Name: an in vivo murine sciatic nerve model of perineural invasion
Uploaded: 2018-04-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 55 s
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著者らは、分子細胞診施設、メモリアルスローンケタ リング癌センターの動物施設によって提供される技術サービスをご了承ください。この作品は、NIH 助成金 CA157686 (r. j. ウォン) と P30 CA008748 によって支持された (メモリアルスローンケタ リングがんセンター助成金)。

すべての動物の主題のプロシージャは機関動物ケア、メモリアルスローンケタ リング癌センターで利用委員会によって承認されました。
1. がん細胞の調製
<ol><li>37 ° C で 5 分間 0.25% トリプシン サブ合流する Panc02 H7 セルを収穫します。15 mL 遠心管の細胞を収集します。 注: セルは、80% の confluency と 4 mL のトリプシンでフラスコあたり約 12 × 106セル T-225 フラスコで育つ/フラスコを使用します。</li>
	<li>5 分洗って再細胞による細胞 (でピペッティングを上下 2 回)、1 mL の PBS でペレット、氷の懸濁液を 1.5 mL 遠心チューブに転送のための 4 ° C で 900 g x で細胞を遠心します。</li>
	<li>4 ° C、5 分で 900 g x で再び細胞を遠心し、ペレットを乱すことがなく上澄みを廃棄します。注射まで氷の上小球形にされた細胞を保ちます。</li>
</ol>2. マウスや手術の準備
メモ: この研究では 8 週齢、男性と女性の c57bl/6 j マウス使用します。手術条件当院の IACUC 規則に従います。器具を滅菌、手術の作業面の消毒、動物の消毒、外科医は、滅菌手袋を着用します。
<ol><li>手術前に日に 2% イソフルランを使用してマウスを麻酔、薄いかみそりまたは化学毛の除去剤で背側の大腿骨の長さに沿う毛皮を取り外します。</li>
	<li>手術の日、部屋に誘導 2 %isofluorane を用いたマウスを麻酔します。つま先ピンチ刺激と応答の欠如によって anesthetization を確認します。</li>
	<li>麻酔下での乾燥を防ぐため目に獣医軟膏を適用します。</li>
	<li>腹側に麻酔下のマウスを置き、ゆっくり注入するのには、手足に軽い張力を作成する低刺激性のテープで各のリムを保護します。麻酔はイソフルレン ノーズコーンと精度気化器を介して配信を使用して維持されます。</li>
	<li>その後、再び 70% アルコールで Betadine で注射部位をきれい。さらに 2 回繰り返します。手術野の緩い毛が残っていないことを確認します。</li>
	<li>小さなハサミと大腿骨平行に下約 2 mm で 1 cm の切開を確認します。下にある筋肉を公開するために横方向にピンセットで皮膚を撤回します。</li>
	<li>坐骨神経は、大殿筋と大腿二頭筋の筋への深い実行されます。小さなハサミで筋膜平面に沿ってこれらの 2 つの筋肉を分離し、下に坐骨神経を公開します。鈍的切離を使用して周囲の筋肉から神経を解放します。</li>
	<li>10 μ L のシリンジにペレットから癌細胞 (約 50,000 細胞) の 3 μ L を描画します。 注: 別の方法として、コントロールとして 3 μ L の PBS を描画します。</li>
	<li>サポートのために注射の時点で神経の下に小さな金属のヘラを配置します。解剖顕微鏡で観察、下で挿入時に可能な限り神経を並列として針を維持する、金属ベースに対して神経に針を挿入します。神経の背面を穿刺しないように注意します。このプロセス全体を通じて、できるだけ神経の処理を最小限に抑えます。</li>
	<li>神経 5 以上にゆっくりと注入 s。噴射領域での球根の形成は良い注入を示します。3 のための場所で針を残してそっと針を削除する前に s。3 のための場所で針を維持する s 神経から細胞の逆流を最小限に抑えます。 注: 末梢神経や脊髄に向かって注入が行えます。実験のセット内で一貫性を維持することが重要です。場合は、細胞は、外流出、実験における動物を含めない。経験と、これらのイベントは非常にまれです。</li>
	<li>神経を元の位置に戻ります。覆っている筋肉と神経をカバーします。適切な鎮痛を持つマウスを治療し、5-0 ナイロン縫合糸で皮膚を閉じます。</li>
	<li>それは完全に麻酔から覚醒するまで、復旧中に観察のためきれいなケージで一人でマウスを配置します。 注: それは完全な意識を取り戻すために動物のための 5-15 分かかります。それは胸骨の横臥を維持するために十分な意識を取り戻したまで動物は放置しません。動物は他の動物を完全に回復するまでの会社に返されません。その後、少なくとも 72 時間のすべての 24 h の回復を評価します。</li>
</ol>3. 坐骨神経抽出
<ol><li>Postop 日 #7、CO2を持つマウスを安楽死させます。腹側にマウスを置き、ピンを使用して遠位四肢を安定します。</li>
	<li>注入された手足と胴体の背側の皮膚を削除します。</li>
	<li>鈍的切離を使用、深い筋肉に坐骨神経を公開します。</li>
	<li>腸骨と仙骨の間の神経のコース。脊髄領域における神経へのアクセスを持っている、2 つの骨を区切ります。まず坐骨神経がある狭い領域で閉じたハサミを挿入し、マウスを押しながらはさみを開きます。繊細し、解剖中坐骨神経の整合性を維持します。</li>
	<li>慎重に、大腿骨骨端を遠位と近位脊髄に坐骨神経を解剖します。</li>
	<li>注: 侵略の神経は非常に壊れやすく、引張り破断や強制的な処理になりやすいです。</li>
	<li>最初の遠位端を切断することによって神経を収穫します。隣接組織から解放しながら神経を慎重に持ち上げます。近位端、脊柱から出口にできるだけ近くで神経を切る。</li>
	<li>記録し、ノギスを使用して侵入の総長さ。このマクロ的推定は示しています。</li>
</ol>4. 神経処理と定量
<ol><li>10 月化合物に切り裂かれた神経を埋め込みます。神経を縦に配置することを確認して、できるだけモールドの底部の平らを確認します。</li>
	<li>カセットの P と D の文字をマークすることによって神経の近位および遠位側を示す</li>
	<li>彼らはすぐに区分がない場合は、ドライの氷の上に埋め込まれた神経を配置します。サンプルは、数週間-80 ° C で保存可能性があります。</li>
	<li>クライオスタット ミクロトームを使用してスライド ガラスに 5 μ m の厚さと場所セクションでセクションのサンプル。可能であれば、合わせて 2 神経セクションごとにスライド。神経の近位側を示します。</li>
	<li>H & E 染色12を使用してスライドを染色します。</li>
	<li>デジタル高解像度デジタル データを提供するスライド スキャナーで汚された神経のセクションをスキャンします。</li>
	<li>測定距離ボタンをクリックして侵略の長さを定量化するイメージング ソフトウェアを使用して、侵入、または他の領域はパラメーターを希望します。侵略の長さの良い推定、同じ神経の複数のセクション (2、4) を使用します。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Liebig, C., Ayala, G., Wilks, J. A., Berger, D. H., Albo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perineural+invasion+in+cancer.">Perineural invasion in cancer.</a> Cancer. 115 (15), 3379-3391 (2009).</li><li>Bapat, A. A., Hostetter, G., Von Hoff, D. D., Han, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perineural+invasion+and+associated+pain+in+pancreatic+cancer.">Perineural invasion and associated pain in pancreatic cancer.</a> Nat Rev Cancer. 11 (10), 695-707 (2011).</li><li>Deborde, S., Wong, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+Schwann+cells+facilitate+cancer+progression+in+nerves.">How Schwann cells facilitate cancer progression in nerves.</a> Cell Mol Life Sci. 341 (177-186), 1236361-1236416 (2017).</li><li>Abiatari, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consensus+transcriptome+signature+of+perineural+invasion+in+pancreatic+carcinoma.">Consensus transcriptome signature of perineural invasion in pancreatic carcinoma.</a> Mol Cancer Ther. 8 (6), 1494-1504 (2009).</li><li>Ayala, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+dorsal+root+ganglia+and+human+prostate+cell+line+interaction:+redefining+perineural+invasion+in+prostate+cancer.">In vitro dorsal root ganglia and human prostate cell line interaction: redefining perineural invasion in prostate cancer.</a> Prostate. 49 (3), 213-223 (2001).</li><li>Gil, Z., Cavel, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+regulation+of+pancreatic+cancer+cell+invasion+by+peripheral+nerves.">Paracrine regulation of pancreatic cancer cell invasion by peripheral nerves.</a> J Natl Cancer Inst. 102 (2), 107-118 (2010).</li><li>Deborde, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+induce+cancer+cell+dispersion+and+invasion.">Schwann cells induce cancer cell dispersion and invasion.</a> J Clin Invest. 126 (4), 1538-1554 (2016).</li><li>Pour, P. M., Egami, H., Takiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+growth+and+metastases+of+induced+pancreatic+cancer+in+relation+to+the+prognosis+and+its+clinical+implications.">Patterns of growth and metastases of induced pancreatic cancer in relation to the prognosis and its clinical implications.</a> Gastroenterology. 100 (2), 529-536 (1991).</li><li>Eibl, G., Reber, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+xenograft+nude+mouse+model+for+perineural+invasion+and+recurrence+in+pancreatic+cancer.">A xenograft nude mouse model for perineural invasion and recurrence in pancreatic cancer.</a> Pancreas. 31 (3), 258-262 (2005).</li><li>Stopczynski, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroplastic+changes+occur+early+in+the+development+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">Neuroplastic changes occur early in the development of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Cancer Res. 74 (6), 1718-1727 (2014).</li><li>Gil, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve-sparing+therapy+with+oncolytic+herpes+virus+for+cancers+with+neural+invasion.">Nerve-sparing therapy with oncolytic herpes virus for cancers with neural invasion.</a> Clin Cancer Res. 13 (21), 6479-6485 (2007).</li><li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections.">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), 655-658 (2014).</li><li>Cremer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+the+N-CAM+gene+in+mice+results+in+size+reduction+of+the+olfactory+bulb+and+deficits+in+spatial+learning.">Inactivation of the N-CAM gene in mice results in size reduction of the olfactory bulb and deficits in spatial learning.</a> Nature. 367 (6462), 455-459 (1994).</li><li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemokine+(CCL2-CCR2)+signaling+axis+mediates+perineural+invasion.">The chemokine (CCL2-CCR2) signaling axis mediates perineural invasion.</a> Mol Cancer Res. 13 (2), 380-390 (2015).</li><li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFR&#945;1+released+by+nerves+enhances+cancer+cell+perineural+invasion+through+GDNF-RET+signaling.">GFR&#945;1 released by nerves enhances cancer cell perineural invasion through GDNF-RET signaling.</a> P Natl Acad Sci USA. , 02944 (2014).</li></ol>

著者が明らかに何もありません。

このプロトコルでは膵臓癌細胞による坐骨神経浸潤の定量化は、浸潤の体内マウス モデルをについて説明します。このモデルにより、神経浸潤の分子メカニズムの研究です。この技術を用いた実験の成功プロセスで 3 つの重要な手順に慎重なアプローチが必要: 2) 侵略神経 (ステップ 3.4) の抽出と収穫された神経 (手順 4.1) の処理 3) 癌細胞 (手順 2.7、2.8) の 1) の注入。
<p class="jove_con...

神経は、がんの成長と移行1,2,3を刺激する特定の腫瘍微小環境を形成します。浸潤 (PNI) は、神経周辺を介して、がん細胞に侵入するプロセスです。それは、癌の浸潤が神経に沿って元のサイトから延びてので転移のユニークなルートとして考慮されるかもしれない。PNI は 22% から 1001,2に至るまで発生率と膵臓、前立腺、頭と首、唾液、子宮頚部、大腸癌を含むいくつかのがんの種類で発見されます。PNI 痛みに関連付けられ、予後不良と悪い生存率1,2と相関します。
神経周囲浸潤のモデルの開発は、このプロセスの細胞および分子メカニズムを明らかにし、梗数を減らす治療剤の候補物質をテストするのには不可欠です。癌と神経間相互作用を勉強の in vitro方法があります神経外植片4後根罹5,6、7、または特定のセル癌細胞の共培養神経からシュワンなど微小細胞7をです。生体内でのアプローチは、ただし、もっと生理学的に関連して、癌マウスモデルでがんが誘発または移植の使用を含む、会計全体の神経の微小環境の利点があります。同所性同種膵や前立腺癌、PNI のモデルはずっと報告された8,9,10 PNI の発生率が記録される可能性がありますがこれら器官の神経のサイズが小さいため参照してくださいすることは困難です。全体の神経とそのため梗数の程度を定量化します。ここで述べるモデルは単純な手術11を介してマウスの坐骨神経に注入される細胞の癌 PNI の体内モデルです。異所性移植は、脊髄へ神経内に侵入します。脊髄注射のサイトから神経の侵略の長さ測定される、神経中の癌のボリュームだけでなく。重要なは、侵略の神経は様々 なアッセイを顕微鏡、分子解析などのも収集できます。様々 な癌細胞をテストことができますと遺伝的に変更または特定化合物処理ホスト マウスを使用することもことがあります。この強力なアッセイとは、がん細胞とホスト微小環境 PNI のメカニズムを調査用に変更します。

<table><tbody><tr><td>Mouse</td><td></td><td></td><td>Number and age variable depending on experimental needs</td></tr><tr><td>Cell culture media (PBS, Trypsin, and DMEM+10% FBS)</td><td>Any</td><td></td><td>Steps 1.1, 1.2, 1.3.</td></tr><tr><td>Conical centrifuge tube, 50 mL</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td>Step 1.1</td></tr><tr><td>Microcentrifuge tube 1.5 mL</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C-S</td><td>Step 1.2</td></tr><tr><td>Electric razor</td><td>WAHL</td><td>9962</td><td>Step 2.1. Can be substituted with commercial hair removal agent</td></tr><tr><td>Isoflurane, 250 mL</td><td>Baxter</td><td>1001936060</td><td>Step 2.2</td></tr><tr><td>Hypoallergenic surgical tape</td><td>3M Blenderm</td><td>70200419342</td><td>Step 2.3</td></tr><tr><td>Betadine Swapsticks</td><td>PDI</td><td>SKU 41350</td><td>Step 2.4</td></tr><tr><td>Webcol Alcohol Preps</td><td>Covidien</td><td>5110</td><td>Step 2.4</td></tr><tr><td>Sterile surgical tools (scissors and forceps)</td><td></td><td></td><td>Steps 2.4, 2.5, 3.3, 3.4, 3.5</td></tr><tr><td>10 &amp;mu;L Hamilton syringe</td><td>Hamilton</td><td>80308</td><td>Steps 2.7, 2.8</td></tr><tr><td>Steel Micro spatula</td><td>Fisher Scientific</td><td>S50823</td><td>Step 2.7</td></tr><tr><td>Dissecting microscope</td><td></td><td></td><td>Step 2.7</td></tr><tr><td>Bupivacine, 1 g</td><td>Enzo Life Sciences</td><td>BML-NA139-0001</td><td>Step 2.9. Reconstitute to 0.5%</td></tr><tr><td>5-0 Nylon suture</td><td>Ethicon</td><td>698H</td><td>Step 2.9</td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>Step 4.1</td></tr><tr><td>Tissue-Tek Cryomold Molds</td><td>VWR</td><td>25608-916</td><td>Step 4.1</td></tr></tbody></table>

an in vivo murine sciatic nerve model of perineural invasion

癌細胞浸潤 (PNI)、がん細胞が増殖し、神経の微小環境の移行と呼ばれるプロセスを介して神経に侵入します。このタイプの侵略は様々 な癌の種類は、展示し、膵臓癌の発見は非常に頻繁。マウスの膵臓の神経線維の微細なサイズは、直交異方性マウスモデルで難しい PNI の研究をレンダリングします。ここでは、マウスの坐骨神経に同系膵癌細胞株 Panc02 H7 を注入我々 PNI の生体内異所性モデルについて述べる.このモデルでは、麻酔下マウスの坐骨神経を公開され、がん細胞を注入します。挿入ポイントから脊髄に向かって近位の神経の癌細胞に侵入します。侵略の坐骨神経は抽出し、10 月冷凍区分のため処理します。H & E と以下の免疫蛍光染色は、蛋白質の表現の侵略の度に変化の定量化を許可します。このモデルは、その汎用性を与え PNI に関する研究各種に適用できます。PNI の細胞および分子メカニズムの調査のため、別のがんの種類によりさまざまな遺伝的変更および/または異なったタイプの癌細胞とマウスを使用します。さらに、これらのマウスに治療を適用することによって神経浸潤に対する治療薬の効果を学ぶことができます。

このメソッドは、定量化可能な神経浸潤の生体内でモデルを作成するマウスの坐骨神経に膵臓癌細胞の外科的移植について説明します。図 1は、坐骨神経の解剖学的位置と注射部位を示しています。図 2は、裸のマウスの 2 つの坐骨神経を示しています。(右) MiaPaCa 2 がん細胞を注入した神経に注入 PBS 神経 (左) が比?...

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An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

神経周囲浸潤のIn Vivoマウスの坐骨神経モデル

坐骨神経に同系膵癌細胞を注入することによって浸潤の体内マウス モデルについて述べる。モデル神経浸潤の程度の定量化と浸潤細胞および分子メカニズムの調査をサポートしています。

Cancer cells invade nerves through a process termed perineural invasion (PNI), in which cancer cells proliferate and migrate in the nerve ...

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

12.0K ビュー.  Memorial Sloan Kettering Cancer Center. 坐骨神経に同系膵癌細胞を注入することによって浸潤の体内マウス モデルについて述べる。モデル神経浸潤の程度の定量化と浸潤細胞および分子メカニズムの調査をサポートしています。

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Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased understanding of the molecular events that give rise to glioblastomas, this cancer still remains highly refractory to conventional treatment. Surgical resection of high grade brain tumors is rarely complete due to the highly infiltrative nature of glioblastoma cells. Therapeutic approaches which attenuate glioblastoma cell invasion therefore is an attractive option. Our laboratory and others have shown that tumor associated macrophages and microglia (resident brain macrophages) strongly stimulate glioblastoma invasion. The protocol described in this paper is used to model glioblastoma-macrophage/microglia interaction using in vitro culture assays. This approach can greatly facilitate the development and/or discovery of drugs that disrupt the communication with the macrophages that enables this malignant behavior. We have established two robust coculture invasion assays where microglia/macrophages stimulate glioma cell invasion by 5 - 10 fold. Glioblastoma cells labelled with a fluorescent marker or constitutively expressing a fluorescent protein are plated without and with macrophages/microglia on matrix-coated polycarbonate chamber inserts or embedded in a three dimensional matrix. Cell invasion is assessed by using fluorescent microscopy to image and count only invasive cells on the underside of the filter. Using these assays, several pharmacological inhibitors (JNJ-28312141, PLX3397, Gefitinib, and Semapimod), have been identified which block macrophage/microglia stimulated glioblastoma invasion.

Understanding the malignant behavior of cancer requires creating accurate models of how tumor cells interact with components of the tumor microenvironment, such as macrophages. Here we describe two methods to study glioblastoma cell interaction with tumor associated macrophages and microglia where the effect on glioblastoma invasion is assessed.

共培養アッセイは、神経膠芽腫の浸潤のマクロファージとミクログリアの刺激を研究します

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

がん研究

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, radiation, and chemotherapy, locoregional recurrences and distant metastases occur at higher rates, and overall survival is decreased by 40% compared to HNSCC without PNI. In vitro studies of the pathways involved in HNSCC PNI have historically been challenging given the lack of a consistent, reproducible assay. Described here is the adaptation of the dorsal root ganglion (DRG) assay for the examination of PNI in HNSCC. In this model, DRG are harvested from the spinal column of a sacrificed nude mouse and placed within a semisolid matrix. Over the subsequent days, neurites are generated and grow in a radial pattern from the cell bodies of the DRG. HNSCC cell lines are then placed peripherally around the matrix and invade preferentially along the neurites toward the DRG. This method allows for rapid evaluation of multiple treatment conditions, with very high assay success rates and reproducibility.

Perineural invasion (PNI) is a common feature of head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC), conferring lower survival rates. Its mechanisms are poorly understood. Utilizing neurites generated from murine dorsal root ganglia confined to a semisolid matrix, the pathways involved in the PNI of HNSCC cell lines can be investigated.

頭頸部扁平上皮癌における神経周囲の浸潤のためのモデル

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. Here we describe a method using targeted peripheral irradiation to induce fatigue-like behavior in mice. With appropriate shielding, the irradiation targets the lower abdominal/pelvic region of the mouse, sparing the brain, in an effort to model radiation treatment received by individuals with pelvic cancers. We deliver an irradiation dose that is sufficient to induce fatigue-like behavior in mice, measured by voluntary wheel-running activity (VWRA), without causing obvious morbidity. Since wheel running is a normal, voluntary behavior in mice, its use should have little confounding effect on other behavioral tests or biological measures. Hence, wheel running can be used as a feasible outcome measure in understanding the behavioral and biological correlates of fatigue. CRF is a complex condition with frequent comorbidities, and likely has causes related both to cancer and its various treatments. The methods described in this paper are useful for investigating radiation-induced changes that contribute to the development of CRF and, more generally, to explore the biological networks that can explain the development and persistence of a peripherally-triggered but centrally-driven behavior like fatigue.

We describe a method using targeted peripheral irradiation to induce fatigue-like behavior in mice. The selected non-lethal irradiation dose leads to a week-long reduction in voluntary wheel-running activity.

周辺照射による疲労のマウスモデル

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

One way that solid tumors disseminate is through neural invasion. This route is well-known in cancers of the head and neck, prostate, and pancreas. These neurotropic cancer cells have a unique ability to migrate unidirectionally along nerves towards the central nervous system (CNS). The dorsal root ganglia (DRG)/cancer cell model is a three dimensional (3D) in vitro model frequently used for studying the interaction between neural stroma and cancer cells. In this model, mouse or human cancer cell lines are grown in ECM adjacent to preparations of freshly dissociated cultured DRG. In this article, the DRG isolation protocol from mice, and implantation in petri dishes for co-culturing with pancreatic cancer cells are demonstrated. Five days after implantation, the cancer cells made contact with the DRG neurites. Later, these cells formed bridgeheads to facilitate more extensive polarized, neurotropic migration of cancer cells.

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

This video article shows the use of the dorsal root ganglia (DRG)/cancer cell model in pancreatic ductal adenocarcinoma.

後根神経節モデル：癌性神経浸潤のin vitroモデルでは

One way that solid tumors disseminate is through neural invasion. This route is well-known in cancers of the head and neck, prostate, and pancreas. These ...

神経科学

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous cell carcinoma and other cancers. Mechanistic studies have shown that the molecular crosstalk between nerves and tumor cells occurs prior to physical interaction. There are only a few in vivo models to study perineural invasion, especially to investigate early progression, before physical nerve-tumor interactions occur. The chick chorioallantoic membrane model has been used to study cancer invasion, because the basement membrane of the chorionic epithelium mimics that of human epithelial tissue. Here we repurposed the chick chorioallantoic membrane model to investigate perineural invasion, grafting rat dorsal root ganglia and human head and neck squamous cell carcinoma cells onto the chorionic epithelium. We have demonstrated how this model can be useful to evaluate the ability of cancer cells to invade neural tissue in vivo.&#160;

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is an aggressive phenotype for head and neck squamous cell carcinomas and other tumors. The chick chorioallantoic membrane model has been used for studying angiogenesis, cancer invasion, and metastasis. Here we demonstrate how this model can be utilized to assess perineural invasion in vivo.

頭頸部癌のペリオラル侵食を評価する生体内モデルにおけるひよこチョリオアラントIC膜

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous ...

医学

Modified Spared Nerve Injury Surgery Model of Neuropathic Pain in Mice

Spared nerve injury (SNI) is an animal model that mimics the cardinal symptoms of peripheral nerve injury for studying the molecular and cellular mechanism of neuropathic pain in mice and rats. Currently, there are two types of SNI model, one to cut and ligate the common peroneal and the tibial nerves with intact sural nerve, which is defined as SNIs in this study, and another to cut and ligate the common peroneal and the sural nerves with intact tibial nerve, which is defined as SNIt in this study. Because the sural nerve is purely sensory whereas the tibial nerve contains both motor and sensory fibers, the SNIt model has much less motor deficit than the SNIs model. In the traditional SNIt mouse model, the common peroneal and the sural nerves are cut and ligated separately. Here a modified SNIt surgery method is described to damage both common peroneal and sural nerves with only one ligation and one cut with a shorter procedure time, which is easier to perform and reduces the potential risk of stretching the sciatic or tibial nerves, and produces similar mechanical hypersensitivity as the traditional SNIt model.

<meta charset="utf8"></head><body>マウスの神経因性疼痛の改良温存神経損傷手術モデル

The modified surgery is a simplified method for mouse or rat spared nerve injury model that requires only one ligation and one cut to injure both common peroneal and sural nerves.

マウスの神経因性疼痛の改良温存神経損傷手術モデル

Spared nerve injury (SNI) is an animal model that mimics the cardinal symptoms of peripheral nerve injury for studying the molecular and cellular ...

Establishing a Three-dimensional Co-culture Model of Murine Dorsal Root Ganglia and Cancer Cells: An In Vitro Model to Study Perineural Cancer Cell Invasion

Source: Huyett, P. et al. <a href="https://www.jove.com/video/55043" target="_blank">A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.</a> J. Vis. Exp. (2017)
In this video, we demonstrate the procedure for developing an in vitro perineural cancer cell invasion model by co-culturing mouse dorsal root ganglion and neurotropic cancer cells. The model can be utilized to conduct cancer assays, producing rapid and reproducible results.

マウス背根神経節とがん細胞の三次元共培養モデルの確立:神経周囲がん細胞の浸潤を研究するためのインビトロモデル

Source: Huyett, P. et al. A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma. J. Vis. Exp. (2017)
In this video, we demonstrate the ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

頭頸部がん

アッセイと技術

Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion or PNI: Extraction and Processing of Sciatic Nerve to Understand Invasion by Cancer Cells

Source: Deborde, S. et al. <a href="https://www.jove.com/video/56857" target="_blank">An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe the procedure to establish a murine model of perineural invasion by injecting cancer cells into the sciatic nerve. The model can help gain an understanding of the magnitude of nerve invasion for subsequent assessment of anti-cancer drugs.

神経周囲浸潤またはPNIのマウス坐骨神経モデル:がん細胞による浸潤を理解するための坐骨神経の抽出と処理

Source: Deborde, S. et al. An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion. J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe the procedure to ...

神経系のがん

体外研究

Murine Perineural Invasion Model: Generating an In Vivo Model to Simulate Perineural Invasion in Mouse Sciatic Nerve

Source: Deborde, S. et al. <a href="https://www.jove.com/video/56857" target="_blank">An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we develop an in vivo mouse model for perineural invasion by injecting pancreatic cancer cells into the sciatic nerve. This model helps quantify the extent of invasion and study the interactions between cancer cells and nerves.

マウス神経周囲浸潤モデル:マウス坐骨神経における神経周囲浸潤をシミュレートするためのIn vivoモデルの生成

Source: Deborde, S. et al. An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion. J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we develop an in vivo mouse ...

神経周囲浸潤のIn Vivoマウスの坐骨神経モデル

要約

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この動画の章

共培養アッセイは、神経膠芽腫の浸潤のマクロファージとミクログリアの刺激を研究します

頭頸部扁平上皮癌における神経周囲の浸潤のためのモデル

周辺照射による疲労のマウスモデル

後根神経節モデル：癌性神経浸潤のin vitroモデルでは

頭頸部癌のペリオラル侵食を評価する生体内モデルにおけるひよこチョリオアラントIC膜

マウスの神経因性疼痛の改良温存神経損傷手術モデル

マウスの神経因性疼痛の改良温存神経損傷手術モデル

マウス背根神経節とがん細胞の三次元共培養モデルの確立:神経周囲がん細胞の浸潤を研究するためのインビトロモデル

神経周囲浸潤またはPNIのマウス坐骨神経モデル:がん細胞による浸潤を理解するための坐骨神経の抽出と処理

マウス神経周囲浸潤モデル:マウス坐骨神経における神経周囲浸潤をシミュレートするためのIn vivoモデルの生成