腎交感神経除神経は高血圧の潜在的な治療法であり、多くの臨床試験で証明されています。この技術は、腎動脈の損傷なしに自由流の腎神経を除神経します。さらに、これはシンプルで、重要で、再現性があり、標準化されたモデルです。
手順を実演するのは、私の研究室のラボアシスタントであるMing Wangです。まず、操作台を70%エタノールで消毒し、次に加熱パッドの温度を摂氏37度に調整します。手術前に、顕微手術用ハサミ、細い直線鉗子、細い湾曲した鉗子、止血鉗子、滅菌ガーゼ、計量紙など、すべての手術器具を摂氏121度で30分間滅菌します。
14週齢のオスのC57BKL/6マウスに麻酔をかけた後、シェーバーで背中の毛を取り除き、乾燥を防ぐために獣医軟膏を目に塗ります。マウスを背側の手術台に置きます。スワイプして剃った部分をポビドンヨードで拭き、続いて70%エタノールで3回拭きます。
滅菌メスの刃を使用して、前脚の肩甲骨の上に耳の後ろの尾に垂直に1センチメートルの切開を行います。次に、滅菌止血剤を使用して皮膚の下に皮下トンネルを作り、ポンプ用のポケットを作ります。アンジオテンシンIIで満たされた浸透圧ポンプをポケットにそっと挿入し、皮膚を伸ばさずに傷口を縫合するのに十分な空きスペースを確保します。
中断された6-0ビクリル縫合糸で筋肉を縫合し、中断された4-0ナイロン縫合糸で皮膚を閉じます。次に、傷の部位をポビドンヨードで拭いて拭きます。すべての手術器具を滅菌器に10秒間入れ、手術の合間に滅菌手袋を交換します。
マウスが完全に回復するまでマウスを監視します。発赤、腫れ、感染など、最初の週に少なくとも1日2回、その後は毎日1回、創傷治癒を注意深く監視および観察します。.アンジオテンシンII注入中にマウスが死亡した場合は直ちに解剖を行う。
ベースライン時およびアンジオテンシンII注入後毎週、意識のあるマウスのテールカフプレチスモグラフィ法で血圧を測定します。.アンジオテンシンII注入の1週間後、血圧が上昇したマウスを選択し、体重を記録します。腎除神経手術のために最低体重24グラムの動物を選択してください。
次に、麻酔をかけたマウスの腹部の毛をシェーバーで取り除き、マウスを手術台に置きます。腹部を上に保ち、手足をテープで固定します。腹部の皮膚をポビドンヨードで消毒し、続いて70%エタノールで3回拭きます。
腹側正中線2センチの腹部切開を行った後、摂氏37度の生理食塩水に浸したガーゼで腸を引き戻し、左腎動脈を露出させます。慎重に、しかし率直に、湾曲したピンセットを使用して腎動脈から脂肪を解剖します。滅菌鋭利なハサミを使用して、計量紙を腎動脈と同じサイズの長方形に切ります。
形状を同じに保つために、一度に数枚の計量紙を切り取ります。計量紙を10%フェノールエタノール溶液に少なくとも30秒間浸します。左腎動脈の表面を覆い、血管を計量紙で2分間包みます。
ガーゼを使用して周囲の組織を保護し、計量紙が腎臓や腸に触れないようにします。右腎動脈についても同じ手順を繰り返します。手術後、筋肉を初期位置に再配置し、中断された縫合パターンで6-0ビクリル縫合糸で腹膜を閉じ、中断された4-0ナイロン縫合糸で皮膚を閉じます。
完全に回復するまですべてのマウスを監視します。収縮期血圧の有意な上昇は、アンジオテンシンII注入後1週間で観察された。腎交感神経除神経(RDN)アンジオテンシンII群は、RDN処置後21日目に偽アンジオテンシンII群と比較して収縮期血圧の有意な低下を示した。
RDN処置後2週間で偽群とRDN群の間に有意差は観察されなかった。腎交感神経と腎動脈のヘマトキシリンとエオジン染色をここに示します。腎動脈の内膜層の肥厚は4群で認められなかった。
偽群、断片化核、およびパイクノティック核と比較して、両方のRDN群で神経内組織の消化と腫れが観察されました。神経束の免疫組織化学により、RDNおよびRDNアンジオテンシンII群では、チロシンヒドロキシラーゼの発現が両偽群と比較して有意に低下することが明らかになりました。正常血圧群と高血圧群の両方で除神経腎臓の腎皮質ノルエピネフリン含有量は、神経支配腎臓と比較して有意に減少しました。.
マッソン染色では腹部大動脈の内膜中膜に顕著な増加は見られなかった。異なる群における心筋の代表的な画像をここに示す。アンジオテンシンII注入誘発心肥大は、間質線維症および心筋細胞サイズの減少によりRDN治療によって改善した。
施術中は、腎動脈以外の周辺組織にフェノールを触れないでください。腸閉塞や腹部感染症、腎動脈狭窄の原因となりますので、お手技をしないでください。この方法は、高血圧を制御するメカニズムの研究に役立つ標準化されたRDNモデルを確立することができます。この技術の将来の応用は、高血圧と心肥大のプロセスを強調する経路の拡大に貢献する可能性があります。
