糖尿病性ウサギにおける後肢虚血の前臨床モデル

末梢動脈疾患の再生治療は非常に有益であり、この動物モデルは、実験的治療がヒト患者で働くことができるかどうかをより良くテストすることができるかもしれない。私たちの手順は、改良されたモデルを出すことを目指しています。糖尿病または高脂血症患者に遭遇した治療抵抗をより正確に複製するものである。

この動物モデルは、末梢虚血の新しい治療法をテストするために使用することができ、虚血に新血管新血管化を損なった前臨床モデルを提供する。生後4~6ヶ月の糖尿病性および高脂血症ウサギの後足ピンチに対する応答の欠如を確認した後、15番の刃を持つメスを使用して、気管の右側に4〜5センチメートルの長い切開を行い、鈍い解剖を使用して右の一般的な頸動脈動脈を露出させる。小さなヴァイトラナーレトラクターを使用して切開を開き、頸動脈を頸静脈と迷走神経から慎重に分離します。

頸動脈が神経と頸静脈から完全に分離されている場合は、露出した動脈の近位および遠位端に4-Oシルク縫合糸を置き、頸動脈の遠位端を外科医の結び目と4つの正方形の結び目で結ぶ。近位端で、血管の締め付けまたは緩めを可能にするために血管シリコーンのネクタイを使用して、必要に応じて。次に、露出した頸動脈と神経に沿って約0.5ミリリットルの1%リドカインを塗布し、血管拡張を促進し、神経刺激を軽減する。

500の国際的なヘパリンIVユニットを投与する。4インチのワイヤー挿入ツールを動脈に入れる。0.014 インチで 185 センチメートルガイドワイヤーを挿入ツールを通して下降大動脈の腸骨の分岐点に供給し、3 つのフランスのピグテール血管造影カテーテルをワイヤー上で進めます。ピグテールカテーテルを2センチメートル近く下降大動脈の腸骨の分岐に進め、7つ目の腰椎と最初の仙椎の間にカテーテルの先端を配置します。

2~4ミリリットルの造影剤を手動で注入してカテーテルの位置をテストします。正しい位置決めが確認されたら、血管拡張を増加させるためにカテーテルを介してニトログリセリンの100マイクログラムの動脈内注射を投与する。その後、カテーテルを介して0.8〜1%リドカインを1ミリリットル投与し、血管拡張を支援し、ヘパリン化生理食塩水でカテーテルを洗い流す。

自動血管造影インジェクターのチューブをカテーテルに取り付け、ラインから空気を取り除きます。自動化された血管造影インジェクターを使用して、毎秒3ミリリットルでカテーテルを通して9ミリリットルのコントラスト媒体を送達し、毎秒6フレームでデジタル減算血管造影を行います。シリアル画像を選択し、骨の外観を最小限に抑え、コントラストを持つ血管灌流の全体像をキャプチャするために、マイナス40%の設定を使用して血管造影の画像を変更します。

大腿動脈を単離するには、15番のメスの刃を使用して右大腿動脈の縦方向皮膚切開を行い、切開がりん膜靭帯から劣って伸び、膝蓋骨のすぐ近位の領域で終わることを確認する。大腿動脈を露出させ、ワイトラナーレトラクターで切開を開くには、鈍い解剖を使用してください。約 0.5 ミリリットルの 1%リドカインを局所的に適用して神経刺激を軽減し、血管拡張を促進する。

組織の鈍い解剖を続けて、下側上端、深い大腿骨、横方向の円反射および表在性上皮動脈を含む全ての枝と共に大腿動脈の全長を解放する。大腸および伏在性動脈に沿って解剖し、外部腸骨動脈と同様に、定期的に生理食塩水で領域を水分補給して組織の損傷から保護する。大腿動脈を大腿静脈と神経から慎重に分離し、2本の4-Oシルク縫合糸を大腿動脈に配置し、縫合糸の間に十分なスペースを確保して動脈を切断する。

その後、小さなメッツェンバウムはさみを使用して、結紮動脈の2つのネクタイの間を切断します。動脈が二股下および大窩動脈を形成するために動脈が二分するところから大腿動脈を物品切除し、近く働き、大腿動脈の残りの部分を上心動脈のすぐ下に切除するために任意の側枝を結びつける。繰り返し血管造影の場合は、3ミリメートルのステンレス鋼球を取り付けたシラスティックシートを使用してください。

ステンレスボールを四頭筋の上部に4-Oシルク縫合糸で取り付ける。ボールが所定の位置にあるときに、ボールの上に皮膚を引っ張ります。血管拡張を増加させるためにカテーテルを介してニトログリセリンの100マイクログラムの動脈内注射を投与する。

必要に応じて、カテーテルを介して1%リドカインの別の0.8〜1ミリリットルを投与し、血管拡張を支援し、ヘパリナイズした生理食塩水でフラッシュします。同じ設定で自動血管造影インジェクターを使用して、さらに9ミリリットルのコントラスト媒体を注入します。次に、示されるように別の血管造影を行います。

処置の終わりに、右動脈からカテーテルを取り除き、動脈の周りに既に配置されている4-Oシルク縫合糸を使用して動脈を縛り取る。次に、4-Oポリジオキサノンまたは3-Oポリグラクチン910縫合糸を連続的な縫合パターンでテーパー針で閉じ、4-Oポリジオキサノンまたは4-Oポリグラクチン910縫合糸を埋めた連続切断縫合糸パターンの逆切断針で皮膚を閉じます。非糖尿病動物では、コレステロールが高い場合でも、糖尿病動物と比較して最終時点で血管造影における虚血性肢および血管における血圧の回復が増加している。

組織学的には、浮腫および虚血性損傷と一致する筋肉構造の変化は、筋線維の喪失または破壊として観察される。また、PECAM1およびα平滑筋アクチンに対する免疫染色は、組織切片内の血管の数および大きさを同定するために使用することができる。ドップラー超音波、レーザードップラーイメージング、赤外線サーモグラフィー、MRIなどの他のイメージング方法は、虚血性肢再灌流のさらなるモニタリングのために追加することができる。

この治療抵抗性の組み込みにより、当社のモデルは、疾患状態の虚血をより正確に模倣し、末梢動脈疾患の新しい治療法の評価を進めています。