副甲状腺は非常に重要な機能を持つ小さな臓器です。私たちのプロトコルは、甲状腺癌の甲状腺摘出術中に外科医がPGを保護するのに役立つ新しいPG識別技術の開発に使用できます。このモデルの主な利点は、IONPのネガティブイメージングを通じて甲状腺とPGの明確な違いを観察できることです。
さらに、このラットモデルのコストと操作の難しさは、大型動物モデルよりもかなり低くなります。まず、手術中に動物の体温を維持するために、予熱した加熱パッドを手術台に置き、麻酔をかけたラットを手術台に置かれた手術用ドレープに移します。輪ゴムを使用して、ラットの手足を手術台に固定し、ドレープで作られた円筒形の枕をラットの肩の下に置き、頭を後ろに傾け、首の領域を完全に露出させ、次に脱毛クリームを首の領域、顎下腔まで、剣状突起まで、および胸鎖乳突筋の両側に塗布します。
3分後、髪と脱毛クリームをティッシュでやさしく拭きます。次に、ヨードフォア綿球を使用して、首の中央とその周辺を滅菌します。そこから髪が取り除かれます。
動物を外科用ドレープで覆い、穴を消毒した領域に合わせます。メスを使用して、ラットの首の前正中線に約5センチメートルの縦方向の切開を行います。切開部の両側に沿って皮膚を持ち上げ、ハサミを使用して、線状アルバ頸管に沿って縦方向に切断します。
鉗子を使用して、胸骨舌骨筋と胸骨甲状腺筋を分離します。血管鉗子を使用して首の前で分離した筋肉を固定し、固定された組織を外側に引き出します。針を使用して、固定された組織に縫合糸を通します。
結び目を作り、縫合糸を手術台の外科用ドレープに固定します。甲状軟骨を盾状から、輪状軟骨を手術領域の上側境界として、頸部の前後の管状軟骨の輪状形状を中心として気管の位置を特定する。上部と下部の境界の間の気管の反対側にある赤い蝶の形をした腺である甲状腺を見つけます。
次に、赤みがかっているが周囲の甲状腺よりも明るい紡錘形の2つの副甲状腺を見つけ、甲状腺の上側と外側に特定の境界があります。気管、甲状腺、喉頭のある副甲状腺の正面写真を撮ります。食道の後ろを解剖し、開創器を使用して、副甲状腺の右側を露出させます。
甲状腺と気管のある副甲状腺の右側写真を撮り、同様に腺の左側を露出させてキャプチャします。インスリン注射器を使用して、10マイクロリットルの黒色酸化鉄ナノ粒子懸濁液を甲状腺の中心に局所的に注入し、注射部位をガーゼで5秒間静かに押し、次に、副甲状腺を負に染色し、周囲の甲状腺と区別するため、甲状腺内の黒色酸化鉄ナノ粒子の急速な拡散を観察しますが、副甲状腺は観察しません。陰性に染色された副甲状腺の正面、左、右側の写真を、気管、甲状腺、喉頭とともに撮影します。
注入後、造影剤である黒色酸化鉄ナノ粒子は甲状腺内で容易に拡散し、黒色に染色されますが、組織密度が高いため副甲状腺に浸潤することはできません。黒色酸化鉄ナノ粒子を注入した甲状腺の組織学的分析により、副甲状腺は密接に整列した主細胞に富んでいるのに対し、甲状腺は組織密度がはるかに低いことを示す多くの緩い内腔を備えていることが明らかになりました。この手順では、2つの重要なことを覚えておく必要があります。
まず、ラットの姿勢。耳を傾けて頭を後ろに向け、首の部分を完全に露出させることをお勧めします。第二に、IONPを注射するときは、甲状腺の表面が血管でいっぱいであるため、細かい針を使用する必要があります。
この手順は、非侵襲的でリアルタイムの情報を提供し、造影剤として色素を使用しないPGの自家蛍光イメージングによっても実行できますが、自家蛍光信号が弱く、イメージング効率も劣ります。他の研究者は、犬や豚などのより複雑で高価な大型動物を使用する代わりに、このシンプルで効果的なラットモデルを使用して、新しいPG識別技術および製品を開発および評価できます。
