Um tratamento regenerativo para doença arterial periférica seria extremamente benéfico e este modelo animal pode ser capaz de testar melhor se tratamentos experimentais poderiam funcionar em pacientes humanos. Nosso procedimento visa apresentar um modelo melhorado. Uma que replica com mais precisão a resistência terapêutica encontrada em pacientes com diabetes ou hiperlipidemia.
Este modelo animal pode ser usado para testar novas terapias para isquemia periférica e fornece um modelo pré-clínico que comprometeu a neovascularização à isquemia. Depois de confirmar a falta de resposta à beliscação da pata traseira em um coelho diabético e hiperlipidêmico anestêmico de quatro a seis meses, use um bisturi com uma lâmina número 15 para fazer uma incisão de quatro a cinco centímetros de comprimento apenas lateral para o lado direito da traqueia e usar dissecção sem corte para expor a artéria carótida comum certa. Use pequenos retráteis Weitlaner para abrir a incisão e isolar cuidadosamente a artéria carótida da veia jugular e do nervo vago.
Quando a artéria carótida estiver totalmente separada da veia nervosa e jugular, coloque uma sutura de seda 4-O nas extremidades proximal e distal da artéria exposta e amarre a extremidade distal do carótida com o nó de um cirurgião e quatro nós quadrados. Na extremidade proximal, use uma gravata de silicone vascular para permitir o aperto ou afrouxamento do vaso, conforme necessário. Em seguida, aplique aproximadamente 0,5 mililitros de 1%lidocaína ao longo da artéria carótida exposta e nervo para promover a vasodilatação e reduzir a irritação nervosa.
Administre 500 unidades internacionais de heparina IV.Coloque uma ferramenta de inserção de fio de quatro polegadas na artéria. Alimente um fio-guia de 0,014 polegadas por 185 centímetros através da ferramenta de inserção para a bifurcação aórtica na crista ilíaca na aorta descendente, e avance um cateter angiográfico de três rabos-de-cavalo franceses sobre o fio. Avance o cateter de rabo de cavalo para dois centímetros proximal à bifurcação aórtica na crista ilíaca na aorta descendente, posicionando a ponta do cateter entre a sétima lombar e a primeira vértebra sacral.
Teste a localização do cateter injetando manualmente de dois a quatro mililitros de agente de contraste. Uma vez confirmado o posicionamento correto, administre uma injeção intraarterial de 100 microgramas de nitroglicerina através do cateter para aumentar a vasodilatação. Em seguida, administre 0,8 a um mililitro de 1%lidocaína através do cateter para auxiliar na vasodilatação e lave o cateter com soro fisiológico heparinizado.
Conecte a tubulação para o injetor angiográfico automatizado ao cateter, certificando-se de remover qualquer ar da linha. Use o injetor angiográfico automatizado para fornecer nove mililitros de meio de contraste através do cateter a três mililitros por segundo e realize a angiografia de subtração digital a seis quadros por segundo. Selecione as imagens seriais e altere a imagem do angiograma usando menos 40% de configuração para minimizar a aparência do osso e capturar uma imagem completa da perfusão do vaso com contraste.
Para isolar a artéria femoral, use uma lâmina de bisturi número 15 para fazer uma incisão longitudinal da pele sobre a artéria femoral direita, certificando-se de que a incisão se estende inferiormente do ligamento inguinal e termina na área apenas proximal à patela. Use dissecção contundente para expor a artéria femoral e abrir a incisão com retratores Weitlaner. Aplique aproximadamente 0,5 mililitros de 1%lidocaína localmente para reduzir a irritação nervosa e promover a vasodilatação.
Continue a dissecção contundente dos tecidos para liberar toda a extensão da artéria femoral juntamente com todos os seus ramos, incluindo as artérias epigástricas inferiores, femorais profundas, circunflexos laterais e epigástricas superficiais. Disseque ao longo das artérias popliteal e safena, bem como a artéria ilíaca externa, hidratando periodicamente a área com soro fisiológico para proteger contra danos teciduais. Separe cuidadosamente a artéria femoral da veia femoral e do nervo e coloque duas suturas de seda 4-0 na artéria femoral com espaço suficiente entre as suturas para permitir que a artéria seja cortada.
Em seguida, use uma tesoura pequena Metzenbaum para cortar entre os dois laços da artéria ligada. Extite a artéria femoral de onde a artéria bifurca para formar as artérias safenas e popliteais, trabalhando proximamente, amarrando qualquer ramo lateral para extircar o resto da artéria femoral até logo abaixo da artéria epigástrica. Para a angiografia repetida, use uma folha silastic com uma bola de aço inoxidável de três milímetros montada.
Para fixar a bola de aço inoxidável na parte superior do músculo quadríceps com suturas de seda 4-O. Puxe a pele sobre a bola quando ela estiver no lugar. Administre uma injeção intraarterial de 100 microgramas de nitroglicerina através do cateter para aumentar a vasodilatação.
Se necessário, administre outro 0,8 a um mililitro de 1%lidocaína através do cateter para auxiliar na vasodilatação e lave com soro fisiológico heparinizado. Use o injetor angiográfico automatizado nas mesmas configurações para injetar outros nove mililitros de meio de contraste. Em seguida, realize outro angiograma, como demonstrado.
No final do procedimento, remova o cateter da artéria direita e amarre a artéria usando a sutura de seda 4-O já em vigor ao redor da artéria. Em seguida, feche as camadas musculares e subcuticulares com polidioxanona 4-O ou 3-O poliglactina 910 suturas em uma agulha de taper em um padrão de sutura contínua e feche a pele usando polidioxanona 4-O ou 4-O poliglactina 910 suturas em uma agulha de corte reversa em um padrão de sutura subcuticular contínua enterrada. Em animais não diabéticos, mesmo com colesterol mais elevado, há uma recuperação aumentada da pressão arterial no membro isquêmico e vascularização nos angiogramas no momento final em comparação com animais diabéticos.
Histologicamente, alterações na estrutura muscular consistentes com edema e danos isquêmicos são observadas como perda ou ruptura das fibras musculares. Além disso, a imunostaining para PECAM um e alfa smooth muscle actin pode ser usada para identificar o número e o tamanho dos vasos nas seções teciduais. Outros métodos de imagem, como ultrassom Doppler, imagem do doppler laser, termografia infravermelha e ressonância magnética podem ser adicionados para um monitoramento adicional da reperfusão do membro isquêmico.
Com essa incorporação da resistência terapêutica, nosso modelo imita com mais precisão a isquemia em estado doente, avançando na avaliação de novas terapias para doença arterial periférica.
