a> Brain Res. 954, 100-114 (2002).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

C-FOSの前初期遺伝子であり、その生成物の検出は、C-FOSタンパク質は、古典的なインビボ 11,13,25,28 内の特定の呼吸応答に関与する神経細胞集団を同定するために使用され、 エクスビボで 16-18、 27,32,33。 議定書の中で重要なステップ 灌流工程​​の間には注意してください。 4％PF...

C-fosの遺伝子は、1980 1,2の初めに初めて同定し、その産物は、遺伝子活性化剤の特性3,4を有する核タンパク質として1984年に特徴づけられました。これは、ニューロンの刺激に関連した長期的なメカニズムに参加しています。実際に、ニューロンの活性の変化は、転写因子のc-FOSの産生を誘導する前初期遺伝子c-FOSの発現を誘導する二次メッセンジャーシグナル伝達カスケードにつながります。後者は、後期遺伝子の発現を開始し、したがって、刺激4多くの異なる種類の神経系の適応応答に関与しています。したがって、1980 5,6の端部から、C-FOSタンパク質の検出は、しばしば、ニューロン経路をマッピングするための一般的な4および中枢神経系（CNS）の活性に遺伝子転写の外因性因子の効果を研究するために使用されています異なる生理学的に関与アル条件。 基底のc-fosの発現は、マウス、ラット、ネコ、サル、およびヒトの4を含む様々な種において研究されています。これにより、その発現の動態は比較的よく知られています。転写活性化は、（5〜20分）7,8迅速であり、かつmRNA蓄積を刺激9の発症後30〜45分の間で最大に達し、12分の短い半減期で低下します。 C-FOSタンパク質合成は、mRNAの蓄積に続く、20〜90分後に刺激6で免疫組織化学によって検出することができました。 c-fosの発現の分析は、古典的低酸素症または高炭酸ガス10-14への換気応答に関与する中心的な呼吸ネットワークを識別するために、in vivo試験で使用されています。最近では、このツールはまた、低酸素症またはhに中央呼吸ネットワーク適応を探索するためにex vivoで脳幹の製剤で使用されましたypercapnia 15-18。確かに、これらの製剤は、古典的に中央呼吸ドライブ19に同化リズミカルな活動を生成します。従って、製剤のこのタイプは、完全に求心路遮断であるという利点を有し、従って、C-fosの発現についての結果は、周辺構造の介入なしに、中央の刺激の結果を反映します。 C-FOSの検出は、免疫組織化学的または免疫組織蛍光アプローチによって行うことができます。間接的な免疫は、c-FOSに対する一次抗体と一次抗体が産生された種に対して指向二次抗体の使用を必要とします。免疫組織化学法のために、二次抗体は、基質（ペルオキシダーゼH 2 O 2）に作用する酵素（例えばペルオキシダーゼ）にコンジュゲートされています。酵素反応の生成物は、色原体（3.3ジアミノベンジジンtetrahydrochloridによって開発されていますE）、それを染色し、光学顕微鏡下で観察することができます。反応は、ニッケル硫酸アンモニウムを用いて強化することができます。これらの方法は、異なる生理学的な課題中の活性物質の神経細胞の検出、したがって、同定および/または連続した生理的応答に関与末梢および中枢経路のマッピングを可能にします。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cell culture plate 12-Well</td>
			<td style="width:71px;">Costa</td>
			<td style="width:119px;">35/3</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="106">
			<td height="106" style="height:107px;width:216px;">15 mm Netwell inserts with mesh polyester membrane</td>
			<td style="width:71px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3477</td>
			<td style="width:167px;">The 15mm diameter well inserts have 74&#181;m polyester mesh bottoms attached to polystyrene inserts</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:216px;">primary antibody (rabbit polyclonal antibody against the c-Fos protein)</td>
			<td style="width:71px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:119px;">sc-52</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Vectastain Elite ABC KIT&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:71px;">Vector laboratories</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">PK-6101</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">(Rabbit IgG-secondary antibody)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaH2PO4*2H2O</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">71505</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Na2HPO4</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S7907</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P6148</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaOH 0.1N</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">43617</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Polyvinyl-Pyrrolidone</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">PVP-360</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sucrose</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S7903</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S7653</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethylene-glycol</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">33068</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Triton X100</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T8787</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trisma HCl</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T5941</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trisma Base</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T1503</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">3.3-diaminobenzidine tetrahydrochloride&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Rockland</td>
			<td style="width:119px;">DAB50</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nickel ammonium sulphate</td>
			<td style="width:71px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:119px;">12519</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">H2O2</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">H1009</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylene</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">33817</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Entellan Neo</td>
			<td style="width:71px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">107961</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Slide&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Thermo-scientific</td>
			<td style="width:119px;">1014356190</td>
			<td style="width:167px;">Superfrost ultraplus</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cover glass</td>
			<td style="width:71px;">Thermo-scientific</td>
			<td style="width:119px;">Q10143263NR1</td>
			<td style="width:167px;">24 x 60mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">BSA</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">A2153</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the c-fos protein immunohistological detection: a useful tool as a marker of central pathways involved in specific physiological responses in vivo and ex vivo

多くの研究は、特定の生理的な規制に関与する脳領域を特定し、マップしようとしています。癌原遺伝子C-FOS、前初期遺伝子は、種々の刺激に応答してニューロンで発現されます。タンパク質生成物は、容易にそれらの活性の変化を表示するニューロンのグループをマップするC-FOSの検出の使用につながる、免疫組織化学的技術を用いて検出することができます。この記事では、低酸素症または高炭酸ガスに換気の適応に関与脳幹ニューロン集団の同定に焦点を当てました。 2つのアプローチが、動物の生体内で関与する神経細胞集団を同定することが記載され、ex vivoでの求心路遮断脳幹準備インチインビボ 、動物は。高炭酸ガスまたは低酸素ガス混合物にさらされたex vivoで 、求心路遮断準備が低酸素や高炭酸ガス人工脳脊髄液で灌流しました。両方の場合において、いずれかの制御インビボ動物またはE でX vivoでの製剤は、正常酸素とnormocapnic条件下で維持しました。これら二つのアプローチの比較は、インビボにおいて 、末梢および/ ​​または中枢ニューロンの活性化、すなわちの起源の決意を可能にし、 エクスビボ 、brainstemsを集め、固定し、切片にスライスしました。切片を調製した後、C-FOSタンパク質の免疫組織化学的検出は、低酸素または高炭酸ガス刺激によって活性化された細胞の脳幹のグループを識別するためになされました。標識された細胞は、脳幹の呼吸器の構造で計数しました。対照条件と比較して、低酸素症または高炭酸ガス血症は、c-FOSの数を増加させ、したがって、中央呼吸ドライブの適応に関与するニューロン経路の構成されているいくつかの特定の脳幹部位で細胞を標識しました。

c-FOSの検出は、 生体内 （ 図2A） における低酸素および高炭酸ガス血症として、またはこれらの条件のex vivo（ 図2B）を模倣する状況では、特定の条件下で活性化された細胞の識別グループを可能にする便利なツールです。 インビボ 、新生児、若いです、または成人の齧歯類は、ガス環境が継続的に正確に30〜180分<...

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The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

C-FOSタンパク質免疫組織学的検出：特定の生理反応に関与する中央経路のマーカーとして有用ツール<em&gt;インビボ</em&gt;と<em&gt; ex vivoで</em

Here, we present a protocol based on c-FOS protein immunohistological detection, a classical technique used for the identification of neuronal populations involved in specific physiological responses in vivo and ex vivo.

Many studies seek to identify and map the brain regions involved in specific physiological regulations. The proto-oncogene c-fos, an immediate early gene, ...

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Research

JoVE Journal

Biology

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

33.3K ビュー.  University Paris 13. Here, we present a protocol based on c-FOS protein immunohistological detection, a classical technique used for the identification of neuronal populations involved in specific physiological responses in vivo and ex vivo.

ビデオ: The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

Single Cell Electroporation in vivo within the Intact Developing Brain

Single-cell electroporation (SCE) is a specialized technique allowing the delivery of DNA or other macromolecules into individual cells within intact tissue, including in vivo preparations. The distinct advantage of this technique is that experimental manipulations may be performed on individual cells while leaving the surrounding tissue unaltered, thereby distinguishing cell-autonomous effects from those resulting from global treatments. When combined with advanced in vivo imaging techniques, SCE of fluorescent markers permits direct visualization of cellular morphology, cell growth, and intracellular events over timescales ranging from seconds to days. While this technique is used in a variety of in vivo and ex vivo preparations, we have optimized this technique for use in Xenopus laevis tadpoles. In this video article, we detail the procedure for SCE of a fluorescent dye or plasmid DNA into neurons within the intact brain of the albino Xenopus tadpole. We also discuss methods to optimize yield, and show examples of live two-photon fluorescence imaging of neurons fluorescently labeled by SCE.

Single-cell electroporation (SCE) is a specialized technique allowing delivery of DNA or other macromolecules into individual cells within intact tissue, including in vivo preparations. Here we detail the procedure for SCE of a fluorescent dye or plasmid DNA into neurons within the intact brain of the Xenopus laevis tadpole.

無傷の開発脳内の生体内の単一細胞のエレクトロポレーション

Single-cell electroporation (SCE) is a specialized technique allowing the delivery of DNA or other macromolecules into individual cells within intact ...

生物学

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ideal tool for studying  the formation and patterning of brain, neural tube, somite and heart primordia. Applications of chick embryo culture include electroporation of DNA or RNA constructs in order to analyze gene function, grafts of growth factor coated beads such as FGFs and BMPs , as well as whole mount in situ hybridization and immunohistochemistry. This video demonstrates the different steps in chick embryo culture; First, the embryo is explanted in saline. Then, the embryo is centered on a glass ring. The membranes surrounding the embryo are lifted along the walls of the ring. The ring is then placed in a culture dish containing a pool of albumine. The culture dish is sealed and placed in a humid chamber, where the embryo is cultured for up to 24 hrs. Finally, the embryo is removed from the ring, fixed and processed for further applications. A troubleshooting guide is also presented.

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

This video demonstrates New culture, a method by which chick embryos are cultured outside the egg for up to 24 hr. This method enables one to study early development (primitive streak to 14 som.), a period corresponding to E7-9 in mouse. Applications of this technique include electroporation, in situ hybridization and immunohistochemistry.

初期のニワトリ胚をex vivo（新文化）の文化のための方法

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell differentiation, axon guidance, retinotopic organization and synapse formation[1]. One drawback is the inability to efficiently and reliably manipulate gene expression in RGCs in vivo, especially in the otherwise accessible murine visual pathways. Transgenic mice can be used to manipulate gene expression, but this approach is often expensive, time consuming, and can produce unwanted side effects. In chick, in ovo electroporation is used to manipulate gene expression in RGCs for examining retina and RGC development. Although similar electroporation techniques have been developed in neonatal mouse pups[2], adult rats[3], and embryonic murine retinae in vitro[4], none of these strategies allow full characterization of RGC development and axon projections in vivo. To this end, we have developed two applications of electroporation, one in utero and the other ex vivo, to specifically target embryonic murine RGCs[5, 6]. 
With in utero retinal electroporation, we can misexpress or downregulate specific genes in RGCs and follow their axon projections through the visual pathways in vivo, allowing examination of guidance decisions at intermediate targets, such as the optic chiasm, or at target regions, such as the lateral geniculate nucleus. Perturbing gene expression in a subset of RGCs in an otherwise wild-type background facilitates an understanding of gene function throughout the retinal pathway. Additionally, we have developed a companion technique for analyzing RGC axon growth in vitro. We electroporate embryonic heads ex vivo, collect and incubate the whole retina, then prepare explants from these retinae several days later. Retinal explants can be used in a variety of in vitro assays in order to examine the response of electroporated RGC axons to guidance cues or other factors. In sum, this set of techniques enhances our ability to misexpress or downregulate genes in RGCs and should greatly aid studies examining RGC development and axon projections.

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

Here we present two techniques for manipulating gene expression in murine retinal ganglion cells (RGCs) by in utero and ex vivo electroporation. These techniques enable one to examine how alterations in gene expression affect RGC development, axon guidance, and functional properties.

マウス網膜神経節細胞における遺伝子発現のための子宮内および生体外でのエレクトロポレーションで

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

In-vivo Detection of Protein-protein Interactions on Micro-patterned Surfaces

Unraveling the interaction network of molecules in-vivo is key to understanding the mechanisms that regulate cell function and metabolism. A multitude of methodological options for addressing molecular interactions in cells have been developed, but most of these methods suffer from being rather indirect and therefore hardly quantitative. On the contrary, a few high-end quantitative approaches were introduced, which however are difficult to extend to high throughput. To combine high throughput capabilities with the possibility to extract quantitative information, we recently developed a new concept for identifying protein-protein interactions (Schwarzenbacher et al., 2008). Here, we describe a detailed protocol for the design and the construction of this system which allows for analyzing interactions between a fluorophore-labeled protein ("prey") and a membrane protein ("bait") in-vivo. Cells are plated on micropatterned surfaces functionalized with antibodies against the bait exoplasmic domain. Bait-prey interactions are assayed via the redistribution of the fluorescent prey. The method is characterized by high sensitivity down to the level of single molecules, the capability to detect weak interactions, and high throughput capability, making it applicable as screening tool.

In-vivo Detection of Protein-protein Interactions on Micro-patterned Surfaces

This video shows experiments with subsequent analysis of protein-protein interactions by the use of micro-patterned surfaces. The approach offers the possibility to detect protein interactions in living cells and combines high throughput capabilities with the possibility to extract quantitative information.

マイクロパターン化表面でのタンパク質間相互作用の in vivo検出

Unraveling the interaction network of molecules in-vivo is key to understanding the mechanisms that regulate cell function and metabolism. A multitude of ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway that polypeptide chain follows during co-translational folding to achieve its functional form is still an enigma. In order to understand this process and to determine the exact conformation of the co-translational folding intermediates, it is essential to develop techniques that allow the isolation of RNCs carrying nascent chains of predetermined sizes to allow their further structural analysis.
SecM (secretion monitor) is a 170 amino acid E. coli protein that regulates expression of the downstream SecA (secretion driving) ATPase in the secM-secA operon6. Nakatogawa and Ito originally found that a 17 amino acid long sequence (150-FSTPVWISQAQGIRAGP-166) in the C-terminal region of the SecM protein is sufficient and necessary to cause stalling of SecM elongation at Gly165, thereby producing peptidyl-glycyl-tRNA stably bound to the ribosomal P-site7-9. More importantly, it was found that this 17 amino acid long sequence can be fused to the C-terminus of virtually any full-length and/or truncated protein thus allowing the production of RNCs carrying nascent chains of predetermined sizes7. Thus, when fused or inserted into the target protein, SecM stalling sequence produces arrest of the polypeptide chain elongation and generates stable RNCs both in vivo in E. coli cells and in vitro in a cell-free system. Sucrose gradient centrifugation is further utilized to isolate RNCs.
The isolated RNCs can be used to analyze structural and functional features of the co-translational folding intermediates. Recently, this technique has been successfully used to gain insights into the structure of several ribosome bound nascent chains10,11. Here we describe the isolation of bovine Gamma-B Crystallin RNCs fused to SecM and generated in an in vitro translation system.

We describe here a technique that is now routinely used to isolate stably bound ribosome nascent chain complexes (RNCs). This technique takes advantage of the discovery that a 17 amino acid long SecM "arrest sequence" can halt translation elongation in a prokaryotic (E. coli) system, when inserted into (or fused to the C-terminus) of virtually any protein.

リボソーム結合したポリペプチドを単離するためのツールと​​してSECM逮捕シーケンスを使用して、

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

Developmental studies in the mouse are hampered by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to isolate and culture individual organs of interest are essential to provide a method of both visualizing changes in development and allowing novel treatment strategies. To promote the long-term culture of the embryonic heart at late stages of gestation, we developed a protocol in which the excised heart is cultured in a semi-solid, dilute Matrigel. This substrate provides enough support to maintain the three-dimensional structure but is flexible enough to allow continued contraction. In brief, hearts are excised from the embryo and placed in a mixture of cold Matrigel diluted 1:1 with growth medium. After the diluted Matrigel solidifies, growth medium is added to the culture dish. Hearts excised as late as embryonic day 16.5 were viable for four days post-dissection. Analysis of the coronary plexus shows that this method does not disrupt coronary vascular development. Thus, we present a novel method for long-term culture of embryonic hearts.

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

Developmental studies in the mouse are hampered by the inaccessibility of the embryo during gestation. To promote the long-term culture of the embryonic heart at late stages of gestation, we developed a protocol in which the excised heart is cultured in a semi-solid, dilute Matrigel.

小説<em&gt;エクスビボ</emマウス胎児ハート&gt;文化法

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a versatile analytical tool for characterizing viscoelastic mechanical properties for a variety of materials ranging from hard (plastic, glass, metal, etc.) surfaces to cells on any substrate. It has been widely used to measure the stiffness of cells, but less frequently used to measure the stiffness of aortas. In this paper, we will describe the procedures for using AFM in contact mode to measure the ex vivo elastic modulus of unloaded mouse arteries. We describe our procedure for isolation of mouse aortas, and then provide detailed information for the AFM analysis. This includes step-by-step instructions for alignment of the laser beam, calibration of the spring constant and deflection sensitivity of the AFM probe, and acquisition of force curves. We also provide a detailed protocol for data analysis of the force curves.

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

We present detailed protocols for isolation of aortas from mouse and measurement of their elastic modulus using atomic force microscopy.

の剛性を測定します<em&gt; ex vivoで</em原子間力顕微鏡を使用&gt;マウス大動脈

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

In Vivo Detection and Analysis of Rb Protein SUMOylation in Human Cells

The post-translational modifications of proteins are critical for the proper regulation of intracellular signal transduction. Among these modifications, small ubiquitin-related modifier (SUMO) is a ubiquitin-like protein that is covalently attached to the lysine residues of a variety of target proteins to regulate cellular processes, such as gene transcription, DNA repair, protein interaction and degradation, subcellular transport, and signal transduction. The most common approach to detecting protein SUMOylation is based on the expression and purification of recombinant tagged proteins in bacteria, allowing for an in vitro biochemical reaction which is simple and suitable for addressing mechanistic questions. However, due to the complexity of the process of SUMOylation in vivo, it is more challenging to detect and analyze protein SUMOylation in cells, especially when under endogenous conditions. A recent study by the authors of this paper revealed that endogenous retinoblastoma (Rb) protein, a tumor suppressor that is vital to the negative regulation of the cell cycle progression, is specifically SUMOylated at the early G1 phase. This paper describes a protocol for the detection and analysis of Rb SUMOylation under both endogenous and exogenous conditions in human cells. This protocol is appropriate for the phenotypical and functional investigation of the SUMO-modification of Rb, as well as many other SUMO-targeted proteins, in human cells.

In Vivo Detection and Analysis of Rb Protein SUMOylation in Human Cells

Small ubiquitin-related modifier (SUMO) family proteins are conjugated to the lysine residues of target proteins to regulate various cellular processes. This paper describes a protocol for the detection of retinoblastoma (Rb) protein SUMOylation under endogenous and exogenous conditions in human cells.

生体内でRb タンパク質 sumo 化ひと細胞の検出と解析

The post-translational modifications of proteins are critical for the proper regulation of intracellular signal transduction. Among these modifications, ...

Visualization and Quantification of Mesenchymal Cell Adipogenic Differentiation Potential with a Lineage Specific Marker

Several dyes are currently available for use in detecting differentiation of mesenchymal cells into adipocytes. Dyes, such as Oil Red O, are cheap, easy to use and widely utilized by laboratories analyzing the adipogenic potential of mesenchymal cells. However, they are not specific to changes in gene transcription. We have developed a gene-specific differentiation assay to analyze when a mesenchymal cell has switched its fate to an adipogenic lineage. Immuno-labelling against fatty acid binding protein-4 (FABP4), a lineage-specific marker of adipogenic differentiation, enabled visualization and quantification of differentiated cells. The ability to quantify adipogenic differentiation potential of mesenchymal cells in a 96 well microplate format has promising implications for a number of applications. Hundreds of clinical trials involve the use of adult mesenchymal stromal cells and it is currently difficult to correlate therapeutic outcomes within and especially between such clinical trials. This simple high-throughput FABP4 assay provides a quantitative assay for assessing the differentiation potential of patient-derived cells and is a robust tool for comparing different isolation and expansion methods. This is particularly important given the increasing recognition of the heterogeneity of the cells being administered to patients in mesenchymal cell products. The assay also has potential utility in high throughput drug screening, particularly in obesity and pre-diabetes research.

Traditional methods of assessing adipogenic differentiation are cheap and easy to use, but are not specific to changes in gene expression. We have developed an assay to quantify mesenchymal cell differentiation into mature adipocytes using a lineage specific marker. This assay has diverse applications across basic research and clinical medicine.

可視化と系統特異的マーカーと間葉系細胞脂肪細胞の微分の潜在性の定量化

Several dyes are currently available for use in detecting differentiation of mesenchymal cells into adipocytes. Dyes, such as Oil Red O, are cheap, easy ...

C-FOSタンパク質免疫組織学的検出：特定の生理反応に関与する中央経路のマーカーとして有用ツール

要約

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無傷の開発脳内の生体内の単一細胞のエレクトロポレーション

初期のニワトリ胚をex vivo（新文化）の文化のための方法

マウス網膜神経節細胞における遺伝子発現のための子宮内および生体外でのエレクトロポレーションで

マイクロパターン化表面でのタンパク質間相互作用の in vivo検出

リボソーム結合したポリペプチドを単離するためのツールとしてSECM逮捕シーケンスを使用して、

小説

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

の剛性を測定します

生体内でRb タンパク質 sumo 化ひと細胞の検出と解析

可視化と系統特異的マーカーと間葉系細胞脂肪細胞の微分の潜在性の定量化

C-FOSタンパク質免疫組織学的検出：特定の生理反応に関与する中央経路のマーカーとして有用ツール

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無傷の開発脳内の生体内の単一細胞のエレクトロポレーション

初期のニワトリ胚をex vivo（新文化）の文化のための方法

マウス網膜神経節細胞における遺伝子発現のための子宮内および生体外でのエレクトロポレーションで

マイクロパターン化表面でのタンパク質間相互作用の in vivo検出

リボソーム結合したポリペプチドを単離するためのツールと​​してSECM逮捕シーケンスを使用して、

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