A denervação simpática renal é um tratamento potencial para a hipertensão, que foi comprovado por muitos ensaios clínicos. Esta técnica desnerva os nervos renais de fluxo livre sem danos na artéria renal. Além disso, é um modelo simples, crítico, repetível e padronizado.
Demonstrando o procedimento estará Ming Wang, um assistente de laboratório do meu laboratório. Comece desinfetando a mesa de operação com etanol a 70% e, em seguida, ajuste a temperatura da almofada de aquecimento para 37 graus Celsius. Antes da cirurgia, esterilize todos os instrumentos cirúrgicos, incluindo tesouras microcirúrgicas, pinça reta fina, pinça curva fina, pinça hemostática, gazes estéreis e papel de pesagem a 121 graus Celsius por 30 minutos.
Depois de anestesiar um rato C57BKL/6 macho de 14 semanas de idade, remova o cabelo nas costas com um barbeador e, em seguida, aplique pomada veterinária nos olhos para evitar o ressecamento. Coloque o rato sobre uma mesa de operação na posição dorsal. Passe o dedo e limpe a área raspada com iodopovidona, seguido de três toalhetes com etanol a 70%.
Usando uma lâmina de bisturi estéril, faça uma incisão de um centímetro perpendicular à cauda atrás da orelha sobre a omoplata da perna da frente. Em seguida, use um hemostato estéril para fazer um túnel subcutâneo sob a pele e criar uma bolsa para a bomba. Insira suavemente uma bomba osmótica cheia de angiotensina II na bolsa, garantindo espaço livre suficiente para suturar a ferida sem esticar a pele.
Suture o músculo com suturas de Vicryl 6-0 interrompidas e feche a pele com suturas de nylon 4-0 interrompidas. em seguida, esfregue e limpe o local da ferida com iodopovidona. Coloque todos os instrumentos cirúrgicos em um esterilizador por 10 segundos e substitua as luvas estéreis entre as cirurgias.
Monitore o mouse até que ele tenha se recuperado completamente. Monitore de perto e observe a cicatrização de feridas pelo menos duas vezes por dia durante a primeira semana e uma vez por dia posteriormente, incluindo vermelhidão, inchaço e infecção. Realize a dissecção imediatamente se o rato morrer durante a perfusão de angiotensina II.
Medir a pressão arterial no início do estudo e todas as semanas após a perfusão de angiotensina II com o método de pletismografia do manguito caudal em ratinhos conscientes. Uma semana após a infusão de angiotensina II, selecione os camundongos com pressão arterial elevada e registre seu peso. Escolha animais com um peso mínimo de 24 gramas para a cirurgia de desnervação renal.
Em seguida, remova os pelos no abdômen de um rato anestesiado com um barbeador e, em seguida, coloque o rato na mesa de operação. Mantenha o abdômen para cima e fixe os membros com fita adesiva. Desinfetar a pele abdominal com iodopovidona, seguido de três toalhetes com etanol a 70%.
Depois de fazer uma incisão abdominal ventral de dois centímetros na linha média, puxe o intestino para trás com gaze embebida em solução salina de 37 graus Celsius para expor a artéria renal esquerda. Cuidadosamente, mas sem rodeios, disseque a gordura para longe da artéria renal usando pinças curvas. Usando uma tesoura afiada estéril, corte o papel de pesagem em um retângulo do mesmo tamanho que a artéria renal.
Corte vários pedaços do papel de pesagem de cada vez para manter a mesma forma. Mergulhe o papel de pesagem em solução de etanol a 10% de fenol durante, pelo menos, 30 segundos. Cubra a superfície da artéria renal esquerda e envolva o vaso com o papel de pesagem por dois minutos.
Use gaze para proteger os tecidos circundantes para evitar que o papel de pesagem toque o rim e o intestino. Repita o mesmo procedimento para a artéria renal direita. Após a cirurgia, reposicione os músculos em sua posição inicial e feche o peritônio com suturas de Vicryl 6-0 em um padrão de sutura interrompido, em seguida, feche a pele com suturas de nylon 4-0 interrompidas.
Monitore todos os ratos até que estejam totalmente recuperados. Um aumento significativo da pressão arterial sistólica foi observado uma semana após a infusão de angiotensina II. O grupo de angiotensina II de denervação simpática renal, ou RDN, mostrou uma redução significativa na pressão arterial sistólica em comparação com o grupo de angiotensina II simulada aos 21 dias após o procedimento de RDN.
Não foi observada diferença significativa entre os grupos sham e RDN em duas semanas após o procedimento RDN. A coloração de hematoxilina e eosina do nervo simpático renal e da artéria renal é mostrada aqui. Não foi observado espessamento da camada íntima da artéria renal nos quatro grupos.
Em comparação com o grupo shams, núcleos fragmentados e picnóticos, digestão e inchaço do tecido endoneurial foram observados em ambos os grupos RDN. A imuno-histoquímica dos feixes nervosos revelou que a expressão de tirosina hidroxilase foi significativamente diminuída no grupo RDN e RDN angiotensina II em comparação com ambos os grupos shams. O conteúdo de norepinefrina cortical renal nos rins desnervados tanto no grupo normotenso quanto no hipertenso foi significativamente reduzido em comparação com o rim inervado.
A coloração de Masson não mostrou aumento notável da íntima média da aorta abdominal entre os grupos. Imagens representativas do miocárdio em diferentes grupos são mostradas aqui. A hipertrofia cardíaca induzida por infusão de angiotensina II foi melhorada pelo tratamento com RDN pela diminuição da fibrose intersticial e do tamanho dos cardiomiócitos.
Durante o procedimento, não toque o fenol no tecido circundante, exceto na artéria renal, pois pode causar obstrução intestinal, infecção abdominal e estenose da artéria renal. Este método pode estabelecer um modelo RDN padronizado para ajudar a estudar os mecanismos que controlam a hipertensão. Futuras aplicações dessa técnica podem contribuir para a ampliação das vias que reforçam o processo de hipertensão e hipertrofia cardíaca.
