Eine regenerative Behandlung für periphere arterielle Erkrankungen wäre äußerst vorteilhaft, und dieses Tiermodell könnte besser testen, ob experimentelle Behandlungen bei menschlichen Patienten funktionieren könnten. Unser Verfahren zielt darauf ab, ein verbessertes Modell aufzustellen. Eine, die die therapeutische Resistenz bei Patienten mit Diabetes oder Hyperlipidämie genauer repliziert.
Dieses Tiermodell kann verwendet werden, um neue Therapien für periphere Ischämie zu testen und bietet ein präklinisches Modell, das die Neovaskularisation zu Ischämie beeinträchtigt hat. Nach der Bestätigung eines Mangels an Reaktion auf Hinterpfoten-Pinch in einem anästhesierten vier bis sechs Monate alten diabetischen und hyperlipidemkaninchen verwenden Sie ein Skalpell mit einer Klinge der Zahl 15, um einen vier bis fünf Zentimeter langen Schnitt nur seitlich zur rechten Seite der Luftröhre zu machen und stumpfe Sektion zu verwenden, um die richtige gemeinsame Karotisarterie freizulegen. Verwenden Sie kleine Weitlaner Retraktoren, um den Schnitt zu öffnen und die Halsschlagader vorsichtig von der Jugularvene und dem Vagusnerv zu isolieren.
Wenn die Halsschlagader vollständig von der Nerven- und Jugularvene getrennt ist, legen Sie eine 4-O-Seidennaht an die proximalen und distalen Enden der exponierten Arterie und binden Sie das distale Ende des Carotis mit einem Chirurgenknoten und vier quadratischen Knoten ab. Verwenden Sie am proximalen Ende eine vaskuläre Silikonbinde, um das Gefäß bei Bedarf festzuziehen oder zu lösen. Als nächstes wenden Sie etwa 0,5 Milliliter 1%Lidocain entlang der exponierten Halsschlagader und Nerven auf, um die Vasodilatation zu fördern und Nervenreizungen zu reduzieren.
Verwalten Sie 500 internationale Einheiten von heparin IV.Platzieren Sie ein Vier-Zoll-Drahteinsteckwerkzeug in die Arterie. Führen Sie einen 0,014 Zoll mal 185 Zentimeter großen Führungsdraht durch das Einsteckwerkzeug zur Aortenbifurkation am Iliaskamm in der absteigenden Aorta, und leiten Sie einen drei französischen Pigtail-Angiographischen Katheter über den Draht. Den Zöpfenkatheter auf zwei Zentimeter proximal zur aortenbifurkation am Iliaskamm in der absteigenden Aorta voranbringen und die Spitze des Katheters zwischen dem siebten Lendenund und dem ersten Sakralwirbel positionieren.
Testen Sie die Position des Katheters, indem Sie manuell zwei bis vier Milliliter Kontrastmittel injizieren. Sobald die korrekte Positionierung bestätigt ist, verabreichen Sie eine intraarterielle Injektion von 100 Mikrogramm Nitroglycerin durch den Katheter, um die Vasodilatation zu erhöhen. Dann verabreichen Sie 0,8 bis ein Milliliter 1%Lidocain durch den Katheter, um bei der Vasodilatation zu helfen und den Katheter mit heparinisierter Saline zu spülen.
Befestigen Sie die Schläuche für den automatisierten angiographischen Injektor am Katheter, wobei Sie sicher sind, dass Sie luftaus der Leitung entfernen. Verwenden Sie den automatisierten angiographischen Injektor, um neun Milliliter Kontrastmedium mit drei Millilitern pro Sekunde durch den Katheter zu liefern und digitale Subtraktionsangiographie mit sechs Bildern pro Sekunde durchzuführen. Wählen Sie die seriellen Bilder aus und ändern Sie das Bild des Angiogramms mit einer Einstellung von minus 40 %, um das Aussehen des Knochens zu minimieren und ein vollständiges Bild der Gefäßdurchblutung mit Kontrast zu erfassen.
Um die Oberschenkelarterie zu isolieren, verwenden Sie eine Skalpellklinge der Nummer 15, um einen Längshautschnitt über die rechte Oberschenkelarterie zu machen, um sicherzustellen, dass sich der Schnitt minderwertig vom Leistenband erstreckt und im Bereich nur proximal bis zur Patella endet. Verwenden Sie stumpfe Sezierung, um die Oberschenkelarterie zu entlarven und den Schnitt mit Weitlaner Retraktoren zu öffnen. Tragen Sie ca. 0,5 Milliliter 1%Lidocain lokal auf, um Nervenreizungen zu reduzieren und die Vasodilatation zu fördern.
Setzen Sie die stumpfe Zerlegung des Gewebes fort, um die gesamte Länge der Oberschenkelarterie zusammen mit all ihren Zweigen zu befreien, einschließlich der minderwertigen epigastrischen, tiefen Femoral, seitlichen Zirkumflex und oberflächlichen epigastrischen Arterien. Sezieren Entlang der poplitealen und schronen arterienden Arterien, sowie der äußeren Iliasarterie, periodisch hydratisieren den Bereich mit Saline, um vor Gewebeschäden zu schützen. Trennen Sie vorsichtig die Oberschenkelarterie von der Femoralvene und dem Nerv und legen Sie zwei 4-O-Seidennähte auf die Femoralarterie mit gerade genug Platz zwischen den Nähten, um die Arterie abtrennen zu können.
Dann verwenden Sie kleine Metzenbaum Schere, um zwischen den beiden Krawatten der Ligadarterie zu schneiden. Verbrauchen Sie die Femoralarterie, von wo die Arterie zweifäliert, um die saphenous und popliteal Arterien zu bilden, arbeiten nahe, binden alle Seitenzweige, um den Rest der Femoralarterie zu verbrauchen, um knapp unterhalb der epigastrischen Arterie. Für die Wiederholungderingiographie verwenden Sie ein Silastische Blech mit einer montierten Drei-Millimeter-Edelstahlkugel.
Um die Edelstahlkugel mit 4-O-Seidennähten in den oberen Teil des Quadrizepsmuskels einzubinden. Ziehen Sie die Haut über den Ball, wenn er an Ort und Stelle ist. Verabreichen Sie eine intraarterielle Injektion von 100 Mikrogramm Nitroglycerin durch den Katheter, um die Vasodilatation zu erhöhen.
Bei Bedarf weitere 0,8 bis ein Milliliter 1%Lidocain durch den Katheter verabreichen, um bei der Vasodilatation zu helfen und mit heparinisierter Saline zu spülen. Verwenden Sie den automatisierten angiographischen Injektor bei den gleichen Einstellungen, um weitere neun Milliliter Kontrastmedium zu injizieren. Führen Sie dann ein weiteres Angiogramm durch, wie gezeigt.
Am Ende des Verfahrens den Katheter aus der rechten Arterie entfernen und die Arterie mit der 4-O-Seidennaht, die bereits um die Arterie herum vorhanden ist, abbinden. Schließen Sie dann die Muskel- und Unterhautschichten mit 4-O-Polydioxanon oder 3-O-Polyglactin 910 Nähten auf einer Verjüngungsnadel in einem kontinuierlichen Nahtmuster und schließen Sie die Haut mit 4-O-Polydioxanon oder 4-O-Polyglactin 910 Nähten auf einer umgekehrten Schneidnadel in einem vergrabenen kontinuierlichen subcuticularen Nahtmuster. Bei nicht-diabetischen Tieren, auch mit höherem Cholesterin, gibt es eine erhöhte Erholung des Blutdrucks in der ischämischen Gliedmaße und Vaskularität in den Angiogrammen zum letzten Zeitpunkt im Vergleich zu diabetischen Tieren.
Histologisch werden Veränderungen der Muskelstruktur im Einklang mit Ödemen und ischämischen Schäden als Verlust oder Störung der Muskelfasern beobachtet. Darüber hinaus kann die Immunfärbung für PECAM ein und alpha glatte Muskel Actin verwendet werden, um die Anzahl und Größe der Gefäße in den Gewebeabschnitten zu identifizieren. Andere bildgebende Verfahren wie Doppler-Ultraschall, Laser-Doppler-Bildgebung, Infrarot-Thermographie und MRT können zur weiteren Überwachung der ischämischen Gliedmaßenreperfusion hinzugefügt werden.
Mit dieser Einbeziehung der therapeutischen Resistenz imitiert unser Modell die Ischämie genauer in einem kranken Zustand und treibt die Bewertung neuer Therapien für periphere arterielle Erkrankungen voran.
