この方法は、実際に組織工学分野の聖杯である血管化足場の生成に関する重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、逆向きの加圧パウチが非移植可能なヒト器官の脱細胞化を改善し、適切な時間枠にわたって無菌の方法でそれを行うことができるということです。脱細胞化のために心臓を準備するために、まず、可能な欠陥のための内部検査を行う。
中隔欠陥が存在する場合は、適切な縫合線で欠陥を修正します。次に、2-0シルク縫合糸で上手と下の大静脈をリゲートします。5-0 PROLENEで右心房壁を縫合し、その後のカヌリンのために大動脈を主肺動脈から離れて解剖する。
大動脈と肺動脈に、血管の直径に応じてコネクタを挿入し、2-0シルク縫合糸でコネクタを固定します。肺静脈オリフィスの1つを使用して、左心室に向かって左心房を通してチューブラインを挿入し、大動脈のコネクタと肺動脈のコネクタに流出線を注入ラインを接続します。作った心臓を逆向きのポリエステルポーチに入れ、パウチを灌流容器に入れます。
ゴム栓の各ポートに各ラインを接続し、容器の直径に応じて、ポリエステルポーチを密封するために、灌流容器の蓋にストッパーを挿入します。次に、ゴム栓の注入口を介してPBSをパーフュージョンし、肺動脈からの流出を検証し、左心室に挿入されたラインから、この流れを使用して血管構造内の血液の残りの痕跡の器官をきれいにする。心臓の準備ができたら、組み立てられたバイオリアクターを直立方向に配置し、注入ライン、圧力ヘッドライン、肺動脈流出ライン、およびバイオリアクタードレインラインを灌流バイオリアクターの上にあるゴムキャップ表面ポートに接続します。
次いで、高張液で4時間、低張性溶液で2時間、ドデシル硫酸ナトリウム、またはSDSで120時間、PBSの120リットルで最終洗浄し、すべて大動脈根で測定された水銀圧力の一定の120ミリメートルの下で、心臓を脱周細胞化する。PBS洗浄の最後の10リットルの間に、スキャフォールドを殺菌するために、10の通常の水酸化ナトリウムで中和された滅菌2.1%過酢酸溶液の500ミリリットルを加える。典型的には、輸液が高張性から低張薬に変化するにつれて、脱細胞化プロセス中の大オルタへの流量は徐々に低下する。
対照的に、灌流溶液が低張性溶液からSDSに変化すると流量が増加し、その時点で輸液流量が変動を示す。肺動脈からの流出率は、超低調溶液と同様の傾向を示す。しかし、SDS灌流時の流出速度は全体的に低下を示す。
冠状動脈灌流効率は、異なる試薬が血管系を通して浸透するにつれて時間の経過とともに減少します。肺動脈と左心室からの流出パーフューズは同時に収集されるため、その破片含有量は分光法によって比較することができる。両方の血管からの排水の濁度は、灌流の間に時間の経過とともに減少するが、肺動脈からの濁度は、最初の灌流期間中に左心室から観察したものに比べてより急激な色変化を示す。
6つの脱細胞化されたヒトの心臓からのビチンチオン酸タンパク質アッセイによる流出濁度と細胞デブリとの相関を評価すると、タンパク質濃度と流出濁度との間の線形相関が明らかとなる。この手順を試みる際には、流量を監視し、灌流プロセスを実際に監視するために定期的に透過液を収集することが重要です。この手順に従って、機械的評価や無菌性試験などの他の技術を使用して、足場の忠実度と、機能的な心臓組織を生成するための再細胞化のためのその潜在的な使用を評価することができます。
その開発後、この技術は、再生医療および組織工学分野の研究者が血管化された臓器全体の生成を探求する道を開き、文字通り固体臓器移植分野を変えました。人間の臓器や組織、SDSなどの化学物質を扱うと非常に危険であり、この手順を実行する際には常に適切な個人保護装置を着用することを忘れないでください。
