Renale sympathische Denervierung ist eine mögliche Behandlung für Bluthochdruck, die durch viele klinische Studien bewiesen wurde. Diese Technik denerviert frei fließende Nierennerven ohne Nierenarterienschäden. Darüber hinaus ist es ein einfaches, kritisches, wiederholbares und standardisiertes Modell.
Das Verfahren wird von Ming Wang, einem Laborassistenten aus meinem Labor, demonstriert. Beginnen Sie mit der Desinfektion des Operationstisches mit 70% Ethanol und stellen Sie dann die Heizkissentemperatur auf 37 Grad Celsius ein. Sterilisieren Sie vor der Operation alle chirurgischen Instrumente, einschließlich mikrochirurgischer Scheren, feiner gerader Pinzetten, feiner gebogener Pinzetten, hämostatischer Pinzetten, steriler Gaze und Wiegenpapier bei 121 Grad Celsius für 30 Minuten.
Nach der Betäubung einer 14 Wochen alten männlichen C57BKL / 6-Maus entfernen Sie die Haare auf dem Rücken mit einem Rasierer und tragen Sie dann Tierarztsalbe auf die Augen auf, um Trockenheit zu verhindern. Legen Sie die Maus in Rückenposition auf einen Operationstisch. Wischen und wischen Sie den rasierten Bereich mit Povidon-Jod, gefolgt von drei Tüchern mit 70% Ethanol.
Machen Sie mit einer sterilen Skalpellklinge einen Zentimeter langen Schnitt senkrecht zum Schwanz hinter dem Ohr über dem Schulterblatt des Vorderbeins. Als nächstes verwenden Sie einen sterilen Hämostat, um einen subkutanen Tunnel unter der Haut zu machen und eine Tasche für die Pumpe zu schaffen. Führen Sie vorsichtig eine mit Angiotensin II gefüllte osmotische Pumpe in die Tasche ein, um genügend Freiraum zu schaffen, um die Wunde zu nähen, ohne die Haut zu dehnen.
Nähen Sie den Muskel mit unterbrochenen 6-0 Vicryl-Nähten und schließen Sie die Haut mit unterbrochenen 4-0-Nylonnähten. Dann tupfen und wischen Sie die Wundstelle mit Povidon-Jod ab. Legen Sie alle chirurgischen Instrumente für 10 Sekunden in einen Sterilisator und ersetzen Sie die sterilen Handschuhe zwischen den Operationen.
Überwachen Sie die Maus, bis sie sich vollständig erholt hat. Überwachen und beobachten Sie die Wundheilung mindestens zweimal täglich in der ersten Woche und danach einmal täglich, einschließlich Rötung, Schwellung und Infektion. Führen Sie sofort eine Dissektion durch, wenn die Maus während der Angiotensin-II-Infusion stirbt.
Messen Sie den Blutdruck zu Studienbeginn und jede Woche nach der Angiotensin-II-Infusion mit der Schwanzmanschettenplethysmographie-Methode bei bewussten Mäusen. Eine Woche nach der Angiotensin-II-Infusion wählen Sie die Mäuse mit erhöhtem Blutdruck aus und notieren Sie ihr Gewicht. Wählen Sie Tiere mit einem Mindestgewicht von 24 Gramm für eine renale Denervierungsoperation.
Als nächstes entfernen Sie die Haare auf dem Bauch einer betäubten Maus mit einem Rasierer und legen Sie die Maus auf den Operationstisch. Halten Sie den Bauch oben und fixieren Sie die Gliedmaßen mit Klebeband. Desinfizieren Sie die Bauchhaut mit Povidon-Jod, gefolgt von drei Tüchern mit 70% Ethanol.
Nach einem zwei Zentimeter ventralen Mittellinien-Bauchschnitt ziehen Sie den Darm mit Gaze zurück, die in 37 Grad Celsius Kochsalzlösung getränkt ist, um die linke Nierenarterie freizulegen. Sezieren Sie das Fett vorsichtig, aber unverblümt mit einer gebogenen Pinzette von der Nierenarterie weg. Schneiden Sie das Wiegepapier mit einer sterilen scharfen Schere in ein Rechteck von der gleichen Größe wie die Nierenarterie.
Schneiden Sie mehrere Stücke des Wiegepapiers gleichzeitig ab, um die Form beizubehalten. Tauchen Sie das Wägepapier mindestens 30 Sekunden lang in 10%ige Phenolethanollösung. Bedecken Sie die Oberfläche der linken Nierenarterie und wickeln Sie das Gefäß zwei Minuten lang mit dem Wiegepapier ein.
Verwenden Sie Gaze, um das umliegende Gewebe zu schützen, um zu vermeiden, dass das Wiegepapier die Niere und den Darm berührt. Wiederholen Sie den gleichen Vorgang für die rechte Nierenarterie. Positionieren Sie die Muskeln nach der Operation wieder in ihre Ausgangsposition und schließen Sie das Peritoneum mit 6-0 Vicryl-Nähten in einem unterbrochenen Nahtmuster, dann schließen Sie die Haut mit unterbrochenen 4-0-Nylonnähten.
Überwachen Sie alle Mäuse, bis sie vollständig wiederhergestellt sind. Ein signifikanter Anstieg des systolischen Blutdrucks wurde eine Woche nach der Angiotensin-II-Infusion beobachtet. Die renale sympathische Denervierung oder RDN-Angiotensin-II-Gruppe zeigte 21 Tage nach dem RDN-Verfahren eine signifikante Senkung des systolischen Blutdrucks im Vergleich zur Scheinangiotensin-II-Gruppe.
Zwei Wochen nach dem RDN-Verfahren wurde kein signifikanter Unterschied zwischen Schein- und RDN-Gruppen beobachtet. Hämatoxylin- und Eosin-Färbung des Nierensympathikusnervs und der Nierenarterie ist hier dargestellt. In den vier Gruppen wurde keine Verdickung der Intimaschicht der Nierenarterie beobachtet.
Im Vergleich zur Scheingruppe wurden fragmentierte und pyknotische Kerne in beiden RDN-Gruppen Verdauung und Schwellung von endoneurialem Gewebe beobachtet. Die Immunhistochemie der Nervenbündel zeigte, dass die Expression der Tyrosinhydroxylase in der RDN- und RDN-Angiotensin-II-Gruppe im Vergleich zu beiden Scheingruppen signifikant erniedrigt war. Der renale kortikale Noradrenalingehalt in den denervierten Nieren sowohl in der normotensiven als auch in der hypertensiven Gruppe war im Vergleich zur innervierten Niere signifikant reduziert.
Die Masson-Färbung zeigte keinen bemerkenswerten Anstieg der intima media der Bauchaorta unter den Gruppen. Repräsentative Bilder des Myokards in verschiedenen Gruppen werden hier gezeigt. Die Angiotensin-II-Infusionsinduzierte Herzhypertrophie wurde durch RDN-Behandlung durch die Abnahme der interstitiellen Fibrose und der Kardiomyozytengröße verbessert.
Berühren Sie während des Eingriffs das Phenol nicht mit dem umgebenden Gewebe, außer mit der Nierenarterie, da dies zu Darmverschluss, Bauchinfektion und Nierenarterienstenose führen kann. Diese Methode kann ein standardisiertes RDN-Modell erstellen, um die Mechanismen zu untersuchen, die Bluthochdruck kontrollieren. Zukünftige Anwendungen dieser Technik können dazu beitragen, die Signalwege zu erweitern, die den Prozess der Hypertonie und Herzhypertrophie unterstreichen.
